基于捕集柱阵列的制备型二维液相色谱纯化烟草中的4个组分

二维液相色谱(2D-LC)因具有较高的峰容量,在复杂样品的分离分析中获得了广泛的关注。然而,制备型2D-LC以纯化高纯单体为目标,在方法开发和设备构成等方面与分析型2D-LC有较大的不同,目前尚未得到充分的开发,在大规模的制备纯化中应用较少。本文以一套制备液相色谱模块为分离系统,以稀释泵、切换阀和捕集柱阵列为接口,构建了新型的制备型2D-LC系统,旨在规模化纯化多个活性成分。以烟叶中可以用作医药原料的烟碱、绿原酸、芦丁和茄尼醇等组分为目标物,考察了不同类型填料对样品的捕集效率、过载条件下的色谱保留行为等,优化了制备色谱条件。进而利用在线2D-LC系统实现了烟叶提取物的纯化,通过一次运行获得了4个高纯化合物。该系统具有中压色谱纯化成本低、系统在线运行自动化程度高、稳定性好及容易放大等优点。烟叶中活性化学成分的回收利用对促进烟草行业的发展及带动地方农业经济开发具有重大的意义。

中压制备色谱法分离黑果枸杞中2个矮牵牛素花色苷及其对胰脂肪酶的抑制活性

为了快速制备较高纯度的黑果枸杞花色苷,黑果枸杞花色苷粗提物首先用大孔树脂-中压制备色谱进行纯化,再用凝胶树脂-中压制备色谱分离获得2个花色苷单体,采用超高效液相色谱-串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)、核磁共振氢谱(1H nuclear magnetic resonance,1H NMR)对其结构进行鉴定,并对纯化物的胰脂肪酶抑制活性进行评价。结果表明:用D101大孔树脂-中压制备色谱对黑果枸杞花色苷进行纯化,所得纯化物中P1、P2的相对含量分别为18.22%和30.77%,继续采用Sephadex LH-20联合中压制备色谱分离纯化可得到相对含量分别为84.16%和81.48%的两个黑果枸杞花色苷组分P1和P2,经UPLC-MS/MS和1H NMR鉴定,2个花色苷化合物分别为矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-对香豆酰基)-葡萄糖苷-5-O-葡萄糖苷和矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-对香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷。P1和P2具有较好的胰脂肪酶抑制活性,其IC50值分别为0.250 mg/mL和0.224 mg/mL,且远低于花色苷粗提物和大孔树脂纯化物。研究为黑果枸杞花色苷利用提供一定基础。

卷烟爆珠溶剂中链甘油三酯的分离与鉴定

为明确卷烟爆珠常用溶剂中链甘油三酯(MCT)的化学组成,利用GC/MS法对3种市售MCT和7种爆珠卷烟的爆珠溶剂进行了定性分析,利用中压制备液相色谱-紫外检测技术分离制备了MCT中极性相近的4个组分,并通过对各个组分的化学表征确定了其成分信息。结果表明:(1)卷烟爆珠溶剂与市售MCT的主要化学成分一致。(2)收集的4个组分的质量总和占MCT产品的92%。(3)通过核磁共振与质谱比对,4个组分及其占MCT产品的质量分数分别为三辛酸甘油酯22.8%、二辛酸一癸酸甘油酯37.9%、一辛酸二癸酸甘油酯25.5%和三癸酸甘油酯5.8%。

中压制备液相色谱快速分离制备儿茶素单体

以反相中压制备液相色谱为工具,甲醇-水作为洗脱溶剂,通过C18(ODS-AQ)填料从茶多酚中一步分离出表没食子儿茶素(EGC)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素(EC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)等四种儿茶素单体。1.0 g纯度为92.6%的茶多酚经过中压色谱,制备得到了90 mg EGC、355 mg EGCG、23 mgEC和92 mg ECG,它们的纯度分别为91.8%、97.6%、97.7%、99.3%,纯品得率56.0%,四种单体总回收率达到68.2%。四种儿茶素单体的结构经核磁共振氢谱、碳谱以及高分辨质谱加以确证。

中低压制备色谱制备新绿原酸对照品的研究

目的:建立从金银花中分离制备新绿原酸对照品的方法。方法:利用HPD200A大孔树脂对金银花水提液中的新绿原酸富集,经中低压制备色谱分离制备金银花中新绿原酸单体,运用HPLC对新绿原酸进行含量测定。采用现代波谱技术ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR进行结构鉴定。结果:新绿原酸的最佳纯化工艺为加5 BV水洗脱,收集水洗液,浓缩、干燥,得新绿原酸粗品;以乙腈-0.5%甲酸溶液(10:90)为流动相,流速20 m L?min-1,检测波长326 nm,进行分离纯化,分离制备的新绿原酸的纯度达98.86%,收率为89.1%。结论:该方法可有效制备高纯度的新绿原酸对照品,以用于中药新药中定性鉴别和含量测定。

