Determination of metformin in diabetic rat plasma by an improved ion-pair high-performance liquid chromatography: application to a pharmacokinetic study

An efficient and sensitive ion-pair HPLC-UV method using atenolol as internal standard （IS） was developed and validated for the determination of metformin in the plasma of diabetic rats. Plasma samples were deproteinated with 10% （v/v） perchloric acid. Separation was achieved on a UltimateTM AQ-C18 column （250 mm×4.6 mm, 5 μm） with a mobile phase （pH 5.05） composed of acetonitrile-water （31：69, v/v, containing 0.002 M sodium dodecyl sulfate, 0.0125 M potassium dihydrogen phosphate, 0.015 M triethylamine） at a flow rate of 1.0 mL/min. The calibration curve was linear （r〉0.994） between 7.5 and 4000 ng/mL. The lower limit of quantification （LLOQ） was 7.5 ng/mL. The precision was validated and the relative standard deviation was in the range of 1.87% to 15.70%; the accuracy was between 93.98%-106.89%. The mean recoveries were 95.40% and 95.31% for metformin and IS, respectively. The relative error （RE） of stability at different storage conditions was within ±9.00%. This method was used to determine the concentration-time profile of metformin in diabetic rat plasma following an oral administration of metformin at the dose of 10 mg/kg. Our results indicated that ion-pair HPLC-UV method using UltimateTM AQ-C18 column was effective for the pharmacokinetic studies of high polarity compounds like metformin.

HPLC法测定人血浆中氧化苦参碱含量

目的：建立测定氧化苦参碱血药浓度的ＨＰＬＣ法。方法：血浆标本经碱化以氯仿一正丁醇（９８∶２）提取，吹干后以甲醇一正己烷（４∶１，氨水调ｐＨ至８）为流动相，经过Ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ－ＳｉＯ２（５μｍ）柱分离后在紫外２２０ｎｍ处检测。结果：氧化苦参碱血浆浓度曲线范围１２～３６ｍｇ·Ｌ－１，最低检出限为０１ｍｇ·Ｌ－１（Ｓ／Ｎ＝２）。样品在１２～３６ｍｇ·Ｌ－１浓度时的平均回收率为９８３１％～１０９０％，日内和日间精密度的ＲＳＤ均小于４％。结论：此方法为氧化苦参碱的血药浓度测定及药代力动学研究提供了一种简便可行的方法。

HPLC法测定犬口服养阴通脑颗粒后血浆中的葛根素

目的 建立HPLC测定犬口服复方葛根制剂后葛根素的血药浓度。方法 以沸水浴法处理血浆 ,以对羟基苯甲酸为内标 ,甲醇 水 醋酸 (5 .6 2 5mol/L) (39∶5 8∶3,v/v)为流动相 ,InertsilODS 3色谱柱 (15 0mm× 4.6mm ,5 μm)为固定相 ,流速为 0 .9ml/min。以二极管阵列检测器在 2 48nm波长下测定并通过三维图观察其紫外吸收定性。结果 葛根素在 0 .0 98～ 0 .784μg/ml范围内线性关系良好 ,RSD <10 % ,平均回收率为 10 2 .44 % ,最低检测限为 0 .33ng ,血浆中最低检测浓度为 0 .0 392 μg/ml。 结论 此法简便、快速、灵敏、可靠 ,可较好地用于口服复方葛根素制剂血药浓度的测定。

HPLC测定人血浆中罗痛定浓度及药代动力学研究

建立了测定人血浆中罗痛定药物浓度的高效液相色谱法。采用ＹＷＧＣ１８色谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ），以甲醇－水－三乙胺（７０∶３０∶０．３，ｖ／ｖ／ｖ，ｐＨ６．３）为流动相，维拉帕米为内标，用紫外检测器在２８１ｎｍ处检测。血浆样品用正己烷－正丁醇混合液（１２∶１）在碱性条件下提取。血药浓度在２．５～１０００ｎｇ／ｍｌ范围内呈线性关系，ｒ＝０．９９９１，最小检测浓度１．５ｎｇ／ｍｌ。日内、日间ＲＳＤ分别＜６．９％，＜８．７％。方法回收率＞９２．１％。应用该法研究了五名健康志愿者口服罗痛定片后的药代动力学。

