MDMB-4en-PINACA及其代谢标记物在大鼠体内降解规律及动态分布研究

本文旨在建立生物样品中MDMB-4en-PINACA及其代谢标记物的高效液相色谱–三重四极杆串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法,探索MDMB-4en-PINACA及其水解代谢物(M1)和脱烷基代谢物(M2)在大鼠体内降解规律及动态分布规律。将5只SD大鼠分为5组,一组为空白对照组,另外四组灌胃给药MDMB-4en-PINACA后分别置于干净代谢笼中,分别收集1~15 d的尿液;将60只SD大鼠随机分为15组,一组作为空白对照组,其余14组通过灌胃给药MDMB-4en-PINACA,分别在不同时间点(15min、30min、45min、1h、1.5h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、10h、12h)处死,立即取血、尿及组织(心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉)。用HPLC-MS/MS检测血液、尿液、各组织中MDMB-4en-PINACA及代谢标记物M1和M2的质量浓度。MDMB-4en-PINACA进入大鼠体内后,迅速分布代谢,各组织和血液中均在15 min内达最高浓度,MDMB-4en-PINACA在体内的分布特点为:脑>脾>血>肺>心脏>肝>肾>肌肉>尿;M1的分布特点为:血>脾>肺>脑>肝>肾>心脏>肌肉>尿;M2的分布特点为:血>肝>心脏>肺>脑>脾>肾>肌肉>尿。在0~12 h内MDMB-4en-PINACA及代谢标记物在各组织中呈不同规律的降解。在对1~15 d尿液的监控中,MDMB-4en-PINACA及其代谢标记物仅在少量样本中检出。本文建立的方法操作简单、检出限低、回收率高、重现性好,适用于生物样品中MDMB-4en-PINACA及代谢标记物的检验。经灌胃MDMB-4en-PINACA进入大鼠体内后,监测MDMB-4en-PINACA及代谢标记物在大鼠体内的动态分布及降解规律为体内MDMB-4en-PINACA检验提供科学依据。

吲哚酰胺类新型合成大麻素5F-MDMB-PICA和MDMB-FUBICA的LC-MS/MS测定方法

5F-MDMB-PICA和MDMB-FUBICA属于新型合成大麻素,且均具有吲哚酰胺结构,建立一种液相色谱-串联质谱法同时测定上述2种吲哚酰胺类新型合成大麻素方法。液相色谱选用色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18(1.7μm,2.1 mm×100 mm),流动相0.2%甲酸乙腈溶液和0.2%甲酸水溶液进行梯度洗脱;采用ESI离子源正离子方式,多反应监测模式(MRM)进行定量分析。结果表明,该方法对5F-MDMB-PICA和MDMB-FUBICA的测定在0.1~20 ng/mL范围内呈现良好的线性关系,检出限为0.05 ng/mL(S/N≧3),定量限为0.1 ng/mL(S/N≧10),日内精密度和日间精密度均小于6%。该方法准确可靠、重复性好,能够满足实际案件中对合成大麻素测定的实际需要。

新型烷基甲酰吲哚类合成大麻素MDMB-4en-PINACA的检验

本文利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)、红外光谱(IR)、高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(HPLC-QTOF)、核磁共振(NMR)等技术对新型烷基甲酰吲哚类合成大麻素MDMB-4en-PINACA进行结构确认。采用硅胶层析法对缴获的可疑烟叶进行纯化获得目标成分,利用GC-MS、IR、HPLC-QTOF、^(1)H-NMR、^(13)C-NMR等方法进行分析,确定目标物结构。结果表明,通过HPLC-QTOF获得未知化合物的精确质量数为358.2209及同位素峰簇特征,利用^(1)H-NMR确定质子数为27及其归属,^(13)C-NMR确定碳类型,确定分子式为C_(20)H_(27)N_(3)O_(3),通过红外吸收确定官能团类型,确认该物质为合成大麻素MDMB-4en-PINACA。利用GC-MS、IR、HPLC-QTOF、^(1)H-NMR、^(13)C-NMR多种方法对未知精神活性物质进行检验具有可靠性和参考性。

