甲基原薯蓣皂苷含量的高效液相色谱法测定

建立了测定甲基原薯蓣皂苷（MPD）含量的高效液相色谱法。以甲醇制样，采用氨基柱（200mm×4．6mm，5μm），以乙腈-水（体积比90：10）流动相等度洗脱，流速1.2mL·min^-1，柱温35℃，检测波长208nm；MPD在0．1008～1．008g·L^-1范围内线性关系良好（r=0．9998，n=6）；精密度实验的RSD为2．4％（n=6），重复性实验的RSD为1．6％（n=5），平均回收率为98．4％。3批MPD原料的批内平均含量均不少于92．89％（n=5），批间平均含量为93．78％（n=3）。

超滤法测定甲基原薯蓣皂苷的血浆蛋白结合率

目的:测定甲基原薯蓣皂苷的血浆蛋白结合率。方法:采用超滤法结合高效液相色谱-串联质谱联用法(HPLC-MS-MS)对甲基原薯蓣皂苷与大鼠血浆以及健康人血浆的蛋白结合率进行测定。结果:甲基原薯蓣皂苷与大鼠血浆在20.0,100,200μg.mL-1下的血浆蛋白结合率分别为(94.6±0.16)%,(91.6±0.35)%,(86.10±0.60)%。甲基原薯蓣皂苷在以上3个浓度下与健康人血浆的血浆蛋白结合率分别为(82.11±5.12)%,(84.54±0.32)%,(88.52±1.02)%。结论:甲基原薯蓣皂苷与血浆蛋白具有较强的结合。

胡芦巴总皂苷的化学成分

目的:对中药提取物胡芦巴总皂苷成分进行分析。方法:采用大孔树脂及硅胶色谱分离。通过物理、化学和光谱学方法鉴定化合物的结构。结果:分离纯化2个呋甾烷型的甾体皂苷。分别为甲基原薯蓣皂苷(methyl-protodioscin)和甲基原翠雀皂苷(methyl-protodeltonin)。结论:methyl-protodioscin和methyl-protodeltonin均首次从胡芦巴属植物胡芦巴中分得。

薯蓣皂苷元对大鼠急性心肌缺血的治疗作用

目的研究薯蓣皂苷元(MPD)对大鼠急性心肌缺血的治疗作用。方法采用冠状动脉结扎心肌梗塞模型,测定心肌梗塞范围及血管活性物质,以评价MPD对大鼠急性心肌缺血的治疗作用。结果与模型对照组比较,MPD可显著降低心肌梗塞面积,抑制血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)的升高,显著降低增高的丙二醛(MDA)水平,升高超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)水平。结论MPD可显著降低大鼠心肌梗塞面积,降低心肌酶水平,提高氧自由基清除能力。同时MPD还可改善血管内皮细胞功能,且静脉给药有优于口服给药的趋势。

甲基原薯蓣皂苷对人肝微粒体中7种CYP450酶活性的影响

目的研究甲基原薯蓣皂苷对CYP450酶的7种亚型酶活性的影响。方法将MPD和CYP450酶7种亚型的特异性探针底物咖啡因（CYP1A2）、右美沙芬（CYP2D6）、甲苯磺丁脲（CYP2C9）、s-美芬妥因（CYP2C19）、氯唑沙宗（CYP2E1）、香豆素（CYP2A6）及咪达唑仑（CYP3A4）与人肝微粒体进行孵化反应，采用HPLC和LeMS／MS法测定对应的7种代谢产物（1，7-二甲基黄嘌呤、去甲右美沙芬、4-羟基甲苯磺丁脲、4-羟基美芬妥因、6-羟基氯唑沙宗、7-羟基香豆素和1-羟基咪达唑仑）的浓度，通过与对照组比较，确定MPD对以上7种酶活性的影响。结果MPD在1～10μmol·L^-1时对7种酶均无明显抑制作用，在100／μmol·L^-1时对CYP2D6有抑制趋势，但对其他6种酶无抑制作用，均无统计学意义（P〉0．05）。结论MPD在与以上6种酶（CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9和CYP2A6）代谢的药物联合用药时，发生药物相互作用的可能性较小。

