纤蛇纹石石棉及代用纤维粉尘的光谱研究与噻唑蓝(MTT)比色法分析

以纤蛇纹石石棉、陶瓷纤维、玻璃纤维、岩棉、硅灰石为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测染毒72h后V79细胞的存活率,并通过吉姆萨染色观察细胞形态学上的变化。不同浓度ρ/(μg.ml-1)的矿物粉尘(100,200,400,600,800,1000)作用72h后,V79存活率下降,细胞增殖明显受到抑制并出现大量细胞衰亡,呈现出剂量效应关系,且细胞毒性大小为玻璃纤维>纤蛇纹石石棉>陶瓷纤维>硅灰石>岩棉;形态学观察发现染毒细胞出现空泡、肿胀、裸核、黑褐色颗粒以及胞浆胞核模糊、形态变化等现象,且不同的粉尘对V79细胞的影响不同。总体而言,岩棉是五种粉尘中毒性最低的石棉代用纤维。

甲醛、三氯乙烯、三氯化铝的细胞联合毒作用

目的 研究甲醛、三氯乙烯和三氯化铝的联合毒作用类型。方法 噻唑蓝法 (MTT)测定 3种物质各自的半数生长抑制浓度 (IC50 )及混合物 (甲醛、三氯化铝、三氯乙烯 )的IC50 ,根据Finney数学模型和Logistic回归方法判断联合作用类型。结果 甲醛、三氯乙烯、三氯化铝及其混合物质的IC50 分别为 0 . 0 2 2 6 ,0 . 36 8,0 . 5 89和0 . 12 4mg/ml,据Finney法求得Q值为 1 .0 8,Logisitc回归模型参数 β4差异无统计学意义。结论 甲醛、三氯化铝、三氯乙烯 (6∶11∶33)混合染毒 ,对中国仓鼠肺细胞的联合毒性表现为相加作用。

葛根对中国仓鼠肺细胞的毒性作用

目的:观察葛根对中国仓鼠肺细胞(CHL)形态学、细胞增殖活性及细胞相对存活率的影响。方法:以葛根为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的葛根在不同作用时间对CHL相对存活率的影响。结果:不同浓度的葛根(12.50、50.00、100.00、200.00和400.00 mg.L-1)作用一定时间后,CHL存活率下降,细胞增殖明显受到抑制并出现细胞脱落,呈现出时间-剂量效应关系。接触受试物48 h后,细胞生长半数抑制浓度(IC50)为282.00 mg.L-1。结论:葛根可以抑制CHL生长,降低线粒体代谢活性。

黄芪总皂苷对H_2O_2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的研究黄芪总皂苷(ASTs)对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用及相关调控蛋白Hsp-70、Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响。方法 (1)常规方法培养大鼠乳鼠心肌细胞,分为正常对照组、模型组及黄芪总皂苷4个剂量组(20,40,80,100 mg.L-1),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察黄芪总皂苷不同浓度对H2O2损伤心肌细胞存活率的影响;(2)乳鼠心肌细胞培养后分为正常对照组、模型组、黄芪总皂苷(100 mg.L-1)预处理组,细胞免疫组化法和免疫印迹法(Western-blotting)分别检测Bcl-2、Bax、Hsp-70、Caspase-3的表达。结果 (1)各黄芪总皂苷各组与模型组比较,细胞存活率明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且与黄芪总皂苷呈剂量依赖性;(2)与正常对照组比较,模型组Bcl-2、Hsp-70有少量表达,Bax、Caspase-3表达明显增多,黄芪总皂苷(100 mg.L-1)组与模型组比较,明显促进Bcl-2、Hsp-70的表达,降低Bax、Caspase-3的表达。结论黄芪总皂苷对心肌细胞具有良好的抗氧化保护作用,且呈剂量依赖性,其作用机制可能是通过上调Bcl-2、Hsp-70及下调Bax、Caspase-3的表达来实现。