新型合成大麻素MDMB-4en-PINACA、ADB-BUTINACA在大鼠体内代谢研究

通过动物实验探索MDMB-4en-PINACA和ADB-BUTINACA两种合成大麻素在大鼠体内的代谢方式,确定主要代谢物和代谢标记物。利用高效液相色谱–四极杆飞行时间质谱(HPLC-QTOF)筛查给药后MDMB-4en-PINACA和ADB-BUTINACA在大鼠血液和肝组织中可能存在的代谢物;12只SD大鼠随机分为两组,禁食12 h,按1.0 mg/kg腹腔注射给药,第一组为MDMB-4en-PINACA实验组,第二组为ADB-BUTINACA实验组,在给药后5、15、30、60、120 min分别处死取血液和肝组织,经处理后检测分析。结果表明:合成大麻素MDMB-4en-PINACA进入大鼠体内后,经双键氧化羧基化、酯水解、4-脱戊烯基化、羟基化代谢成相应的代谢物;ADB-BUTINACA进入大鼠体内后,经水解、4-脱烷基化、4-丁基羟基化、羟基化代谢成相应的代谢物。根据检测大鼠血液和肝组织中成分的响应强度,MDMB-4en-PINACA代谢物主要有4-戊烯基氧化羟基化代谢物(编号M6),4-戊烯基氧化羧基化代谢物(编号M7),丁酸甲酯水解代谢物(编号M2)和进一步羟基化代谢物(编号M3、M4、M5),n-脱烷烯基化代谢物(编号M1),确定MDMB-4en-PINACA代谢标记物为M1和M2。ADB-BUTINACA的代谢物主要有4-脱丁基化代谢物(编号A1)和甲酰胺基水解代谢物(编号A2),4-丁基羧基化代谢物(编号A3),4-丁基羟基化代谢物(编号A4),确定ADB-BUTINACA代谢标记物为A1和A2。

合成大麻素类新精神活性物质5F-MDMB-PICA的检验

目的建立基于红外光谱(FT-IR)、气相色谱-质谱(GC-MS)、高分辨质谱(high resolution mass spectrometer,HRMS)、核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance spectroscopy,NMR)等多技术联合检验合成大麻素类新精神活性物质5F-MDMB-PICA的方法。方法粉末样品直接用FT-IR检测;粉末样品用甲醇溶解、烟丝样品用甲醇提取后采用GC-MS和高分辨质谱检测;粉末样品用氘代甲醇溶解后进行核磁共振氢谱(1H NMR)结构确证。结果GC-MS检测测得样品中主要组分的质谱特征离子(m/z)为232(基峰)、144、376、320、288、260、116、212,HRMS实测的精确质量数[M+H]+为377.22305,经数据库检索比对再结合数据分析,并经1H NMR确证,确定了该样品为5F-MDMB-PICA。而且,样品中主要组分的GC-MS保留时间和特征离子与5F-MDMB-PICA对照品一致。结论本研究建立的方法快速、简便、准确,可用于样品中5F-MDMB-PICA的检验,同时可为其他合成大麻素类新精神活性物质的检验提供方法参考。

疑似电子烟油和毛发中新型合成大麻素MDMB-4en-PINACA检测方法研究

通过建立联合傅里叶变换红外光谱、气相色谱-质谱、液相色谱-质谱多种技术联合鉴定方法,对实际案件中可疑电子烟油和毛发进行鉴定。GC-MS测得样品主要组分的质谱特征离子m/z分别为131、145、171、185、213、269、301、357,经查阅资料和数据库检索结合质谱分析与标准品比对,判断其含有合成大麻素3,3-二甲基-2-[1-(4戊烯-1-基)-1H-吲唑-3-甲酰氨基]丁酸甲酯。此方法能用于未知样品中MDMB-4en-PINACA的鉴定,且灵敏度高、准确可靠,为此类合成大麻素的鉴定提供参考依据。

