LncRNA MALAT1通过靶向miR-146a调节PI3K/Akt信号通路影响胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肺腺癌转移相关转录子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)通过调节miR-146a对胃癌(gastric cancer, GC)细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法 收集GC组织和配对正常胃上皮组织,将GC细胞MNK-45分为空白对照(blank control, BC)组(未转染)、MALAT1 siRNA-NC组(转染MALAT1 siRNA-NC)、MALAT1 siRNA组(转染MALAT1 siRNA)、miR-146a mimics-NC组(转染miR-146a mimics-NC)、miR-146a mimics组(转染miR-146a mimics)、MALAT1 siRNA+miR-146a inhibitor-NC组(共转染MALAT1 siRNA+miR-146a inhibitor-NC)、MALAT1 siRNA+miR-146a inhibitor组(共转染MALAT1 siRNA+miR-146a inhibitor)。定量荧光PCR(qRT-PCR)检测胃组织或细胞中MALAT1、miR-146a表达量;CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;RNA pull down实验、双荧光素酶报告实验分析MALAT1和miR-146a的结合情况;Western blot检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路蛋白及c-Myc、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)蛋白表达量。结果 转染MALAT1 siRNA可明显降低MNK-45细胞的MALAT1表达量,敲低MALAT1或过表达miR-146a可降低细胞活力、克隆能力、迁移和侵袭,增加miR-146a表达,降低PI3Kp85α、PI3Kp85β、c-Myc、MMP9蛋白表达量及p-Akt/Akt水平;MALAT1可结合并靶向下调miR-146a表达;低表达miR-146a可逆转敲低MALAT1对MNK-45细胞增殖、迁移和侵袭的抑制效应。结论 MALAT1可能作为ceRNA吸附并降解miR-146a,敲低MALAT1可上调miR-146a表达,并通过PI3K/Akt通路抑制GC细胞增殖、迁移和侵袭。

血清Irisin、PTX3及MALAT1水平与糖尿病视网膜病变病情程度的关系及联合诊断价值

目的研究血清鸢尾素(Irisin)、长正五聚蛋白3(PTX3)、人肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)水平与糖尿病视网膜病变(DR)病情程度的关系及联合诊断的价值。方法选取2022年4月至2023年4月沧州市中心医院2型糖尿病(T2DM)合并DR患者85例设为DR组,85例单纯T2DM患者设为非DR组,同时期85例健康志愿者设为对照组。将DR组患者以是否处于增生型DR为标准分为增生型组(38例)与非增生型组(47例)。收集DR组患者病例临床资料,包括性别、舒张压、年龄、收缩压、病程、空腹血糖(FPG)、体质量指数、糖化血红蛋白(HbA1c)、吸烟史、甘油三酯(TG)、饮酒史、收缩期峰值流速、舒张末期峰值流速、阻力指数、空腹胰岛素(FINS)、糖尿病家族史、总胆固醇(TC)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。酶联免疫吸附法检测各组患者血清Irisin、PTX3水平,实时荧光定量PCR法检测血清MALAT1水平。采用Pearson相关性分析检测血清Irisin、PTX3及MALAT1水平与DR患者病情程度的相关性。Logistic回归分析DR患者病情程度的影响因素。受者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清Irisin、PTX3及MALAT1单独诊断DR的价值。ROC曲线、净重新分类指数(NRI)及综合判别改善指数(IDI)分析含与不含血清Irisin、PTX3及MALAT1方案诊断DR的价值。结果3组患者血清Irisin、PTX3、MALAT1水平比较,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。增生型组患者病程长于非增生型组,收缩期峰值流速、舒张末期峰值流速、血清Irisin水平均低于非增生型组,阻力指数、FPG、HbA1c、TG、FINS、HOMA-IR及血清PTX3、MALAT1水平均高于非增生型组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。DR患者血清Irisin水平与DR病情程度呈负相关(r=-0.512,P<0.001),PTX3、MALAT1水平与DR病情程度均呈正相关(r=0.497、0.573,均为P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,病程、FPG、HbA1c、TG、FINS、HOMA-IR、收缩期峰值流速、舒张末期峰值流速、阻力指数及血清Irisin、PTX3、MALAT1水平均为DR病情程度加重的影响因素(均为P<0.05)。血清Irisin、PTX3、MALAT1诊断DR的曲线下面积(AUC)分别为0.743、0.811、0.773。与常规诊断方案比较,含有血清Irisin、PTX3、MALAT1水平的新诊断方案的AUC明显增大(Z=2.708,P=0.007),NRI、IDI分别为0.039(95%CI:0.022~0.069)、0.026(95%CI:0.014~0.047)(均为P<0.05)。结论DR患者血清Irisin水平降低,PTX3、MALAT1水平升高,且与患者DR病情程度密切相关,含有血清Irisin、PTX3、MALAT1指标的诊断方案具有较高的诊断价值。