rhEGF促进人结膜上皮细胞增殖的实验研究

目的:探讨rhEGF（recombinant human epidermal growth factor）促进培养人结膜上皮细胞增殖的作用及最佳有效浓度,为提高眼表重建术后成功率寻找有效的治疗手段。方法:在传代人结膜上皮细胞中分别加入1μg/ml～100μg/ml浓度的rhEGF,于加药后第24、48、72、96h分别采用MTT法得出光吸收值以测定活性细胞数。结果:24h EGF各浓度组与对照组光吸收值无明显差异。48h50μg/ml、20μg/ml、10μg/mlEGF组光吸收值明显高于对照组,72h除 100μg/mlEGF组外,其余EGF各组均明显高于对照组。96h EGF各浓度组均明显高于对照组,100μg/ml组与其余EGF浓度组有显著性差异。结论:EGF对结膜上皮的增殖有明显促进作用,浓度为 10～50μg/ml可以获得较好的效果。眼科学报2001;17:118～121。

全冠修复材料对人牙龈成纤维细胞的毒性

目的:观察镍铬合金、金合金、铸造陶瓷对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast cells,HGFC)的毒性。方法:制备镍铬合金、金合金、铸造陶瓷的细胞培养基浸提液,采用四唑盐比色分析法(methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT法)测定材料对HGFC生长的影响;在材料周围接种HGFC,观察细胞的生长情况。采用Stata9.1软件对实验结果进行析因分析。结果:金合金的细胞相对增殖率为1.016、1.014、0.824、0.796,镍铬合金的细胞相对增殖率为1.028、1.079、0.903、0.809,铸造陶瓷的细胞相对增殖率为1.018、1.030、0.924、0.818。金合金和镍铬合金对细胞相对增殖率的影响有统计学差异(P=0.021),但金合金与铸造陶瓷、镍铬合金与铸造陶瓷之间无统计学差异(P>0.05)。金合金、镍铬合金和铸造陶瓷的细胞毒性级别(cytotoxical grade,CG)为0-1级。倒置显微镜观察3种材料周围均有细胞生长,镍铬合金周围有细胞坏死带产生。结论:镍铬合金与HGFC直接接触引起的细胞损伤比析出的金属离子对细胞损伤大。金合金和铸造陶瓷具有良好的生物相容性。

光敏化姜黄素的细胞毒理学检验

探究基于小鼠成纤维L929细胞的光敏化姜黄素的细胞毒理学。采用倒置显微镜观察细胞形态;四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测L929细胞的相对增殖率,按通用标准评价细胞毒性;DNA片段化分析及Hoechst细胞核染色法检测细胞凋亡状况。结果表明:经不同浓度的光敏化姜黄素(5、10、20μmol/L)处理后,L929细胞生长良好,呈梭形或不规则形状,与对照组相比均无明显差异;毒性级别为"0"或"1",即无细胞毒性;在琼脂糖凝胶电泳图上未见"阶梯状"的条带出现,细胞核染色后也呈现正常的蓝色,即光敏化姜黄素不会引起L929细胞凋亡,对L929细胞没有毒性。

镍冶炼烟尘对中国仓鼠肺细胞毒性作用的实验研究

目的 观察镍冶炼烟尘对中国仓鼠肺细胞 (CHL)的毒性作用。方法 以我国某镍冶炼厂电炉烟道尘为受试物 ,采用噻唑蓝 (MTT)比色法检测CHL细胞活性。结果 不同浓度下的镍冶炼烟尘 ( 6 2 5、 12 5 0、 2 5 0 0、 5 0 0 0、10 0 0 0 μg/ml)作用一定时间后 ,CHL细胞存活率下降 ,呈现出时间 剂量 反应关系。接触受试物 3 6h ,细胞生长半数抑制浓度IC50 为 2 1 3 6μg/ml。同时镜下观察细胞形态也发生改变。 结论 镍冶炼烟尘可以抑制CHL细胞生长 。