ASE-HPLC-MS/MS检测生物样本中MDMB-4en-PINACA及其代谢物

为建立快速溶剂萃取–高效液相色谱–三重四极杆串联质谱(ASE-HPLC-MS/MS)检测以肝、肾组织为代表的生物样本中MDMB-4en-PINACA及其代谢物的方法,本文考察了液液萃取、快速溶剂萃取对生物样本中药物的提取效果,用高效液相色谱-三重四极杆串联质谱对生物样本中MDMB-4en-PINACA及代谢物进行分析。结果显示,快速溶剂萃取法回收率最高,在0.5~200 ng/g范围内生物样本中MDMB-4en-PINACA、其水解产物(M1)和脱烷烯基代谢物(M2)浓度与峰面积线性关系良好(r大于0.997 3),MDMB-4enPINACA、M1和M2在肝组织中最低检出限均为0.01 ng/g;MDMB-4en-PINACA、M1和M2在肾组织中最低检出限分别为0.01、0.03和0.02 ng/g。快速溶剂萃取–液相色谱-串联质谱法操作简单、回收率高,可用于生物样本中MDMB-4en-PINACA及其代谢物的检验。

液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱鉴定一种新精神活性物质5F-MDMB-PICA在斑马鱼体内的代谢产物

通过建立斑马鱼模型研究5F-MDMB-PICA(3,3-二甲基-2-[1-(5-氟戊基)吲哚-3-甲酰氨基]丁酸甲酯)的体内代谢转化途径,利用液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱(LC-Q-Orbitrap MS)技术,结合Mass Frontier软件对5F-MDMB-PICA及其代谢产物进行质谱解析和结构分析。结果表明,在斑马鱼体内共检测到5F-MDMB-PICA的22个代谢产物,包括15个I相代谢产物以及7个Ⅱ相代谢产物。5F-MDMB-PICA在斑马鱼体内的Ⅰ相代谢途径主要包括酯水解、脱烷基化、氧化脱氟、羧基化和羟基化,葡萄糖醛酸及硫酸结合反应是主要的Ⅱ相代谢转化途径。该研究初步阐明了5F-MDMB-PICA在斑马鱼体内的代谢途径及主要代谢产物,其中酯水解代谢产物(A19)被推荐为5F-MDMB-PICA滥用生物标志物,6个Ⅱ相代谢产物(A1、A3、A5、A7、A6、A14)为首次报道。

电子烟油中新型合成大麻素5F-ADBICA和5F-MDMB-PICA的GC-MS检验分析

目的:5F-ADBICA和5F-MDMB-PICA属于新型合成大麻素,且二者具有同样的吲哚母核结构,本文首次报道了5F-ADBICA和5F-MDMB-PICA电子烟油,建立了气相色谱-质谱联用(GC-MS)分析方法。方法:未知样品混合均匀后用乙酸乙酯提取,吸取上清液采用气相色谱-质谱检测。结果:经GC-MS检测,测得目标样本中未知组分的质谱特征碎片峰及保留时间,经与相关标准物质的质谱图和保留时间比对,最终认定目标样本分别含有5F-ADBICA和5F-MDMB-PICA成分。结论:该方法简单可靠,可用于新型合成大麻素5F-ADBICA和5F-MDMB-PICA的检验。

