FAM96B基因在结肠癌组织中低表达且抑制癌细胞增殖并诱导其凋亡

目的观察96序列相似的家庭成员B(family with sequence similarity 96,member B,FAM96B)在56例结肠癌组织中的表达,并探讨其对结肠癌细胞系HCT-116细胞增殖及凋亡的影响。方法分别采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)及Western blot检测56例结肠癌肿瘤组织和癌旁组织中FAM96B的mRNA及蛋白表达水平。构建含人FAM96B全长序列的pcDNA3.1-myc-FAM96B重组质粒,并通过脂质体质粒转染人结肠癌细胞系HCT-116细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测FAM96B过表达对HCT-116增殖能力的影响,采用流式细胞技术检测其对细胞周期和凋亡的影响。结果在56例结肠癌组织中,FAM96BmRNA在肿瘤组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.05)。FAM96B蛋白在肿瘤组织中的表达同样低于癌旁组织(P<0.05)。MTT细胞实验结果表明FAM96B组吸光度(A)值显著低于对照组(P<0.05),即过表达FAM96B可抑制HCT-116细胞增殖。流式细胞仪检测结果显示过表达FAM96B组的细胞凋亡率高于对照组[(44.70±1.12)%vs.(4.30±0.91)%,P<0.05)。细胞周期分析显示,过表达FAM96B组在G_1期的细胞百分数[(51.58±0.97)%]显著低于对照组[(62.64±0.87)%,P<0.05],S期的细胞百分数[(35.35±0.58)%]显著高于对照组[(25.79±0.74)%,P<0.05]。结论 FAM96B在结肠癌组织中低表达,过表达FAM96B可抑制结肠癌细胞系HCT-116增殖且诱导其凋亡。FAM96B可能作为一个潜在抑癌基因直接参与结肠癌发生、发展过程,并有可能成为结肠癌新的抗癌靶点。

FAM96B在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察96序列相似的家庭成员B(family with sequence similarity 96,member B,FAM96B)在120例胃癌组织中的表达,分析其表达差异与胃癌临床病理特征的关系,并探讨FAM96B对胃癌细胞系SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法分别采用免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学技术检测FAM96B蛋白在120例胃癌组织及配对癌旁组织中的表达,并统计分析FAM96B蛋白表达差异与胃癌临床病理特征之间的相关性。采用脂质体转染法将含人FAM96B全长序列的pcDNA3.1-myc-FAM96B重组质粒转染至SGC7901细胞中,分别采用MTT法及流式细胞技术检测FAM96B过表达对SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。结果免疫组化检测结果显示FAM96B在胃癌组织中的蛋白表达定位于细胞质,且FAM96B蛋白在癌旁组织与胃癌组织中的阳性表达率分别为62.5%(75/120)和20.8%(25/120),两者差异具有统计学意义(χ2=45.067,P<0.05)。Western blot结果显示FAM96B蛋白在癌旁组织中的表达水平显著高于胃癌组织[(1.54±0.48)vs.(0.53±0.20),t=10.395,P<0.05)]。胃癌组织中FAM96B表达水平与胃癌浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期显著相关(均P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度及病理类型无明显相关(均P>0.05)。MTT细胞实验结果表明:FAM96B组吸光度值显著低于对照组(P<0.05)。细胞凋亡检测结果示:FAM96B组的细胞凋亡率高于对照组[(49.5±1.0)%vs.(6.7±0.8)%,P<0.05]。结论 FAM96B在人胃癌组织中表达显著下降,其表达水平与胃癌的发生发展、侵袭转移密切相关。过表达FAM96B可抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡。

