MDS基因突变及三种剂量DAC联合预激方案治疗的疗效观察

目的 探讨MDS细胞分子遗传学临床特点及三种剂量DAC联合预激方案治疗的疗效。方法 采用WHO-MDS诊断分型标准,用G/R显带染色体分析;NGS二代测序突变基因;三种不同剂量DAC联合预激化疗方案治疗中高危MDS患者86例,A组(DAC20mg/m^(2)),B组(DAC15mg/m^(2)+CAG),C组(DAC15mg/m^(2))。结果 在86例MDS患者中,共检测到55(63.95%)例基因突变。共检测到26种基因突变类型。分别是:FLT3,TET2,CEBPA,NPM1,RUNX1,STAG2,IDH2,DNMT3A,WT1,EZH2,GATA2,IKZF1,ASXL1,NRAS,SRSF2,RAD21,TP53,CSF3R,IDH1,ETV5,SMC3,AML1-ETO,SF3B1。前5位的基因是:TET2,DNMT3A,ASXL1,SF3B1,NRAS。治疗方案完成≥2疗程患者占94.2%;有效率:A组(93.3%),B组(96.4%),C组(92.8%);ORR 80.8%。完成≥4疗程患者例占84.8%:有效率:A组(86.7%),B组(85.7%),C组(82.1%);ORR 84.9%。A、B、C 3组间有效率χ2检验无显著性差异(P>0.05)。结论 三种不同剂量地西他滨组合方案均可用于中高危MDS患者。根据患者体能状况评分系统选择个体化治疗中高危MDS更为重要。

地西他滨抑制SHP-1基因甲基化对MDS细胞株Skm-1增殖及凋亡影响

目的:探讨DCA作用于MDS细胞模型后的表型及分子机制,通过细胞增殖、侵袭迁移及细胞凋亡等多重维度研究化疗药物作用于MDS细胞后的反应,揭示DCA治疗MDS的分子机理及其与SHP-1基因甲基化的关系。方法:采用MTT法测定不同浓度DCA处理后的MDS细胞存活率,采用Transwell实验检测DCA对MDS细胞侵袭和迁移能力的影响,应用AnnexinV-FITC/PI法检测细胞凋亡情况,Western blot免疫蛋白印迹和real time PCR实验研究DCA治疗MDS的作用机制。结果:实验发现,DCA作用于MDS skm-1细胞能抑制肿瘤增殖,且2.0及5.0μmol/L DCA组相对0.5μmol/L DCA组与阴性对照组相比吸光度降低、抑制效应更加明显。与对照组比较,应用DCA后MDS skm-1细胞穿过Transwell上室底膜的数量显著下降。在0.5、2.0及5.0μmol/L DCA处理后,MDS细胞凋亡率依次为4.54%、9.31%及16.58%,对照组细胞凋亡率为3.20%。这表明,细胞凋亡率随DCA浓度显著增加。在经不同浓度DCA处理的MDS细胞系中,SHP-1基因甲基化状态随着药物浓度升高而减弱,SHP-1表达量升高,STAT3表达量减少,而STAT3磷酸化水平则受到明显抑制。结论:通过对DCA作用于MDS细胞后的表型反应分析,发现其主要通过抑制增殖和转移并诱导凋亡来干预MDS,并具有药物剂量依赖性,这揭示了DCA治疗能够改善SHP-1基因的甲基化进而抑制p-STAT3表达的分子机制。

抗人肝癌MDscFV基因的表达及其免疫活性初步研究

将抗人肝癌单克隆抗体MD的重链可变区VH和轻链可变区VL基因重组,并使其表达。采用PT-PCR技术扩增VH及VL基因,通过重叠延伸拼接PCR在VH和VL基因间引入连接短肽,体外构建加MDscFV基因,经过常规转化与筛选,诱导表达蛋白。MDscFV基因全长为732bp,VH354bp位于上游;VL330bp位于下游。重组蛋白相对分子量36kDa。scFV保留了与亲本抗体MD相似的免疫活性。成功地构建了抗人单链抗体MDscFV,并获得了较高水平的功能性表达。

