雷公藤多苷抑制二肽肽酶I活性及其调节机制的研究

目的:二肽肽酶I(DPPI)是一种溶酶体半胱氨酸蛋白酶,高表达于颗粒免疫细胞包括肥大细胞,有激活炎症介质丝氨酸蛋白酶的功能。本研究用胶原诱导类风湿关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型,探讨雷公藤多苷对DPPI的作用以揭示其治疗类风湿的药理机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和雷公藤多苷治疗组(低剂量组2.5 mg/100 g体重,高剂量组5 mg/100 g体重);用牛Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂诱导大鼠类风湿关节炎,两次免疫后第12天开始灌胃给药,连续2周后处死,收集血液和滑膜。关节切片HE染色和细胞计数,荧光底物法检测DPPI在大鼠血清和滑膜中的表达和活性,明胶酶谱法检测滑膜液中MMP-2/9表达水平,BCA法测定样品总蛋白含量。结果:和模型组相比,雷公藤多苷能降低CIA大鼠关节滑膜组织中肥大细胞的数量,并抑制滑膜液和血清DPPI的活性;滑膜总蛋白和MMP-2/9活性也有所降低。结论:雷公藤多苷对DPPI活性的抑制作用可能是其治疗类风湿药理学机制之一。

射血分数保留的心力衰竭患者MMP-2、MMP-9、Gal-3的浓度变化及其临床意义

目的观察射血分数保留的心力衰竭(HF-PEF)患者血清中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9及半乳糖凝集素-3(Gal-3)的浓度变化及其临床意义。方法选取2016年7月—2017年6月新疆医科大学第五附属医院心血管内科诊治的HF-PEF患者88例作为HF-PEF组,非心力衰竭患者35例为NHF组,均采用ELISA法测定血清MMP-2、MMP-9及Gal-3的浓度,超声测定左房直径(LA)、左室舒张末期内径(LVEDD)及左室射血分数(LVEF),并分析其相关性。结果HF-PEF组患者血清MMP-2、MMP-9及Gal-3浓度明显高于NHF组(t/P=12.952/0.000、17.618/0.000、14.801/0.000),并随着心功能分级升高而显著增加(F/P=78.72/0.000、127.531/0.000、86.418/0.000);HF-PEF组LAD水平大于NHF组,LVEF水平低于NHF组(P均<0.01),而2组LVEDD水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。血清MMP-2、MMP-9和Gal-3浓度与LAD、LVEDD呈正相关(LAD:r/P=0.716/0.000、0.712/0.000、0.661/0.000;LVEDD:r/P=0.267/0.012、0.325/0.002、0.280/0.008),与LVEF呈负相关(r/P=-0.357/0.001、-0.547/0.000、-0.451/0.000)。结论检测血清中MMP-2、MMP-9及Gal-3浓度有助于HF-PEF患者病情早期诊断及其疾病严重程度的判断。

苦瓜总皂苷对2型糖尿病大鼠心脏组织中MMP-9和HO-1表达影响

目的:探讨苦瓜总皂苷对2型糖尿病大鼠心肌组织中血红素加氧酶1(Heme Oxygenase1,HO-1)和基质金属蛋白酶-9(Matrix Metallo Protein-9,MMP-9)表达的影响。方法:将60只健康雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组以及苦瓜总皂苷治疗组,模型组和苦瓜总皂苷治疗组给予高脂饮食4周,腹腔一次性注射STZ 30 mg建立2型糖尿病大鼠模型,造模成功后,治疗组给予苦瓜总皂苷(20 mg/kg)灌胃治疗,其它两组给予生理盐水灌胃,分别于治疗4周和8周后处死大鼠各半,检测血糖、心功能以及心肌组织HO-1和MMP-9的表达。结果:与正常对照组相比,模型组血糖,心功能CK、CK-MB、LDH和HBDH明显升高(P<0.05),治疗4周后均明显降低(P<0.05),治疗8周后进一步降低。心肌组织HO-1和MMP-9免疫组化、Western以及RT-PCR可见,与正常组相比糖尿病组HO-1表达明显下降(P<0.05),MMP-9明显升高(P<0.05);治疗后HO-1表达明显增加(P<0.05),MMP-9表达明显减少(P<0.05)。结论:苦瓜总皂苷对大鼠心肌组织中MMP-9和HO-1有明显的调控作用。