FAM96B在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞增殖凋亡和侵袭转移的影响

目的观察96序列相似的家庭成员B(FAM96B)在80例胃癌组织中的表达,分析表达差异与胃癌生物学特征的关系,并探讨FAM96B对胃癌细胞系SGC7901细胞增殖及凋亡的影响。方法采用Western blot法检测FAM96B蛋白在80例胃癌组织及配对癌旁组织中的表达,并统计分析FAM96B蛋白表达差异与胃癌临床病理特征之间的相关性。采用脂质体转染法将含人FAM96B全长序列的pcD NA3.1-myc-FAM96B重组质粒转染至SGC7901细胞中,分别采用MTT法及流式细胞术检测FAM96B过表达对SGC7901增殖和凋亡的影响。结果 Western blot结果显示FAM96B在癌旁组织中的蛋白表达水平显著高于胃癌组织(t=25.218,P<0.05)。胃癌组织中FAM96B表达水平与胃癌浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期显著相关(P<0.05),然而与患者性别、年龄、肿瘤大小无关。MTT细胞实验结果表明:FAM96B组吸光度值显著低于对照组(P<0.05)。细胞凋亡检测结果示:过表达FAM96B组的细胞凋亡率高于对照组(t=85.585,P<0.05)。结论 FAM96B在人胃癌组织中表达显著下降,其表达水平与胃癌的发生发展、侵袭转移有密切相关。过表达FAM96B可抑制胃癌细胞增殖且诱导其凋亡。

FAM96A在人肝癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的检测96序列相似的家庭成员A(FAM96A)在人肝癌组织中的表达及其与肝癌生物学特征的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot法检测FAM96A蛋白在肝癌组织和癌旁组织、Hep G2细胞和L02细胞中的mRNA及蛋白表达量,比较其差异,并分析FAM96A蛋白表达差异与肝癌临床病理特征之间的关系。结果 Real-time PCR检测结果显示,FAM96A在肝癌组织中的mRNA表达低于癌旁组织(t=21.773,P<0.001),在Hep G2细胞中的表达低于L02细胞(t=26.153,P<0.001)。同时,Western blot检测结果证实:与癌旁组织相比,FAM96A在肝癌组织中的蛋白表达显著降低(t=15.582,P<0.001),在Hep G2细胞中的表达同样低于L02细胞(t=14.478,P<0.001)。且FAM96A蛋白表达差异与本研究中48例肝癌患者肿瘤大小、是否合并门静脉癌栓、是否发生肝外转移、Child分级、巴塞罗那肝癌分期之间存在相关性(P<0.001),然而与患者的性别、年龄、肿瘤个数、是否合并乙肝、是否合并肝硬化、血清甲胎蛋白无明显相关(P>0.05)。结论 FAM96A在人肝癌组织中表达显著下降,其表达水平与肝癌的发生发展、侵袭转移密切相关。

瑞芬太尼通过调控FAM96B表达对骨肉瘤细胞增殖、凋亡影响的机制

目的探讨瑞芬太尼对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响并探讨其机制。方法运用噻唑蓝(MTT)法检测瑞芬太尼(0.0、0.5、5.0、50.0、500.0 ng/ml)对骨肉瘤细胞SAOS-2的抑制率;流式细胞术检测瑞芬太尼对SAOS-2的凋亡率影响;Western印迹检测细胞中96序列相似的家庭成员(FAM96)B、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl相关X蛋白(Bax)的蛋白表达;qRT-PCR法检测细胞中FAM96B、Bcl-2、Bax的mRNA的表达。结果瑞芬太尼(0.0、0.5、5.0、50.0、500.0 ng/ml)可呈浓度依赖性提高SAOS-2的抑制率,最适浓度为50 ng/ml;与对照组相比,瑞芬太尼可促进SAOS-2细胞凋亡,上调FAM96B表达,且过表达FAM96B具有与瑞芬太尼相同的上调SAOS-2细胞抑制率和凋亡率的作用;抑制FAM96B可逆转瑞芬太尼对SAOS-2细胞的作用。结论瑞芬太尼具有抑制骨肉瘤细胞增殖,促进凋亡的作用,其机制可能与上调FAM96B表达有关,将可为瑞芬太尼临床用于骨肉瘤手术麻醉提供新的支持。