去铁胺(DFO)诱导骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株SKM-1的P15^(INK4B)基因去甲基化

目的探讨铁螯合剂去铁胺(deferoxamine,DFO)诱导骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)细胞株SKM-1的P15INK4B基因去甲基化作用。方法以枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)和DFO处理SKM-1细胞,按不同铁负荷分成3组:对照组、FAC组和FAC+DFO组,分别检测不同铁负荷组细胞内可变铁池(labile ironpool,LIP)、细胞内活性氧类(reactive oxygen species,ROS)、P15INK4B基因甲基化状态、P15INK4B基因mRNA表达情况、细胞增殖(CFSE的平均荧光强度MFI)、细胞早期凋亡率以及细胞周期。结果与对照组相比,FAC组的LIP(64.04%±2.12%vs.1.45%±0.65%)、ROS(45.57%±1.18%vs.33.38%±12.96%)、细胞增殖MFI(23.01%±5.20%vs.51.67%±1.61%)明显升高,P15INK4B基因mRNA表达水平(0.72±0.08 vs.1)和细胞早期凋亡率(13.97%±2.25%vs.22.53%±1.76%)明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与FAC组相比,FAC+DFO组的LIP(8.34%±4.21%vs.64.04%±2.12%)、ROS(34.39%±2.12%vs.45.57%±1.18%)、细胞增殖MFI(37.34%±6.61%vs.23.01%±5.20%)明显减少,P15INK4B基因mRNA表达水平(1.50±0.15 vs.0.72±0.08)和细胞早期凋亡率(55.07%±1.30%vs.13.97%±2.25%)明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);3组细胞周期的差异无统计学意义。结论 DFO可使LIP和ROS降低,诱导铁过载的SKM-1细胞P15INK4B基因去甲基化,使其mRNA重新表达,并可抑制铁过载的SKM-1细胞增殖,促进其凋亡。

MDS1-EVI1基因多态性与鼻咽癌相关性研究

目的探讨MDS1-EVI1基因SNP rs6774994多态性与云南鼻咽癌之间的相关性研究.方法采用TaqMan-PCR方法检测MDS1-EVI1基因rs6774994基因型与等位基因频率.结果 (1)鼻咽癌组和对照组MDS1-EVI1基因rs6774994各基因型(P=0.843)和等位基因频率(P=0.784)组间分布差异无统计学意义(P>0.05);(2)鼻咽癌患者MDS1-EVI1基因rs6774994,有家族遗传史患者GG基因型携带者高于无家族遗传史患者(P<0.01),且病理分化类型为非低分化鳞癌的患者GG基因型携带者高于低分化鳞癌患者(P<0.01).结论 MDS1-EVI1基因rs6774994可能不增加云南人罹患鼻咽癌的风险.MDS1-EVI1基因rs6774994GG等位基因可能与家族遗传史和病理分化类型有一定相关性.

应用cDNA微阵列对MDS骨髓细胞基因表达谱的初步研究

目的 应用cDNA微阵列初步研究骨髓增生异常综合征 (MDS)的基因表达谱。方法将 2例患者骨髓单个核细胞RNA各取等量混合后进行逆转录Cy5标记 ,和Cy3标记的正常对照cD NA混合 ,然后与H14 1微阵列杂交。结果 H14 1s芯片中共点样 13484个基因克隆 ,其中 10 6 4个靶克隆是针对同一基因内不同序列的cDNA片段 ,重复点样至少 2次 ,表达结果在 2张芯片内各自完全一致的分别为 6 2 5个 (5 8 7% )和 6 30个 (5 9 2 % ) ,而 2张芯片之间对应位置点检测结果完全相同的为783个 (73 6 % )。MDS患者存在表达差异的基因为 4 0 9个 ,其中 10 1个基因参与造血调控 ,主要涉及转录因子、细胞周期调节蛋白、代谢相关基因、表面黏附分子等。结论 cDNA微阵列可高效提供丰富的基因表达信息 ,并为深入研究MDS的发病分子机理提供线索。重复点样实验可降低微阵列操作过程引起的表达偏差。

