mda-9/Syntenin在肿瘤转移过程中的作用

含有PDZ结构域的蛋白属于支架蛋白，在信号转导级联反应中起承上启下的作用，在细胞分裂、蛋白质运输及降解、基因表达等多种体内重要的生物学过程中发挥关键作用。PDZ是由最早发现含有此结构域的 post-synaptic density protein-95，drosophila disc large tumor suppressor ，zonula occludens-13种蛋白质首字母的缩写而得名，由80～90个氨基酸组成，包含两个α螺旋和6个β折叠。黑色素瘤分化相关基因m da-9／Syntenin是PDZ结构域蛋白家族成员之一，其通过特异性的定位调控体内多种分子事件。本文主要就含 PDZ结构域的mda-9／Syntenin在肿瘤的侵袭，转移过程中的作用及其机制进行综述。

Mda-9/Syntenin在肿瘤进展中的作用研究进展

Mda-9/Syntenin是含有2个PDZ结构域的支架蛋白,研究表明其能通过多种途径,经相应的信号转导通路在肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移以及肿瘤血管形成的过程中发挥重要作用。Syntenin主要通过2个PDZ结构域实现其功能,然而,其N-端结构域和C-端结构域对整个蛋白的稳定性发挥重要作用。文章旨在综述Mda-9/Syntenin在肿瘤进展中的作用及相关研究进展。

腺病毒介导的mda-7／IL-24抑制肝癌VEGF和MMP-9的表达

目的 观察mda-7/IL-24基因对高转移性人肝癌细胞HCCLM6中VEGF和MMP-9的作用,从而探讨mda-7/IL-24基因在抑制肿瘤转移方面的作用.方法 构建Ad.Mda-7并转染至HCCLM6;transwell实验检测侵袭能力的变化;通过RT-PCR和Western Blot分别检测转染mda-7/IL-24基因前后VEGF和MMP-9表达mRNA和蛋白的变化;构建HCCLM6高转移型裸鼠模型,采用Ad.Mda-7肿瘤内注射法干预,观察mda-7/IL-24对裸鼠生存状况的影响和肿瘤内VEGF和MMP-9 的变化.结果 复制缺陷型腺病毒能介导外源基因mda-7/IL-24在肝癌细胞中高效表达;mda-7/IL-24能显著下调肝癌细胞中VEGF和MMP-9的表达.Ad.mda-7能延长裸鼠的生存时间,抑制肿瘤的生长,瘤体内VEGF和MMP-9表达明显降低（P〈0.05）.结论 mda-7/IL-24基因能明显抑制肝癌细胞的侵袭力,其机制可能与下调VEGF和MMP-9的表达有关.

Herceptin和9-顺式视黄酸对MDA-MB-453乳腺癌细胞协同抑制作用的研究

目的 探讨Herceptin和9-顺式视黄酸联合用药对MDA—MB-453乳腺癌细胞的协同抑制效应。方法用Herceptin、9-顺式视黄酸单独和联合处理MDA—MB-453细胞24～72h，用MTT法观察其对乳腺癌细胞的增殖抑制效应，通过流式细胞仪法检测乳腺癌细胞周期相的分布，用TUNEL法检测细胞凋亡的情况。结果 Herceptin和9-顺式视黄酸联合作用组较对照和单独作用组能够显著抑制HER2／neu阳性乳腺癌细胞的增殖活性，并将其细胞周期进程阻遏于G0／G1期，同时还能有效诱导其发生凋亡。结论 Herceptin和9-顺式视黄酸联合用药可有效协同抑制HER2／neu阳性乳腺癌细胞的增殖活性。