HPLC-MS(TOF)法测定人血浆中多奈哌齐的浓度

目的 建立测定人血浆中多奈哌齐的HPLC MS(TOF)法。方法 血浆中加入内标氯雷他定后经碱化以异丙醇 正己烷 (3∶97)提取血浆样品 ,用LC MS(TOF)联用技术 ,以电喷雾 (ESI)作为接口技术 ,选择多奈哌齐的准分子离子 ([M +H]+ ,m z 380 )和内标氯雷他定的准分子离子 ([M +H]+ ,m z 383)作为测定离子 ,测定人血浆中多奈哌齐的浓度。结果 多奈哌齐的回归方程 :As Ai=0 0 137+0 10 5 6C ,r =0 9998;线性范围为 0 1～ 15 μg·L- 1 ,定量限为 0 1μg·L- 1 ,方法回收率和提取回收率均大于 90 %。结论 该测定方法灵敏度高、专属性好、快速 。

一种改进的HPLC法测定人血浆中盐酸二甲双胍浓度(英文)

目的 :采用改进的离子对高效液相色谱方法测定人血浆中二甲双胍的浓度。方法 :乙腈作为蛋白沉淀剂 ,除去酸化血浆样品中的蛋白 ,二氯甲烷进一步去杂质后 ,取上清液进样。流动相为甲醇 (5 6 % ) ,0 35mmol·L-1的十二烷基硫酸钠和 5mmol·L-1的磷酸盐缓冲液 (4 4 % ,pH 6 6 ) ,流速为 1 2mL·min-1,紫外检测波长 2 34nm。结果 :二甲双胍和内标 (哌仑西平 )的保留时间分别为 7 1和 4 8min ,标准曲线在 2 0～ 4 0 0 0mg·L-1浓度范围内线性关系良好 ,绝对回收率 >95 % ,检测限和定量限分别为 4和 10mg·L-1。天内和天间RSD <6 4 %。结论

盐酸氟桂利嗪人体血药浓度的HPLC测定法

目的 建立了盐酸氟桂利嗪血药浓度的 HPLC测定法 ,用于小剂量给药后氟桂利嗪的人体药动学研究。方法 血浆样品加甲醇沉淀后碱化 ,以环己烷提取。采用 Hypersil C1 8柱 ,以甲醇 -水 -冰醋酸 -三乙胺 (80∶2 0∶ 0 .6∶ 0 .4 )为流动相 ,于 2 5 4 nm波长处检测 ,测定了 2 0名受试者单剂量口服氟桂利嗪 5 mg后血药浓度 -时间过程。结果 最低检测限达 2 ng/ml,线性范围 5～ 2 0 0 ng/ml(r=0 .9996,n=5 ) ,日内和日间 RSD均小于1 0 % ,平均回收率为 92 .61 %～ 95 .2 0 % ,符合生物样品分析要求。结论 本法简便、准确、灵敏 。

RP-HPLC法测定大鼠血浆中丹参酮IIA浓度及其药代动力学研究

目的 建立高效液相色谱法测定大鼠血浆中丹参酮IIA浓度的方法。方法 血浆样品经液 液萃取后 ,用HPLC法进行分析。色谱柱为YMCC1 8(5 μm ,ID 3 0mm× 1 50mm) ;流动相为乙腈 水 冰醋酸 (74∶2 6∶1 ) ;流速 0 3mL·min-1 ;检测波长 2 70nm ;内标为 4 氯联苯。结果 线性范围为 0 0 5mg·L-1 ～ 6 40mg·L-1 ,最低检测浓度为 0 0 5mg·L-1 。高、中、低 3种浓度的平均方法回收率分别为 98 9% ,1 0 2 1 %和 1 0 0 4%。日内、日间精密度 (RSD)均小于5 %。结论 本方法稳定、简便、可靠 。

RP-HPLC法测定兔血浆中黄芩苷含量

目的采用RP HPLC法测定家兔血浆中黄芩苷的浓度。方法用乙腈沉淀血浆蛋白 ,上清液直接进样测定。色谱柱为DiamonsilTMC18柱 ;流动相为甲醇 水 磷酸 ( 5 0∶5 0∶0 2 ,V∶V∶V) ,流速1 0mL/min ;检测波长为 2 77nm ,以对硝基苯甲酸为内标物。结果在黄芩苷浓度为 0 1～5 0mg/L内线性关系良好 (r =0 9975 ,日内、日间RSD分别≤ 5 4 %和≤ 7 2 % ,平均回收率为1 0 0 1 %。结论方法简便快速 ,适用于黄芩苷的血药浓度测定及药代动力学研究。

