The Effect of Sheng Bai Solution on Irradiated Mice Bone Marrow Cell Division Index and DNA Content

Before and after general irradiation with 60Co-γ, mice were orally given Sheng Bai Solution (SBS) for one week. SBS alleviated the irradiation-induced reduction of bone marrow cell chromosome division index. The irradiation-induced decrease of marrow DNA amount, thymic and splenic fractions, and total leukocyte number were restored to some extent. SBS also helped to ameliorate general condition of patients.

气态甲醛致小鼠骨髓细胞DNA-蛋白质交联的研究

为探讨吸入性甲醛能否对小鼠骨髓造血细胞产生遗传毒性,以SPF级昆明雄性小鼠为材料,采用动态吸入方式连续染毒72h,取骨髓细胞,测定DNA-蛋白质交联.结果发现,随着甲醛浓度的升高(0、0.5、1.0、3.0mg·m-3),小鼠骨髓细胞DNA-蛋白质交联系数逐渐升高,0.5mg·m-3组与对照组存在显著差异(p<0.05),1.0、3.0mg·m-3组与对照组存在极显著差异(p<0.01).表明,在实验浓度范围内,甲醛对小鼠骨髓细胞具有一定的遗传毒性.

荷人鼻咽癌裸鼠骨髓细胞DNA合成及凋亡相关基因表达的生物节律的初步研究

背景与目的:有关鼻咽癌的生物节律特征尚未见文献报道。本文拟探索荷人鼻咽癌裸鼠骨髓细胞的DNA合成及几种凋亡相关基因表达的生物节律,为临床制定鼻咽癌时辰化疗方案提供必要的参数。方法:BALB/C裸小鼠69只,置于程控的独立光照系统(12h光照,12h黑暗)同步化至少3周。然后双侧腋窝皮下接种人鼻咽低分化鳞癌细胞(CNE-2)裸小鼠移植瘤,成瘤后按6个不同时间点分批处死小鼠,收集骨髓细胞,固定、染色后流式细胞仪测DNA含量,用ANOVA法检验各期细胞在6个时间点差异的显著性,Cosinor法考察G1、S、G2/M期细胞在24h的分布是否符合余弦函数。部分骨髓细胞经裂解、蛋白定量后用WesternBlot法检测不同时间点p53、p21和Bcl-2三种基因蛋白表达的变化情况。结果:G1、S、G2/M期细胞在3、7、11、15、19、23HALO(HoursAfterLightOnset即灯亮后第3、7、11、19、23h)的分布随时间变化有显著性差异,G1、G2/M期细胞24h变化符合余弦节律,高峰值分别位于10.8HALO和1.8HALO。骨髓细胞p53和Bcl-2蛋白表达24h强度不同。p53在11HALO最强,在7HALO最弱;Bcl-2在15HALO最强,在19HALO最弱,p21蛋白未见表达。结论:荷人鼻咽癌裸小鼠骨髓细胞DNA合成随昼夜交替呈节律变化,p53和Bcl-2蛋白表达随昼夜时间变化而规律性波动。

低剂量气态苯暴露对小鼠骨髓细胞DNA的损伤作用

目的探讨低剂量气态苯暴露对小鼠骨髓细胞DNA损伤作用。方法将24只615小鼠随机分为4组,即对照组、苯暴露组、L615K淋巴细胞白血病细胞转染小鼠组(简称接种肿瘤组)、L615K淋巴细胞白血病细胞转染小鼠苯暴露组(简称接种肿瘤苯暴露组),对小鼠进行苯动态暴露染毒10d,每天6h,剂量为1mg/m3;应用单细胞凝胶电泳实验检测小鼠骨髓细胞的DNA损伤情况。结果苯暴露组、接种肿瘤组以及接种肿瘤苯暴露组的小鼠骨髓细胞DNA损伤均重于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);而接种肿瘤苯暴露组的小鼠DNA损伤却轻于接种肿瘤组,差异有统计学意义(P<0.01);接种肿瘤组、接种肿瘤苯暴露组小鼠的肝、脾脏器系数均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),苯暴露组和对照组小鼠的肝、脾脏器系数差异无统计学意义(P>0.05)。结论低剂量气态苯暴露可以导致小鼠骨髓细胞DNA损伤,但对已形成白血病小鼠的骨髓细胞DNA损伤有抑制作用,原因有待深入研究。