蚊母草提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外运动能力的影响

目的研究蚊母草提取物(Extracts from Veronica peregrina L.,EVP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外运动能力的影响。方法采用MTT法检测EVP 40、80、160、320、640 g·L^(-1)生药浓度(相当于提取物浓度0.168、0.336、0.672、1.344、2.688 mg·mL^(-1))对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖的影响,计算各EVP处理组的细胞相对存活率。将MDA-MB-231细胞分为空白组、阳性对照组(BB-94组,终浓度为20 nmol·L^(-1))、EVP不同浓度组(终质量浓度为生药40、80、160 g·L^(-1)的EVP)。采用AP48 Chamber system和OrisTM细胞侵袭试剂盒分别检测EVP对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外迁移和侵袭能力的影响;鬼笔环肽(Phalloidin)染色法观察MDA-MB-231细胞骨架F-actin排列情况;Western Blot法检测细胞Runx2、磷酸化Runx2(p-Runx2)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达;采用SensoLyte^(■)570 Generic MMP检测试剂盒分析MDA-MB-231细胞的MMPs活性。结果EVP的终浓度分别为生药40、80、160、320、640 g·L^(-1)时,MDA-MB-231细胞相对存活率分别为(105.63±4.62)%、(92.81±8.34)%、(103.32±17.47)%、(69.08±4.32)%、(41.82±12.63)%,低浓度EVP对MDA-MB-231细胞的生存无明显影响,后续研究中采用生药40、80、160 g·L^(-1)作为各EVP处理组的终浓度。与空白组相比,BB-94组及EVP生药40、80、160 g·L^(-1)浓度组的迁移细胞数显著减少(P<0.01)。空白组的绝大多数细胞可突破基质胶,侵袭至中央空白处,几乎完全覆盖中央圆形无细胞区域;而BB-94组及EVP各浓度组的MDA-MB-231细胞侵袭则明显被抑制,均不能完全侵袭至中央区域,且中央无细胞区域的大小呈现一定的剂量依赖性。空白组MDA-MB-231细胞中,F-actin沿细胞长轴整齐排列,F-actin在细胞周边聚集成应力纤维;而BB-94组及EVP各浓度组的MDA-MB-231细胞内,F-actin均呈无规则的紊乱排列,应力纤维明显减少。与空白组相比,EVP生药40、80、160 g·L^(-1)浓度组MDA-MB-231细胞的Runx2蛋白表达无明显变化(P>0.05),而p-Runx2、MMP-9蛋白表达均显著下调(P<0.01),MMPs活性明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论EVP可显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外运动能力,具有潜在的抗转移作用,其机制可能与抑制Runx2活化,进而干扰其下游MMP-9等靶基因表达有关。

Bcl-9基因敲除对乳腺癌细胞株侵袭及迁移能力作用研究

目的初步研究Bcl-9基因在3种乳腺癌细胞株中的表达情况,探讨Bcl-9基因的敲除对乳腺癌细胞株侵袭及迁移能力的影响及意义。方法分析3种不同表型的人乳腺癌细胞株,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RTPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7和MDA-MB-453中Bcl-9 mRNA及蛋白表达水平,筛选出高表达Bcl-9的细胞株;构建Bcl-9慢病毒质粒shRNA,针对高表达Bcl-9的细胞株做Bcl-9基因敲除实验;采用Transwell细胞小室及细胞划痕实验进一步研究Bcl-9基因的敲除对乳腺癌细胞株侵袭及迁移能力的影响。结果 MDA-MB-231细胞株Bcl-9 mRNA和蛋白表达水平均高于MCF-7和MDA-MB-453,且MCF-7高于MDAMB-453(P<0.05)。实验组Bcl-9 mRNA和蛋白表达水平、MDA-MB-231穿膜细胞数、划痕愈合率均低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论 Bcl-9基因的敲除可有效抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭及迁移能力,提示其可能成为抑制乳腺癌细胞侵袭及转移新的分子靶点。

氨氯地平对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭影响的体外实验

目的探讨氨氯地平对人乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231体外侵袭的影响及其相关机制。方法用8.34μmol/L氨氯地平处理肿瘤细胞,以人工重组基底膜侵袭小室(Transwell)观察氨氯地平对MDA-MB-231细胞侵袭的影响;免疫细胞化学方法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-9(matrix met-allo-proteinase,MMP-9)的表达。结果8.34μmol/L的氨氯地平可显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力,侵袭抑制率为36.27%;免疫细胞化学检测结果显示,MMP-9和VEGF蛋白的表达在MDA-MB-231细胞中亦明显降低。结论氨氯地平对MDA-MB-231细胞体外侵袭具有明显的抑制作用,此作用与降低肿瘤细胞的MMP-9和VEGF的表达有关。