新精神活性物质4F-MDMB-BUTINACA在斑马鱼体内的代谢

目的通过建立斑马鱼模型研究合成大麻素2-[1-(4-氟丁基)-1H-吲唑-3-甲酰氨基]-3,3-二甲基丁酸甲酯(4F-MDMB-BUTINACA)的体内代谢转化途径。方法将6条成年斑马鱼随机分为空白对照组和实验组,每组3条。实验组斑马鱼在4F-MDMB-BUTINACA(1μg/mL)药液中暴露染毒24h后转移到清水中清洗3次,进行样品前处理,待仪器分析。空白对照组斑马鱼不暴露于4F-MDMB-BUTINACA。采用液相色谱-高分辨质谱技术结合Mass Frontier软件对4F-MDMB-BUTINACA及其代谢产物进行质谱解析和结构分析。结果斑马鱼体内共检测到4F-MDMB-BUTINACA的26个代谢产物,包括18个Ⅰ相代谢产物以及8个Ⅱ相代谢产物。4F-MDMB-BUTINACA在斑马鱼体内的Ⅰ相代谢途径主要包括酯水解、脱烷基化、氧化脱氟和羟基化,葡萄糖醛酸结合反应是主要的Ⅱ相代谢转化途径。结论酯水解代谢产物Md24和酯水解脱氢代谢产物Md25被推荐为4F-MDMB-BUTINACA滥用的良好生物标志物。

UHPLC-MS/MS法测定小鼠血浆和脑中的4F-MDMB-BUTICA含量

目的:建立液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)测定小鼠血液和脑组织样本中4F-MDMB-BUTICA的含量。方法:采用液相色谱串联质谱法,使用C_(18)色谱柱,以0.1%甲酸水和乙腈为流动相,以5F-MDMB-PICA为内标物质,通过液-液萃取前处理后对滥用4F-MDMB-BUTICA后小鼠的血液和脑组织样本中的4F-MDMB-BUTICA进行定量检测,并对该方法进行方法学验证。结果:血浆和脑组织中的4F-MDMB-BUTICA在0.1~100 ng/ml的范围内均线性关系良好(R^(2)分别为0.9942和0.9939),最低检出限为0.1 ng/ml。日内准确度和日间准确度均在85%~115%范围内,日内精密度和日间精密度均小于15%,且基质效应的影响在85%~115%范围内,表明该方法下基质无明显增强或抑制效应。结论:本研究建立了一种准确、灵敏、可靠的检测方法使用液相色谱串联质谱法(UHPLC-MS/MS)检测血液和脑组织样本中4F-MDMBBUTICA,为该物质基于动物的相关成瘾研究做基础。

尿液中大麻及合成大麻素MDMB-4en-PINACA、ADB-BUTINACA酶水解条件研究

目的合成大麻素类(synthetic cannabinoids,SCs)新精神活性物质进入人体后被广泛代谢,在尿液中通常很难检出合成大麻素原体,大多数以代谢物及代谢物葡糖醛酸结合形式存在,需在尿液前处理方法中断裂葡糖醛苷酸链,将葡萄糖醛酸结合物还原。本研究针对尿液中SCs的酶水解条件进行优化。方法采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析方法,对阳性尿液中11-去甲基-9-羧基-THC(Δ^(9)-THC-COOH)的酶水解条件进行优化,并与碱消解方法进行比较;同时对MDMB-4en-PINACA、ADB-BUTINACA阳性尿液的酶水解条件进行了优化研究。结果在55℃条件下,添加3μL的β-d-葡萄糖醛苷酸酶溶液(>100000 units/mL)酶解30min可充分水解Δ^(9)-THC-COOH葡萄糖醛酸结合物,在75℃条件下,添加3μL的β-d-葡萄糖醛苷酸酶溶液(>100000units/mL)孵育30min可充分水解MDMB-4en-PINACAM和ADB-BUTINACAM葡萄糖醛酸结合物。结论该研究可为检测尿液中合成大麻素类新精神活性物质建立快速、准确、可靠的酶水解方法提供参考。

