橙皮苷衍生化改性及清除自由基研究

橙皮苷和碳酸二甲酯为原料,采用正交试验对Lewis酸在极性溶剂中催化合成甲基橙皮苷的工艺进行了研究。结果表明,甲基橙皮苷的最佳合成工艺为:催化剂用量为反应物总质量的10%,反应时间为3h,反应温度为70℃,碳酸二甲酯用量为理论用量的6倍,甲基橙皮苷的得率可达23.3%。橙皮苷和甲基橙皮苷及其金属配合物对Fenton体系产生的.OH有较好的清除作用。

HPLC法测定脑络通胶囊中甲基橙皮苷的含量

目的:建立高效液相色谱法测定脑络通胶囊中甲基橙皮苷含量的检测方法。方法:Dikma C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:冰醋酸-水-甲醇-乙腈(4:66:28:2);流速:1.0ml·min-l;检测波长:283nm;柱温:40℃。结果:甲基橙皮苷在0.03～0.17μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系,回收率为98.5%,RSD为2.4%(n=6)。结论:本方法简便、快速、准确,可用于脑络通胶囊的质量控制。

脑络通胶囊质量标准的完善

目的:完善脑络通胶囊的质量标准,以更好控制产品质量。方法:用理化方法对脑络通胶囊中维生素B_6和TLC法对丹参、黄芪、甲基橙皮苷、川芎进行鉴别;采用HPLC法测定原儿茶醛、甲基橙皮苷及维生素B_6的含量。结果:理化方法能检出维生素B_6,用TLC法均能检出丹参、黄芪、甲基橙皮苷、川芎。原儿茶醛在0.08～0.49μg范围内线性关系良好,r= 0.9999,平均回收率为101.6%,RSD为1.7%(n=6);甲基橙皮苷在0.22～2.16μg范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为99.6%,RSD为1.6%(n=6);维生素B_6在0.04～0.4μg范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为99.9%,RSD为3.1%(n=6)。结论:方法操作简单,可以用来控制脑络通胶囊的质量。

甲基橙皮苷和人血清白蛋白相互作用的光谱研究

利用荧光光谱法和红外光谱法研究了甲基橙皮苷(MH)与人血清白蛋白(HSA)的相互作用.结果表明,MH对HSA的荧光有较强的猝灭作用.在296、303、310K温度下,MH与HSA相互作用的结合常数分别为1.77×104,2.65×104,3.53×104 L·mol-1.热力学分析结果表明,MH与HSA之间的结合过程是吸热的并且是自发的;作用力以疏水作用为主,并伴随氢键作用.

橙皮苷对抑郁症大鼠海马神经细胞凋亡、GR及NR2B的影响

目的:探讨橙皮苷对抑郁症大鼠海马神经细胞凋亡、糖皮质激素受体(GR)及N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(NR2B)的影响。方法:将36只SD大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、阳性对照组(氟西汀,10 mg·kg^-1)和橙皮苷低、中、高剂量组(40,80,160 mg·kg^-1),每组6只。除正常对照组外,其余各组构建抑郁症大鼠模型,并灌胃给予相应药物,1次/d,连续28d。采用旷场(open field)实验、糖水偏好实验和强迫游泳实验观察大鼠的行为学变化,ELISA法检测海马组织中GR和NR2B含量,TUNEL法检测海马神经细胞凋亡,Western Blotting法检测海马组织中B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白质(Bax)和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠自由活动次数明显减少,糖水偏好百分比降低,强迫游泳时间明显延长,海马组织中GR含量和Bcl-2蛋白表达水平明显降低,而NR2B含量和Bax蛋白表达水平明显升高,海马区凋亡阳性细胞数明显增多(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和橙皮苷中、高剂量组大鼠自由活动次数明显增加,强迫游泳时间明显缩短,海马组织中GR含量和Bcl-2蛋白表达水平明显升高,NR2B含量和Bax蛋白表达水平明显降低,海马区凋亡阳性细胞数明显减少(P<0.05),且阳性对照组和低、中、高剂量橙皮苷组大鼠的糖水偏好百分比明显升高(P<0.05)。结论:橙皮苷可通过减少神经细胞凋亡和调控GR、NR2B表达发挥抗抑郁的作用。

甲基橙皮苷的研究进展

甲基橙皮苷是一类重要的天然黄酮类化合物。主要研究报道了甲基橙皮苷制备方法,即植物提取法和化学合成法,并报道了其在医学、生命科学、食品科学、工业缓蚀剂等方面的最新研究进展。提出碳酸二甲酯合成工艺是制备甲基橙皮苷比较有前途的工艺,甲基橙皮苷在临床医学及食品科学中有更为广泛的应用。