骨髓增生异常综合征(MDS)基因诊断研究

目的根据Southern印迹杂交结果设计并合成适当引物。方法以32例MDS、13例可疑MDS、53例其他血液病和8例正常人骨髓细胞DNA为模板进行PCR。根据PCR结果和用于上述Southern印迹杂交的限制性酶切位点,设计并合成2个寡核苷酸(Oligos)经地高辛标记,对33例MDS(包括转白血病者),3例可疑MDS和19例其他血液病患者骨髓细胞涂片作原位杂交(ISH)。结果 MDS有共同的PCR产物电池带型。MDS原位杂交均呈阳性反应。对照组19例中仅有1例AA阳性反应,可疑MDS 3例中有2例阳性反应,且杂交信号的增强与MDS转白血病相关(P<0.01),也与SCD阴性相关(P<0.01)。结论建立起MDS PCR基因诊断法,笔者设计的两条Oligos所包含的限制性酶切位点的确是MDS C-erbB重排位置和重排/扩增位置,为MDS基因治疗提供了靶基因的靶位置。

微阵列芯片技术及其在MDS基因表达研究中的应用

MDS是一种恶性骨髓造血干细胞克隆性疾病 ,研究MDS基因表达对于明确其发生、发展的规律具有重要作用 ,有助于指导临床分型、治疗和判断预后。微阵列芯片技术是在 2 0世纪90年代逐渐发展起来的一项全新技术 ,它在分子生物学领域中的应用有力地促进了生物学、医学的发展 ,促进对多种疾病 ,尤其是恶性疾病的发病机制的深入认识[1～7] 。本文综述微阵列芯片技术的基本原理及其在MDS研究中的应用。

基于LDA模型和MDS算法的多基因组可视化

面向多基因组的研究,以建模多个体关系和比较个体差异为主要研究内容。多基因组可视化可以帮助研究者依据多个体关系,有目的地分析、比较多基因组之间的差异。多个基因组遗传变异层面的比较,因为变异数量巨大、并且绝大部分变异并无信息性,故而很难在有限的显示空间内可视化。本文根据多基因组可视化的需求,分析了多基因组可视化的数据降维策略,提出了基于LDA模型及KL散度的多基因组相似度求解方法,建立了基于MDS算法的多基因组可视化降维方法,并使用千人基因组第三阶段的基因组变异数据,验证上述方法的可靠性。

MDS、急性白血病的ras癌遗传基因

部分骨髓异常增生综合征(简称MDS)被认为是前白血病状态,ras癌遗传基因在MDS、急性白血病的部分病例中,其基因的位点发生突变而被活化,与白血病化有着重要的关系。MDS是以造血细胞的分化异常、异形性和异常增殖为主要特点的综合征。部分病例异形成性增强,并且获得自主的增殖能力,而进展成为白血病。白血病化的过程可以分为分化异常和自主增殖两种表现。