大蒜素对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭作用的影响

目的:探讨大蒜素对人乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231体外侵袭的影响和相关机制。方法:用20mg/L大蒜素处理肿瘤细胞,以人工重组基底膜侵袭小室(Transwell)观察大蒜素对人乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231侵袭的影响;免疫细胞化学方法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metallo-proteinase,MMP-9)的表达。结果:20mg/L的大蒜素可显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力,侵袭抑制率为33.27%;免疫细胞化学显示,MMP-9和VEGF蛋白的表达在MDA-MB-231细胞中亦明显降低。结论:大蒜素对人乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231体外侵袭具有明显的抑制作用,此作用与降低肿瘤细胞的MMP-9和VEGF表达有关。

山慈菇-蜂房药对抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外侵袭转移的机理研究

目的研究山慈菇-蜂房药对对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响及其作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测山慈菇-蜂房药对大鼠含药血清对细胞活力的影响,Transwell小室法测定其侵袭力,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)基因的表达。结果山慈菇-蜂房药对组MDA-MB-231细胞体外生长杀伤率为35.86%;能明显抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力(P<0.01),其抑制率为34.8%;MMP-9 mRNA明显降低,TIMP-1 mRNA明显升高,MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA值显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论山慈菇-蜂房药对能够抑制MDA-MB-231细胞侵袭能力,其机制可能与下调MMP-9mRNA表达,上调TIMP-1mRNA的表达,降低MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比值有关。

曲古菌素A对乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用

目的:研究组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase,HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭、细胞周期及ERα表达的影响。方法:100～400nmol/L的TSA分别处理MDA-MB-231细胞6～48h后用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测MDA-MB-231细胞的生长活性。应用流式细胞仪观察细胞周期的变化。采用RT -PCR法检测MDA-MB-231细胞在24h不同浓度100～400nmoi/L TSA作用下对ERα,MMP-9 mRNA表达的影响。采用免疫组织化学法检测MDA-MB-231细胞在24h不同浓度100～400nmol/L TSA作用下对ERα,MMP-9在细胞中表达的影响。采用细胞侵袭实验检测MDA-MB-231细胞在24h不同浓度100～400nmol/L TSA作用下细胞侵袭力的变化。结果:TSA可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,呈时间及剂量依赖性。TSA能够延缓细胞周期G_2/M期进程,阻滞细胞于G_2期。RT-PCR显示,TSA能够上调ERαmRNA在MDA-MB-231细胞中的表达,下调MMP-9在MDA-MB-231细胞中的表达。侵袭实验显示TSA能够较明显的抑制MDA-MB-231细胞的侵袭。结论:TSA能够较明显的上调ERα与下调MMP-9的表达可能是抑制MDA-MB-231细胞增生侵袭与转移的重要机制之一。

不同浓度血通灵对人乳腺癌细胞侵袭作用及基质金属蛋白酶-9蛋白表达的影响

目的探讨血通灵对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移作用机制。方法 Transwell侵袭实验检测不同浓度血通灵对细胞侵袭作用的影响,初步明确药物抗肿瘤转移的物质基础;应用明胶酶谱法检测血通灵对MDA-MB-231细胞分泌基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响;Western blot检测不同浓度血通灵干预后细胞中MMP-9蛋白表达的变化。结果不同浓度血通灵均能显著抑制细胞分泌MMP-9能力、细胞侵袭能力和细胞内MMP-9蛋白表达,该抑制作用呈剂量依赖关系。结论血通灵可能通过下调MDA-MB-231细胞中MMP-9蛋白表达而降低活性MMP-9的分泌,抑制细胞的侵袭能力。

乳腺癌细胞中E1AF,MMP-1和MMP-9的表达及其相关性

目的 探讨雌激素受体阳性（ER＋）乳腺癌细胞MCF-7和雌激素受体阴性（ER-）乳腺癌细胞MDA-MB-231及MDA-MB-435s中E1AF,MMP-1和MMP-9表达情况及相关性.方法 应用免疫细胞化学技术检测3种不同乳腺癌细胞中MMP-9的表达,采用RT-PCR方法检测细胞株中E1AF,MMP-1及其mRNA表达.结果 ER（-）乳腺癌细胞MDA-MB-231中E1AF基因、MMP-1及其mRNA的表达水平与MMP-9的表达高于ER（＋）乳腺癌细胞MCF-7和ER（-）乳腺癌细胞MDA-MB-435s.结论 乳腺癌细胞中E1AF的表达与MMP-1,MMP-9的表达存在相关性,E1AF可能是乳腺癌侵袭转移的重要因子.

