黄芩苷修复肿瘤坏死因子-α诱导MCR-5细胞损伤的实验研究

目的探讨黄芩苷修复细胞损伤的作用及相关分子机制。方法首先采用10 ng·mL-1的肿瘤坏死因子(TNF-α)连续刺激体外培养的人胚肺成纤维细胞7 d,再用100μg·mL-1黄芩苷干预作用72 h,经β-半乳糖苷酶染色试剂染色后,通过倒置显微镜观察并评判细胞损伤情况及黄芩苷修复损伤效果;采用RT-qPCR法检测黄芩苷对TNF-α诱导的MCR-5细胞miR-22表达的影响;采用Western blot技术测定黄芩苷对TNF-α诱导的MCR-5细胞SIRT1及CDK6蛋白表达的影响。结果β-半乳糖苷酶活性检测结果显示,TNF-α诱导MCR-5细胞损伤率为65.2%,黄芩苷可明显修复MCR-5细胞的损伤,损伤率为52.4%;黄芩苷100μg·mL-1浓度可有效抑制损伤的MCR-5细胞miR-22的表达,促进SIRT1及CDK6表达(P均<0.05)。结论黄芩苷具有修复细胞损伤的作用,其作用可能与下调miR-22表达、增强SIRT1-CDK6路径的信号转导相关。

1株可裂解bla_(NDM-5)及mcr-1阳性大肠杆菌噬菌体的分离与生物学特性

旨在分离1株可裂解bla_(NDM-5)及mcr-1阳性大肠杆菌的噬菌体,探究该噬菌体的生物学特性,为防控bla_(NDM-5)及mcr-1阳性大肠杆菌感染提供新的技术思路。对分离出的噬菌体进行透射电镜观察、最佳感染复数、一步生长曲线等生物学特性试验及全基因组测序分析。结果显示:成功分离出1株大肠杆菌噬菌体vB_EcoM-ZQ1,该噬菌体属于有尾病毒目,肌尾病毒科,其最佳感染复数为0.1,潜伏期为20 min,裂解期为10 min,裂解量为92 PFU·cell^(-1)。在温度4~55℃、pH4~10条件下,该噬菌体都有较高的活性。其对多重耐药大肠杆菌有一定裂解作用,裂解率为25.5%。该噬菌体基因全长149112 bp,GC含量为49.1%,共有184个ORF,其中70个ORF编码功能蛋白,有2个ORF编码tRNA,并未发现含有耐药基因与毒力因子;经BLAST比对发现,噬菌体与Shigella phage phiSboM-AG3有92.37%的相似性,基于噬菌体末端酶大亚基构建的同源进化树结果可得结论,噬菌体vB_EcoM-ZQ1和与沙门菌噬菌体pSal-SNUABM-02的亲缘关系最近。综上提示,噬菌体vB_EcoM-ZQ1,生物学特性稳定,基因结构完整,为后续bla_(NDM-5)及mcr-1阳性大肠杆菌感染的防控奠定了一定前期基础。

一株多重耐药大肠杆菌全基因组测序及其耐药性分析

为了解大肠杆菌携带的粘菌素耐药基因并筛选敏感药物,解决多重耐药和动物临床无药可选的困局,采用16S rRNA菌种全基因组测序,PCR筛查mcr-4、mcr-5、blaTEM和AmpC酶耐药基因,应用BLAST和MEGA软件进行生物信息学和系统进化树分析,并对该菌株进行了78种抗生素抗菌药物敏感性测试及4种天然植物提取物(黄藤素、黄连素、黄芩苷和博落回)的抑菌、杀菌效果试验。结果表明,从2021年(1—12月)和2022年(1—6月)猪临床腹泻病例肠道中分离鉴定的145株大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)中,鉴定出1株同时携带粘菌素耐药基因(mcr-4,mcr-5)和β内酰胺酶blaTEM、AmpC基因的猪源大肠埃希氏菌临床菌株HN2149。78种抗生素药敏试验结果显示,HN2149菌株对头孢吡肟、头孢地嗪、磷霉素、头孢克肟、头孢唑林、头孢哌酮、美洛培南、头孢西丁、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶、替卡西林/克拉维酸、头孢哌酮/舒巴坦、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢噻肟/克拉维酸、头孢唑肟、头孢美唑、头孢他啶/克拉维酸和头孢他美敏感,对其余57种抗菌药物表现为耐药。4种植物提取物的药敏结果显示,博落回对菌株HN2149的抑菌、杀菌效果较好,其余3种提取物均对该菌株无抑菌和杀菌效果。以上研究结果为猪大肠杆菌病的防控提供参考。

Facile microwave-assisted synthesis of 1H-pyrazino[1,2-a]quinoxaline-1,5(6H)-dione derivatives via a nucleophilic substitution reaction

A series of compounds containing the 1H-pyrazino[1,2-a]quinoxaline-1,5(6H)-dione scaffold have been synthesized using a one-pot procedure under microwave irradiation. This new strategy allowed for the facile synthesis of target compounds in good yields and could be readily applied to the construction of diverse libraries of compounds for high throughput screening in medicinal chemistry.