AB-8大孔吸附树脂纯化蛋黄卵磷脂的工艺研究

采用柱层析法对蛋黄卵磷脂纯化工艺进行研究。结果表明,从3种吸附介质中筛选出AB-8大孔吸附树脂为蛋黄卵磷脂的纯化树脂,并通过静态试验得到其对蛋黄卵磷脂的最大吸附率为92. 2%,最佳静态吸附时间是60 min。经过中压制备色谱分离,采用干法上样,用体积分数95%的乙醇洗脱,可得到蛋黄卵磷脂的纯化倍数为4倍,纯度达到83. 1%,回收率为97. 04%。AB-8大孔吸附树脂使用50个操作周期时,卵磷脂吸附率仍在80%以上。表明AB-8大孔吸附树脂纯化蛋黄卵磷脂具有纯化倍数高、回收率高、时间短、重复性好等优点。

芦荟苷A、B以及异芦荟色苷D的同时分离纯化

首次采用反相中压制备色谱从芦荟中一次分离制备得到芦荟苷A、B以及异芦荟色苷D。以库拉索芦荟丙酮粗提物为原料,采用中压制备色谱系统:SCO色谱柱(40 cm×26 cm,30～50μm),流动相甲醇-0.5%乙酸水(33∶67,V/V),流速20 mL/min,等度洗脱方式,柱温室温,检测波长254 nm,收集波长356 nm对芦荟样品进行分离制备,得到三种化合物单体。经高效液相色谱、紫外、红外、质谱及核磁共振等方法分析表明所得到的三种化合物分别是异芦荟色苷D、芦荟苷A和芦荟苷B,其纯度分别达到了98.0%,96.0%和98.9%。该方法简便,产品质量高,一次制备可以得到多种单体,为芦荟成分的测定与药理活性的研究提供了条件。

利用中压制备液相色谱从桑葚中快速制备矢车菊素-3-葡萄糖苷单体

单体花色苷的快速大量制备长久以来是花色苷产业化中的难题,而中压制备液相色谱在产业应用中有着很大的开发空间。选取花色苷组分较单一的桑葚为实验原料,经提取分离总花色苷后使用填装有反相C18填料的耐压玻璃柱作为中压制备液相色谱柱,纯化制备矢车菊素-3-葡萄糖苷单体。结果显示:3个色谱分离峰中目的峰(峰2)经高效液相色谱和质谱确证为由矢车菊素-3-葡萄糖苷(cyanidin-3-glucoside,C3G)和矢车菊素-3-芸香糖苷(cyanidin-3-rutinoside,C3R)组成,采用峰面积归一化法计算得到C3G纯度为73.56%;通过对峰2采用切割方式进行收集,C3G纯度达到98%以上,单次收集到C3G单体溶液650 mL。中压制备液相色谱法单次上样量大、步骤简洁、成本低廉,可为矢车菊素-3-葡萄糖苷单体的规模化生产提供一定的参考。

连翘酯苷A中压快速制备工艺的优化

为获得一种易操作、高效、高纯度的连翘酯苷A制备工艺,以聚酰胺和MDS-5为分离材料,采用单因素多水平试验的方法考察上样量、上样浓度、洗脱流速等因素对连翘酯苷A得率和纯度的影响,优化两步柱分离纯化工艺条件。试验结果表明,以聚酰胺为分离材料可获得连翘酯苷A含量为50%的产物,产物以MDS为分离材料进一步分离可获得连翘酯苷A含量为90%的产物。本方法具有分离效率高、溶剂毒性小等优点,是一种获得高含量连翘酯苷A的简便、高效、经济的方法。

中压制备色谱技术分离甜菊糖苷四种单体

甜菊糖苷是从甜叶菊叶子中提取分离的一种新型天然食品甜味剂,由多种二萜苷单体组成,其中莱鲍迪苷A、莱鲍迪苷C、甜菊双糖苷、甜菊苷等为消费者所熟知。本文以甜菊糖结晶母液为原料,采用中压制备色谱技术实现甜菊糖苷单体的分离,利用硅胶正相柱,以甲醇∶二氯甲烷作洗脱剂,初步分离得到以RUB、DA、RC、STV为主要成分的三大部分原料;再经过C18反相柱,以乙腈∶水作洗脱剂,探讨不同单体的分离条件,此时RUB、DA、RC、STV纯度均为80%以上,结合重结晶各单体纯度大于95%,然后对分离制备得到的单体研究其甜味特性,为国内甜菊糖开发应用提供理论支撑。

药桑叶中金丝桃苷及其异构体分离鉴定

应用色谱分离法和高效制备液相色谱法研究药桑叶中金丝桃苷及其异构体分离制备方法。结果表明,药桑叶95%醇提物经乙酸乙酯萃取,过已活化的D-101型大孔吸附树脂经中压柱色谱可得到金丝桃苷及其异构体的混合物。将混合物用高效制备液相分离,制备液相色谱柱为Waters Xbridge(300 mm×21 mm,10μm),流动相为95%乙腈-5%水(含0.1%甲酸),上样量100 mg,流速15 mL·min^(-1),柱温40℃,检测波长285 nm,得到纯度为98.7%、97.8%以上两种纯物质,经核磁共振和质谱分析鉴定其结构为金丝桃苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷,二者互为同分异构体。

