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On-column Refolding of Diphtheria Toxin Variant CRM197 by Different Metal-Chelating Affinity Chromatography Matrices
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作者 Alessandra Stefan Mattia Boiani +1 位作者 Luca Longanesi Alejandro Hochkoeppler 《Journal of Chemistry and Chemical Engineering》 2014年第12期1135-1141,共7页
We have previously shown that the diphtheria toxin variant CRM 197 (cross-reacting material 197) can be overexpressed in Escherichia coli at high levels, yielding insoluble aggregates, which were solubilized using u... We have previously shown that the diphtheria toxin variant CRM 197 (cross-reacting material 197) can be overexpressed in Escherichia coli at high levels, yielding insoluble aggregates, which were solubilized using urea. This study reports a comparison of three matrices suitable for the purification and refolding of recombinant CRM197 by metal-chelating affinity chromatography, Moreover, we show that refolded CRM197 features enzymatic activity. 展开更多
关键词 REFOLDING chromatographic matrix cross-reacting material 197 metal-chelating affinity chromatography
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超氧化物歧化酶吸附分离-化学修饰的耦合过程 被引量:1
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作者 李东华 王鸿 +2 位作者 孙汉栋 易喻 应国清 《化工进展》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第1期135-140,共6页
以超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)为模板蛋白,将其分离纯化过程和修饰过程耦合起来,从而获得比活更高、稳定性更好的修饰SOD。将SOD选择性地吸附在DEAE-52层析柱和铜离子螯合葡聚糖凝胶柱上,先不经洗脱分离,直接用活化的聚... 以超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)为模板蛋白,将其分离纯化过程和修饰过程耦合起来,从而获得比活更高、稳定性更好的修饰SOD。将SOD选择性地吸附在DEAE-52层析柱和铜离子螯合葡聚糖凝胶柱上,先不经洗脱分离,直接用活化的聚乙二醇(PEG)5000对吸附在柱上的SOD进行化学修饰,再通过特异性洗脱分离获得PEG-SOD,使SOD分离纯化和修饰过程同步完成。SOD通过离子交换吸附层析-PEG修饰耦合过程和金属螯合层析-PEG修饰耦合过程,所得的PEG-SOD比活力分别为9638.0U/mg和9067.8U/mg,纯化倍数分别为1.87倍和1.755倍,氨基修饰率分别为35.3%和40.9%。结果表明SOD的分离纯化-化学修饰耦合过程是可行的,且金属螯合层析-修饰耦合过程的效果要优于离子交换吸附层析-修饰耦合过程。 展开更多
关键词 超氧化物歧化酶 化学修饰 离子交换层析 金属鳌合层析 耦合过程
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