无胶筛分毛细管电泳分离盐生盐杆菌DNA片段

由羟乙基纤维素和聚吡咯烷酮混合组成筛分介质 ,在涂敷聚硅氧烷的毛细管柱上 ,研究了LambdaDNA/EcoRⅠ +HindⅢ片段分离的最佳条件。实验表明 ,混合筛分介质与单一的羟乙基纤维素筛分介质相比 ,改变了筛分介质的孔径大小 ,抑制了毛细管壁对DNA的吸附 ,从而改善了分离 ,并首次在同一条件下将所含的 13个片段完全分离。方法简便、快速 ,曾应用于两组盐生盐杆菌DNA片段的分离及其碱基对数目的推测。

含有金纳米粒子的筛分介质对不同长度DNA片段的毛细管电泳分离

探讨了含有金纳米粒子(GNPs)的筛分介质在毛细管电泳(CE)中对不同长度DNA片段的分离。以聚环氧乙烷(PEO)-金纳米粒子(GNPs)-TBE为CE筛分介质,用涂层的毛细管柱(37 cm×75μm,有效长度27 cm)分离DNAMarker D和1 kbp DNALadder Marker标准DNA片段,考察了CE过程中各参数(如筛分介质质量浓度、分离电压、温度和筛分介质pH值)对不同长度DNA片段分离的影响。对比了新型筛分介质与不含GNPs的PEO-TBE筛分介质的分离效果,并将新型筛分介质用于实际样品的检测。结果表明,在筛分介质中添加GNPs后能够改进CE的分离效果,且分离时间短。方法较适于分离较宽范围的DNA片段。

一个通用策略用于构建新型T载体及其应用

由于T载体能够用于PCR产物的快速克隆且易于操作而受到广泛欢迎。通过选择一个大小合适的媒介DNA片段,采用PCR引物设计,在其两端各引入1个XcmI位点,成功构建了1个重组质粒——pBTMCM,该载体能够非常方便地被限制性内切酶XcmI切割后产生T载体。该载体现在已成功应用于结核分枝杆菌H37Rv Rv0006基因的克隆。该策略由于其通用性因而能被广泛应用。