4-羟苯基维胺对瘢痕疙瘩成纤维细胞Procollagen Ⅰ和MMP-1 mRNA表达的影响

目的探讨4-羟苯基维胺(4-HPR)对瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型前胶原(ProcollagenⅠ)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)mRNA表达的影响。方法运用实时荧光定量PCR方法测定瘢痕疙瘩成纤维细胞中ProcollagenⅠ和MMP-1 mRNA表达情况。观察4-HPR对ProcollagenⅠ和MMP-1 m RNA表达的影响。结果瘢痕疙瘩成纤维细胞中ProcollagenⅠmRNA表达明显高于正常皮肤成纤维细胞,而MMP-1 mRNA低表达,差异具有统计学意义。4-HPR不同浓度组瘢痕疙瘩成纤维细胞ProcollagenⅠmRNA表达水平明显减少,MMP-1 mRNA表达水平明显增加,差异具有统计学意义。结论 ProcollagenⅠ和MMP-1基因表达在瘢痕生成过程中起重要作用。4-HPR可抑制ProcollagenⅠ和促进MMP-1 mRNA表达水平。

基质金属蛋白酶2与心力衰竭的研究进展

基质金属蛋白酶2(MMP-2)是基质金属蛋白酶家族(MMPs)的重要成员,可通过高效降解细胞外基质参与充血性心力衰竭(CHF)过程中的左心室重构。CHF时MMP-2表达升高并存在与组织抑制因子失衡,因此,MMP-2与CHF的发生发展密切相关。检测MMP-2可能对判断CHF病情程度及预后具有预测作用,抑制MMP-2表达和活性有望成为治疗CHF的新策略。

铜绿假单胞菌外排泵及整合子与碳青霉烯类耐药中的关系

目的明确金属酶、整合子和外排泵在铜绿假单胞菌碳青霉烯类耐药中的作用。方法对42株泛耐药铜绿假单胞菌采用K-B法检测MIC值,双纸片扩散法测金属β-内酰胺酶(MBL),PCR扩增整合子并测序基因盒,real-time PCR检测oprM基因表达,western blot检测外膜蛋白。结果亚胺培南耐药率高达45.23%,美罗培南耐药率71.42%;检出有22株产MBL;Ⅰ类整合子检出率52.30%,携带dhfrⅫ-orfF-aadA2和aacA4-blaVIM-4两种类型的基因盒组合形式;oprM基因高表达细菌是低表达细菌的3.56倍;25株高表达MexAB-OprM外膜蛋白。结论金属酶、整合子均不是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药的主要原因,MexAB-OprM高表达致美罗培南耐药。各种耐药机制相互影响,并相互协同。

铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究

目的:研究铜绿假单胞菌(PA)对亚胺培南的耐药机制,为临床合理选择抗生素提供确切的依据。方法:用2-巯基丙酸和头孢他啶双纸片协同法,检测临床分离的48株耐亚胺培南PA金属β-内酰胺酶(MBL)产生率,并提取各菌株的外膜蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析,比较各耐药菌株外膜蛋白与标准菌株的差异。结果:48株耐亚胺培南PA中8株产MBL;在外膜蛋白SDS-PAGE图上发现32株缺少外膜蛋白OprD2,其中8株还伴随其他外膜蛋白的改变。结论:PA对亚胺培南耐药的主要原因是外膜蛋白OprD2缺失或含量减少以及MBL的产生,或由两者共同作用所致。

冠心病患者动脉弹性与血清高敏C反应蛋白和基质金属蛋白酶9的相关性

目的探讨冠心病患者动脉弹性与高敏C反应蛋白和基质金属蛋白酶9的关系。方法运用动脉弹性功能测定仪检测大动脉弹性指数(C1)和小动脉弹性指数(C2);采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测血清高敏C反应蛋白及基质金属蛋白酶9。结果 C1、C2、基质金属蛋白酶9及高敏C反应蛋白在冠心病组与对照组之间存在差异,且有统计学意义。Logistic逐步回归分析显示:男性、吸烟、低密度脂蛋白、C2、高血压史、高敏C反应蛋白是冠心病的独立危险因素。冠心病患者C1与高敏C反应蛋白及基质金属蛋白酶9相关系数分别为-0.51(P<0.01)和-0.49(P<0.01);C2与高敏C反应蛋白及基质金属蛋白酶9相关系数分别为-0.69(P<0.01)和-0.55(P<0.01)。冠心病患者动脉弹性影响因素多元逐步回归分析显示,C1独立影响因素为年龄、脉压、收缩压、高敏C反应蛋白、低密度脂蛋白、基质金属蛋白酶9,C2独立影响因素为年龄、脉压、空腹血糖、高敏C反应蛋白、低密度脂蛋白。结论冠心病患者动脉弹性与血清炎症因子高敏C反应蛋白及基质金属蛋白酶9均呈明显负相关,炎症反应可能是冠心病患者动脉弹性的重要影响因素之一。