刀豆蛋白A条件化培养基对体外培养的兔角膜内皮细胞生长的影响

目的研究刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)条件化培养基对体外培养的兔角膜内皮细胞(rabbit corneal endothelial cells,RCECs)生长的影响。方法采用揭取后弹力层及内皮细胞联合组织块法进行RCECs的体外原代培养,分别用含有体积分数为5%、10%、15%、20%ConA的活化大鼠脾细胞条件上清液的RPMI1640培养基进行RCECs原代培养,并用含10%(体积分数)胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的RPMI1640培养基作为对照。神经烯醇化酶免疫组织化学染色法进行细胞鉴定;噻唑蓝比色法观察各组RCECs生长的状况;SPSS11.0One-way ANOVA及LSD检验进行统计分析。结果成功进行了RCECs的体外培养,培养细胞内神经烯醇化酶阳性表达。ConA条件化培养基各组细胞增殖均高于对照组(P<0.001),且10%、15%ConA条件化培养基组的RCECs细胞数量明显高于其他各实验组(P<0.001)。结论ConA条件化培养基具有促进RCECs生长的作用,可作为培养辅佐剂。

尼古丁对人牙龈成纤维细胞的增殖及IL-8表达的影响

目的：探讨尼古丁对体外培养人牙龈成纤维细胞（HGFs）的增殖及其分泌IL-8的影响。方法：组织块法原代培养HGFs，MTT法观察10、50、100、250、500、1000、2000μg/mL不同浓度尼古丁对其增殖的影响；取第4代HGFs分别与10、50、100、250、500、1000μg/mL不同浓度尼古丁共同培养72 h，用酶联免疫吸附（ELISA）法检测HGFs培养上清中IL-8的含量。结果：50～2000μg/mL不同浓度的尼古丁均能明显抑制HGFs的增殖（P＜0．05），且呈浓度依赖性；10～500μg/mL尼古丁均能明显促进HGFs合成IL-8（P＜0．05），其中以100μg/mL浓度组的促进作用最强。结论：一定浓度尼古丁可抑制HGFs的增殖并促进其合成IL-8，提示尼古丁可能通过调控IL-8的表达而造成对牙周组织的破坏。

甘肃猫儿眼提取物对人LGC-7910细胞毒性作用及机制

给予人LGC-7910细胞甘肃猫儿眼提取物体外培养,采用流式细胞仪、MTT法对甘肃猫儿眼提取物细胞毒性活性进行了检测.结果为,分别给予LGC-7910细胞甘肃猫儿眼提取物10.0、1.0和0.1μg/mL 48 h后测定,对细胞增殖的抑制率分别为82.4%、54.9%和33%,半数抑制浓度(IC50)为0.53μg/mL;凋亡率分别为32.1%、25.6%和16.3%.

稳定高表达人野生型DNApolβ食管癌细胞Ec9706的生物学特征

目的:建立稳定高表达人野生型DNA聚合酶beta(polβ)的食管癌细胞系Ec9706,并对该细胞系的生物学特征进行分析。方法:脂质体转染法将人野生型polβ重组绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-AC3转染入Ec9706细胞,荧光显微镜观察转染效果,经G418筛选得到稳定转染细胞系。RT-PCR方法检测转染细胞polβmRNA的表达水平,绘制生长曲线,软琼脂实验测细胞克隆形成率,MTT法测转染前后细胞对顺铂的敏感性。结果:荧光显微镜下转染细胞荧光强,转染效率高,RT-PCR结果表明转染细胞的polβ表达较空载体转染细胞、对照细胞增加。转染前后细胞生长速度接近,转染细胞周期分布发生改变,多被阻滞在S期,在软琼脂实验中克隆形成率增加,对顺铂的敏感性降低。结论:成功建立了稳定高表达人野生型polβ的Ec9706细胞系,polβ的高表达与细胞的细胞周期分布、恶性增殖能力及耐药性有一定关系。

猫儿眼植物酸抗肿瘤作用的实验研究

采用气-质联用仪、流式细胞仪、MTT法和台盼蓝法对猫儿眼植物酸组分及其抗肿瘤活性进行实验研究.结果为,分别给予SGC-7901细胞猫儿眼植物酸10.0μg/mL、1.0μg/mL和0.1μg/mL48h后测定,对肿瘤细胞的抑制率分别为73.5%、52.9%和26.5%,半数抑制浓度(IC50)为0.909μg/mL;对细胞增殖抑制率分别为70.8%、58.7%和30.9%,IC50为0.552μg/mL;凋亡率分别为26.8%、22.6%和12.4%.

