乌骨藤中五环三萜类化合物的分离鉴定

利用硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20凝胶柱色谱法及半制备高效液相色谱法,从乌骨藤的正丁醇萃取物中分离得到4种五环三萜类化合物。利用核磁共振谱、质谱、红外光谱等分析方法对化合物结构进行了分析和表征,确定了4种化合物分别为β-香树脂醇(β-amyrin)、白桦酯醇(betulin)、白桦酯酸(betulinic acid)和羽扇豆醇(lupeol),它们为首次在牛奶菜属植物中发现,其中后3种化合物具有抗肿瘤活性。

高效毛细管电泳法测定乌骨藤药材及其制剂中绿原酸的含量

目的建立毛细管电泳法测定乌骨藤药材及其制剂中绿原酸的含量。方法未涂层毛细管柱（50μm×50cm，有效长度42cm）；缓冲液：200mmol·L^-1硼酸与10％甲醇（NaOH溶液调节至pH=8．0）；分离电压：30kV；检测波长：328nm；温度：25℃；进样条件：50mbar，5．0s。结果绿原酸浓度在21．0～105．0μg·mL^-1内线性关系良好，r=0．9997，平均回收率为99．16％，RSD为0．8％。结论本法简便，准确、重复性好，可为乌骨藤药材及其制剂的质量研究提供一种新的分析方法。

乌骨藤脂肪酸组成成分的GC/MS分析

通过水浴回流提取乌骨藤中的脂肪酸,利用气相色谱-质谱联用技术对乌骨藤的成分进行分析检测。结果表明:在乌骨藤中共检测到27种物质,其中不饱和脂肪酸6种(43.77%)、饱和脂肪酸10种(33.53%)、醇类2种(5.18%)、烃类9种(12.48%)。3种奇数碳原子的脂肪酸为十七碳酸、十九碳酸、二十三碳酸。乌骨藤中(E)-9-十八碳烯酸、(10E,12Z)-十八碳二烯酸、棕榈酸含量较高。

正交试验法优选通关藤醇提工艺

目的优选通关藤饮片醇提工艺。方法以绿原酸和总酚酸的量为监测指标,采用正交试验对通关藤的醇提工艺进行优选。结果最佳提取工艺为:以60%乙醇为提取溶媒,加乙醇总量为18倍量,回流提取3次,每次1.5 h。结论该提取工艺合理,生产实际操作简单,适合于大生产。

正交设计筛选通关藤增殖培养基的研究

[目的]应用正交试验设计方法,筛选通关藤增殖培养基。[方法]以通关藤的诱导苗为试验材料,采用L9(34)正交试验设计方案研究培养基、6-BA(细胞分裂素)、NAA(萘乙酸)及不同接种部位4个试验因子对通关藤增殖苗生长状况和增殖率的影响。[结果]筛选出通关藤最佳增殖培养基方案为MS+0.5mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+25g/L蔗糖+7g/L琼脂+茎尖。[结论]该研究为通关藤规模化生产提供一定的技术支持。

不同酵母发酵乌骨藤酒香气成分GC-MS分析

以乌骨藤为原料,用不同酵母生产乌骨藤发酵酒,采用顶空固相微萃取和气相色谱-质谱联用技术对4种不同酵母发酵所产乌骨藤酒的香气成分进行分析,共鉴定出53种香气成分。酿酒活性干酵母1938、1394、1921、1450发酵的乌骨藤酒中分别检测到28、33、41、33种香气成分,其中20种是4者共有的。酿酒酵母1938、1921和1450发酵乌骨藤酒主要香气成分为β-苯乙醇和异戊醇,酿酒酵母1394发酵乌骨藤酒主要香气成分为β-苯乙醇和羊脂酸。

不同产地通关藤中总皂苷的含量测定

目的:建立了以通关藤苷D为对照,采用比色法测定通关藤中总皂苷含量的方法,比较了不同产地通关藤药材中总皂苷的含量,为通关藤药材的质量控制提供依据。方法:以通关藤苷D作为对照品,采用香草醛-高氯酸法显色,在462nm处测定通关藤中总皂苷的含量,并对其方法学进行系统考察。结果:本品在16.08μg～160.8μg范围内吸光度与含量成良好的线性关系,r=0.9993(n=5),重复性良好,回收率RSD小于3%(n=6)。结论:此方法稳定可靠、重复性好,可控制药材质量,且其4个不同产地通关藤中云南的总皂苷含量为最高,这与云南为通关藤地道药材相一致。