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药机制研究

目的对临床分离的14株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药机制进行研究。方法药敏试验检测对15种常用抗菌药物的耐药情况;协同试验筛选产金属酶菌株和聚合酶链反应检测金属酶基因及oprD基因;氰氯苯腙检测主动外排情况及其对亚胺培南最低抑菌浓度(MIC)的影响。结果耐亚胺培南的铜绿假单胞菌对其它常用抗菌药物耐药率也很高,其中,5株产VIM-2型金属酶,11株oprD基因检测阴性。2株在有氰氯苯腙存在时对亚胺培南的MIC降低至原值的1/4,表明这2株有主动外排系统参与对亚胺培南的耐药。结论OprD2蛋白表达缺失是本研究中铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因,其次为产VIM-2型金属酶和主动外排系统,且至少有4株存在两种以上耐亚胺培南的机制。

冠心病患者可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1的表达变化及临床意义

目的观察冠心病患者血浆可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1（sLRP1）浓度的变化,并分析其与基质金属蛋白酶9（MMP-9）和高敏C反应蛋白（hsCRP）浓度变化的相关性。方法选取2013年8～10月北京安贞医院心内科住院的12例稳定型心绞痛（SAP）、32例急性冠脉综合征（ACS）,同期冠脉造影阴性的患者8例为对照组。于介入术前空腹检测血浆sLRP1、MMP-9和hsCRP的浓度,比较三组之间差异。介入术后第一天空腹检测患者血浆sLRP1,并与术前相比较,分析冠心病患者sLRP1与MMP-9、hsCRP的相关性。结果术前ACS组sLRP1、MMP-9和hsCRP浓度显著高于SAP组和对照组,差异有统计学意义（均P〈0.01）,而SAP组和对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。ACS组患者介入术前和术后sLRP1差异无统计学意义（P〉0.05）。ACS患者sLRP1与hsCRP浓度显著正相关（r=0.713,P=0.000）,与MMP-9浓度无相关性。结论sLRP1可能是反映ACS炎症状态的一个指标。

激光生物效应的生化分析与机理研究──激光对大豆作用的生化分析与作用机理的初步探讨

比较分析研究红宝石、Ｎ＿２、ＣＯ＿２激光对大（青）豆单独或复合辐照的作用，观察到激光软应对生物大分子的含量和生物活住的影响因激光种类和剂量不同而异，特别是不同激光效应对大（青）豆系列种子蛋白中的组份氢基酸含量的影响各具类型。尤以Ｇｌｕ，Ｍｅｔ含量变化显著而特异。

前列腺癌组织中BMP-4的表达及临床意义

目的探讨骨形态发生蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP-4)在前列腺癌组织中的表达,分析其表达下调对前列腺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法采用免疫组化En Vision法检测58例前列腺癌及40例前列腺良性增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)组织中BMP-4蛋白的表达;利用Western blot法检测前列腺癌细胞(LNcap、PC-3、Du145)和BPH细胞中BMP-4蛋白的表达;将BMP-4 siRNA和对照siRNA分别转染LNcap,分为未处理组、对照siRNA组和BMP-4 siRNA组,采用Western blot法检测三组LNcap细胞中BMP-4、MMP-2和MMP-9的表达量;利用CCK8分别检测三组细胞的增殖能力;采用Tanswell小室实验检测三组细胞的侵袭能力。结果前列腺癌组织中BMP-4蛋白阳性率高于BPH组织(P <0. 05),BMP-4蛋白在前列腺癌细胞中的表达量高于BPH细胞。BMP-4 siRNA组细胞中BMP-4蛋白表达低于未处理组和对照siRNA组; BMP-4 siRNA组细胞增殖能力及细胞侵袭能力均低于未处理组和对照siRNA组。BMP-4 siRNA组细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达量低于未处理组和对照siRNA组。结论 BMP-4高表达于前列腺癌组织中,与前列腺癌细胞增殖和侵袭相关,有望成为前列腺癌潜在的治疗靶点。