D-半乳糖致衰老模型大鼠体征和骨髓DNA含量的改变与中药干预作用

目的观察D-半乳糖致衰老模型大鼠的一般症状、皮肤状况、饮食嗜好及骨髓细胞DNA含量的变化,并探讨中药抗衰老的作用及其机制。方法大鼠每日一次皮下注射D-半乳糖,连续7周,建立衰老大鼠模型,观察衰老大鼠的一般症状和体重变化,测定其皮肤含水量、糖水消耗量和骨髓细胞DNA含量,并用抗衰老片和首乌延寿片进行干预,观察中药对衰老模型大鼠的干预作用。结果大鼠皮下注射D-半乳糖后,逐渐出现体重增长缓慢、行动迟缓、精神不振、嗜睡、被毛卷曲枯黄、光泽欠佳、尾部出现色素斑点等衰老症状,并在造模第5周出现体重下降,造模7周后,衰老大鼠的皮肤含水量和糖水消耗量明显减少(P<0.05),骨髓细胞的DNA含量亦明显减少(P<0.01);给予抗衰老片和首乌延寿片后,均可不同程度地延缓衰老症状,缓解体重的下降,显著提高皮肤的含水量和糖水消耗量(P<0.01),同时,明显提高骨髓细胞DNA含量(P<0.05)。结论D-半乳糖致衰老大鼠模型的衰老体征明显,机体抗DNA损伤的能力下降,而抗衰老片和首乌延寿片等中药可明显改善衰老模型大鼠的衰老症状,其作用机制可能与提高机体修复DNA损伤的能力有关。

同位素示踪微量法测定白血病细胞DNA-甲基转移酶活性

目的:建立3H标记同位素示踪微量分析法用于白血病细胞MTase活性测定,并评价其准确性、敏感性及可靠性;了解急性白血病患者骨髓细胞MTase活性改变的规律。方法:以Poly[d(IC)d(IC)]为甲基受体,3HSAM为甲基供体,测定骨髓单个核细胞和白血病细胞系的MTase活性。以细胞裂解蛋白作用2h所得的每分计数值表示酶活性。每次测定设不加Poly[d(IC)d(IC)]的阴性对照,以HL60细胞MTase活性为100%,所测样本值均和其相比,以相对数表示结果。结果:当细胞裂解蛋白质量在0.25～7.5μg之间时,本法线性良好,Y每分计数=2864X+142(r=0.998,P<0.01)。方法灵敏度为2.4×104Bq,批间变异系数11.4%(n=9),批内变异系数5.9%(n=4)。15例急性白血病MTase活性平均值为(9.1±4.6)%,较11例非恶性血液病对照组[平均(2.1±1.6)%]明显升高。11例缓解期急性白血病MTase活性平均(4.1±2.6)%,和对照组无明显区别。结论:同位素微量分析法测定MTase活性灵敏度高、重复性好。MTase活性增高是急性白血病的高发现象。急性白血病缓解后MTase活性下降。MTase活性测定可能对监测白血病病情变化有一定意义。

离体人胸骨骨髓DNA降解与腐败尸体死亡时间推断的初步研究

目的研究死后胸骨骨髓DNA的降解与较长死后间隔时间(PMI)的关系。方法采用改良Feulgen染色及计算机图像分析技术对离体人胸骨(取材后分别室温搁置0,1,3,5,7d)骨髓DNA含量进行定量检测。结果在较长PMI范围内,人胸骨骨髓DNA含量仍呈现下降规律。结论人胸骨骨髓DNA降解规律可望应用于较长PMI的推断。

辐射损伤骨髓造血细胞的DNA含量及AgNOR定量分析

LACA小鼠经60 Coγ射线全身一次照射 ,对骨髓组织切片和骨髓细胞悬液涂片 ,分别采用改良的Feulgen染色及核仁组成区相关蛋白 (AgNOR)染色 ,利用图像分析技术对在不同照射剂量、不同时间点的造血细胞核内DNA及AgNOR含量进行了定量分析。结果显示各照射组在2 5 - 7 0Gy剂量、 6h～ 4周范围内 ,骨髓均出现明显损伤及损伤后重建现象 ,且剂量越大 ,损伤越重 ,恢复亦较慢 ;其中以 5 5Gy组骨髓细胞核内DNA和AgNOR含量变化最为典型 ,在损伤早期进行性减少 ,而在恢复期出现持续性增加 ,直至恢复正常。结果提示 :骨髓造血细胞核内AgNOR及DNA含量的变化可以作为反映骨髓辐射损伤与修复程度的定量指标。