和胃降逆胶囊通过PI3K/AKT信号通路调控人胃癌AGS细胞增殖与凋亡机制研究

目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白组,分别干预AGS细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、促凋亡基因(Bax)、抑细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Cyclin D1和p21 mRNA表达情况。结果:随着和胃降逆胶囊含药血清作用时间的延长,各药物组细胞活力逐渐降低,同剂量组24 h、48 h、72 h比较差异有统计学意义(P<0.05),48 h与72 h比较差异无统计学意义。在同一干预时间点,细胞活力随着药物血清浓度的增加而降低。各组含药血清处理AGS细胞48 h后,G0/G1期细胞比值与空白组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白及抑制凋亡蛋白Bcl-2和Cyclin D1的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡蛋白Bax和p21的表达(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中抑制凋亡基因Bcl-2和Cyclin D1 mRNA的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡基因Bax和p21 mRNA的表达(P<0.05),且呈现出浓度相关性。结论:和胃降逆胶囊通过抑制PI3K/AKT通路的活化,调控下游周期阻滞相关基因和凋亡相关基因的表达,进而抑制人胃癌AGS细胞增殖并促进AGS细胞凋亡。

不同来源生脉注射液体外细胞毒性的比较及原因分析

目的:比较不同来源生脉注射液体外细胞毒性的差别,寻找造成差别的主要原因。方法:将不同来源生脉注射液原液以及不同浓度的稀释液分别与L929细胞接触培养,通过倒置相差显微镜观察其形态,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)量化细胞毒性,计算相对增殖率,并进行细胞毒性评价。结果:8个厂家生产的生脉注射液原液的细胞毒性分级均为4级,为重度毒性。样品A的EC50最高,说明其细胞毒性较其他样品高。在生脉注射液所添加的辅料中,当聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)浓度为处方量的0.5%时,其细胞毒性分级为3～4级。将吐温80稀释至0.062 5%时,其细胞毒性分级为1级,基本无细胞毒性。8个厂家生产的生脉注射液原液中吐温80的含量不一致,有些厂家的含量大于0.5%。结论:不同厂家生产的生脉注射液由于原料产地、生产条件不同等原因,其细胞毒性存在较大的差别。吐温80作为中药注射剂的辅料,在高于0.062 5%的浓度下存在细胞毒性。生脉注射液中吐温80的含量与细胞毒性可能呈一定的正相关性。

苯扎氯铵对人结膜上皮细胞毒性的研究

目的探讨苯扎氯铵（BAC）对无血清培养法培养的人结膜上皮细胞的细胞毒性。方法采用无血清培养的3-5代人结膜上皮细胞，将不同浓度的BAC（0．01％，0．005％，0．001％，0．0005％，0．0001％）单次作用于结膜上皮细胞15min，分别于处理细胞后6，12，24，48hMTT法检测细胞活力，于处理细胞后48h固定，扫描电镜观察拍照。结果自BAC处理后6h起，与对照组相比，各浓度BAC均使细胞活力下降（P〈0．01）。经过48小时的恢复期，细胞活力未见恢复。随BAC浓度增高，细胞表面微绒毛消失，细胞出现不同程度收缩至脱落至大部分溶解坏死。结论BAC对于培养的人结膜上皮细胞具有细胞毒性，其毒性作用呈剂量依赖性。