HPLC-UV法测定人血浆中青霉胺浓度

目的建立人血浆中青霉胺浓度的HPLC测定方法,并用于人体药动学试验中青霉胺血药浓度测定。方法取血浆样品加入衍生化试剂DTNB,室温反应5 min,10%的高氯酸溶液沉淀蛋白,上清液进样分析。色谱柱:岛津VP-ODS C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05 mol.L-1醋酸钠缓冲溶液(12:88),流速1.0 ml.min-1,检测波长320 nm,柱温25℃,进样量20μl。结果血浆中青霉胺在0.1～10.0 mg.L-1浓度范围内线性关系良好,定量下限为0.1 mg.L-1(S/N>10,n=5;RSD=6.4%,准确度为94.2%),在低、中、高浓度血浆样品日内、日间RSD均小于6%,准确度在92%～96%范围内,提取回收率>60%,且稳定(RSD<10%),符合生物样品分析要求。结论所建立的HPLC法样品前处理简便、操作简便、能满足青霉胺在人体内的药代动力学研究。

RP-HPLC法测定人体血浆中吉西他滨的浓度

目的:建立一种测定人体血浆中吉西他滨血药浓度的高效液相色谱方法。方法:取血浆样品1 mL,加内标100μL(含氟脲苷0.8μg·mL-1),混匀,加甲醇-乙腈(1:9)3 mL混匀,放置5 min,离心(3500 r·min-1,10 min),取上清液于60℃水浴放置,氮气吹干,残渣用0.5 mL流动相溶解,离心(15000 r·min～1,10 min),取上清液,进样50μL。色谱柱:Lichrospher 5-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相:40 mmol·L-1醋酸铵缓冲液(用醋酸调节pH=5.5)-乙腈(97.5:2.5),流速:0.8 mL·min～1,检测波长:268 nm,柱温:25℃。结果:本方法线性范围0.20—10.0μg·mL～1,r=0.9999,方法检测限为0.10μg·mL-1(S/N>4),定量限为(0.21±0.02)μg·mL-1(S/N>10);方法回收率为100.1%-106.6%(n=21),日内RSD为2.3%-4.0%(n=21),日间RSD为3.2%-5.2%(n=21)。结论:本方法灵敏度高,操作简便、准确,可用于人体血浆中吉西他滨浓度的测定及药动学研究。

HPLC-MS法测定人血浆中替米沙坦及药代动力学研究

目的建立人血浆中替米沙坦浓度的HPLCMS分析方法,用以测定健康受试者口服替米沙坦制剂后的血药浓度,估算受试制剂和参比制剂的药代动力学参数,评价两种制剂的生物等效性和相对生物利用度。方法血浆中加入内标地西泮后,乙酸乙酯提取,HPLCMS分离、分析。色谱系统ShimadzuODS柱(150mm×46mm),流动相甲醇001mol/L醋酸铵溶液(70∶30,v/v),流速10ml/min,柱温30℃。质谱检测方式SIM。结果替米沙坦的线性范围为05～400ng/ml(r=09998),最低检测浓度达01ng/ml,提取回收率大于80%。受试制剂及参比制剂的生物半衰期分别为(197±30)h和(202±36)h,达峰时间分别为(14±04)h和(16±06)h,峰浓度分别为(1739±304)ng/ml和(1782±355)ng/ml。受试制剂的相对生物利用度为(1012±130)%。结论本法适用于替米沙坦的含量测定,统计学结果表明两种制剂具有生物等效性。

HPLC法测定犬血浆中葛根素含量

目的:建立血浆中葛根素含量测定方法。方法:色谱柱:Waters Symmetry C18柱(150 mm×3.9 mm,5μm);流动相:乙腈-0.0075 mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 2.7)(10:90);测定波长:248 nm;柱温:40℃;流速:1 mL·min-1。血浆样品采用固相萃取处理。并用健康家犬6只,单剂量给予葛根总黄酮片600 mg,进行了血药浓度测定。结果:血浆样品中葛根素无干扰,最低检测限为0.1 ng·mL-1,葛根素在0.0175-2.2μg·mL-1范围内血浆药物浓度与峰面积线性关系良好,r=0.9995,回收率为85.0%-117.1%,日内、日间RSD分别为7.5%-11.6%和4.7%-8.7%。结论:本法样品处理方法简单,无干扰,提取完全,灵敏度高,重现性好,可用于葛根素生物样本分析。