液态或气态甲醛诱导大鼠骨髓细胞 DNA-蛋白质交联形成的研究(英文)

甲醛是一种遗传毒物,流行病学研究表明甲醛可能具有诱导白血病的作用,然而甲醛诱导白血病的机制目前还不清楚. 以不同浓度液态和气态甲醛对大鼠骨髓细胞进行染毒,采用KCl-SDS 法检测了骨髓细胞 DNA-蛋白质交联程度,并采用单细胞凝胶电泳技术(彗星实验)检测了骨髓细胞 DNA 链断裂程度. 研究结果表明:与对照组相比,低浓度甲醛(液态甲醛浓度为:5μmol·L-1和25μmol·L-1;气态甲醛浓度为:0.5mg·m-3 和 1.0mg·m-3)可以引起 DNA断裂水平显著增高 (p<0.01);而高浓度甲醛 (液态甲醛浓度为:125μmol·L-1 和 625μmol·L-1;气态甲醛浓度为:3.0mg·m-3)则可以引起 DNA-蛋白质交联水平显著增高(p<0.01; p<0.05). 研究结果提示:甲醛染毒可以导致大鼠骨髓细胞DNA的损伤,暗示甲醛诱导白血病具有高度的可能性.

DNA降解与腐败尸体死亡时间的相关性

目的探讨骨髓细胞核DNA含量变化与腐败尸体死亡时间的关系。方法应用DNA高度特异性染色方法Feulgen改良法结合计算机图像分析技术对死后不同时间(0～14d)胸骨骨髓细胞核DNA含量变化进行分析。结果胸骨骨髓细胞核DNA含量随死亡时间延长呈缓慢而规律下降,直至死后两周仍未完全降解。结论死后DNA降解速率与死亡时间呈线性关系,测定死后骨髓细胞核DNA含量可望成为腐败尸体死亡时间推断的新方法。

不同X线剂量照射对骨髓间充质干细胞的增殖及DNA损伤的影响

目的低剂量电离辐射对骨髓间充质干细胞(human mesenchymlstem cells-bone marrow,HMSC-bm)有兴奋效应,但高剂量电离辐射对该细胞的损伤作用少见报道。文中旨在研究不同X线剂量照射对体外骨髓间充质干细胞细胞增殖及DNA损伤影响。方法采用人HMSC-bm体外进行培养,实验分为对照组及照射组,以0、0.5、1、2、4、6、8 Gy不同X射线分别照射细胞,采用CCK8法检测细胞增殖水平;以0、1、2、4 Gy不同剂量照射细胞:CB法检测各组细胞微核率;免疫荧光检测照射后0.5、2、12、24 h不同时间点53BP1免疫荧光簇焦点(foci)数目的变化。结果随辐照剂量的增加,与0 Gy比较,除第3天0.5、1 Gy外,同一时间各组细胞吸光度值(A值)逐渐减少(P<0.05)。与同一辐照剂量第1天比较,0.5、1、4 Gy第3、4、5天A值增加(P<0.05),0、6 Gy第4、5天A值增加(P<0.05),2、8 Gy第5天A值增加(P<0.05)。细胞受照后0.5 h均出现foci点,达到最高峰,后随着时间的延长,foci点逐渐减少;不同剂量同一时间相比,随着剂量的增加,各个时间点免疫荧光簇集点增加,同一剂量不同时间相比,随着时间的增加免疫荧光焦点逐渐减少(P<0.05)。与对照组细胞微核率[(6.333±2.031)%]相比,随着辐射剂量增加(1、2、4 Gy)细胞微核率逐步上升[(23.667±1.582)%、(42.000±4.583)%、(777.333±2.082)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HMSC-bm对高剂量X射线具有敏感性,基因组不稳定,其自我修复能力受到剂量的影响,在运用放射疗法及临床治疗上应该加强其应用安全性。

一丁基锡和二丁基锡致小鼠骨髓细胞DNA损伤

目的研究不同剂量的一丁基锡、二丁基锡对体外培养的小鼠骨髓细胞DNA损伤作用。方法应用彗星试验检测不同浓度一丁基锡、二丁基锡对小鼠骨髓细胞DNA损伤。结果结果1×10-10,1×10-11g/L剂量的一丁基锡、二丁基锡与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。随着剂量的增加,DNA损伤也越严重,存在着明显的剂量-效应关系。组间比较,差异有统计学意义。结论体外条件下,一丁基锡、二丁基锡可引起小鼠骨髓细胞DNA的损伤。