扶正通络解毒汤对急性心肌梗死大鼠心肌组织内游离钙离子浓度、MMP-9、MDA及SOD的影响

目的探讨扶正通络解毒汤对急性心肌梗死(AMI)大鼠模型血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性及心肌组织内游离钙离子浓度的影响。方法选取60只健康雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为造模组与假手术组,每组30只,造模组采用改良冠脉结扎手术法制作AMI大鼠模型,术中进行心电图监测,以大鼠左室前壁变白、心跳减弱、心电图Ⅱ导联ST段弓背向上抬高≥0.1 mV或病理性Q波作为手术成功的标志;假手术组仅开胸,不给予冠脉结扎,术后2 h抽取鼠尾静脉血测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、心肌钙蛋白(cTnI)浓度,造模组大鼠血清CK-MB活性比值及c TnI浓度较假手术组升高,差异有统计学意义(P<0.05),证明造模成功。将30只AMI大鼠随机分为3组,每组10只,造模后笼养24 h灌胃给药,中药组给予8 g/kg扶正通络解毒汤,西药组给予2.6 mg/kg的硫氮酮,模型组给予等量0.9%氯化钠溶液。每日给药1次,给药第7日抽取鼠尾静脉血,采用酶联免疫吸附法在给药前后测定血清中MMP-9、MDA浓度和SOD活性。取血后处死大鼠,取出心脏组织,将梗死区剪成小块,采用比色法测定梗死区心肌细胞游离钙离子浓度。结果1)给药前,3组大鼠血清MMP-9、MDA浓度和SOD活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。给药7 d后,3组大鼠血清MMP-9、MDA浓度较给药前降低,血清SOD单位活性较给药前增加,差异有统计学意义(P<0.05)。且给药后3组血清MMP、MDA浓度、SOD活性差异有统计学意义(P<0.05)。MMP-9、MDA浓度:中药组<西药组<模型组;SOD活性:中药组>西药组>模型组。2)给药第7日,3组大鼠梗死区心肌组织内游离钙离子浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05):中药组<西药组<模型组。结论扶正通络解毒汤可促进AMI模型大鼠的MMP-9、MDA浓度和SOD活性的改善,也能降低缺血心肌组织内游离钙离子浓度。

FRNK对人乳腺癌MDA-MB-435细胞迁移的抑制作用

背景与目的:粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)的高表达或过度激活与肿瘤迁移密切相关。粘着斑相关非激酶(FAKrelatednon-kinase,FRNK)是FAK内源性抑制剂,通过与FAK竞争粘着斑结合位点抑制FAK活性。本研究旨在探讨FRNK对人乳腺癌细胞MDA-MB-435迁移的抑制作用及相关机制。方法:RT-PCR法克隆目的基因FRNK,构建pcDNA3.1-FRNK重组质粒;利用脂质体转染MDA-MB-435细胞,经G418筛选抗性单细胞克隆,通过Westernblot鉴定稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞并检测其与野生型MDA-MB-435细胞中基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase9,MMP-9)表达水平;采用体外划痕修复实验和Boyden趋化小室比较野生型和稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞的非定向及定向迁移运动能力。结果:成功构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-FRNK,建立稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞。高表达FRNK的细胞较野生型MDA-MB-435细胞MMP-9蛋白表达降低73.1%。在划痕修复实验中,稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞移行面积与空白面积之比为0.35±0.02,与野生型MDA-MB-435细胞(0.58±0.06)相比划痕修复能力明显减弱(P<0.05);在趋化小室实验中,高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞迁移数为65.15±8.56,仅为野生型MDA-MB-435细胞迁移数(97.86±5.44)的66.57%。结论:FRNK可抑制MDA-MB-435细胞迁移运动,该抑制作用与MDA-MB-435细胞中MMP-9表达下调有关。