甲基橙皮苷的制备

目的:采用石灰法(CaOH2)制备甲基橙皮苷,提高产率。方法:采用氢氧化钙的水溶液溶解橙皮苷,生成橙皮苷查耳酮,经硫酸二甲酯甲基化后,用正丁醇提取、分离、乙醇精制得甲基橙皮苷。结果:收率达到75%,产物质量符合国家药品标准,工艺稳定可行。

高效液相色谱法同时测定维尔康胶囊中3种成分含量

目的建立同时测定维尔康胶囊中维生素B1、维生素C和甲基橙皮苷含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱为Phenomenex Luna C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%磷酸溶液-甲醇(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为270 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。结果维生素B1、维生素C和甲基橙皮苷进样量在0.250~1.502μg、2.500~15.001μg、0.500~3.002μg范围内与峰面积线性关系良好(r>0.9990),精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2%,平均加样回收率分别为101.21%,98.83%,102.17%,RSD分别为1.47%,1.60%,1.06%(n=6)。结论该方法操作简便、准确,精密度、稳定性、重复性好,可用于同时测定维尔康胶囊中3种成分的含量。

RP-HPLC测定脑络通胶囊中甲基橙皮苷的含量

目的建立用RP-HPLC测定脑络通胶囊中甲基橙皮苷含量。方法采用ODS-C18(200 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;甲醇—醋酸-水(35∶4∶61)为流动相;检测波长为284 nm。结果甲基橙皮苷在4.92-246.0μg/m l的浓度范围内线性良好,r=0.9999,平均回收率为99.78%,RSD为0.3%(n=6)。结论该方法简便,结果准确、重复性好,可用于脑络通胶囊的质量控制和评价。

橙皮苷通过MeCP2/Wnt轴对口腔鳞状细胞癌恶性生物学行为的作用机制

目的观察橙皮苷对口腔鳞状细胞癌(OSCC)CAL27细胞系恶性生物学行为的影响,并探讨可能机制。方法取对数期CAL27细胞,分为空白组、橙皮苷组、甲基化CpG结合蛋白-2(MeCP2)过表达组、橙皮苷+MeCP2过表达组。空白组不处理,橙皮苷组培养基加入橙皮苷(100μmol/L终浓度),MeCP2过表达组转染pcDNA 3.1-MeCP2,橙皮苷+MeCP2过表达组加入橙皮苷(100μmol/L终浓度)+转染pcDNA 3.1-MeCP2。平板克隆实验、划痕实验、Transwell实验分别检测细胞克隆、迁移、侵袭能力;Western blot法检测各组细胞Wnt-1、β-连环蛋白(β-catenin)、腺瘤样结肠息肉病(APC)蛋白表达量。结果与HoK细胞系中MeCP2蛋白表达量(0.43±0.03)相比,CAL27细胞系中MeCP2蛋白表达量(0.61±0.05)显著升高。与空白组比较,橙皮苷组MeCP2蛋白表达量、迁移率降低,克隆数、侵袭细胞数减少,MeCP2过表达组MeCP2蛋白表达量、迁移率升高,克隆数、侵袭细胞数增加(P<0.05);与橙皮苷组比较,橙皮苷+MeCP2过表达组MeCP2蛋白表达量、迁移率升高,克隆数、侵袭细胞数增加(P<0.05);与MeCP2过表达组比较,橙皮苷+MeCP2过表达组MeCP2蛋白表达量、迁移率降低,克隆数、侵袭细胞数减少(P<0.05);与空白组比较,橙皮苷组Wnt-1、β-catenin蛋白表达降低、APC蛋白表达升高,MeCP2过表达组Wnt-1、β-catenin蛋白表达升高,APC蛋白表达降低(P<0.05);与橙皮苷组比较,橙皮苷+MeCP2过表达组Wnt-1、β-catenin蛋白表达升高,APC蛋白表达降低(P<0.05);与MeCP2过表达组比较,橙皮苷+MeCP2过表达组Wnt-1、β-catenin蛋白表达降低、APC蛋白表达升高(P<0.05)。结论橙皮苷可抑制OSCC细胞克隆、侵袭、迁移,其作用机制可能与下调MeCP2,进而抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