薯蓣皂苷元对大鼠体内外血栓形成及血液黏度的影响

目的观察薯蓣皂苷元(MPD)对大鼠体内外血栓形成及血液黏度的影响。方法采用Chandler法形成大鼠体外血栓,测量其长度、湿重、干重;采用体内血栓形成仪,观察大鼠体内血栓形成时间;并测定大鼠高切、中切、低切下全血黏度及血浆黏度。结果与空白对照组相比,MPD中剂量组可延缓血栓形成时间,高、低剂量组也有一定的作用趋势。MPD高剂量组可降低大鼠体外血栓长度、湿重和干重。MPD高、中、低剂量组均可降低高、中、低切全血黏度和血浆黏度。结论MPD能抑制大鼠体外血栓形成,降低血栓干、湿重;延长大鼠体内血栓形成时间,降低全血黏度和血浆黏度。

薯蓣皂苷元活性成分对心肌细胞损伤的保护作用及机制研究

目的观察薯蓣皂苷元(MPD)活性成分对缺氧再复氧引起的心肌细胞损伤的保护作用,并研究其作用机制。方法采用建立缺氧再复氧引起心肌细胞损伤的模型,将细胞分为正常组、对照组和MPD组,正常组不进行缺氧再复氧和药物干预,对照组进行缺氧再复氧无MPD干预,MPD组进行缺氧再复氧和MPD干预,观察乳酸脱氢酶(LDH)和心肌细胞膜ATP酶。另外对正常心肌细胞经MPD的处理后,检测钠钙交换器(NCX)的mRNA表达量。结果与对照组比较,加入MPD(10μg/mL、50μg/mL)处理后,细胞的损伤程度减轻。经缺氧再复氧后MPD组的钠钾ATP酶和钙镁ATP酶的活性显著高于对照组。与对照组比较,NCX的mRNA表达量经MPD处理后降低(P<0.05)。结论MPD可能通过维持心肌细胞膜钠泵和钙泵功能,共同影响心肌细胞钙离子跨膜转运,维持细胞内低钙离子的环境。

甲基原薯蓣皂苷静脉注射给予大鼠后体内代谢物的LC-MS^n分析

采用液相色谱-多级离子阱质谱法(LC-MSn)法,检测大鼠生物样本中的甲基原薯蓣皂苷(MPD)及其代谢产物,以推测MPD在大鼠体内的代谢途径。对大鼠静脉注射给予40 mg/kg的MPD,并收集尿液、血浆、胆汁和粪便等样本,经固相萃取(SPE)净化提取后,采用Phenomenex Gemini C18色谱柱,以甲醇(B)-水(A)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min。采用正负离子检测。在生物样本中共检测到14个代谢产物。通过与对照品的色谱行为和多级质谱特征相比对,鉴定了其中6个代谢产物,分别为Protodioscin(M3),26-O-β-D-Glucopyrannosyl-(25R)-furan-5-ene-3β,22α,26-trihydroxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2 or 4)-β-D–glucopyranoside(M5),MPD(M0),Pseudoprotodioscin(M7),26-O-β-D-Glucopyrannosyl(25R)-furan-5-ene-3β,26-dihydroxy-22-methoxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranoside(M9),26-O-β-D-Glucopyrannosyl(25R)-furan-5-ene-3β,26-dihydroxy-22-methoxy-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside(M10)和Dioscin(M11)。根据已有对照品的质谱裂解规律,用LC-MSn法推测了另外5个代谢物。其中Protodioscin(PD)和Dioscin是两个主要的代谢产物,其对应的生成途径是MPD在大鼠体内的主要代谢途径。代谢反应总体以一相代谢为主,主要是水解脱糖,同时检出2个二相代谢产物;代谢物结构变化主要发生在糖上,母核均无明显变化。

聚(对苯二甲酸,间苯二甲酸-5-磺酸钠乙二醇,2-甲基1,3-丙二醇)的结构性能

在聚对苯二甲酸乙二酯(PET)聚合中添加间苯二甲酸-5-磺酸钠(SIPE)和2-甲基1,3-丙二醇(MPD),成功制备了聚(对苯二甲酸,间苯二甲酸-5-磺酸钠乙二醇,2-甲基1,3-丙二醇)(MCDP).采用核磁共振(NMR)、热失重分析(TGA)、差示扫描量热法(DSC)、广角X光衍射(WAXD)、偏光显微镜(POM)等表征分析了MCDP的结构性能.结果发现MCDP中所测MPD的摩尔分数较投料比例略高;MCDP的热稳定性略有下降;随MPD摩尔分数的增加,MCDP的结晶程度及速率降低,但球晶的形态及生长机理无显著影响.

