AKR1B10联合GPC-3在肝细胞癌免疫组化诊断中的应用

目的探讨AKR1B10和GPC-3联合应用对提高肝细胞癌(HCC)免疫组化诊断敏感性和特异性的价值。方法制备75例HCC组织芯片作为训练集,进行AKR1B10和GPC-3免疫组化检测,建立Logistic回归诊断模型,以此构建ROC曲线(受试者工作特征曲线),利用其曲线下面积(AUC)对单个指标和联合指标的敏感性和特异性进行评估。将Logistic回归诊断模型用于200例HCC的测试集中,检测其有效性。结果训练集中,AKR1B10和GPC-3的AUC分别为0.773和0.800,联合诊断后的AUC提高至0.931;AKR1B10和GPC-3的敏感性分别为56%和61.3%,特异性均为98.7%,两者联合后的敏感性提高至88.0%,特异性为97.3%。测试集中,AKR1B10联合GPC-3对HCC诊断的敏感性和特异性分别为97.0%和96.5%。结论AKR1B10联合GPC-3明显提高HCC免疫组化诊断的敏感性和特异性,可在常规病理检查中合理组合使用。

miR-568通过下调AKR1B10表达影响胶质母细胞瘤细胞的增殖和凋亡

目的 探讨微小RNA-568(miR-568)对胶质母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法 培养正常星形胶质细胞HA1800及胶质母细胞瘤细胞系(U251、T98G和SHG44)购自中国科学院上海细胞库,qRT-PCR检测细胞中miR-568和醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)mRNA表达,蛋白质印迹法(Western blotting)检测AKR1B10蛋白表达。以U251细胞为研究对象,构建上调miR-568或下调AKR1B10的U251细胞,MTT、流式细胞仪和Western blotting实验检测细胞增殖、凋亡及细胞中CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-568与AKR1B10调控关系。结果 胶质母细胞瘤细胞系(U251、T98G和SHG44)及HA1800细胞中miR-568表达分别为(1.01±0.09)、(0.39±0.03)、(0.58±0.05)及(0.46±0.04),AKR1B10 mRNA表达分别为(0.98±0.08)、(2.45±0.2)、(2.16±0.21)及(2.37±0.23),AKR1B10蛋白表达分别为(0.12±0.03)、(0.61±0.05)、(0.51±0.04)及(0.59±0.05),胶质母细胞瘤细胞系(U251、T98G和SHG44)中miR-568表达低于HA1800细胞(P<0.05),AKR1B10 mRNA和蛋白表达高于HA1800细胞(P<0.05)。上调miR-568或下调AKR1B10后,U251细胞增殖活性[(0.61±0.06)、(0.69±0.06)]、CyclinD1[(0.32±0.03)、(0.35±0.03)]和Bcl-2蛋白表达[(0.29±0.03)、(0.32±0.03)]降低(P<0.05),U251细胞凋亡率[(22.41±2.15)%、(21.26±2.14)%]、p21[(0.58±0.05)、(0.56±0.05)]和Bax蛋白表达[(0.72±0.07)、(0.67±0.07)]升高(P<0.05)。miR-568靶向结合并负调控AKR1B10。上调AKR1B10逆转了上调miR-568对U251细胞增殖和凋亡的影响。结论 上调miR-568通过靶向负调控AKR1B10抑制胶质母细胞瘤细胞增殖,并促进其凋亡。

醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)通过激活Wnt/β-catenin通路促进乳腺癌细胞增殖

目的探讨醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法在乳腺癌MCF-7细胞过表达AKR1B10、在BT-20细胞敲低AKR1B10,分别建立过表达以及敲低细胞系。利用CCK-8增殖实验检测过表达与敲低AKR1B10对乳腺癌细胞增殖的影响。实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织及配对正常组织AKR1B10 mRNA水平,Western blot法检测乳腺癌组织、过表达及敲低AKRB10的乳腺癌细胞AKR1B10、β联蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、存活蛋白(survivin)、c-Myc的蛋白水平。结果乳腺癌组织AKR1B10表达增加。过表达AKR1B10后,MCF-7乳腺癌细胞增殖加快,β-catenin、cyclin D1、c-Myc、survivin蛋白表达增加;敲低AKR1B10后,BT-20乳腺癌细胞增殖变慢,β-catenin、cyclin D1、c-Myc、survivin蛋白表达下降。结论AKR1B10在乳腺癌中高表达并通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞增殖。

血清AKR1B10和甲胎蛋白联合检测对肝细胞癌诊断的意义

目的:探讨血清AKR1B10和甲胎蛋白(AFP)联合检测对肝细胞癌(HCC)的临床诊断价值。方法:2015年3月至2018年6月苏州第五人民医院收治的160例HCC患者、160例肝硬化患者、120例慢性乙型肝炎患者、53例自身免疫性肝炎患者、69例药物性肝损伤患者,同期从门诊体检部选取健康体检者120例。用二分类变量Logistic回归进行分析,产生新变量,并对各单项指标、预测概率进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,评估单项及联合检测的ROC下面积(AUC)及其敏感性和特异性。结果:HCC组患者的血清AFP和AKR1B10水平均明显高于肝硬化、慢性乙型肝炎、自身免疫性肝炎、药物性肝损伤、健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。基于Youden指数,AKR1B10判断HCC的cut-off值为903.0 pg/ml,其AUC为0.891,95%CI 0.862-0.920,其敏感性为93.8%,特异性为80.5%;AFP判断HCC的AUC为0.867,95%CI 0.826~0.907。AKR1B10和AFP联合判断HCC的AUC为0.926,95%CI 0.903~0.950,其敏感性为80.0%,特异性为92.5%。另外,AKR1B10诊断早期HCC的AUC为0.893,95%CI 0.854-0.933,其敏感性为93.8%,特异性为81.0%;AKR1B10联合AFP判断早期HCC的AUC为0.916,95%CI 0.880-0.952,敏感性为77.8%,特异性为92.5%。结论:血清AKR1B10和AFP联合检测有助于提高HCC的临床诊断水平,对高危人群的筛查及早期诊断有重要意义。