产金属酶合并外膜蛋白缺失的铜绿假单胞菌的检测

目的研究铜绿假单胞菌对亚胺培南(IMP)耐药机制,为临床合理选择抗生素提供确切的依据。方法对20株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌,以EDTA、CuCl2、FeCl2、2-MPA、IMP为酶抑制剂,头孢他啶(CAZ)、亚胺培南为底物,在M-H平板上用纸片扩散法进行抗生素协同敏感性检测,并用聚合酶链反应(PCR)检测金属酶基因;对3株耐亚胺培南(IMP)的菌株和3株敏感株,提取其菌株外膜蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析,比较两组菌株外膜蛋白的差异。结果协同法检测20株铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶有1例阳性,结果与PCR法检测结果一致,PCR产物经测序证实为VIM-2型金属β-内酰胺酶;金属β-内酰胺酶阳性的菌株在2种底物纸片中均与EDTA、2-MPA和IMP纸片有协同作用,其中2-MPA效果最好,与CuCl2、FeCl2纸片无协同作用;在外膜蛋白SDS-PAGE电泳图谱上发现敏感株存在OprD2、OprE带,但耐药株缺乏OprD2,OprE带缺乏或者染色较淡;定量分析发现耐药株OprD2、OprE含量明显低于敏感株。结论铜绿假单胞菌对IMP耐药的主要原因是外膜蛋白OprD2、OprE缺失或含量减少以及VIM-2型金属β-内酰胺酶的产生所致,或由两者共同作用所致。

丁苯酞应用于rt-PA静脉溶栓脑卒中的疗效性和安全性分析

目的分析丁苯酞注射液应用于rt-PA静脉溶栓脑卒中的疗效和安全性。方法根据rt-PA静脉溶栓的急性缺血性脑卒中(AIS)患者是否接受丁苯酞注射液治疗分成rt-PA静脉溶栓+丁苯酞注射液治疗组(n=124)和rt-PA静脉溶栓+0.9%生理盐水对照组(n=75)。对两组基线资料及治疗后24 h、7 d、14 d美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、颅内多普勒超声(TCD)监测大脑中动脉平均血流速度(Vm)及搏动指数(PI)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、90 d mRS评分等临床指标进行比较及分析。结果治疗组NIHSS评分、MMP-9明显低于对照组(P<0.05);TCD监测Vm、PI,治疗组均明显高于对照组(P<0.05)。mRS评分治疗组的预后良好率为93.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论rt-PA静脉溶栓患者应用丁苯酞注射液有显著临床疗效,未增加不良反应发生率及病死率,其作用机制可能与降低血清中MMP-9水平有关。

铜转运蛋白hCtr1结合Cu(I)并转运至铜伴侣蛋白Atox1

铜转运蛋白hCtr1细胞膜内的C端区域对于细胞的铜转运过程具有重要作用,然而这一结构域对铜离子的捕获和胞内蛋白的铜分布机理尚不清楚.为了研究hCtr1蛋白的C端结构域与铜的结合方式,通过紫外-可见吸收光谱、核磁共振谱和质谱等方法,对C端8肽(C8)与铜离子的结合进行了分析.结果表明,一价铜离子对C8有很高的亲和力(log K=16.6).C8能够结合多个铜离子,其HCH基序中的组氨酸和半胱氨酸残基是铜结合位点,而另一个天冬氨酸残基也可能参与铜结合.进一步研究发现,铜离子能够从C8转移到Atox1.实验数据揭示了铜与hCtr1结合的详情,也有助于理解铜在细胞中的分布.

左西孟旦对脓毒性休克患者肾脏功能保护作用观察

目的观察左西孟旦对脓毒性休克患者肾脏功能保护作用。方法选取脓毒性休克32例,按照治疗方法不同将其分为观察组和对照组两组各16例。观察组先静脉滴注多巴酚丁胺24 h后,改用左西孟旦连续静脉滴注24 h;对照组持续静脉滴注多巴酚丁胺48 h。观察比较两组治疗前后血流动力学参数、左室射血分数(LVEF)、肾血流阻力指数(RI)、血乳酸、血肌酐清除率、尿胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP-7)、尿金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP-2)、其他相关指标,以及治疗期间不良反应发生情况。结果治疗前,两组血流动力学参数、LVEF、肾血流RI、血乳酸、血肌酐清除率及尿IGFBP-7、TIMP-2比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组心率(HR)和中心静脉压(CVP)均较治疗前降低;观察组LVEF和血肌酐清除率较治疗前升高,肾血流RI和血乳酸、尿IGFBP-7、TIMP-2较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。治疗后,观察组HR、CVP、肾血流RI、血乳酸及尿IGFBP-7、TIMP-2低于对照组,LVEF及血肌酐清除率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。观察组非连续性肾脏替代治疗患者24 h尿量多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,两组均未出现相关不良反应。结论左西孟旦治疗脓毒性休克患者可以改善肾血流RI,增加肾脏叶间动脉血流,改善肾脏灌注,对肾脏功能有保护作用。