赫赛汀及9-顺式视黄酸对乳腺癌联合抑制作用

目的探讨赫赛汀联合9-顺式视黄酸对ErbB2阳性乳腺癌细胞周期进程及分布的影响及其相应的分子机制。方法利用流式细胞仪检测经赫赛汀、9-顺式视黄酸单独和联合作用后,癌基因(ErbB2/neu)阳性的MDA-MB-453乳腺癌细胞周期进程和分布的变化。在此基础上,利用免疫印记和半定量PCR法对CDK2、CyclinE、P27的表达进行检测,同时利用免疫沉淀法检测CyclinE/CDK2结合力的变化。结果与对照组比较,一定剂量的赫赛汀和9-顺式视黄酸可将MDA-MB-453细胞的周期进程阻遏于G0/G1期从而抑制其增殖活性。经2者联合作用后,CyclinE、CDK2的表达较对照组均有所下降,其中以CDK2的变化最为明显,而P27蛋白表达则明显升高。同时,2者联合作用还能有效降低CyclinE/CDK2的结合能力。结论赫赛汀和9-顺式视黄酸可在体外分别通过改变CyclinE、CDK2和P27的表达和活性起到协同抑制HrbB2/neu阳性乳腺癌的目的。

miR-9-5p对乳腺癌恶性生物学行为的影响及其调控机制

目的:探讨miR-9-5p在乳腺癌恶性生物学行为中发挥的作用及其可能的调控机制。方法:利用OncomiR在线数据库分析miR-9-5p在乳腺癌组织与正常乳腺组织中表达的差异,qPCR检测乳腺癌细胞系与正常乳腺细胞中miR-9-5p表达水平。基于靶基因预测软件TargetScan分析ONECUT2(one cut homeobox 2)可能是miR-9-5p的作用靶基因,双荧光素酶报告实验验证两者的靶向关系。向MDA-231细胞中分别转染miR-9-5p mimic、ONECUT2 siRNA及相应对照,qPCR及WB实验检测转染对MDA-231细胞中干性基因NOTCH1、NANOG和Y染色体性别决定区(sex-determing region of Y chromosome,SRY)-盒转录因子9(SRY-box transcription factor 9,SOX9)表达水平的影响,BrdU法、AnnexinⅤ流式细胞术、MTS实验分别检测转染对细胞增殖、凋亡和化疗耐药的影响,ALDEFLUOR染色流式细胞术检测miR-9-5p及靶基因ONECUT2对肿瘤干细胞化特征的影响。建立NSG小鼠乳腺癌化疗模型,体内实验进一步验证ONECUT2对肿瘤干性化及化疗抵抗等肿瘤恶性生物学行为的影响。结果:miR-9-5p在乳腺癌组织(P=0.007)及乳腺癌MDA-231细胞系(P=0.0005)中呈现显著高表达,并与乳腺癌患者不良预后呈正相关(P=0.0016)。miR-9-5p可靶向负调控ONECUT2,进而增加ALDH+MDA-231细胞比例(P=0.0006),上调干性NOTCH1、NANOG和SOX9蛋白表达,并增强乳腺癌细胞抗凋亡能力(P=0.0003)及其对多西他赛(DTX)和多柔比星(DOXO)化疗的耐受性;然而miR-9-5p/ONECUT2轴未能显著影响MDA-231细胞的增殖能力(P>0.05)。与对照组相比,MDA-231/ONECUT2组小鼠接受DTX治疗后,移植瘤体积较对照组显著缩小(P<0.05),瘤组织中NOTCH1、SOX9蛋白和ABC转运蛋白的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:乳腺癌组织中高表达的miR-9-5p通过靶向ONECUT2诱导乳腺癌干细胞化及抗凋亡能力,增强了其对化学治疗的抵抗性。

Herceptin联合9-顺式视黄酸对ErbB2阳性乳腺癌细胞的抑制作用及其相关分子机制的研究

目的探讨Herceptin联合9-顺式视黄酸对ErbB2阳性乳腺癌细胞的协同增殖抑制效应及其分子机制。方法利用MTT法检测经Herceptin、9-顺式视黄酸单独和联合作用后HER2/neu阳性的MDA-MB-453乳腺癌细胞的增殖活性的变化,在此基础上,利用免疫印记和半定量PCR法对HER2/neu、RXR以及COX-2的表达进行检测,同时利用ELISA法检测细胞培养上清内PGE-2的水平变化。结果一定剂量的Herceptin和9-顺式视黄酸能够有效协同抑制MDA-MB-453细胞的增殖活性。经二者联合作用后,磷酸化、非磷酸化的ErbB2以及COX-2的表达较对照组均显著下降,而RXRα的表达则无明显变化。同时,二者联合作用还能有效降低细胞PGE-2的分泌水平。结论Herceptin和9-顺式视黄酸可在体外分别通过抑制HER2/neu和COX-2的表达和活性来达到协同抑制HER2/neu阳性乳腺癌的作用。

