黄芩苷修复肿瘤坏死因子-α诱导MCR-5细胞损伤的实验研究

目的探讨黄芩苷修复细胞损伤的作用及相关分子机制。方法首先采用10 ng·mL-1的肿瘤坏死因子(TNF-α)连续刺激体外培养的人胚肺成纤维细胞7 d,再用100μg·mL-1黄芩苷干预作用72 h,经β-半乳糖苷酶染色试剂染色后,通过倒置显微镜观察并评判细胞损伤情况及黄芩苷修复损伤效果;采用RT-qPCR法检测黄芩苷对TNF-α诱导的MCR-5细胞miR-22表达的影响;采用Western blot技术测定黄芩苷对TNF-α诱导的MCR-5细胞SIRT1及CDK6蛋白表达的影响。结果β-半乳糖苷酶活性检测结果显示,TNF-α诱导MCR-5细胞损伤率为65.2%,黄芩苷可明显修复MCR-5细胞的损伤,损伤率为52.4%;黄芩苷100μg·mL-1浓度可有效抑制损伤的MCR-5细胞miR-22的表达,促进SIRT1及CDK6表达(P均<0.05)。结论黄芩苷具有修复细胞损伤的作用,其作用可能与下调miR-22表达、增强SIRT1-CDK6路径的信号转导相关。

1株可裂解bla_(NDM-5)及mcr-1阳性大肠杆菌噬菌体的分离与生物学特性

旨在分离1株可裂解bla_(NDM-5)及mcr-1阳性大肠杆菌的噬菌体,探究该噬菌体的生物学特性,为防控bla_(NDM-5)及mcr-1阳性大肠杆菌感染提供新的技术思路。对分离出的噬菌体进行透射电镜观察、最佳感染复数、一步生长曲线等生物学特性试验及全基因组测序分析。结果显示:成功分离出1株大肠杆菌噬菌体vB_EcoM-ZQ1,该噬菌体属于有尾病毒目,肌尾病毒科,其最佳感染复数为0.1,潜伏期为20 min,裂解期为10 min,裂解量为92 PFU·cell^(-1)。在温度4~55℃、pH4~10条件下,该噬菌体都有较高的活性。其对多重耐药大肠杆菌有一定裂解作用,裂解率为25.5%。该噬菌体基因全长149112 bp,GC含量为49.1%,共有184个ORF,其中70个ORF编码功能蛋白,有2个ORF编码tRNA,并未发现含有耐药基因与毒力因子;经BLAST比对发现,噬菌体与Shigella phage phiSboM-AG3有92.37%的相似性,基于噬菌体末端酶大亚基构建的同源进化树结果可得结论,噬菌体vB_EcoM-ZQ1和与沙门菌噬菌体pSal-SNUABM-02的亲缘关系最近。综上提示,噬菌体vB_EcoM-ZQ1,生物学特性稳定,基因结构完整,为后续bla_(NDM-5)及mcr-1阳性大肠杆菌感染的防控奠定了一定前期基础。

一株多重耐药大肠杆菌全基因组测序及其耐药性分析

为了解大肠杆菌携带的粘菌素耐药基因并筛选敏感药物,解决多重耐药和动物临床无药可选的困局,采用16S rRNA菌种全基因组测序,PCR筛查mcr-4、mcr-5、blaTEM和AmpC酶耐药基因,应用BLAST和MEGA软件进行生物信息学和系统进化树分析,并对该菌株进行了78种抗生素抗菌药物敏感性测试及4种天然植物提取物(黄藤素、黄连素、黄芩苷和博落回)的抑菌、杀菌效果试验。结果表明,从2021年(1—12月)和2022年(1—6月)猪临床腹泻病例肠道中分离鉴定的145株大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)中,鉴定出1株同时携带粘菌素耐药基因(mcr-4,mcr-5)和β内酰胺酶blaTEM、AmpC基因的猪源大肠埃希氏菌临床菌株HN2149。78种抗生素药敏试验结果显示,HN2149菌株对头孢吡肟、头孢地嗪、磷霉素、头孢克肟、头孢唑林、头孢哌酮、美洛培南、头孢西丁、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、头孢他啶、替卡西林/克拉维酸、头孢哌酮/舒巴坦、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢噻肟/克拉维酸、头孢唑肟、头孢美唑、头孢他啶/克拉维酸和头孢他美敏感,对其余57种抗菌药物表现为耐药。4种植物提取物的药敏结果显示,博落回对菌株HN2149的抑菌、杀菌效果较好,其余3种提取物均对该菌株无抑菌和杀菌效果。以上研究结果为猪大肠杆菌病的防控提供参考。