正交试验法优选甲基橙皮苷的喷雾工艺

目的优选甲基橙皮苷喷雾干燥的最佳工艺。方法采用正交试验法,以溶剂残留量和收率为考察指标,考察进风温度、出风温度和塔内压力的影响。结果甲基橙皮苷喷雾干燥的最佳工艺为进风温度170℃,出风温度85℃,塔内压力-7 Pa。干燥所得的甲基橙皮苷的平均溶剂残留量为3 050 mg/kg,平均收率为93.6%。结论该试验优选的工艺稳定,能有效控制产品的质量。

毛细管电泳法测定复方三维亚油酸胶丸I中甲基橙皮苷的含量

目的:采用毛细管电泳法测定复方三维亚油酸胶丸I中甲基橙皮苷的含量。方法:采用毛细管空管柱,以pH 9.5的20 mmol/L磷酸溶液为背景电解质测定复方三维亚油酸胶丸I中的甲基橙皮苷,检测波长为210 nm,柱温为25℃,电压20 kV。结果:甲基橙皮苷在0.085～0.512mg/mL范围内线性关系良好,高中低加样回收率分别为97.67%,99.76%,98.74%。结论:该电泳方法简单快速、能够为复方三维亚油酸胶丸I等复方制剂的质量控制提供依据。

顶空气相色谱法测定甲基橙皮苷原料中有机溶剂的残留量

目的建立甲基橙皮苷中有机溶剂乙醇和正丁醇的气相色谱测定方法。方法顶空气相色谱法,色谱条件:色谱柱为Agilent DB-624毛细管柱(30 m×0.32 mm,1.80μm);检测器:氢火焰离子化检测器,进样口温度220℃,检测器温度260℃;柱温:初始温度60℃,保温10 min,以40℃/min升至180℃,保温5 min;载气:氮气;流速6.00 mL/min;分流比10∶1。结果乙醇浓度在10.066～201.32μg/mL范围内,正丁醇浓度在5.032～100.64μg/mL范围内具有良好的线性范围;乙醇的平均回收率为98.6%(n=6),RSD为0.96%,正丁醇的平均回收率为99.5%(n=6),RSD为1.6%。结论本方法简便、快速、灵敏,是控制甲基橙皮苷残留有机溶剂的可靠测定方法。

HPLC同时测定脑络通胶囊中盐酸托哌酮和甲基橙皮苷的含量

目的建立测定脑络通胶囊中盐酸托哌酮和甲基橙皮苷的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Shim-pack VP-ODS 乙腈-0.025 mol.L-1磷酸二氢钾（每1 L加5 mL三乙胺,用磷酸调节pH为3.0）（25∶75）为流动相,流速为1.0 mL.min-1 柱温为30℃,检测波长261和283 nm。结果盐酸托哌酮在0.191 4~5.742μm内、甲基橙皮苷在0.040 5~1.215 6μg内呈良好的线性关系,盐酸托哌酮和甲基橙皮苷的平均回收率分别为101.94%和99.68%,RSD为1.86%和1.01%（n=9）。结论所用方法简便、准确,可作为脑络通胶囊的质量控制标准。

《中国药典》2020版陈皮质量标准修订的研究

目的:针对《中国药典》2020版陈皮质量标准的修订提出两点建议,以突出"陈皮"与"广陈皮"的共性特征与个性差异,完善陈皮质量标准。方法:采用TLC三步展开法,以橙皮苷、川陈皮素和2-甲氨基-苯甲酸甲酯为对照,鉴别并区分"陈皮"与"广陈皮";同时采用HPLC法对橙皮苷、川陈皮素、橘皮素等5种黄酮成分进行含量测定,并对川陈皮素与橘皮素进行相关性分析。结果:TLC鉴别结果表明橙皮苷与川陈皮素是"陈皮"与"广陈皮"的共有成分,而2-甲氨基-苯甲酸甲酯仅在"广陈皮"中发现,可作为区分二者的特征成分;HPLC测定结果显示橙皮苷,川陈皮素和橘皮素是二者的主要活性成分,同时川陈皮素与橘皮素含量具有良好的正相关性,且以川陈皮素为高,故可考虑以橙皮苷与川陈皮素作为测定指标。结论:结合本研究结果,对《中国药典》2020版陈皮质量标准的修订提出两点建议:一是在TLC鉴别项下以橙皮苷、川陈皮素和2-甲氨基-苯甲酸甲酯为"陈皮"与"广陈皮"的鉴别对照,二是在含量测定项下以橙皮苷与川陈皮素为二者的测定指标。该实验方法具有很好的耐用性和专属性,可有效体现二者的共性特征与个性差异,为陈皮质量的有效控制提供合理参考。