FAM96A在人肝癌组织中表达及其对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的观察96序列相似的家庭成员A(FAM96A)在人肝癌组织中的表达并探讨其对人肝癌细胞系HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应及免疫印迹法检测FAM96A蛋白在肝癌组织和癌旁组织、HepG2细胞和L02细胞中的mRNA及蛋白表达量。采用脂质体转染法将含人FAM96A全长序列的pc DNA3.1-myc-FAM96A重组质粒转染至HepG2细胞中,取对数生长期的HepG2细胞,24 h后分为FAM96A组和对照组,分别转染pc DNA3.1-myc-FAM96A质粒和pc DNA3.1-vector空白质粒。采用MTT法及流式细胞技术检测两组HepG2细胞增殖活力和凋亡率。结果 FAM96A mRNA在肝癌组织、癌旁组织中的相对表达量分别为0.704±0.178、1.707±0.267,在HepG2细胞、L02细胞中的相对表达量分别为0.627±0.251、1.654±0.285,两者比较,P均<0.05。FAM96A蛋白在肝癌组织中的表达低于癌旁组织、在HepG2细胞中的表达低于L02细胞,P均<0.05。FAM96A组细胞增殖活力低于对照组(P<0.05),FAM96A组、对照组细胞凋亡率分别为33.06%±3.15%、5.08%±0.75%,两组比较,P<0.05。结论 FAM96A在人肝癌组织中表达下降,过表达FAM96A可抑制肝癌细胞增殖且诱导其凋亡。

Fam96B基因rs3890213_A>G多态性与冠心病的关系

目的探讨广东地区汉族人群Fam96B基因单核苷酸多态位点rs3890213_A>G与冠心病的关系。方法利用聚合酶链式反应-连接酶检测反应分析技术,对274例健康对照个体(对照组)和294例冠心病患者(病例组)的Fam96B基因rs3890213_A>G多态位点进行分型,采用非条件逻辑回归分析统计该多态位点与冠心病易感的相关性。结果 AA、AG、GG基因型在病例组中的频率分别为2.0%、33.0%和65.0%,在对照组中分别是4.4%、24.5%和71.2%。非条件逻辑回归分析发现,以AA基因型作为参照,AG和GG基因型均没有显著增加个体患冠心病的风险(OR=2.74,95%CI为0.82～9.11,P=0.101;OR=1.80,95%CI为0.56～5.81,P=0.324)。结论 Fam96B基因rs3890213_A>G多态位点与广东汉族人群冠心病易感无相关性。

FAM96A在结肠癌组织中的表达差异及其对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察FAM96A在60例结肠癌组织中的表达,分析其表达差异与结肠癌生物学特征的关系,并探讨FAM96A对结肠癌细胞系HCT116细胞增殖及凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测FAM96A蛋白在60例结肠癌组织及配对癌旁组织中的表达,并统计分析FAM96A蛋白表达差异与结肠癌临床病理特征之间的相关性。采用脂质体转染法将含人FAM96A全长序列的pc DNA3.1-myc-FAM96A重组质粒转染至HCT116细胞中,分别采用MTT法及流式细胞技术检测FAM96A过表达对HCT116增殖和凋亡的影响。结果Western blot结果显示FAM96A蛋白在癌旁组织中的表达水平显著高于结肠癌组织(t=16.328,P<0.05)。FAM96A蛋白表达差异与本研究中60例结肠癌患者的淋巴结转移、浸润深度、TNM分期及是否发生远处转移之间差异有统计学意义(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小及分化程度之间差异无统计学意义(P>0.05)。MTT法及流式细胞技术检测结果显示:FAM96A组吸光度(A)值显著低于对照组(P<0.05)。FAM96A组的细胞凋亡率高于对照组(t=30.015,P<0.05)。结论 FAM96A在人结肠癌组织中表达显著下降,其表达水平与结肠癌的发生发展、侵袭转移密切相关。过表达FAM96A可抑制结肠癌细胞增殖且诱导其凋亡。