消癌平注射液辅助化疗治疗非霍奇金淋巴瘤的临床分析

【目的】评价消癌平注射液联合中医辨证治疗辅助化疗方案对非霍奇金淋巴瘤(NHL)的疗效及安全性。【方法】回顾分析南京中医药大学附属医院血液科2009~2014年经CHOP方案化疗2~3个疗程的NHL患者79例,根据治疗方法的不同将患者分为观察组38例和对照组41例。对照组单纯接受CHOP方案化疗,观察组在对照组基础上给予消癌平注射液(中药乌骨藤提取物)联合中医辨证治疗(根据寒痰凝结、气郁痰结、阴虚痰瘀和阴阳俱虚4型,分别给予阳和汤、柴胡疏肝散、壮骨丸、肾气丸加减治疗),比较2组的近期疗效和不良反应,并进一步将观察组按照病理类型、病情分期、侵袭程度、危险度及中医辨证等分层,比较其疗效差异。【结果】(1)观察组的总有效率和疾病控制率分别为71.1%和84.2%,明显高于对照组的58.5%、73.2%,差异有统计学意义(P <0.05)。(2)分层比较结果显示,观察组对B细胞淋巴瘤的有效率(78.1%)和疾病控制率(90.6%)均高于T细胞淋巴瘤(40.0%、40.0%),对低-中/中危组淋巴瘤的有效率(87.0%)和疾病控制率(95.7%)均高于中-高/高危组淋巴瘤(46.7%、66.7%),对惰性和初发淋巴瘤的疾病控制率(100.0%、91.7%)高于侵袭性和难治/复发淋巴瘤(78.6%、71.4%),差异均有统计学意义(P <0.05)。(3)观察组对气郁痰结和阴虚痰瘀组的有效率分别为81.8%、90.0%,对气郁痰结和阴虚痰瘀组的疾病控制率分别为90.9%、100.0%,均高于寒痰凝结组和阴阳两虚组,差异均有统计学意义(P <0.01)。(4)观察组在血小板减少、贫血和发热的发生率方面均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P <0.05),而2组在其他毒副反应方面的发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】消癌平注射液联合中医辨证治疗与化疗方案治疗NHL具有协同作用,对B细胞、惰性、初发、气郁痰结组和阴虚痰瘀淋巴瘤具有一定优势和潜在治疗价值。

乌骨藤脂溶性成分抗肿瘤活性及其成分分析

目的:研究乌骨藤脂溶性成分的抗肿瘤活性,并分析其化学成分。方法:采用超临界流体萃取法提取中药乌骨藤的脂溶性成分,采用MTT法研究其对人肝癌细胞系HepG-2细胞的细胞毒活性,并利用气相-质谱联用技术分析其化学成分。结果:乌骨藤脂溶性成分对人肝癌细胞系HepG-2细胞有明显的细胞毒活性,同时分析了其化学成分,鉴定了其中24个化合物,并测定了相对含量。结论:乌骨藤的脂溶性成分具有抗肿瘤活性,其药理活性与所含有的化学成分相关。

乌骨藤中白桦酯酸的提取分离及抗肿瘤活性

目的:对乌骨藤中白桦酯酸进行提取分离,并探讨其抗肿瘤活性。方法:采用硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20凝胶柱色谱法及半制备高效液相色谱法,对白桦酯酸进行提取分离,并采用结晶紫法,以细胞死亡率为检测指标,观察白桦酯酸在不同质量浓度1～500 mg·L-1情况下,对细胞密度为1×104/孔的4种肿瘤细胞分别作用12,24,36,48 h的生长抑制作用。结果:白桦酯酸对人宫颈癌细胞HeLa、人胃癌细胞MGC、人乳腺癌细胞MCF-7具有很好的增殖抑制作用,并呈剂量依赖效应,在质量浓度为500 mg·L-1作用48 h时,对Hela细胞及MGC细胞的死亡率分别为77.9%,81.7%,质量浓度为100 mg·L-1作用48 h时,对MCF-7的细胞死亡率为74.1%,但对人乳腺导管癌细胞(ZR株)作用不显著。结论:白桦酯酸对HeLa,MGC,MCF-7肿瘤细胞具有抗肿瘤活性,对ZR株肿瘤细胞作用不明显。