地西他滨治疗移植后复发MDS/AML及高危AML患者的临床疗效分析

目的:探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后复发的骨髓增生异常综合征/急性髓系白血病(MDS/AML)患者应用含地西他滨的化疗方案缓解后继续维持治疗的效果及高危AML在allo-HSCT后进行预防性输注地西他滨的疗效。方法:对2016年11月至2018年5月于本院行allo-HSCT术后的10例MDS/AML患者进行回顾性分析,包括AML 4例,MDS 2例,MDS转化的AML(t-AML)4例。10例患者中移植后复发8例,高危AML移植后应用地西他滨预防2例。复发组患者应用地西他滨+化疗达完全缓解(CR)后,继续应用地西他滨维持治疗;预防组患者在移植后30至45 d、无移植物抗宿主病(GVHD)前提下,给予预防性地西他滨输注。8例患者辅以G-CSF动员的供者淋巴细胞输注(DLI)。地西他滨维持治疗及预防性输注的剂量为5 mg/m2×(7-10)d,每4-6周为1个疗程,共3-7个疗程。结果:随访至2018年11月30日,10例患者中7例无病存活,平均生存期为15.5±1.9个月,1年总生存(OS)率为64.0%。10例患者中发生急性GVHD及慢性GVHD者分别为6例和4例。结论:应用地西他滨+DLI治疗allo-HSCT后复发MDS/AML及高危AML患者在allo-HSCT后预防应用地西他滨,可延长无病生存期,降低复发率,为患者获得长期生存提供可能。

人TLR4及MD2基因反义真核表达载体的构建

目的 构建人TLR4及MD2基因反义真核表达载体 ,为研究其在肺炎症反应中的作用奠定基础。方法 通过PCR技术扩增出TLR4及MD2基因片段 ,然后分别反向插入真核表达载体pEFBOS的多克隆位点 ,最后对产生的重组子进行酶切和测序鉴定。结果 扩增出的TLR4目的片段为 2 6kb ,MD2为 0 5kb ,并成功地连接到pEFBOS载体上 ,DNA测序结果也显示插入片段为目的片段。

MDS铁过载小鼠模型建立及鉴定

目的:建立一种MDS铁过载小鼠模型,研究铁过载对MDS的影响。方法:通过逆转录病毒,将外源突变基因RUNX1-S291fs插入小鼠骨髓单个核细胞基因组,然后移植给经60Coγ射线照射的C57BL/6小鼠。8周后,腹腔注射铁剂,建立MDS铁过载小鼠模型。移植24周后,取小鼠外周血、骨髓、股骨、肝脏和脾脏进行鉴定:对外周血和骨髓细胞行瑞氏染色观察形态特征;对股骨、肝脏和脾脏组织行HE染色检测病理变化;对肝脏、脾脏和骨髓行普鲁士蓝染色观察铁沉积情况;应用流式细胞术检测小鼠骨髓细胞抗原表达情况;对骨髓单个核细胞和脾组织蛋白行免疫印迹实验,确认RUNX1-S291fs基因转入并表达蛋白。移植后对小鼠定期监测血常规指标和移植细胞嵌合率。结果:相比空白质粒对照小鼠,RUNX1-S291fs突变小鼠外周血白细胞计数、血红蛋白水平和血小板计数均降低;外周血和骨髓细胞显示病态造血;肝脏和脾脏明显增大;在股骨、肝脏和脾脏可见组织结构异常;骨髓细胞表面抗原表达异常;骨髓细胞和脾组织有RUNX1-S291fs蛋白表达。相比生理盐水对照小鼠,铁剂注射小鼠普鲁士蓝染色可见骨髓、肝脏和脾脏组织有明显铁沉积。结论:注射铁剂的RUNX1-S291fs突变组小鼠合并有MDS和铁过载的病理特征,成功构建了MDS铁过载小鼠模型,为研究铁过载对MDS的影响奠定了基础。

枝状枝孢霉MD2的候选基因A00981的克隆及转基因菌株的构建

目的:为揭示真菌紫杉醇合成分子机制.方法:克隆了产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的候选基因A00981,该基因DNA和cDNA序列分别为969 bp和894 bp;其编码蛋白含有298个氨基酸、无跨膜结构和信号肽,与酰基辅酶A脱氢酶(ACAD)具有73%的一致性.进一步构建该基因的超表达载体pTFC-A00981,并转化枝状枝孢霉MD2,共获得9株转基因菌株.结果:Southern blot分析证明其中5株转基因菌株的外源基因是以单拷贝方式插入.结论:该结果为深入分析超表达候选基因A00981对枝状枝孢霉MD2紫杉烷类合成的影响奠定了基础.