以Chelex^R100作为介质、一步法从贮存骨髓涂片中提取DNA作PCR分析

利用螯合型离子交换树脂Ｃｈｅｌｅｘ~Ｒ１００作为介质、一步法从已贮存数年的骨髓细胞涂片中提取用作ＰＣＲ分析的ＤＮＡ。共提取已经或未经瑞氏染色的骨髓涂片２０张，平均每片ＤＮＡ收获率１．２±０．４μｇ。ＤＮＡ分子量为２～６ｋｂ大小，适合用于ＰＣＲ分析，但不能用于ＳｏｕｔｈｅｒｎＥｐ迹分析。本法具有简便、省时、明显减少因操作引起的标本间ＤＮＡ交叉污染的机会。此法有利于临床上收集大量的、不同病期的血液病标本，进行分子生物学研究和回顾性诊断。

转化生长因子β2真核表达载体pcDNA3.1(+)/TGF-β2的构建及其在骨髓基质细胞的表达

目的 :构建人转化生长因子 β2的真核表达载体 pcDNA3.1(+) /TGF - β2 ,检测其转染骨髓基质细胞后的表达。方法 :用PCR方法从人胎盘cDNA文库DNA中扩增TGF - β2全长cDNA ,该基因片段两端设计了NheⅠ和XhoⅠ限制性酶切位点。将所得片段连接到T载体上测序证实。利用重组DNA技术将TGF - β2的cDNA构建到真核表达载体 pcDNA3.1(+)上 ,酶切鉴定。通过脂质体介导的转染技术 ,将所构建的载体导入从骨髓中分离培养的基质细胞中 ,体外单层培养。分别于转染后 2 4h和 4周利用RT -PCR和Western -Blotting方法检测目的基因的表达情况。结果 :经琼脂糖凝胶电泳及测序证实 ,PCR获得的片段与GenBank中登记的TGF - β2cDNA序列完全相同。pcDNA3.1(+) /TGF - β2酶切片段的长度与理论大小相符。转染后不同时期的骨髓基质细胞在mRNA和蛋白质水平均可检测到TGF - β2的表达。结论 :pcDNA3.1(+) /TGF - β2真核表达载体构建成功 。

内脏利什曼病患者骨髓及血内病原体特异性kDNA片段PCR扩增用于诊断的研究

目的 :建立简易、准确的诊断内脏利什曼病和病原体鉴定技术。方法 :采用作者设计的杜氏利什曼原虫 ( L.d.)种特异引物 和 ,经 PCR扩增样品内病原体 k DNA2 97bp片段 ,检测 2 2例确诊内脏利什曼病 ( VL )患者骨髓、血、血清共 55份样品和 4例临床疑诊为黑热病患者的骨髓 (共 2 6例 ,59份样品 )。结果 :( 1) PCR法与骨髓涂片镜检符合率为 96.2 % ( 2 5/2 6) ;( 2 ) PCR法检测骨髓、血及血清的总阳性率为 95.4 % ( 2 1/2 2 ) ;( 3) PCR法检测 2 2例骨髓、 16例血样品及 17例血清样品 ,阳性率分别为 91% ( 2 0 /2 2 )、 68.8% ( 11/16)及 2 9.4 % ( 5/17)。 15例骨髓对照样品得自 9例白血病患者及 6例健康人。血及血清对照样品各得自 5例健康人。全部对照未见扩增产物 ,均为阴性。结论 :采用引物 和 进行 PCR扩增检测血内 k DNA特异片段诊断内脏利什曼病有较好前景。

胸骨骨髓细胞核DNA含量与死亡时间关系的研究

目的探讨人胸骨骨髓DNA含量随死亡时间延长变化的规律。方法离体人胸骨置于特定条件下,随时间延长分别取出制成病理切片,Feulgen染色后,采用计算机图像分析技术观察DNA与死亡时间的关系。结果死后1～9d,Feulgen染色阳性产物随死亡时间的延长而逐渐减少,DNA含量随死亡时间延长而下降,染色逐渐变浅淡,至10d后已观察不到。且二者之间存在线形关系。结论人死后1～9d,胸骨髓细胞核DNA含量随死亡时间延长呈下降趋势。