胃肠道间质瘤组织中FAM96A、FAM96B、Caspase3表达观察

目的观察胃肠道间质瘤(GIST)中96序列相似的家庭成员A(FAM96A)、96序列相似的家庭成员B(FAM96B)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)蛋白及FAM96A、FAM96B mRNA的表达变化,并探讨其意义。方法手术留取的GIST组织140例份(120例份用于免疫组化检测、20例份用于RT-PCR检测,分别记为肿瘤1组、肿瘤2组)和正常组织130例份(120例份用于免疫组化检测、10例份用于RT-PCR检测,分别记为正常1组、正常2组)。采用免疫组化EnVision二步法检测肿瘤1组及正常1组中FAM96A、FAM96B、Caspase3蛋白阳性率,分析FAM96A、FAM96B、Caspase3蛋白间及其与GIST临床病理参数的关系;采用RT-PCR法检测肿瘤2组、正常2组FAM96A、FAM96B mRNA。结果肿瘤1组和正常1组FAM96A蛋白阳性率分别为14.2%、91.7%,FAM96B蛋白阳性率分别为21.7%、89.2%,Caspase3蛋白阳性率分别为65.0%、90.0%,两组比较,P均<0.05。FAM96A、FAM96B蛋白阳性表达与肿瘤1组GIST肿瘤直径、危险度分级有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤发生部位、核分裂像无相关性(P均>0.05);Caspase3蛋白阳性表达与GIST患者性别、年龄、肿瘤发生部位、肿瘤直径、核分裂像、危险度分级均无相关性(P均>0.05)。肿瘤1组GIST组织中FAM96A、FAM96B蛋白表达与Caspase3蛋白表达均无相关性(P均>0.05)。肿瘤2组、正常2组FAM96A mRNA相对表达量分别为0.55±0.23、1,FAM96B mRNA相对表达量分别为1.22±0.66、1,两组FAM96A mRNA相对表达量比较,P均<0.05。结论FAM96A、FAM96B、Caspase3在GIST组织中呈低表达,FAM96A和FAM96B可能作为新的抑癌基因,其表达的减少甚至缺失可能抑制了GIST肿瘤细胞的凋亡,这为临床提供了新的治疗靶点和思路。

FAM96A和FAM96B结构与功能的研究进展

96序列相似的家庭成员A和B(family with sequence similarity 96 member A and B,FAM96A和FAM96B)是属于MIP18(MMS19-interacting protein of 18 kD)家族的2个高度保守的同源蛋白,MIP18是与有丝分裂纺锤体相关的MMDX(MMS19-MIP18-XPD)复合体的亚基。研究表明,FAM96A和FAM96B在人胃肠道间质瘤、结肠癌、肝癌、胃癌和乳腺癌等多种肿瘤组织中的表达显著降低,提示其可能是作为潜在的抑癌基因参与肿瘤的发生发展,但目前关于FAM96A和FAM96B在肿瘤发生发展过程中的作用机理并不十分清楚。此外,研究发现FAM96A和FAM96B可通过与其他不同的蛋白质相互作用在体内发挥多种不同的功能。因此,就目前对于FAM96A和FAM96B结构和功能的研究所取得的进展进行了回顾与总结,并对其在肿瘤发生发展中的分子机制和相互作用蛋白鉴定的研究前景进行了展望,以期为临床上将FAM96A和FAM96B作为新的肿瘤诊断标志物和治疗靶点奠定基础,并为揭示二者在体内更多的新功能提供依据。

结肠癌组织中FAM96B和TCF4的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨结肠癌组织中96序列相似的家庭成员B(FAM96B)及T细胞因子4(TCF4)蛋白的表达及其与结肠癌患者临床病理特征之间的关系。方法选取手术切除的结肠癌肿瘤组织标本60例作为观察组,同期癌旁正常组织标本20例作为对照组,采用免疫组织化学染色法检测2组标本中FAM96B及TCF4蛋白的表达,采用免疫组织化学评分(IHS)对2种蛋白表达进行定量评价,采用Spearman等级相关进行FAM96B阳性表达与TCF4蛋白阳性表达之间的相关性。结果FAM96B和TCF4蛋白在2组标本中均有表达,观察组标本FAM96B蛋白的IHS评分较对照组低,TCF4蛋白的IHS评分则较对照组高,差异均有统计学意义(P<0.05);FAM96B蛋白在未侵及浆膜层结肠癌组织中的阳性表达率高于侵及浆膜层的结肠癌组织,在低分化结肠癌组织中的阳性表达率低于中、高分化结肠癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05);TCF4蛋白在低分化结肠癌中的阳性表达率高于中、高分化结肠癌组织,在Ⅰ~Ⅱ期结肠癌组织中的阳性表达率低于Ⅲ~Ⅳ期结肠癌组织,差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman分析显示FAM96B阳性表达与TCF4蛋白阳性表达无相关性(r=0.052,P=0.692)。结论FAM96B和TCF 4蛋白可能参与了结肠癌的发生发展,有望成为结肠癌新的治疗靶点。