血清LncRNA MALAT1和microRNA-124水平检测对非小细胞肺癌患者预后的评估价值

目的:探究长链非编码RNA-转移相关肺腺癌转录本1(LncRNA MALAT1)和微小RNA-124(microRNA-124)对非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的预测效能。方法:选取2020年06月至2022年06月我院收治的124例NSCLC患者作为研究对象,入院后,收集患者的病历资料,检测入院时外周血LncRNA MALAT1、microRNA-124的相对表达量。电话随访12个月记录患者的死亡率,分为生存组和死亡组,分析NSCLC患者预后的影响因素,评估血清LncRNA MALAT1、microRNA-124对NSCLC患者预后的预测效能。结果:死亡组患者的IV期占比及LncRNA MALAT1相对表达量高于生存组,microRNA-124相对表达量低于生存组。Logistic遂步分析显示,病理分期IV期(OR=12.342,95%CI:4.295~36.765)、LncRNA MALAT1(OR=5.371,95%CI:1.836~15.714)及microRNA-124(OR=0.257,95%CI:0.089~0.752)是NSCLC患者死亡的影响因素(P<0.05)。LncRNA MALAT1与microRNA-124呈负相关(P<0.05)。受试者工作特性曲线(ROC)分析显示,LncRNA MALAT1及microRNA-124单一及联合预测NSCLC患者预后的灵敏度分别为0.741(95%CI:0.601~0.846)、0.759(95%CI:0.621~0.861)、0.815(95%CI:0.682~0.903),特异度分别为0.825(95%CI:0.705~0.906)、0.762(95%CI:0.635~0.856)、0.841(95%CI:0.723~0.917),曲线下面积(AUC)分别为0.781、0.760、0.839。联合预测效能更高(P<0.05)。结论:LncRNA MALAT1及microRNA-124可用于预测NSCLC患者的预后,且预测效能良好。

过敏性鼻炎病人外周血MALAT1、miR-17-5p的表达及临床意义

目的:探讨过敏性鼻炎病人外周血肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)、微小RNA17-5p(miR-17-5p)的表达水平及其临床意义。方法:选取过敏性鼻炎病人125例作为观察组,择同期体检健康者62名作为对照组。以荧光定量聚合酶链反应检测受试者外周血MALAT1、miR-17-5p表达水平,绘制ROC曲线评估外周血MALAT1、miR-17-5p对过敏性鼻炎发生的诊断价值,Spearman相关性分析外周血MALAT1、miR-17-5p与病人疾病严重程度的相关性,再以多因素logistic回归分析影响过敏性鼻炎严重程度的独立危险因素。结果:观察组外周血MALAT1 mRNA水平低于对照组,miR-17-5p水平高于对照组(P<0.05);ROC曲线分析显示,MALAT1 mRNA曲线下面积为0.812,miR-17-5p曲线下面积为0.845,MALAT1 mRNA灵敏性优于miR-17-5p,特异性低于miR-17-5p,两者联合检测诊断价值更高;中重度过敏性鼻炎病人血清MALAT1 mRNA水平明显低于轻度病人(P<0.05),miR-17-5p水平明显高于轻度病人(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,外周血MALAT1 mRNA水平与过敏性鼻炎疾病严重程度呈负相关关系(r=-0.779,P<0.01),miR-17-5p水平与疾病严重程度呈正相关关系(r=0.774,P<0.01);多因素logistic回归分析结果显示,低水平MALAT1 mRNA、高水平miR-17-5p为影响过敏性鼻炎严重程度的独立危险因素(P<0.05)。结论:过敏性鼻炎病人外周血中MALAT1 mRNA呈低表达,miR-17-5p呈高表达,与疾病严重程度关系密切,为影响过敏性鼻炎严重程度的独立危险因素,可能作为诊断过敏性鼻炎及评估疾病严重程度的潜在指标。

lncRNA MALAT1/HMGB1在缺血后处理减轻缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肺腺癌转录子1(MALAT1)以及下游调控蛋白高迁移率族蛋白B1(High-mobility group protein box-1,HMGB1)在缺血后处理降低大鼠心肌缺血-再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,IRI)中的作用。方法将24只大鼠饲养7天后,随机分成3组:假手术(Sham)组、缺血再灌注(ischemia/reperfusion,IR)组、缺血后处理(ischemic post-conditioning,IPO)组。模型构建完毕24 h进行检测大鼠血清中心肌肌钙蛋白I(cTnI)和白介素6(IL-6)表达水平,取材检测大鼠心肌梗死面积,检测大鼠心肌组织中MALAT1转录表达水平的差异,HMGB1、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)蛋白含量差异。结果与Sham组比较,IR、IPO组血清中cTnI、IL-6水平明显升高,心肌梗死面积明显增加,心肌组织中MALAT1表达水平显著上调,HMGB1、TLR4水平明显升高(P<0.05)。与IR组比较,IPO组cTnI浓度显著降低,心肌梗死面积显著减小,心肌组织中lncRNA-MALAT1相对表达量降低,HMGB1、TLR4蛋白含量降低(P<0.05)。结论及时的缺血后处理可有效减缓大鼠心肌缺血-再灌注的损伤程度,其相关机制可能与抑制MALAT1调节控制HMGB1、TLR4表达水平之间有一定的关联。

下肢动脉硬化闭塞症患者支架植入术后血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST与1年内支架内再狭窄相关性研究