HPLC测定血浆中黄豆苷元浓度及其人体药动学研究

目的建立HPLC测定人血浆中黄豆苷元浓度的方法,进行其人体药动学研究。方法以氟康唑为内标,血浆样品经预处理后,选用HypersilODS2色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,甲醇-水（49∶51）为流动相,流速1.0mL·min^-1,室温260nm处测定。结果黄豆苷元血浓度线性范围为5-640μg·L-1,最低定量浓度为5μg·L^-1;相对回收率为89.53%-110.35%,绝对回收率为61.24%-85.04%,日内、日间变异系数均〈12%。黄豆苷元药动学参数t1/2为（3.863±0.983）h,ρmax（192.261±115.077）μg·L^-1,tmax（0.900±0.409）h,AUC0~12（490.839±162.855）μg·h·L^-1,AUC0~∞（535.279±163.190）μg·h·L^-1。结论本法分离效果良好,灵敏度高,重现性好,回收率高,日内、日间误差小,适用于黄豆苷元人体药动学及生物利用度研究。

LC-MS和HPLC法测定人血浆中格列本脲和二甲双胍方法的建立

目的 建立人血浆中盐酸二甲双胍的高效液相色谱和格列本脲的液相色谱 质谱测定方法。方法 二甲双胍血浆样品经乙腈直接沉淀蛋白进样。分析柱:EC 2 5 0 4 6NUCLEOSIL 10 0 5 (4 6mm×2 5 0mm ,5 μm) ;流动相:0 0 3mol L(NH4 )H2 PO4 ∶乙腈(75∶2 5 ,pH 7 0 ) ,流速1 0ml min ;检测波长2 40nm。格列本脲血浆中加入格列吡嗪为内标,经乙酸乙酯提取,进行LC MS测定。色谱柱为ORBAXSB3 0 0C1 8柱(2 1mm×15 0mm ,5 μm) ,流动相为乙腈∶0 1%乙酸铵(5 5∶45 ) ,流速为0 2ml min ;ESI选择性正离子检测。结果 格列本脲浓度为2～2 0 0ng ml线性关系良好(r =0 9998) ,盐酸二甲双胍浓度为6 2 5～40 0 0ng ml线性关系良好(r =0 9999)。二甲双胍和格列本脲方法的日内和日间RSD <5 %。结论 所建立的人血浆中格列本脲的HPLC MS测定方法和二甲双胍的HPLC测定方法灵敏、准确、简便,可用于格列本脲、二甲双胍的人体药代动力学研究。

HPLC法测定生物样品中淫羊藿苷的浓度

以苯甲酸为内标，建立了ＨＰＬＣ测定动物血浆、尿、粪及心、肝、脾、肺、肾等组织匀浆中淫羊藿苷的浓度．色谱柱采用ＺｏｒｂａｘＯＤＳ，流动相为四氢呋喃—水—冰醋酸（２０７５５），紫外检测波长２７０ｎｍ．生物样品经乙酸乙酯提取处理后可获得良好分离，血药浓度在１～１２８μｇ／ｍＬ范围内呈线性关系，相关系数０．９９９９，最低检测浓度为０．５μｇ／ｍＬ．生物样品的平均方法回收率９５．２６％～１０１．３％，平均提取回收率７３．５７％～９７．１０％，日内、日间精密度ＲＳＤ２．０％～７．１％．