构建全细胞生物传感器测定农田土壤中有机磷农药甲基对硫磷含量

土壤中污染物的生物有效性评估对于准确评价环境污染风险至关重要,而全细胞生物传感器是此类评估的重要工具之一。本研究旨在使用新型全细胞生物传感器建立土壤中甲基对硫磷(methyl parathion,MP)的检测方法。首先,使用筛选出的甲基对硫磷水解酶基因(methyl parathion degrading gene,mpd)和pUC19质粒骨架以及已有的特异性诱导元件pobR为材料,构建全细胞生物传感器。然后,以96孔的酶标板为载体和以5种全细胞生物传感器为指示细胞,建立了土壤提取液样品中甲基对硫磷的分析方法,并应用于实际测试和田间土壤样品中甲基对硫磷的检测。以检测性能的最佳大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α/pMP-AmilCP为例,其检测限为6.21−6.66μg/L,线性范围为10−10000μg/L。E.coli DH5α/pMP-RFP和E.coli DH5α/pMP-AmilCP的方法用于分析土壤提取液样品中甲基对硫磷的浓度,具有较好的检测性能。这种全细胞生物传感器方法有助于快速评估土壤中甲基对硫磷的生物有效性强弱,从而有效判断有机磷农药甲基对硫磷对土壤的污染风险。

甲基原薯蓣皂苷对心肌细胞内钙及ATP酶功能的影响及其机制

目的:研究甲基原薯蓣皂苷(MPD)对大鼠心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i)的活动及细胞膜ATP酶功能的影响,并分析其机制。方法:将乳鼠心肌细胞悬液随机分为对照组、MPD组、地尔硫卓(Dil)组,荧光分光光度计法观察心肌细胞[Ca2+]i的变化。将培养的乳鼠心肌细胞分为对照组和MPD组,分别检测心肌细胞膜ATP酶活性,并观察肌浆网钙ATP酶SERCA2a基因的mRNA表达水平。结果:在静息状态下,各组的心肌细胞[Ca2+]i均无显著性差异。但在KCl刺激下,MPD和Dil组与对照组相比,荧光信号峰值和[Ca2+]i浓度均低于对照组(P<0.001)。在心肌细胞膜ATP酶的活性中,MPD组的Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),而Mg2+-ATP酶的活性在2组间的比较无差异性。MPD组与对照组2组SERCA2a的mRNA表达量也无差异性。结论:MPD在一定程度上可以抑制细胞膜上电压依赖型钙通道开放,减少钙离子内流。MPD还可以通过提高心肌细胞膜钠泵和钙泵功能,影响心肌细胞钙离子跨膜转运,维持细胞内低钙离子的环境。

RP-HPLC同时测定穿山龙药材中原薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷和伪原薯蓣皂苷的含量

目的:建立测定产地黑龙江大兴安岭穿山龙供试品中水溶性皂苷含量的方法。方法:采用RP-HPLC,Diamonsil(钻石)C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水梯度洗脱,检测波长203 nm,柱温30℃。结果:原薯蓣皂苷浓度在50～500 mg·L-1、甲基原薯蓣皂苷在35～350 mg·L-1、伪原薯蓣皂苷质量浓度在15～150 mg·L-1与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 9(n=6)。方法学考察中各项实验结果的RSD均<3%。结论:方法重复性好,具有良好的回收率,稳定性佳,为穿山龙药材的质量控制提供了参考。

HPLC法测定不同产地穿山龙中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷

目的建立HPLC法同时测定不同产地穿山龙药材中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷。方法穿山龙药材粉末经50%甲醇超声处理。采用Agilent SB-Aq色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–水,梯度洗脱;检测波长203 nm;体积流量1.0 m L/min;柱温25℃;进样体积20μL。结果原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷在1.054 0~10.540 0、0.519 0~5.1900、0.287 0~2.870 0、0.021 2~0.212 0、0.061 4~0.614 0、0.061 4~0.614 0μg线性关系良好,r均大于0.999 0。平均加样回收率分别为100.19%、100.24%、99.87%、100.92%、99.36%、100.03%,RSD值分别为2.03%、2.51%、2.33%、3.07%、2.77%、3.41%。不同产地的穿山龙药材中原薯蓣皂苷、原纤细薯蓣皂苷、甲基原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷的质量分数分别为1.587~4.837%、0.260~1.950%、0.477~1.317%、0.037~0.187%、0.801~3.813%、0.088~0.524%。结论该方法快速、简便、准确,可用于穿山龙药材的质量控制。