纳米四氧化三铁颗粒对小鼠骨髓细胞DNA损伤作用

目的观察纳米四氧化三铁颗粒(Nano-Fe3O4)对小鼠骨髓细胞DNA损伤作用。方法将40只成年清洁级ICR小鼠,雌雄各随机分为4组,分别为溶剂对照(高纯水)组和低剂量(2.5 mg/kg,1/64 LD50)、中剂量(10 mg/kg,1/16 LD50)和高剂量(40 mg/kg,1/4 LD50)Nano-Fe3O4染毒组,每组5只。采用一次性尾静脉注射方式进行染毒,注射量为10 mL/kg,注射速度约为0.02 mL/s。染毒后3 d,用单细胞凝胶电泳法检测其对小鼠骨髓细胞DNA损伤。结果染毒3 d后,雌性小鼠骨髓细胞DNA 0级损伤各剂量组明显低于对照组(P<0.05),并且随着剂量的增加无损伤的比例逐渐减少,Ⅰ级损伤各剂量组明显高于对照组(P<0.05),且随着剂量升高损伤程度逐渐增强,仅高剂量组出现≥Ⅱ级损伤。雄性小鼠骨髓细胞DNA 0级损伤各剂量组明显低于对照组(P<0.05),并且随着剂量的升高无损伤的比例逐渐降低,Ⅰ级损伤中各剂量组明显高于对照组(P<0.05),且随着剂量的升高损伤程度逐渐增强,仅高剂量组出现≥Ⅱ级损伤。结论在本实验条件下,一次性尾静脉注射Nano-Fe3O4颗粒3 d后,可引起小鼠骨髓细胞的DNA损伤。

5．0 Gy放射损伤对小鼠早期骨髓造血基质细胞周期及其DNA含量的影响

取５．０Ｇｙγ射线照射后３ｄ和７ｄ的小鼠骨髓体外液体培养１４ｄ和２１ｄ，显示骨髓基质细胞仍能贴壁生长，但骨髓基质细胞集落（ＣＦＵ－Ｆ）数量显著低于正常，照后７ｄ的ＣＦＵ－Ｆ数量虽比照后３ｄ的ＣＦＵ－Ｆ数量有所增加，但恢复缓慢；延长培养时间，显示照射鼠的骨髓基质细胞增殖受抑。流式细胞仪检测结果表明Ｇ２＋Ｍ期细胞和ＤＮＡ含量显著低于正常对照组；随着照后时间的延长，Ｓ、Ｇ２＋Ｍ期含量有所恢复，但仍显著低于正常对照组。说明骨髓造血基质细胞具有较高的辐射敏感性且对辐射损伤持续较久。

放射复合伤骨髓微环境中基质细胞的周期、DNA含量与形态变化的观察

用流式细胞仪、光镜、扫描电镜和透射电镜观察单纯放射损伤（单放组）、单纯烧伤（单烧组）和放射复合伤（复合伤组）小鼠骨髓基质细胞的细胞周期、ＤＮＡ含量和形态变化。结果：①单烧组骨髓基质细胞的Ｇ２＋Ｍ期比例、ＤＮＡ含量由高到低；单放组和复合伤组Ｇ２＋Ｍ期比例、ＤＮＡ含量则由低到高；②与正常组骨髓基质细胞相比，各损伤组均出现不同特征的形态学变化；③单放组的内质网扩张，线粒体基质变淡，嵴消失；单烧组的线粒体增多、肿胀；放射复合伤的线粒体重度退行性变，结构紊乱。提示：放射复合伤骨髓基质细胞的细胞周期比例、ＤＮＡ含量和形态的改变可能是导致放射复合伤造血微环境损伤的重要原因之一。

不同冷冻条件对骨髓造血细胞的CFU－GM形成能力及DNA活性的影响

本文对不同冷冻条件下人骨髓造血细胞的粒单系集落（ＣＦＵ－ＧＭ）形成能力及ＤＮＡ活性变化进行测定。结果证明：室温下低温保护剂二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）使骨髓造血细胞形成ＣＦＵ－ＧＭ的能力下降；程序降温至－８０℃与降至－８０℃后与在液氮内冻存７天骨髓造血细胞相比较，二者形成ＣＦＵ－ＧＭ的能力以及ＤＮＡ活性均无明显变化；在程序降温过程中，消除融合热释放组骨髓造血细胞形成ＣＦＵ－ＧＭ的能力明显高于来消除融合热释放组。