目的探讨下肢动脉硬化闭塞症(LEASO)患者支架植入术后血清长链非编码RNA(LncRNA)-肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)、LncRNA-X失活特异性转录本(XIST)与1年内支架内再狭窄(ISR)的相关性。方法回顾性选取2018年1月—2022年12月在内蒙古医科大学附属肿瘤医院血管外科行支架植入术的LEASO患者147例作为研究对象,根据1年内是否发生ISR分为ISR组41例和无ISR组106例,采用实时荧光定量PCR检测术后血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平;通过Pearson法分析LEASO患者血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平与管腔直径缩小率的相关性;多因素Logistic回归分析LEASO患者支架植入术后1年内ISR的影响因素;ROC曲线分析血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平对LEASO患者支架植入术后1年内ISR的预测价值。结果随访1年,147例LEASO患者支架植入术后ISR发生率为27.89%(41/147);与无ISR组比较,ISR组血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平升高(t/P=5.949/<0.001、5.927/<0.001);Pearson相关性分析显示,LEASO患者血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平与管腔直径缩小率呈正相关(r/P=0.596/<0.001、0.588/<0.001);多因素Logistic回归显示,糖尿病和C反应蛋白、LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST升高为LEASO患者支架植入术后1年内ISR的独立危险因素[OR(95%CI)=3.185(1.155~8.781)、1.187(1.003~1.404)、1.433(1.199~1.713)、1.575(1.242~1.998)];ROC曲线显示,血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平联合预测LEASO患者支架植入术后1年内ISR的曲线下面积为0.906,大于血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平单独预测的0.799、0.786(Z/P=3.176/0.002、3.513/<0.001)。结论LEASO患者支架植入术后血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平升高是1年内ISR的独立危险因素,血清LncRNA-MALAT1、LncRNA-XIST水平联合对LEASO患者支架植入术后1年内ISR有较高的预测价值。

血清内脂素、LncRNA MALAT1、HbA1c水平与妊娠期糖尿病患者不良妊娠结局的相关性

目的:分析血清内脂素、长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(LncRNA MALAT1)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平与妊娠期糖尿病(GDM)患者不良妊娠结局的相关性。方法:选取2021年4月至2023年4月该院收治的103例GDM患者为研究对象,纳入观察组,另选取同期于本院进行产检的103名健康孕妇为对照组,检测两组血清内脂素、LncRNA MALAT1、HbA1c水平,并随访至GDM患者分娩。比较两组、不同妊娠结局GDM患者血清内脂素、LncRNA MALAT1、HbA1c水平,并采用Pearson相关性分析血清内脂素、LncRNA MALAT1、HbA1c水平与GDM患者不良妊娠结局的相关性。结果:观察组血清内脂素、LncRNA MALAT1、HbA1c水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);不良妊娠结局GDM患者血清内脂素、LncRNA MALAT1、HbA1c水平均高于正常妊娠结局GDM患者,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,血清内脂素、LncRNA MALAT1、HbA1c水平与GDM患者不良妊娠结局均呈正相关(r>0,P<0.05)。结论:血清内脂素、LncRNA MALAT1、HbA1c水平与GDM患者不良妊娠结局均呈正相关。

长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1在急性冠状动脉综合征患者外周血中的表达及临床意义

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)在急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血中的表达及临床意义。方法:连续选取2015年1月至2018年12月就诊于新疆医科大学第一附属医院心脏中心并确诊为ACS的患者159例为ACS组,另选取本院体检中心同时期进行健康体检、冠状动脉增强CT检查证实无冠心病的患者148例为对照组。提取两组患者的外周血单个核细胞,采用实时荧光定量多聚酶链式反应(qRT-PCR)法检测MALAT1的表达水平,并分析MALAT1表达水平与ACS的相关性及其对ACS的诊断预后预测价值。结果:与对照组相比,ACS组患者外周血MALAT1表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,外周血MALAT1表达水平与ACS独立相关(OR=1.193,95%CI:1.037~1.372,P=0.014)。ROC曲线分析显示,外周血MALAT1表达水平对于ACS的诊断具有一定的价值(AUC=0.664,95%CI:0.600~0.720)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,平均随访(558±223)d期间,外周血MALAT1高表达水平(≥0.816)ACS患者的MACE累积发生率高于外周血MALAT1低表达水平(<0.816)ACS患者(39.05%vs.30.61%,P<0.05)。结论:ACS患者外周血中MALAT1的表达水平显著升高,外周血MALAT1表达水平对于ACS的诊断及预后预测具有潜在的临床价值。

槲皮素通过下调MALAT1抑制膝骨关节炎小鼠软骨损伤及软骨细胞凋亡的相关机制

目的探究槲皮素(quercetin,QUE)通过下调人肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)抑制膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)小鼠软骨损伤及软骨细胞凋亡的相关机制。方法将雄性C57BL/6小鼠分为假手术组、OA组、OA+QUE组,每组各10只。采用内侧半月板失稳术(destabilization of medial meniscus,DMM)诱导膝OA模型,术后5周,小鼠膝关节腔内注射100μL 0.9%(质量分数)氯化钠注射液或QUE(8μmol/L),每周2次,共8周。术后13周,处死小鼠并采集膝关节,分别进行病理观察、Western blot或反转录定量聚合酶链反应检测。从健康雄性C57BL/6小鼠的膝关节软骨中分离软骨细胞,进行原代培养,分为空白组、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)组、QUE组、IL-1β+QUE组。IL-1β组用小鼠重组IL-1β处理24 h;QUE组用2~256μmol/L QUE作用48 h;IL-1β+QUE组先用IL-1β处理24 h,然后再用4、8、16μmol/L QUE作用;空白组不做任何特殊处理。噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)试剂检测细胞活力。结果与假手术组相比,OA组小鼠OARSI评分(4.50±1.08分vs.0.40±0.52分)、MALAT1 mRNA(1.47±0.06 vs.1.00±0.04)和核因子κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)mRNA(1.71±0.08 vs.1.00±0.03)以及白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)、caspase-3蛋白表达水平显著升高,同时miR-9表达(0.78±0.03 vs.1.00±0.03)降低(P<0.05);相反地,OA+QUE组小鼠OARSI评分改善至2.40±1.26分,同时MALAT1、miR-9、NF-κB、IL-6、MMP-13和caspase-3表达较OA组被逆转(P<0.05)。miR-9存在与MALAT1和NF-κB结合的靶向互补序列,而且QUE可抑制MALAT1启动子的转录活性和相对mRNA表达水平。对于细胞实验,与空白组相比,IL-1β组miR-9表达降低(0.45±0.04 vs.1.00±0.03),NF-κB表达(1.52±0.08 vs.0.99±0.02)升高(P<0.05);而IL-1β+QUE组miR-9和NF-κB表达水平则以剂量依赖性方式较IL-1β组被反转(P<0.05)。结论通过QUE直接靶向MALAT1/miR-9/NF-κB轴可能是治疗KOA的一种新的治疗策略。