GC/MS和UPLC-QE-Orbitrap-MS联合检验电子烟油和血中MDMB-4en-PINACA一例

目的检验电子烟油和血中新型合成大麻素MDMB-4en-PINACA,为毒品鉴定提供参考信息。方法采用GC/MS和高分辨LC/MS联合法对电子烟油中的MDMB-4en-PINACA进行定性检验;采用UPLC-QE-Orbitrap-MS法检测血液提取液,并与电子烟油中已定性确认的MDMB-4en-PINACA色谱保留时间和高分辨质谱作比对分析。结果检验血中目标物质与MDMB-4en-PINACA提取离子保留时间相一致,与母离子m/z358,子离子m/z213、m/z298、m/z231等碎片高度吻合,确认血中检出MDMB-4en-PINACA。该结果系国内首次报道在吸食者血液中检出的案例。结论GC/MS和高分辨LC/MS联合检测方法适于吸毒案件中新型合成大麻素的定性检验。

合成大麻素类新精神活性物质4F-MDMB-BICA的检测

目的建立基于红外光谱(fourier transform infrared,FT-IR)、气相色谱-质谱联用(gas chromatographymass spectrometry,GC-MS)、高分辩质谱(high resolution mass spectrometer,HRMS)和核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance spectroscopy,NMR)多技术联用鉴定可疑未知物的方法。方法样品分别用FT-IR、GC-MS、HRMS(溶剂为甲醇)及NMR(溶剂为氘代甲醇)检测。结果GC-MS测得样品中主要组分的质谱特征离子m/z分别为218(基峰)、362、306、274、246、144、116,HRMS实测的精确质量数[M+H]+为363.20774,经FT-IR、GC-MS和HRMS数据分析,推断未知样品为一种新的合成大麻素类新精神活性物质4F-MDMB-BICA,并用1H NMR对其结构进行确证。结论建立的多技术联合鉴定方法能用于未知样品中4F-MDMB-BICA的鉴定。该方法快速、方便、准确、可靠、实用,能够对今后涉及此类物质的案件检测鉴定提供参考依据。

新型合成大麻素5F-MDMB-PICA的波谱特征及结构确证

采用硅胶层析法纯化合成大麻素目标成分,利用紫外光谱、红外光谱、高分辨质谱和核磁共振法研究其波谱学特征以确定结构。结果表明,目标成分为一种暂未列入管制目录的具有吲哚母核的新型合成大麻素衍生物5F-MDMB-PICA,是一种国内首次发现并报道的新型高活性合成大麻素。本文提供了更为准确、全面的紫外、红外、高分辨质谱和核磁谱等波谱学数据,可供相关单位参考。

头发中合成大麻素5F-MDMB-PICA检测

目的一种新型合成大麻素成分5F-MDMB-PICA被非法添加至电子烟油中,其滥用对吸食者自身健康和公共安全产生了极大的危害,因此亟待建立一种5F-MDMB-PICA的检测方法并进行评价。方法采用UPLC-MS/MS方法定性和定量检测电子烟成瘾者头发中的合成大麻素成分5F-MDMB-PICA,称取约20mg头发,加1mL含内标THC-D3(0.4ng/mL)甲醇,经研磨、超声、离心、过滤后,采用Waters Acquity UPLC HSS T3柱(100mm×2.1mm,1.8μm)分离,流动相A为20mmol/L乙酸铵、乙腈和水,流动相B为乙腈。结果头发中5F-MDMB-PICA在1~200pg/mg的浓度范围内线性良好(r>0.99),检测限为0.5pg/mg,定量下限为1pg/mg,日内、日间精密度均小于6.6%,日内、日间准确度为96.8%~105.0%,提取回收率为72.5%~93.3%。结论本文方法灵敏度高、样品制备简便,已成功应用于实际案例的电子烟成瘾者头发中合成大麻素成分5F-MDMB-PICA的定性和定量检测。