FAM96A在乳腺癌组织中表达及其对乳腺癌细胞增殖凋亡和侵袭转移的影响

目的分析FAM96A在乳腺癌组织中表达及其对乳腺癌细胞增殖凋亡和侵袭转移的影响。方法收集的人乳腺癌组织及癌旁组织标本75例,采用免疫印迹法(W-B)法检测乳腺癌组织和癌旁组织中的FAM96A表达水平,并以人乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象,分为2组分别转染pcDNA3.1-vector空白质粒和pcDNA3.1-myc-FAM96A质粒,对比两组MCF-7细胞活性、凋亡率及侵袭转移的差异。结果乳腺癌组织中FAM96A蛋白表达水平为(0.31±0.05)较癌旁组织(1.82±0.27)明显降低;过表达FAM96A后72 h、96 h时,细胞活性较对照组明显减弱(均P<0.05);过表达FAM96A后的细胞凋亡率升高[(32.19±1.02)%比(3.07±0.84)%],穿膜细胞数明显减少(P<0.05)。结论FAM96A可抑制乳腺癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,并减少侵袭转移,其低表达可能是乳腺癌发生和进展的一个机制。

CCR7、FAM96A蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义

目的探讨CCR7、FAM96A蛋白在肝癌组织中的表达及其临床意义。方法收集肝癌患者76例,术中获取肝癌组织及癌旁组织,采用免疫蛋白印迹实验(Western blot,WB)检测CCR7、FAM96A蛋白表达,统计CCR7、FAM96A蛋白在肝癌及癌旁组织中的表达,并分析CCR7、FAM96A蛋白与肝癌临床病理特征的关系。结果肝癌组织中CCR7蛋白表达量显著高于癌旁组织,FAM96A蛋白表达量显著低于癌旁组织,差异均具有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织中CCR7、FAM96A蛋白表达与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝外转移、Child分级、TNM分期相关(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤数目、乙肝、肝硬化、血清AFP水平无关(P>0.05)。相关性分析显示,CCR7蛋白表达与FAM96A蛋白无明显相关性,相关性系数γ=0.053,P>0.05。结论CCR7蛋白在肝癌组织呈现高表达,FAM96A蛋白在肝癌组织呈现低表达,两者水平均与肝癌发生和发展密切相关。

原发性肝癌组织中FAM96A表达及意义

目的探讨原发性肝癌组织96序列相似的家庭成员A(FAM96A)表达及意义。方法选取原发性肝癌组织标本87例,同时选取癌旁组织作为对照,采用Western blot法检测FAM96A表达。结果原发性肝癌组织中FAM96A蛋白相对表达量为(1.411±0.154),明显低于癌旁组织(P<0.05);肿瘤直径≥5 cm、有门静脉癌栓、Ⅲ~Ⅳ期患者FAM96A蛋白相对表达量分别为(0.661±0.103)、(0.621±0.101)和(0.647±0.100),明显低于肿瘤直径<5 cm、无门静脉癌栓,Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05);死亡患者FAM96A蛋白相对表达量为(0.610±0.100),明显低于存活患者(P<0.05)。结论原发性肝癌组织FAM96A表达下调,与肿瘤直径、门静脉癌栓和TNM分期有一定关系,同时可能与患者预后有关,值得进一步研究。