归脾汤对沉默LncRNA MALAT1大鼠下丘脑胰岛素信号通路的影响

目的 探讨沉默肺腺癌转移相关转录本(MALAT)1配合应用归脾汤对胰岛素信号通路中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB)和糖原合成酶激酶(GSK)-3β表达的影响及对胰岛素抵抗的改善情况。方法 长期给予高脂饲料,后期注射链脲佐菌素(STZ)建立并筛选出糖尿病脑病(DE)大鼠模型;除对照组外,将筛选出的DE模型大鼠随机分为模型组、沉默LncRNA MALAT1配合归脾汤治疗(M归脾汤)组、归脾汤组、西药组。以氧化酶法测其血糖水平,以酶联免疫吸附试验(ELISA)测其胰岛素水平,计算胰岛素敏感指数,以实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法测其下丘脑中GSK-3β mRNA的相对表达;应用Western印迹测下丘脑中PI3K、PKB和GSK-3β蛋白的相对表达。结果 与模型组比较,归脾汤组和西药组胰岛素水平显著升高,M归脾汤组和西药组胰岛素敏感指数(ISI)显著升高(P<0.05),归脾汤组中GSK-3β mRNA和蛋白的相对表达显著降低(P<0.05),归脾汤组中PI3K蛋白的相对表达显著提高(P<0.05)。与归脾汤组比较,M归脾汤组GSK-3β mRNA的相对表达、血糖水平和ISI差异有统计学意义(P<0.05),而且PKB蛋白的相对表达明显高于模型组(P<0.05)。结论 归脾汤能够缓解DE大鼠模型的胰岛素抵抗情况,此作用可能通过调节胰岛素信号通路中PI3K、PKB和GSK-3β蛋白的相对表达来实现,并在沉默MALAT1后使归脾汤的作用效果更加明显。

血清lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1与上皮性卵巢癌患者临床病理特征、血清细胞凋亡分子和预后不良的关系研究

目的 探讨血清长链非编码核糖核酸(lncRNA)中的赖氨酰氧化酶样1(LOXL1-AS1)、肺腺癌转移性相关转录本1(MALAT1)与上皮性卵巢癌(EOC)患者临床病理特征、血清细胞凋亡分子和预后不良的关系。方法 选取2017年1月至2020年1月该院收治的EOC患者68例作为EOC组,另选取70例卵巢良性肿瘤患者作为良性组,选取同期体检健康者60例作为对照组;对比3组患者血清中lncRNA LOXL1-AS1与lncRNA MALAT1表达水平,以lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1表达水平中位值(1.90、1.38)分别将EOC患者分为lncRNA LOXL1-AS1低表达组(34例)和lncRNA LOXL1-AS1高表达组(34例),以及lncRNA MALAT1低表达组(33例)和lncRNA MALAT1高表达组(35例),对比EOC患者各表达组的临床病理特征、血清细胞凋亡分子[B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、生存素(Survivin)、B细胞CLI/淋巴瘤2关联凋亡基因1(Bag-1)]水平,并采用Pearson相关性分析法探讨其相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析EOC患者各表达组的预后差异,多因素Cox分析EOC患者的预后不良的影响因素。结果 3组血清lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1、Bcl-2、Survivin、Bag-1水平从高到低依次为EOC组、良性组、对照组(P<0.05);血清Bax水平从低到高依次为EOC组、良性组、对照组(P<0.05)。不同年龄和病理类型的EOC患者lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05),不同国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移、组织分期的EOC患者lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1高表达组Bcl-2、Survivin、Bag-1水平均高于lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1低表达组,Bax水平低于lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1低表达组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清lncRNA LOXL1-AS1与lncRNA MALAT1表达水平均与Bcl-2、Survivin、Bag-1均呈正相关(P<0.05),与Bax呈负相关(P<0.05)。随访2年后,lncRNA LOXL1-AS1低表达组累积生存率为85.29%,高于lncRNA LOXL1-AS1高表达组的55.88%,lncRNA MALAT1低表达组累积生存率为81.82%,高于lncRNA MALAT1高表达组的60.00%(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,淋巴结转移、lncRNA LOXL1-AS1与lncRNA MALAT1高表达是EOC患者预后不良的独立影响因素(P<0.05)。结论 EOC患者血清lncRNA LOXL1-AS1与lncRNA MALAT1水平呈高表达,且与淋巴结转移、FIGO分期、组织分期、凋亡因子表达及预后相关,其表达水平升高提示患者有EOC的可能,且其预后较差,检测血清lncRNA LOXL1-AS1与lncRNA MALAT1水平可能对EOC的诊断及治疗具有重要意义。