HPLC法测定大鼠血浆中马钱子碱的浓度

目的:建立 HPLC 测定大鼠血浆中马钱子碱浓度的方法。方法:以士的宁为内标,血浆用液-液2次萃取进行处理。采用 Phenomenex C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)和汉邦 C_(18)预柱;流动相:乙腈-0.01 mol·L^(-1)庚烷磺酸钠与0.02 mol·L^(-1)磷酸二氢钾等量混合(用10%磷酸调 pH 2.8)(24:76);检测波长:264 nm;流速:1.0 mL·min^(-1);柱温:30℃。大鼠静脉注射马钱子碱溶液10 mg·k^(-1)。应用3P97药动学软件程序对数据进行计算机处理。结果:血浆内源性杂质对样品测定无干扰。马钱子碱定量限为50 ng·mL^(-1),在50～5000 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9978)。血浆中的马钱子碱的绝对回收率为86.3%～97.6%,方法回收率为97.7%～107.0%,日内 RSD≤6.3%,日间 RSD≤7.0%。样品多次冻融后稳定性良好。主要药动学参数 A=2589 ng·mL^(-1),α=0.06 min^(-1),B=926 ng·mL^(-1),β=0.008 min^(-1),Vc=2907 mL·kg^(-1),t_(1/2α)=16 min,t_(1/2β)=80 min,K_(21)=0.022 min^(-1),K_(10)=0.020 min ,K_(12)=0.022 min^(-1),AUC=187 min·μg·mL^(-1),CL=57 mL·kg^(-1)·min^(-1)。结论:该法快速、灵敏、准确,可用于马钱子碱在大鼠体内的药代动力学研究。

RP-HPLC法测定肾移植病人血浆中霉酚酸浓度及其应用

目的:建立反相高效液相色谱法测定血浆中霉酚酸浓度的方法。方法:采用美国Waters高效液相色谱仪,Symmetry C18(150mm×3.9mm,5μm)色谱柱,乙腈-0,05%磷酸(34:66)为流动相,流速1.0 mL·min-1,萘普生作内标。样品在酸性条件下用氯仿漩涡混合萃取浓集后手动进样,在254 nm波长下检测,按内标法定量。结果:标准曲线在0.1-40 mg·L-1范围内有良好线性,最低检测浓度为0.1 mg·L-1,方法回收率为98.3%-100.4%,萃取回收率为88.1%-92.4%,日内测定RSD为0.98%-1.5%,日间测定RSD为1.0%-4.4%。结论:本方法可用于肾移植患者霉酚酸的血药浓度测定和药动学研究。

RP-HPLC法测定人血浆中拉莫三嗪及药动学

目的建立RP-HPLC法测定人血浆中的拉莫三嗪,并将此方法应用于拉莫三嗪片在健康受试者体内的药动学研究。方法血浆样品经乙酸乙酯提取后,采用Kromasil C18柱分离,流动相为乙腈-20 mmol.L-1 KH2PO4(体积比为25∶75),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为306 nm。测定了11名健康受试者口服拉莫三嗪片50 mg后不同时刻血浆中拉莫三嗪的浓度,采用DAS 2.0软件以非房室模型计算药动学参数。结果拉莫三嗪的线性范围为10.0～2 000.0μg.L-1;日内和日间精密度均小于8.0%,准确度(relative error,RE)在±2.6%以内,提取回收率大于59.1%。拉莫三嗪的主要药动学参数:t1/2为(39.1±8.2)h,tmax为(3.3±1.8)h,ρmax为(469.6±152.4)μg.L-1,AUC0-t为(22 424.6±6 952.6)μg.h.L-1,AUC0-∞为(25 573.2±7 196.4)μg.h.L-1。结论该方法适用于拉莫三嗪人体药动学研究。

反相离子对HPLC测定人血浆中二甲双胍研究

目的建立一种快速、准确测定人血浆中盐酸二甲双胍含量的反相离子对HPLC方法。方法在血浆中加入盐酸二甲双胍标样及内标阿替洛尔，用乙腈除蛋白，离心后取上清液加二氯甲烷萃取乙腈，再次离心后，取上清液直接进样分析；色谱柱为Diamonsil C18（150×4．6mm，5μm），流动相组成：（0．01mol／L磷酸二氢钠＋0．0075mol／L十二烷基磺酸钠）（pH5．5）：乙腈（70：30），检测波长为235nm，柱温：30℃，流速为1．0mL／min，进样量为20μL。结果盐酸二甲双胍在0．05～4μg／mL的浓度范围内呈良好线性，r=0．9997，最低检测限为0．015μg／mL，方法回收率大于97．98％，萃取回收率大于89．35％，日间、日内变异系数均小于5％。结论该方法准确、快速、灵敏，可用于盐酸二甲双胍的治疗药物监测、人体内药代动力学及生物等效性研究。