96序列相似的家庭成员B功能的研究进展

96序列相似的家庭成员B(FAM96B)是由163个氨基酸组成的小分子蛋白。目前国内外关于FAM96B基因的研究甚少。最近研究发现,FAM96B基因通过与其相互作用蛋白相互作用发挥功能,可能与血管内皮细胞增殖、迁移及微管形成密切相关,可能在细胞有丝分裂及Apoptin特异性诱导肿瘤细胞凋亡中发挥作用,并可能与着色性干皮病及早老症等疾病的发生有关。但其具体功能尚不明确。

基于数据挖掘分析FAM134B在肝癌中的表达及其与预后的关系

目的研究FAM134B在肝癌组织中的表达情况,探讨其表达差异与临床病理特征以及预后生存的关系。方法挖掘Oncomine、Human Protein Atlas、TCGA和Kaplan Meier-Plotter数据库,分析FAM134B在肝癌组织中的表达,并对表达量与临床病理特征以及预后生存的关系进行探讨。计数资料组间比较采用χ^2检验。FAM134B表达与肝癌预后的关系采用Kaplan-Meier模型分析。结果正常组织中,FAM134B在肾脏中表达量最高,肝脏居第9位,肿瘤组织中,其在肾癌组织表达最高,肝癌第11位。共147项有关FAM134B表达差异的研究结果差异具有统计学意义,各种癌症中其表达差异不一致。其在肝癌组织中表达量较正常肝组织中低。FAM134B蛋白定位于内质网,其表达量与肝癌患者发病年龄、肝硬化、AFP、人种、分化程度有相关性(P值均<0.05)。FAM134B表达量与肝癌患者总生存率有关[风险比(HR)=0.67,95%可信区间(95%CI):0.47~0.95,P=0.026],且对亚洲人种预后有显著影响(HR=0.40,95%CI:0.22~0.74,P=0.003),但对白色人种影响不显著(HR=0.65,95%CI:0.40~1.05,P=0.076)。结论FAM134B在不同癌症中表达不一致,在肝癌中低表达,蛋白定位于内质网,其低表达与肝癌部分恶性表型相关,且与患者总体生存率低有关。