LncRNA MALAT-1靶向microRNA-370-3p调节Akt通路对肺癌细胞生物学行为影响的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子-1(LncRNA MALAT-1)是否能靶向调节microRNA-370-3p(miR-370-3p)的表达,以及对Akt通路和肺癌细胞生物学行为的影响。方法 选用非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞体外培养,分别抑制LncRNA MALAT-1(转染si-MALAT-1)或过表达miR-370-3p(转染miR-370-3p mimic),抑制LncRNA MALAT-1和干扰miR-370-3p(同时转染si-MALAT-1和antimiR-370-3p),观察A549细胞的生物学行为和Akt通路蛋白的表达。qRT-PCR检测LncRNA MALAT-1、miR-370-3p mRNA的表达;MMT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移与侵袭;Western blotting检测Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K蛋白相对表达量。构建MALAT-1野生型(MALAT-1WT_1uc)与突变型(MALAT-1MUT_1uc)荧光素酶报告基因质粒并分别与miR-370-3p、miR-NC转染至A549细胞,观察荧光结合强度并检测miR-370-3p的表达。结果 抑制LncRNA MALAT-1或过表达miR-370-3p能抑制A549细胞迁移、侵袭,促进细胞凋亡,减少A549细胞活性(P <0.05),并下调p-Akt和p-PI3K蛋白的表达(P <0.05)。与单纯抑制LncRNA MALAT-1比较,抑制LncRNA MALAT-1并干扰miR-370-3p能促进A549细胞迁移、侵袭,抑制细胞凋亡,增加A549细胞活性(P <0.05),并上调p-Akt和p-PI3K蛋白的表达(P <0.05)。TargetScan靶基因预测发现LncRNA MALAT-1与miR-370-3p存在结合位点,荧光素酶报告基因实验验证发现,与MALAT-1WT_1uc+Control组和MALAT-1WT_1uc+miR NC组比较,MALAT-1WT_1uc+miR-370-3p组相对荧光强度下降(P <0.05),MALAT-1MUT_1uc+miR-370-3p荧光强度无变化(P>0.05),进一步qRT-PCR结果发现,与Control组比较,si-MALAT-1组的miR-370-3p mRNA相对表达量升高(P <0.05),与si-MALAT-1组比较,si-MALAT-1+anti-miR-370-3p组的miR-370-3pmRNA相对表达量降低(P <0.05)。结论LncRNA MALAT-1可以靶向负调控miR-370-3p。抑制LncRNA MALAT-1可以上调miR-370-3p的表达,抑制A549细胞的增殖、迁移及侵袭,促进A549细胞的凋亡,并下调Akt通路蛋白的磷酸化。

白癜风患者血清LncRNA MALAT1及miR-211-5p表达水平与临床特征的相关性分析

目的探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(long non-coding RNA metastasis associated transcription factor 1 in lung adenocarcinoma,Lnc RNA MALAT1),微小核糖核酸(micro RNA,miR)-211-5p表达水平变化与临床特征的相关性。方法选取2022年1~6月河北省沧州中西医结合医院皮肤科收治的白癜风患者80例为研究对象(白癜风组),同期于该院进行体检的健康者80例为对照组。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)法检测受试者血清中Lnc RNA MALAT1,mi R-211-5p表达水平;两组间比较采用独立样本t检验;多组间(不同临床分期、临床分型、皮损面积及病程)比较进行单因素方差分析,组间多重比较采用SNK-q检验;白癜风患者皮损面积及病程与血清中Lnc RNA MALAT1和mi R-211-5p表达水平的相关性采用Pearson法分析。结果白癜风组患者血清Lnc RNA MALAT1(1.90±0.25)表达水平高于对照组(1.02±0.13),血清mi R-211-5p(0.53±0.07)表达水平低于对照组(1.05±0.10),差异均有统计学意义(t=27.933,38.103,均P=0.000)。进展期及快速进展期血清Lnc RNA MALAT1水平均高于稳定期(2.29±0.42,2.47±0.31 vs 1.54±0.12),差异有统计学意义(t=15.000,16.766,均P<0.001)。血清mi R-211-5p水平均低于稳定期(0.28±0.09,0.22±0.06 vs 0.74±0.11),差异有统计学意义(t=24.748,25.217,均P<0.001)。寻常型血清Lnc RNA MALAT1(2.06±0.26)表达水平高于节段型(1.50±0.16),寻常型血清mi R-211-5p(0.39±0.11)表达水平低于节段型(0.86±0.21),差异有统计学意义(t=9.768,13.127,均P<0.001)。泛发型血清Lnc RNA MALAT1相对表达水平高于肢端型、局限型及散发型(2.59±0.38 vs 2.02±0.19,1.98±0.44,1.89±0.30),差异有统计学意义(t=5.559,6.038,7.375,均P<0.001)。血清mi R-211-5p水平低于肢端型、局限型及散发型(0.17±0.04 vs 0.39±0.09,0.43±0.11,0.45±0.10),差异有统计学意义(t=7.651,9.177,10.520,均P<0.001)。皮损面积<1%,1%~50%和>50%的白癜风患者血清Lnc RNA MALAT1表达水平依次升高(1.69±0.19,1.92±0.21,2.56±0.26),差异有统计学意义(t=6.424,17.408,12.312,均P<0.001);皮损面积<1%,1%~50%和>50%的白癜风患者血清mi R-211-5p表达水平依次升高(0.70±0.09,0.41±0.10,0.21±0.03),差异有统计学意义(t=18.972,22.964,9.012,均P<0.001)。Pearson相关性分析显示,白癜风患者血清Lnc RNA MALAT1与皮损面积呈正相关(r=0.576,P<0.001),血清mi R-211-5p与皮损面积呈负相关(r=-0.475,P<0.001)。病程<1年、1~3年和>3年的白癜风患者血清Lnc RNA MALAT1表达水平依次降低(1.65±0.18,1.88±0.22,2.48±0.23),差异有统计学意义(t=5.984,20.581,13.291,均P<0.001);病程<1年、1~3年、>3年的白癜风患者血清mi R-211-5p表达水平依次降低(0.68±0.11,0.53±0.10,0.21±0.04),差异有统计学意义(t=8.352,24.942,15.170,均P<0.001)。Pearson相关性分析表明,血清Lnc RNA MALAT1与病程呈正相关(r=0.344,P<0.001),血清mi R-211-5p与病程呈负相关(r=-0.433,P<0.001)。结论白癜风患者血清中Lnc RNA MALAT1表达上调,mi R-211-5p表达下调,且与皮损面积及病程等临床特征显著相关。