HPLC法同时测定乌骨藤中通关藤苷A和D的含量

目的:建立测定乌骨藤药材中通关藤苷A和D含量的HPLC方法,并对不同产地药材进行测定。方法:采用AgilentTC-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸(37∶63),流速1.0 mL.min-1,检测波长210 nm,柱温25℃,进样量10μL。结果:通关藤苷A和D的线性范围分别为3.0390～7.0910μg(r=0.9997)和2.4651～5.7519μg(r=0.9991),平均回收率(n=6)分别为99.7%(RSD=2.6%)、99.4%(RSD=2.5%)。结论:本法准确,重复性好,专属性强,可控制药材的质量。且不同产地药材含有的2个成分的含量有一定差异性,其中云南含量最高,可指导临床用药。

乌骨藤的化学成分研究

目的:研究乌骨藤的化学成分。方法:利用硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20凝胶柱色谱法及半制备高效液相色谱法,对乌骨藤的70%乙醇提取物进行分离纯化,利用核磁共振谱、质谱、红外光谱等光谱数据鉴定结构。结果:从乌骨藤中共分离鉴定了7个化合物,分别为β-谷甾醇(1),牛奶菜醇(2),二氢牛奶菜醇(3),白桦酯酸(4),羽扇豆醇(5),胡萝卜苷(6),11α-O-(2-甲基丁酰基)-12β-O-乙酰基通关藤苷元B(7)。结论:化合物4,5为首次从该属植物中分离得到。

顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法测定乌骨藤中的挥发性成分

目的:顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法(HS-SPME-GC-MS)分析乌骨藤挥发性成分。方法:前处理采用干法和湿法2种不同方法,顶空固相微萃取提取后,用气相色谱-质谱联用技术检测乌骨藤挥发性化学成分。结果:采用干法前处理共鉴定了71种成分,占总成分含量的93.5%;湿法前处理共鉴定了53种成分,占总成分含量的99.55%。干法处理后所提取的挥发性成分主要为萜烯类(20.01%)、醇类(17.86%)和脂类(11.92%),湿法处理后所提取的挥发性成分主要为醇类(60.31%)、醛类(12.80%)。结论:干法和湿法前处理测得的挥发性成分差异较大,各成分含量差异也较大。同时用干法和湿法前处理后,再用HS-SPME-GC-MS方法提取和分析乌骨藤中挥发性成分,既简单快速又能全面科学的分析出各挥发性组分。

HPLC测定通关藤中ZP-7通关藤苷元B的含量

目的:建立HPLC测定通关藤药材中ZP-7通关藤苷元B([11α-O-(2-甲基丁酰基)-12β-O-乙酰基通关藤苷元B])含量的方法,并对不同产地的药材进行测定。方法:采用Agilent TC-C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相乙腈-水(35∶65),流速1.0 mL.min-1,检测波长210 nm,柱温25℃,进样量10μL。结果:ZP-7通关藤苷元B的线性范围为3.183～7.427μg(r=0.999 4),平均回收率99.95%(RSD 0.83%)。结论:方法准确,重复性好,专属性强,可控制药材的质量。

GC-MS分析测定乌骨藤挥发性成分

目的:研究乌骨藤挥发性成分。方法:采用石油醚和乙醚作为溶剂,用索氏提取法提取挥发性成分,气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)鉴定其化学成分。结果:采用石油醚作为溶剂鉴定出24种化合物,占挥发成分的55.43%,其中脂肪酸占75.10%,烷烃类占11.91%;乙醚作为溶剂提取鉴定出24种化合物,占60.43%,脂肪酸占38.98%,烷烃类占39.27%。结论:测定了乌骨藤挥发性成分,为进一步研究乌骨藤成分提供了理论依据。