基于miR-148a-3p/SMAD2轴探讨当归多糖对高糖诱导RGC凋亡的影响

目的探究当归多糖(APS)对高糖诱导视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响,及其基于微小RNA-148a-3p/Smad家族成员2(miR-148a-3p/SMAD2)轴的作用机制。方法将分别转染miR-148a-3p模拟物(mimics)、miR-148a-3p抑制剂(inhibitor)及其对照品mimics-NC、miR-NC的RGC,分为对照组(CG)、模型组(MG)、APS低剂量(APS-L)组、APS高剂量(APS-H)组、APS-H+miR-148a-3p对照品组(APS+miR-NC)、APS-H+miR-148a-3p抑制剂组(miR-148a-3p inhibitor),分别以相应的高糖和APS处理,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-148a-3p和SMAD2 mRNA表达水平,检测细胞活力、凋亡情况和氧化应激指标水平,Western Blot法检测SMAD2蛋白表达水平,双荧光素酶实验检测miR-148a-3p和SMAD2的靶向关系。结果(1)miR-148a-3p/SMAD2表达:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组中miR-148a-3p表达水平均高于MG组(t_(APS-L)=6.564、t_(APS-H)=10.542、t_(APS-H+miR-NC)=9.945,均P=0.000),SMAD2 mRNA表达水平低于MG组(t_(APS-L)=4.147,P=0.004;t_(APS-H)=6.464、t_(APS-H+miR-NC)=6.586,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组miR-148a-3p表达水平低于APS-H+miRNC组(t=7.558,P=0.000),SMAD2 mRNA表达高于APS-H+miR-NC组(t=4.513,P=0.001),差异均有统计学意义。(2)细胞活力和凋亡率:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组细胞活力高于MG组(t_(APS-L)=8.105、t_(APS-H)=11.509、t_(APS-H+miR-NC)=11.996,均P=0.000),细胞凋亡率低于MG组(t_(APS-L)=8.729、t_(APS-H)=15.690、t_(APS-H+miR-NC)=14.709,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组细胞活力低于APS-H+miR-NC组(t=10.212,P=0.000),细胞凋亡率高于APS-H+miR-NC组(t=12.247,P=0.000),差异均有统计学意义。(3)氧化应激:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)均低于MG组(LDH:t_(APS-L)=11.257、t_(APS-H)=18.770、t_(APS-H+miR-NC)=18.364,均P=0.000;MDA:t_(APS-L)=11.121、t_(APS-H)=17.139、t_(APS-H+miR-NC)=17.768,均P=0.000),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)均高于MG组(SOD:t_(APS-L)=9.408、t_(APS-H)=14.833、t_(APS-H+miR-NC)=13.240,均P=0.000;GSH:t_(APS-L)=5.616、t_(APS-H)=12.080、t_(APS-H+miR-NC)=12.642,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组LDH和MDA均高于APS-H+miR-NC组(t_(LDH)=15.121、t_(MDA)=14.613,均P=0.000),SOD和GSH均低于APS-H+miR-NC组(tSOD=12.278、tGSH=8.912,均P=0.000),差异均有统计学意义。。(4)凋亡蛋白:APS-L组、APS-H组和APS-H+miR-NC组SMAD2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达低于MG组(SMAD2:t_(APS-L)=4.565、t_(APS-H)=8.042、t_(APS-H+miR-NC)=7.390,均P=0.000;Bax:t_(APS-L)=4.916、t_(APS-H)=8.763、t_(APS-H+miR-NC)=8.336,均P=0.000;Caspase-3:t_(APS-L)=4.214、t_(APS-H)=10.201、t_(APS-H+miR-NC)=9.536,均P=0.000),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达高于MG组(t_(APS-L)=3.713,P=0.001;t_(APS-H)=10.108、t_(APS-H+miR-NC)=10.314,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组SMAD2、Bax、Caspase-3表达均高于APS-H+miR-NC组(t_(SMAD2)=5.651、t_(Bax)=6.840、t_(Caspase-3)=8.205,均P=0.000),Bcl-2表达低于APS-H+miR-NC组(t=9.283,P=0.000),差异均有统计学意义。(5)靶向关系:miR-148a-3p与SMAD2的3'非翻译区存在结合位点。miR-148a-3p mimics和野生型SMAD2共转染组荧光素酶活性低于mimics-NC和野生型SMAD2共转染组,差异有统计学意义(t=12.781,P=0.000)。结论当归多糖可能通过上调miR-148a-3p、下调SMAD2,改善高糖诱导的RGC凋亡和氧化应激损伤。

JNJ-26481585对人肺腺癌培美曲塞耐药裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制探讨

目的:探讨JNJ-26481585对人肺腺癌培美曲塞耐药裸鼠移植瘤的抑制作用及其抗癌机制。方法:构建人肺腺癌A549/培美曲塞耐药细胞(A549/PEM)的移植瘤裸鼠模型,随机分为模型组、培美曲塞组、JNJ组、联合组(培美曲塞+JNJ),第28天治疗观察结束时处死裸鼠,剥离肿瘤组织标本待测。测定4组裸鼠肿瘤体积与体质量,计算抑瘤率,观察各治疗组药物对荷瘤裸鼠的毒副反应,TUNEL方法检测4组移植瘤细胞凋亡情况的差异,qRT-PCR检测4组移植瘤细胞FAM96A、Bax、Bcl-2基因mRNA表达水平差异,Western blot检测4组移植瘤细胞FAM96A、Bax、Bcl-2蛋白表达的差异。结果:联合组的肿瘤体积、体质量低于JNJ组,JNJ组的肿瘤体积、体质量低于培美曲塞组,联合组的抑瘤率高于JNJ组,JNJ组抑瘤率高于培美曲塞组(均P<0.05)。联合组的细胞凋亡率高于JNJ组,JNJ组细胞凋亡率高于培美曲塞组(均P<0.05)。联合组肿瘤细胞的FAM96A、Bax表达水平高于JNJ组,JNJ组FAM96A、Bax表达水平高于培美曲塞组,联合组Bcl-2表达水平低于JNJ组,JNJ组Bcl-2表达水平低于培美曲塞组(均P<0.05)。联合组与单药组比较,血细胞计数均明显下降,肝功能指标均明显升高(P<0.05);培美曲塞组与JNJ组比较,血细胞及肝功能指标无统计学差异(P>0.05)。结论:JNJ-26481585可通过激活抑癌基因FAM96A的表达、上调Bax表达及下调Bcl-2的表达来促进癌细胞凋亡,逆转肺腺癌对培美曲塞的耐药性,并与培美曲塞协同发挥抗癌作用。