肺癌骨转移患者血清lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1表达水平及临床价值

目的探究肺癌骨转移患者血清非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(lncRNA MALAT1)和非编码RNAα-2-巨球蛋白反义RNA 1(lncRNA A2M-AS1)表达水平及临床价值。方法选取2021年9月至2022年9月在哈励逊国际和平医院经过病理学检查确诊为肺癌的164例患者为肺癌组,其中经骨骼ECT检查发现84例者骨转移为骨转移组,80例无骨转移者为无骨转移组。同期选取80例肺部良性疾病患者为对照组。采用qRT-PCR法检测血清lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1表达水平;Pearson法分析lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1表达的相关性;ROC曲线分析lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1对肺癌骨转移的诊断价值。结果与对照组相比,肺癌组血清中lncRNA MALAT1表达水平显著升高(P<0.001),lncRNA A2M-AS1表达水平显著降低(P<0.001)。与无骨转移组相比,骨转移组血清中lncRNA MALAT1表达水平显著升高(P<0.001),lncRNA A2M-AS1表达水平显著降低(P<0.001)。相关性分析显示,肺癌骨转移患者血清中lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1表达水平呈负相关(r=-0.369,P<0.001)。lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1联合诊断肺癌骨转移的AUC高于两者单独诊断(P<0.05)。结论肺癌骨转移患者血清中lncRNA MALAT1表达水平显著升高,lncRNA A2M-AS1表达水平显著降低,两者联合对肺癌骨转移具有一定的诊断价值。

lncRNA-MALAT1表达与TSCC临床病理特征及预后的关系研究

目的探讨长链非编码核糖核酸-转移相关肺腺癌转录本1(lncRNA-MALAT1)在舌鳞状细胞癌(TSCC)组织中的表达特征,分析其与临床病理参数以及预后的关系。方法将2018年1月至2020年1月该院收治的80例TSCC患者纳入研究,检测癌组织以及癌旁组织中lncRNA-MALAT1的表达情况,收集患者临床和随访资料。分析lncRNA-MALAT1表达情况与TSCC临床病理特征以及预后的关系。结果TSCC组织中的lncRNA-MALAT1表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。低中度分化、TNMⅢ期、淋巴结转移、浸润深度≥2/3的TSCC患者癌组织中lncRNA-MALAT1表达水平分别高于高度分化、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移、浸润深度<2/3的TSCC患者(P<0.05)。随访41(30~54)月,随访期间死亡48例。lncRNA-MALAT1高表达TSCC患者总生存率和无进展生存率均低于lncRNA-MALAT1低表达TSCC患者(P<0.05)。多因素COX风险比例回归结果显示TNMⅢ期、淋巴结转移、lncRNA-MALAT1高表达是TSCC患者死亡的危险因素(P<0.05)。结论TSCC组织lncRNA-MALAT1表达显著上调,且与分化程度、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度和低生存率有关。

长链非编码RNA MALAT1对氧糖剥夺/复氧诱导的人脑微血管内皮细胞血管生成的影响

目的:探讨长链非编码RNA (lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1 (MALAT1)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)血管生成的影响,并阐明其潜在的分子机制。方法:采用生物信息学方法预测MALAT1、不均一核糖核蛋白K (hnRNPK)和血管内皮生长因子A (VEGFA)的结合位点。HBMECs进行OGD/R处理构建脑缺血细胞模型,分为对照组、OGD/R模型组、OGD/R+siNC组、OGD/R+沉默MALAT1 (OGD/R+siMALAT1)组和OGD/R+siMALAT1+过表达VEGFA (OGD/R+siMALAT1+VEGFA)组。采用小干扰RNA (siRNA)沉默MALAT1的表达,采用pcDNA载体构建VEGFA过表达载体,将构建的siMALAT1和pcDNA VEGFA载体分别或同时转染至HBMECs中。利用管形成实验检测各组细胞血管形成能力,Western blotting法检测各组细胞中VEGFA蛋白表达水平。6周龄健康雄性C57BL/6 J小鼠20只,随机分为假手术组、大脑中动脉闭塞(MCAO)模型组、MCAO+NC空载体(MCAO+NC)组和MCAO+过表达MALAT1 (MCAO+MATAL1)组,每组5只,除假手术组外,其余各组小鼠利用线栓法构建MCAO小鼠模型,MCAO+NC组和MCAO+MATAL1组小鼠右脑室内分别注射NC空载体和MALAT1过表达载体。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组小鼠脑梗死面积百分率,Western blotting法检测各组小鼠脑组织中VEGFA蛋白表达水平。结果:生物信息学预测,MALAT1与hnRNPK及hnRNPK与VEGFA均存在结合位点。管形成实验和Western blotting法检测,与对照组比较,OGD/R模型组细胞成管数明显增加(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与OGD/R模型组比较,OGD/R+siMALAT1组细胞成管数明显减少(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与OGD/R+siMALAT1组比较,OGD/R+siMALAT1+VEGFA组细胞成管数明显增加(P<0.01),细胞中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。在MCAO模型小鼠实验中,TTC染色和Western blotting法检测,与假手术组比较,MCAO模型组小鼠脑梗死面积百分率和脑组织中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与MCAO模型组比较,MCAO+MALAT1组小鼠脑梗死面积百分率明显降低(P<0.01),脑组织中VEGFA蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:LncRNA MALAT1可增强靶基因VEGFA的稳定性并上调其表达,进而促进缺血性脑卒中小鼠的脑血管生成,为缺血性脑卒中的治疗提供了新的思路。