CARD9蛋白与乳腺癌患者特征及癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响

目的探讨胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitment domain containing protein 9,CARD9)与乳腺癌患者临床特征关系及对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。方法选取2018年1月至2019年9月咸宁市中心医院保存的乳腺癌标本90例,同时选取癌旁组织作为对照,采用Western印迹检测CARD9蛋白表达,组间差异比较采用t检验;选取人类乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞,分为对照组、空白转染组和阳性转染组,其中空白转染组转染空白质粒,阳性转染组转染CARD9表达质粒,采用CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell试验检测细胞侵袭,组间差异比较采用F检验。结果乳腺癌组织CARD9蛋白相对表达量为(1.03±0.22),明显高于癌旁组织(P<0.05);肿瘤直径>5 cm、TNM分期Ⅲ期、ER表达阳性组织CARD9蛋白相对表达量分别为(1.12±0.20)、(1.27±0.21)和(1.12±0.19),明显高于肿瘤直径≤5 cm、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、ER表达阴性组织(P<0.05);阳性转染组细胞培养24、48和72 h时A值分别为(0.487±0.102)、(0.702±0.107)和(0.972±0.106),明显高于对照组和空白转染组(P<0.05);阳性转染组、空白转染组和对照组细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05);阳性转染组细胞侵袭数为(101.2±11.4)个,明显多于空白转染组和对照组(P<0.05)。结论乳腺癌组织CARD9蛋白表达上调,与肿瘤直径、TNM分期及ER表达有一定关系;CARD9表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及侵袭能力有一定影响,对细胞凋亡无明显影响。

ARK5与乳腺癌侵袭转移关系的研究

目的探讨ARK5在乳腺癌侵袭和转移中的意义。方法采用免疫组化SP法检测58例乳腺癌组织和15例癌旁乳腺组织中MMP-2、MMP-9及ARK5表达。应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染MDA-MB-435细胞株,采用Western blot法检测瞬时转染后ARK5蛋白表达情况。通过体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化。ARK5下降后,再次进行Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果乳腺癌组织中MMP-2、MMP-9和ARK5免疫组化阳性结果之间存在正相关性。转染后的细胞株命名:转染ARK5质粒的MDA-MB-435细胞称之为SiARK5/MDA-MB-435,转染对照质粒的MDA-MB-435细胞称之为Scr/MDA-MB-435。转染72 h后,与Scr/MDA-MB-435细胞相比,SiARK5/MDA-MB-435细胞的ARK5蛋白表达水平降低。ARK5表达降低的乳腺癌细胞侵袭并穿透Matrivgel膜基质的细胞数量比对照组少(P<0.01),且MMP-2、MMP-9蛋白表达量降低。结论应用小RNA干扰技术降低ARK5蛋白的表达使MDA-MB-435细胞侵袭转移能力降低,同时MMP-2、MMP-9蛋白表达降低,提示ARK5通过MMP-2、MMP-9在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用。

骨形态发生蛋白9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)在体内、外对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。方法:将pAdtrack-CMV/BMP9和pAdtrack-CMV/GFP腺病毒感染MDA-MB-231细胞,RT-PCR法检测MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231/BMP9细胞中BMP9mRNA的表达,MTT法、平板集落形成实验和FCM法检测细胞增殖和凋亡的情况。建立裸鼠MDA-MB-231、MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231/BMP9移植瘤模型,测量移植瘤体积,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果:MDA-MB-231和MDA-MB-231/GFP细胞中无BMP9mRNA的表达,MDA-MB-231/BMP9细胞中有明显BMP9mRNA表达;MDA-MB-231/BMP9细胞增殖抑制率高于MDA-MB-231/GFP细胞(P<0.05),而细胞集落形成率明显低于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.05),细胞凋亡率则明显高于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.05)。MDA-MB-231/BMP9组的裸鼠移植瘤体积明显小于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.001),而移植瘤细胞中的凋亡指数则明显高于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.001)。结论:BMP9可在体内、外抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖并促进其凋亡。