FAM96B对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响

目的观察96序列相似的家庭成员B(FAM96B)对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响.方法分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测FAM96B在L02和HepG2细胞中的mRNA及蛋白表达量并比较其差异.构建pcDNA3.1-FAM96B真核表达载体并转染至HepG2细胞中,采用噻唑蓝(MTT)检测各组细胞在0、24、48、72、96 h的增殖能力.分别采用流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡、划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell检测细胞侵袭能力.选取10只4~5周龄雄性BALB/c-nu/nu小鼠,构建肿瘤模型,随机分为对照组和FAM96B组.分别注入0.3ml 1×10^10个pcDNA3.1-HepG2细胞和pcDNA3.1-FAM96BHepG2细胞.每隔3d测量皮下瘤的重量和体积,观察30 d后处死.应用SPSS 21.0软件进行统计,计量资料采用均值±标准差(Mean±SD)表示,两组间均数比较采用t检验.结果 FAM96B在HepG2细胞中的mRNA表达量显著低于L02细胞(t=25.343,P<0.01),同时,FAM96B在HepG2细胞中的蛋白表达量显著低于L02细胞.与对照组比较,FAM96B组细胞增殖能力显著减弱(P<0.01).FAM96B组的凋亡率显著高于对照组[(8.61±1.05)%比(47.34±4.82)%,t=23.544,P<0.01].FAM96B组的迁移能力显著低于对照组[(222.33±32.78)μm比(284.13 ±46.18)μm,t=4.227,P<0.01].FAM96B组侵袭能力显著低于对照组[(45.47±4.05)个比(101.13±5.54)个,t=31.413,P<0.01].裸鼠皮下成瘤模型中,FAM96B组裸鼠瘤体重量及体积与对照组比较明显减小(t体积=0.610,t重量=7.186,P均<0.05).结论 FAM96B在肝癌HepG2细胞中低表达,上调FAM96B表达可抑制HepG2细胞增殖、侵袭及转移并诱导其凋亡,且可抑制裸鼠皮下成瘤模型中的肿瘤生长.

石榴皮多酚对食管癌EC9706细胞的增殖及凋亡影响

目的探讨石榴皮多酚对食管癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响,并探索其机制是否与调控96序列相似家庭成员B(FAM96B)表达有关。方法RT-qPCR检测FAM96B在食管癌组织和癌旁组织中的表达。将食管癌细胞EC9706分为对照组,石榴皮多酚低、中、高剂量组,pcDNA组,pcDNA-FAM96B组,石榴皮多酚+si-NC组,石榴皮多酚+si-FAM96B组。采用MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖抑制率和凋亡率,Western blot检测CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax表达。结果与对照组比较,食管癌组织中FAM96B的表达升高(P<0.05)。石榴皮多酚干预后EC9706细胞增殖抑制率,凋亡率,FAM96B、p21和Bax蛋白表达均升高(P<0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达均降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。过表达FAM96B后EC9706细胞增殖抑制率,凋亡率,p21和Bax蛋白表达均升高(P<0.05),CyclinD1和Bcl-2蛋白表达均降低(P<0.05)。干扰FAM96B表达可部分逆转石榴皮多酚对EC9706细胞增殖、凋亡及其相关蛋白表达的影响(P<0.05)。结论石榴皮多酚可抑制食管癌细胞EC9706增殖,诱导细胞凋亡,其机制与调控FAM96B表达有关。