四妙勇安汤对糖尿病足部溃疡患者血清lncRNA MALAT1表达量及足背血流动力学的影响

目的:分析四妙勇安汤对糖尿病足部溃疡患者血清长链非编码核糖核酸(lncRNA)肺癌转移相关转录本1(MALAT1)表达量及足背血流动力学的影响。方法:选取150例糖尿病足部溃疡患者进行回顾性研究,根据治疗方法将其分为两组,每组75例,对照组给予常规西药治疗,观察组在对照组基础上给予四妙勇安汤治疗,比较两组临床疗效、症状体征评分、血清lncRNA MALAT1表达量、血清炎性因子、足背血流动力学指标、肉芽组织形成时间、创面愈合时间。结果:观察组临床总有效率高于对照组(P<0.05)。观察组治疗后色泽、渗出、疼痛、面积积分低于对照组(均P<0.05)。观察组治疗后血清lncRNA MALAT1表达量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平低于对照组(均P<0.05)。观察组治疗后足背动脉血管内径高于对照组,足背动脉血流速度低于对照组(均P<0.05)。观察组肉芽组织形成时间、创面愈合时间短于对照组(均P<0.05)。结论:四妙勇安汤可有效缓解糖尿病足部溃疡患者坏疽、疼痛等症状,降低血清lncRNA MALAT1表达量,减轻炎症反应,改善足部血液循环,促进肉芽组织生长,缩短创面愈合时间。

lncRNA MALAT1对肝星状细胞活化的调节作用及其机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)在肝纤维化进展过程中对肝星状细胞(HSC)活化的调节作用,并阐明其作用机制。方法:收集25例健康志愿者(健康组,n=25)和25例肝纤维化患者[轻度肝纤维化组(n=12)和重度肝纤维化组(n=13)]血清样本。小鼠HSC分为对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)组、TGF-β1+si-NC组、TGF-β1+si-MALAT1组、TGF-β1+si-MALAT1+anti-miR-150-5p组和TGF-β1+si-MALAT1+CXCL14组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组研究对象血清和各组HSC中MALAT1 mRNA、miR-150-5p和CXC趋化因子配体14(CXCL14)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组研究对象血清中CXCL14蛋白表达水平和各组HSC中CXCL14、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白α1(COL1A1)蛋白表达水平,CCK-8法检测各组HSC增殖活性,免疫荧光法检测各组HSC中α-SMA和COL1A1蛋白表达量,双荧光素酶报告系统检测miR-150-5p与MALAT1和CXCL143’-UTR基因的靶向关系。结果:RT-qPCR法检测,与健康组比较,轻度和重度肝纤维化组患者血清中MALAT1 mRNA和CXCL14 mRNA表达水平升高(P<0.05),miR-150-5p表达水平降低(P<0.05);与轻度肝纤维化组比较,重度肝纤维化组患者血清中MALAT1 mRNA和CXCL14 mRNA表达水平升高(P<0.05),miR-150-5p表达水平降低(P<0.05);与对照组比较,TGF-β1组HSC中MALAT1 mRNA和CXCL14 mRNA表达水平均升高(P<0.05),miR-150-5p表达水平降低(P<0.05);与TGF-β1+si-NC组比较,TGF-β1+si-MALAT1组HSC中MALAT1mRNA和CXCL14 mRNA表达水平均降低(P<0.05),miR-150-5p表达水平升高(P<0.05);与TGF-β1+si-MALAT1组比较,TGF-β1+si-MALAT1+anti-miR-150-5p组HSC中miR-150-5p表达水平降低(P<0.05),CXCL14 mRNA表达水平升高(P<0.05);与TGF-β1+si-MALAT1组比较,TGF-β1+si-MALAT1+CXCL14组HSC中CXCL14 mRNA表达水平升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与健康组比较,轻度和重度肝纤维化组患者血清中CXCL14蛋白表达水平升高(P<0.05);与轻度肝纤维化组比较,重度肝纤维化组患者血清中CXCL14蛋白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,TGF-β1组HSC中CXCL14、α-SMA和COL1A1蛋白表达水平升高(P<0.05);与TGF-β1+si-NC组比较,TGF-β1+si-MALAT1组HSC中CXCL14、α-SMA和COL1A1蛋白表达水平降低(P<0.05);与TGF-β1+si-MALAT1组比较,TGF-β1+si-MALAT1+anti-miR-150-5p组和TGF-β1+si-MALAT1+CXCL14组HSC中CXCL14、α-SMA和COL1A1蛋白表达水平升高(P<0.05)。CCK-8法检测,与对照组比较,TGF-β1组HSC增殖活性升高(P<0.05);与TGF-β1+si-NC组比较,TGF-β1+si-MALAT1组HSC增殖活性降低(P<0.05);与TGF-β1+siMALAT1组比较,TGF-β1+si-MALAT1+anti-miR-150-5p组和TGF-β1+si-MALAT1+CXCL14组HSC增殖活性升高(P<0.05)。免疫荧光检测,各组HSC中α-SMA和COL1A1蛋白表达与Western blotting法检测结果一致。MALAT1和CXCL143’-UTR与miR-150-5p存在靶向关系。双荧光素酶报告基因测定,与miR-NC组比较,与MALAT1 WT或CXCL14 WT共转染的miR-150-5p组HSC中荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论:敲低MALAT1可抑制TGF-β1诱导HSC活化,其机制可能与miR-150-5p/CXCL14信号通路有关。