迷迭香酸的提取分离及药理学新发现

迷迭香酸是一种天然的水溶性多酚类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、免疫调节、抗血栓和抗血小板凝聚等作用,一直以来广泛用于食品和化妆品行业。近来,迷迭香酸众多新的药理活性被发现,随即在医药领域崭露头角,因此,有关迷迭香酸的提取分离也倍受关注。本文综述近几年来有关迷迭香酸的分离纯化进展和新发现的药理学活性,如抗辐射、抗诱变、保护脑组织和治疗过敏性疾病等,及其在食品、化妆品和医药领域中的应用现状。

异绿原酸A、B和C的制备工艺研究

目的建立从金银花Lonicera japonica中分离制备高质量分数异绿原酸A、B和C的方法。方法采用D-101大孔树脂、中低压制备色谱分离制备金银花中异绿原酸A、B和C单体,根据理化性质和波谱数据鉴定其结构。结果分离制备的异绿原酸A、B和C质量分数分别为98.7%、99.2%和97.6%。结论该方法经济、简单、快速,可用于制备高质量分数的异绿原酸A、B和C。

中低压制备色谱从枳实中制备柚皮苷与新橙皮苷对照品的研究

目的建立从枳实中分离制备柚皮苷和新橙皮苷对照品的方法。方法结合大孔树脂、中低压制备色谱分离制备枳实中柚皮苷和新橙皮苷单体。结果分离制备的柚皮苷的质量分数达98.76%,新橙皮苷的质量分数达99.50%。结论该方法可有效制备高纯度的柚皮苷和新橙皮苷,可用于制备中药定性、定量分析使用的对照品。

中低压制备型色谱制备紫草萘醌成分的研究

目的建立新的色谱技术,分离纯化紫草萘醌成分。方法采用中低压制备色谱和Flash柱进行分离纯化,利用理化性质和核磁共振谱、红外、质谱等技术鉴定结构,用高效液相色谱技术分析单体的纯度。结果分离鉴定了6个化合物。分别为去氧紫草素,紫草素,异丁酰紫草素,乙酰紫草素,β-乙酰氧基异戊酰紫草素,β,β-二甲基丙烯酰紫草素,纯度分别是99.62%,99.02%,99.5%,99.31%,99.3%,99.2%。结论首次建立中低压色谱技术,快速、准确分离紫草药材的单体成分。

莲子低聚糖快速制备工艺研究

以速冻鲜莲为原料,通过薄层色谱法确定最优流动相。采用中压制备色谱,分别研究流动相流速、莲子低聚糖上样浓度对低聚糖分离效果的影响。采用电喷雾-质谱(ESI-MS)分析各单一组分。研究结果表明,最佳分离条件是:以乙酸乙酯-无水乙醇-水-氨水(体积比为9∶11∶8∶0.9)为流动相,流速25 m L/min,上样质量浓度0.4g/m L。通过ESI-MS法检测的莲子低聚糖组分3,4,5的相对分子质量分别为342,504和666。

中压制备色谱法分离制备油橄榄叶中多酚类化合物

目的研究油橄榄Olea europare叶抗糖尿病有效部位的药效物质基础。方法利用反相中压制备液相色谱技术进行分离纯化,并应用现代波谱技术鉴定化合物的结构。结果从油橄榄叶抗糖尿病活性部位中分离并鉴定得到的5个化合物均为多酚类化合物,分别为脱咖啡酰基毛蕊糖苷(1)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(2)、6″-O-β-D-吡喃葡萄糖-橄榄苦苷(3)、裂环马钱子苷(4)、橄榄苦苷(5)。结论化合物1为首次从该植物中分离得到。5种化合物经HPLC检测,按照归一化法计算其质量分数均大于90%,为以油橄榄叶为原料的新药开发提供技术支撑。

中压制备色谱法制备高纯度石杉碱甲

目的采用中压制备色谱法从蛇足石杉浸膏中制备高纯度石杉碱甲。方法分别使用聚合物反相填料和C18反相填料为分离介质,串联两步中压制备色谱,从蛇足石杉浸膏中分离石杉碱甲单体。结果制备的石杉碱甲单体纯度为99.7%,总体回收率达到87.5%。结论该法利用聚合物填料和C18填料的各自特点,通过合理的工艺衔接,为获得医药级石杉碱甲提供了一条高效、绿色和经济的途径。

中压制备色谱技术分离富集A40926混合物组分和杂质

A40926是糖肽类抗菌药达巴万星的前体,本文采用中压制备色谱(MPLC)技术分离和富集A40926混合物中的单组分和有关杂质。通过优化填料和洗脱方法,确定以聚合物微球SKP-10为填料,以乙醇-水体系为流动相进行梯度洗脱。结果显示,通过此法一次制备能够获取纯度大于95%的组分A_1、B_0,二次制备可以获得纯度大于95%的杂质RS_1、RS_3,并经高效液相色谱串联四极杆-飞行时间质谱(HPLC-QTOF-MS)法确证其结构,与已有文献描述一致。该方法适用于A40926混合物组分和有关杂质的富集,为药物达巴万星的质量研究提供了支持。