基于红外光谱法和气相色谱-质谱法的两种烷基甲酰吲唑类合成大麻素的结构区分

采用红外光谱法和气相色谱-质谱法对两种烷基甲酰吲唑类合成大麻素ADB-4enPINACA和MDMB-4en-PINACA标准品结构进行区分,并对实际烟丝检材中的这两种化合物进行鉴定。结果显示:ADB-4en-PINACA的特征峰位于3354.1,3208.7,682.3 cm^(-1)处,保留时间19.098 min,母离子m/z 342.2,主要子离子m/z 213.1,241.2;MDMB-4en-PINACA的特征峰位于3411.8,1725.4 cm^(-1)处,保留时间13.238 min,母离子m/z 357.2,主要子离子m/z 213.1,270.1。两种化合物产生差异的原因在于ADB-4en-PINACA末端基团为酰胺基,而MDMB-4en-PINACA末端基团为酯基。采用气相色谱-质谱法对疑似含有ADB-4en-PINACA和MDMB-4en-PINACA的样品进行分析,所得质谱特征峰和标准品的基本一致。

新型毒品“小树枝”成分的结构确证

目的本文对“小树枝”新型毒品的未知物成分进行质谱解析,为相关检测和应用研究提供参考。方法经甲醇提取后,采用气相色谱质谱仪对“小树枝”进行检测,经对比分析构成常见合成大麻素的主要基团,找到相关的合成大麻素的质谱特征碎片,并对碎片碎裂途径进行解析。结果确证“小数枝”中的未知化合物分别为5F-AMB、MDMB-CHMICA(主要成分),并将其分别归类为吲哚甲酰胺类和吲唑甲酰胺类合成大麻素。结论本文确证了“小树枝”新型毒品主要成分的分子结构,弥补了质谱NIST库的谱库空白。

麦迪霉素3-O-酰基转移酶在螺旋霉素链霉菌F21中的酰化特性

螺旋霉素(SP)与麦迪霉素(MD)均为16元大环内酯类抗生素,并且结构非常相似。螺旋霉素含有3个组分,其结构差异表现在16元内酯环C3上的一个取代基的差异,SPI组分为羟基、SPII组分羟基乙酰化、SPIII组分羟基丙酰化;麦迪霉素是以麦迪霉素A1为主要组分的多组分抗生素,麦迪霉素16元内酯环C3上连接的均为丙酰化羟基。已知这类抗生素16元内酯环C3羟基酰化是由一种称为3-O-酰基转移酶的蛋白催化完成。本研究将螺旋霉素产生菌—Streptomyces spiramyceticus F21中的螺旋霉素3-O-酰基转移酶基因用Streptomyces mycarofaciens ATCC 21454中的麦迪霉素3-O-酰基转移酶基因原位替换后,发现所产生的螺旋霉素仍然含有3个组分,并且螺旋霉素III组分也不是主要组分,说明麦迪霉素3-O-酰基转移酶在螺旋霉素产生菌—S.spiramyceticus F21中不具有16元内酯环C3羟基丙酰化特异性以及酰化高效性,也提示其在麦迪霉素产生菌中的丙酰化特异性和高效性可能与该菌株(种)的特性有关。

4种酰胺类合成大麻素在人肝微粒体中Ⅰ相代谢规律研究

研究4种近来滥用的酰胺类合成大麻素ADB-4en-PINACA、4CN-CUMYL-BUTINACA、5F-EMB-PICA和4F-MDMBBUTICA的体外人肝微粒体代谢规律。取人肝微粒体,加合成大麻素使成1 mg/mL,模拟人体代谢过程孵育10 min、60 min或3 h,用液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(LC-QTOF-MS)分析技术检测并鉴定代谢产物的结构,探索代谢途径。结果显示,5F-EMB-PICA、4F-MDMB-BUTICA、ADB-4en-PINACA和4CN-CUMYL-BUTINACA存在羟基化、羧基化、N-脱烷基和酯水解等27种Ⅰ相代谢途径,其中主要的Ⅰ相代谢途径为酯水解、双键氧化成邻二醇、氧化脱氟羧基化、单羟基化(烷基侧链或吲哚/吲唑环)和N-脱烷基。本研究可为司法鉴定4种酰胺类合成大麻素的滥用和污水毒情评估提供潜在的检测标志物。