柱型苹果MdCoLBD1/2基因生物信息学及SNP分析

柱型苹果(Columnar apple)是苹果株型育种的珍贵资源。利用同源基因克隆方法,以柱型苹果‘威塞克旭’一年生枝上休眠期芽cDNA为模板,克隆得到了LOB DOMAIN家族(LBD)的2个同源基因,命名为MdCoLBD1/2,分别编码195和240个氨基酸。该基因有LBD家族的典型结构域,如C盒、GAS盒、亮氨酸拉链(Leu zipper)结构以及LOB Domain区域等。MdCoLBD1/2分别定位于第10条染色体Chr10:18985568..19005801和MdCoLBD2Chr10:18985594..19005850区间。MdCoLBD1/2与白梨、葡萄、草莓、椰子、梅、核桃的氨基酸的相似性均在60%以上。聚类分析表明MdCoLBD1和白梨、梅、草莓亲缘关系较近,MdCoLBD2与葡萄、核桃亲缘关系较近,MdCoLBD1/2与亚洲棉、陆地棉的聚类关系均较远。通过测序分析了MdCoLBD1/2基因在30个不同类型材料中的碱基序列差异,得到MdCoLBD1有8个碱基差异位点,MdCoLBD2有5个碱基差异位点。

伴NCOR1::GLYR1融合基因MDS/MPN伴中性粒细胞增多1例患者的研究

目的探讨1例伴NCOR1::GLYR1融合基因骨髓增生异常/骨髓增殖性肿瘤(MDS/MPN)伴中性粒细胞增多患者的临床资料与遗传学特征。方法以2021年5月就诊于南京医科大学第一附属医院的1例伴NCOR1::GLYR1融合基因MDS/MPN伴中性粒细胞增多患者作为研究对象。收集患者的临床资料,分析其骨髓病理资料,并对其进行染色体核型分析、二代测序、转录组测序,分析基因融合序列,验证候选融合基因,并在确诊后给予患者相应的治疗。结果患者为67岁男性,因血小板进行性下降就诊,根据骨髓及外周血细胞形态学分析诊断为MDS/MPN伴中性粒细胞增多,给予去甲基化药物、Bcl-2抑制剂等药物治疗。患者在17个月后进展为急性髓系白血病(AML)。外周血转录组测序检测到NCOR1::GLYR1融合基因转录本,并经实时荧光定量PCR及Sanger测序验证。患者经地西他滨、阿柔吡星、阿糖胞苷、粒细胞集落刺激因子(DCAG)联合西达本胺方案化疗后达到形态学完全缓解。实时荧光定量PCR检测NCOR1::GLYR1融合基因转录本显著下降。结论NCOR1::GLYR1融合基因考虑为该MDS/MPN伴中性粒细胞增多患者的致病原因。

伴NRAS突变的MDS转化为新发FLT3-ITD M2白血病1例报道并文献复习

骨髓增生异常综合征（MDS）是一组病因尚不明确,起源于造血干细胞的获得性异质性髓系克隆性疾病,以无效造血（病态造血）、难治性血细胞减少及高风险向急性髓系白血病（sAML）转化为特征。约1/3的MDS患者将进展为继发性急性髓系白血病（sAML）[1]。

苹果多肽激素基因Md CEP1促进花青苷积累

据《园艺学报》2018年第6期《过表达苹果多肽激素基因Md CEP1促进花青苷积累》(作者李睿等)报道,以王林苹果愈伤组织为试材,初步探讨了苹果多肽激素Md CEP1(C-TERMINALLY ENCODED PEPTIDE1)在调控花青苷合成方面的作用。结果表明,Md CEP1位于苹果第15号染色体,只有1个外显子。蛋白序列比对显示,不同物种中CEP结构域非常保守。启动子分析表明,Md CEP1启动子序列包含多个顺式作用元件,包括与分生组织有关的CAT-box元件、赤霉素响应元件(P-box)、光响应元件(MNF1)和与类黄酮合成相关的MYB类蛋白结合位点(MBSI)。