HCV核心蛋白调控miR-486-5p/AKR1B10促进肝癌细胞生长的实验研究

目的:探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCVc)对肝癌HepG2细胞增殖凋亡和miR-486-5p以及醛酮还原家族1B10(AKR1B10)蛋白表达的影响。方法:以重组腺病毒Ad-GFP-HCVc感染HepG2细胞,采用RT-PCR和Western blot检测HepG2细胞HCVc表达,MTT法和流式细胞术分别检测HepG2细胞增殖和凋亡情况,qRT-PCR检测HepG2细胞中miR-486-5p表达,Western blot检测AKR1B10蛋白表达;以miR-486-5p抑制剂转染HepG2细胞,qRT-PCR和Western blot分别检测HepG2细胞中miR-486-5p和AKR1B10蛋白表达;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-486-5p和AKR1B10的靶向关系。结果:Ad-GFP-HCVc感染后,HepG2细胞中HCVc表达升高;与阴性对照组相比,HCVc组细胞增殖活力和AKR1B10蛋白表达明显升高,而细胞凋亡率和miR-486-5p表达明显降低(P<0.05);与anti-miR-NC组相比,转染miR-486-5p抑制剂的HepG2细胞miR-486-5p表达明显降低,而AKR1B10蛋白表达明显升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-486-5p可与AKR1B10靶向结合。结论:HCVc可能通过下调miR-486-5p表达引起其靶基因AKR1B10表达升高,促进HepG2细胞异常生长。

EBV阳性与阴性NPC细胞中AKR1B10的差异表达及生物学意义

研究EB病毒(Epstein⁃Barr virus,EBV)阳性与阴性鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞中醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)的差异表达及生物学意义。收集NPC组织并检测EBV感染情况及AKR1B10表达水平,比较EBV阳性与阴性NPC组织中AKR1B10表达水平的差异;培养EBV阳性的NPC细胞株HK⁃1和C666⁃1、EBV阴性的NPC细胞株CNE⁃1及CNE⁃2,检测AKR1B10的表达水平。HK⁃1和C666⁃1进行分组,给予10μmol/L、20μmol/L AKR1B10抑制剂处理,20μmol/L AKR1B10抑制剂联合对照溶剂或20μmol/Lβ⁃catenin激动剂处理,检测细胞增殖水平、侵袭数目及c⁃myc、MMP2、MMP9的mRNA表达水平,AKR1B10、总β⁃连环蛋白(β⁃catenin)、核β⁃catenin的蛋白表达水平。结果显示HK⁃1和C666⁃1细胞中AKR1B10的蛋白表达水平高于CNE⁃1及CNE⁃2;10μmol/L、20μmol/L AKR1B10抑制剂组HK⁃1和C666⁃1细胞的增殖水平、侵袭数目、c⁃myc、MMP2、MMP9的mRNA表达水平、核β⁃catenin的蛋白表达水平低于对照组(P<0.05),总β⁃catenin的蛋白表达水平与对照组比较无差异(P>0.05);β⁃catenin激动剂+AKR1B10抑制剂组HK⁃1和C666⁃1细胞的增殖水平、侵袭数目、c⁃myc、MMP2、MMP9的mRNA表达水平、总β⁃catenin及核β⁃catenin的蛋白表达水平高于溶剂+AKR1B10抑制剂组(P<0.05)。可以得出结论,EBV阳性NPC细胞中AKR1B10表达水平增加通过激活β⁃catenin入核的方式促进细胞增殖和侵袭。

利用TCGA数据库分析AKR1B10在肝癌中的表达及临床意义

目的研究醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)在肝癌中的表达情况及临床价值,并探讨AKR1B10参与肝癌发生、发展的机制。方法自2019年10月从肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中下载肝癌数据集,获取AKR1B10基因表达谱及临床信息。分析424例样本中AKR1B10的表达与肝癌预后及临床病理特征之间的相关性。采用基因富集化分析(GSEA)方法预测AKR1B10在肝癌中的调控通路。使用SPSS22.0进行统计分析。肝癌组织与癌旁组织表达差异采用t检验。临床病理参数相关性分析,组间比较采用χ^(2)检验。单因素和多因素分析采用Cox回归模型。P<0.05差异有统计学意义。结果在TCGA数据库中,AKR1B10在肝癌组织中高表达,高表达AKR1B10患者总体生存期明显低于AKR1B10低表达患者(P=0.006)。多因素分析进一步显示AKR1B10表达状态是影响肝癌预后的独立危险因素(P=0.003)。AKR1B10表达富集到Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路、氨酰tRNA生物合成、谷胱甘肽代谢等基因集。结论肝癌组织AKR1B10 mRNA高表达是一种预后不良的危险因素。RT-PCR可快速检测肝癌组织中其表达情况来评估患者预后,是预测肝癌患者预后较好的新指标。