lncRNA MALAT1调节miR-22-3p/NLRP3轴对LPS诱导的急性肺损伤的影响

目的探究长链非编码RNA MALAT1通过miR-22-3p/NLRP3信号轴促进脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的分子机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、ALI组、sh-NC组、sh-MALAT1组,每组9只。通过气管内灌注LPS法建立ALI大鼠模型,假手术组气管内灌注等量的PBS作为阴性对照,sh-NC组、sh-MALAT1组在LPS诱导前48 h,通过静脉分别注射2×10^(7) TU/mL的sh-NC慢病毒或相同剂量的sh-MALAT1慢病毒。通过HE染色法观察肺组织的组织病理学改变;通过TUNEL染色法观察肺组织的细胞凋亡情况。通过双荧光素酶报告基因系统验证MALAT1与miR-22-3p、NLRP3与miR-22-3p的调控关系;通过实时荧光定量PCR技术和免疫印记技术检测肺组织和细胞中MALAT1、miR-22-3p、NLRP3、ASC、caspase-1的表达水平;通过酶联免疫吸附试验检测支气管肺泡灌洗液和细胞培养基中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌情况;通过CCK-8技术检测A549细胞增殖情况;通过流式细胞术检测A549细胞凋亡情况。结果与假手术组相比,LPS诱导的ALI大鼠肺组织和A549细胞中MALAT1、NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA水平显著升高,miR-22-3p水平显著降低(P<0.05)。此外,与假手术组相比,LPS诱导的ALI大鼠肺组织的组织病理损伤水平、炎症反应和细胞凋亡率升高(P<0.05)。与ALI组、sh-NC组相比,抑制MALAT1表达可改善LPS诱导的ALI大鼠肺组织和细胞中的炎症反应和细胞凋亡(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,MALAT1与miR-22-3p、NLRP3与miR-22-3p存在相互调控关系。与ALI组、sh-NC组相比,sh-MALAT1组肺组织中MALAT1、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA水平降低(P<0.05),miR-22-3p水平升高(P<0.05)。同时,BALF上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α水平降低(P<0.05)。此外,下调MALAT1的同时抑制miR-22-3p表达后,细胞中miR-22-3p和Bcl-2表达水平显著降低,细胞增殖水平亦显著降低(P<0.05)。结论降低MALAT1的表达可通过促进miR-22-3p的表达,从而抑制NLRP3的蛋白水平,并最终抑制LPS诱导的ALI模型中的炎症反应和细胞凋亡。

长链非编码RNA MALAT1对人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响

目的探索长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(metastasisassociated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)对人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响。方法培养人肺成纤维细胞(human fetal lung fibroblast 1,HFL-1),按照有无转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)作用分为观察组和对照组,检测两组细胞中lncRNA MALAT1表达水平。在此基础上设置四个组别:空白组、TGF-β1组、转染对照组和siMALAT1组。空白组细胞不接受任何处理;TGF-β1组采用5 ug/L的TGF-β1处理;转染对照组在TGF-β1组的基础上应用siMALAT1阴性对照(negative control,NC)处理;siMALAT1组在TGF-β1组的基础上应用siMALAT1。比较其lncRNA MALAT1、Ⅰ型胶原(collagen 1,COL1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle activation protein,α-SMA)的mRNA表达水平,COL1和α-SMA的蛋白表达水平和细胞增殖情况。结果观察组lncRNA MALAT1相对表达量较对照组高(P<0.05)。四组细胞lncRNA MALAT1、α-SMA和COL1的mRNA及蛋白相对表达量有统计学差异(P<0.05);其中,转染对照组和TGF-β1组以上RNA和蛋白相对表达量均高于siMALAT1组和空白组(P<0.05),而TGF-β1组与转染对照组之间上述RNA和蛋白相对表达量则无差异(P>0.05)。四组细胞增殖活力的差异具有统计学意义(P<0.05);转染对照组和TGF-β1组细胞增殖活力较siMALAT1组和空白组高(P<0.05),而TGF-β1组与转染对照组之间则无差异(P>0.05)。结论lncRNA MALAT1可以促进人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,影响肺纤维化进程中COL1、α-SMA在肺组织中的沉积,靶向lncRNA MALAT1将有助于对肺纤维化过程的深入研究。