运动疗法对膝骨性关节炎患者关节滑液中高敏C反应蛋白的影响

目的:观察运动疗法对膝骨性关节炎(KOA)患者关节滑液中细胞因子高敏C反应蛋白(hs-CRP)的影响,探讨其治疗骨性关节炎的作用机制。方法:80例KOA患者随机分为治疗组和对照组,各组40例,对照组患者口服双氯芬酸钠治疗,治疗组在对照组治疗基础上同时进行运动疗法治疗,治疗4周。分别于治疗前后检测两组患者膝关节滑液中hs-CRP和MMP-9的含量。结果:治疗后,两组患者膝关节滑液中hs-CRP和MMP-9水平均较治疗前显著下降(P<0.01),治疗组患者膝关节滑液中hs-CRP和MMP-3含量均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:运动疗法能够减少KOA患者关节滑液中hs-CRP和MMP-9的产生,抑制炎症因子对关节软骨的破坏。

巨噬细胞移动抑制因子和基质金属蛋白酶9与2型糖尿病合并冠心病的关系研究

目的探讨血清巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）与2型糖尿病患者合并冠心病的关系。方法132例2型糖尿病患者分为合并冠心病组（92例，行冠状动脉造影），根据冠状动脉病变范围再分为单、双、三支病变组，分别为16、34、42例。2型糖尿病无冠心病组（40例），前者选取40例健康体验者作为正常对照组。血浆MIF、MMP-9浓度通过酶联免疫吸附（ELISA）法测定。结果2型糖尿病合并冠心病组MIF、MMP-9水平高于2型糖尿病无冠心病组[（22±7）μg/L比（18±6）μg/L，（20±6）μg/L比（16±8）μg/L]，且2组MIF、MMP-9水平均高于正常对照组[（5±3）、（6±4）μg/L]，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；随冠状动脉病变范围的增加，MIF、MMP-9浓度逐渐升高，并且随Gensini积分的增高而增高。结论MIF、MMP-9增高与2型糖尿病合并冠心病发生、发展明显相关。

FoxO3a对胶质瘤细胞株T98G和A172侵袭能力的影响

目的探讨叉形框蛋白3a(Fox O3a)对胶质瘤细胞系T98G、A172细胞侵袭能力的影响。方法将Fox O3a的RNAi干扰序列嵌入慢病毒载体p HY-LV-KD1.1产生重组病毒载体p HY-Fox O3a-KD;Fox O3a DNA序列克隆入慢病毒表达载体PHY-LV-OE1.6。通过Trans-Lentiviral Packaging System和Vira Power Lentiviral Expression System(Invitrogen)对重组载体进行病毒包装。重组后的慢病毒感染T98G、A172细胞,检测相应细胞株侵袭能力的改变,并通过Western blot检测胶质瘤侵袭相关的靶基因表达水平的变化。结果在T98G细胞中敲低Fox O3a后,肿瘤细胞侵袭能力下降并且侵袭相关基因MMP9表达水平下调;相反A172细胞中过表达Fox O3a肿瘤细胞侵袭能力增强。结论 Fox O3a可以影响T98G、A172细胞的侵袭能力。

冠状动脉慢血流患者血清炎性标志物的检测水平及意义

目的:探讨重要炎症因子高敏C反应蛋白(hs-CRP)、白介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在冠状动脉慢血流(CSF)发生发展中的作用及临床意义。方法:选择经冠状动脉造影(CAG)检查诊断为CSF患者20例,CAG显示无管腔狭窄及无慢血流的正常血流速度(NCF)者24例为对照组,使用校正的TIMI血流分级(CTFC)方法评价冠状动脉血流速度,并分别测定2组的血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)、白介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:2组在年龄、性别、高血压史、早发冠心病家族史、吸烟及血脂等方面均无明显差别。CSF组血清MMP-9、TNF-α水平较NCF组明显增高(P<0.05),但2组的hs-CRP、IL-6水平差异无统计学意义。结论:血清MMP-9、TNF-α2种炎症因子可能介导或参与了CSF形成的发生、发展过程,对血清MMP-9、TNF-α水平的检测及对CSF的诊断有一定的判断作用,值得临床进一步地探讨。