促细胞生长包被丝素蛋白的制备

分别以聚乙二醇、明胶、海藻酸钙、壳聚糖/聚乙二醇和多聚L-赖氨五种材料作为包被物用不同方法对丝素蛋白进行预处理,制备5种丝素蛋白包被支架,并探讨它们对HeLa,293T和B16三种细胞生长的促进效果.结果表明,HeLa,293T和B16分别适合多聚L-赖氨酸、壳聚糖/聚乙二醇和海藻酸钙的丝素蛋白包被方法.在包被支架上不同细胞均呈扁平状、集落性附着在丝素蛋白纤维上.本实验获得的丝素蛋白5种包被支架增强了丝素蛋白的弹性、柔软性和黏附性,提高了丝素蛋白的可操作性,且对细胞具有较好的生物相容性和明显的促进生长作用.

镁离子对滋养细胞在不同培养环境中生存能力的影响

目的探讨氧含量变化对滋养细胞生存能力的影响及抗氧化剂镁离子(Mg2+)对滋养细胞的保护作用。方法 2005年4月至2006年4月,获取在本院接受治疗的20例妊娠8～10孕周健康妇女的无菌绒毛组织,通过滋养细胞原代培养后,再进行不同方式的培养。按照不同培养方式,将滋养细胞分为对照组、缺氧组、缺氧后复氧组及Mg2+缺氧后复氧组(Mg2+0.6mmol/L)。以四甲基偶氮唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)盐比色法(MTT法)测定以上4组滋养细胞的生存能力水平(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准)。结果①按照不同培养方式培养(24～48)h时,MTT法测定对照组、缺氧组滋养细胞的生存能力水平,两组比较,差异有显著意义(P<0.05),72h时,差异无显著意义(P>0.05);②缺氧后复氧组和对照组、缺氧组MTT法测定的滋养细胞的生存能力水平比较,差异有显著意义(P<0.05);③Mg2+缺氧后复氧组MTT值高于缺氧后复氧组,差异有显著意义(P<0.05)。结论缺氧初期可导致滋养细胞生存能力增强,缺氧后复氧环境下滋养细胞生存能力降低,Mg2+对缺氧后复氧细胞有保护作用。

伊马替尼衍生物的合成及细胞毒活性研究

以3-乙酰基嘧啶、2-甲基-5-硝基苯胺为起始原料,经加成、缩合、环化、还原得到中间体N-(2-甲基-5-氨基苯基)-4-(3-吡啶基)嘧啶-2-胺(6),再与(L)-N-酰化-氨基酸缩合得到14个伊马替尼氨基酸衍生物7a^7n.目标化合物结构经过IR,1H NMR,13C NMR,HRMS等确证.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法考察了目标化合物对人白血病细胞(K562)、人肺癌细胞(A549)、人肝癌细胞(Hep G-2)体外抑制活性测试.结果显示化合物7a,7d,7e,7i,7j,7k,7l,7n体外抑制活性较高,与对照品伊马替尼相近.

不同来源甲硫氨酸维B_1注射剂体外细胞毒性的比较与分析

目的:比较不同来源甲硫氨酸维B_1注射剂体外细胞毒性的差别并寻找差别形成的主要原因。方法:将不同来源甲硫氨酸维B_1注射剂不同浓度的稀释液与小鼠成纤维细胞L-929接触培养,通过倒置相差显微镜观察细胞形态,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)量化细胞毒性,计算相对增殖率,并进行细胞毒性评价。建立甲硫氨酸维B_1注射剂中枸橼酸含量的高效液相色谱检测方法,考察枸橼酸含量与制剂细胞毒性的相关性。结果:7个生产厂家的甲硫氨酸维B_1注射液细胞毒性无明显差别。12个生产厂家的注射用甲硫氨酸维B_1中有11个厂家的样品不同浓度组对L-929的细胞毒性级别为1级或2级。但J厂家的注射用甲硫氨酸维B_1样品(20 mg·mL^(-1)和10 mg·mL^(-1))对L-929的细胞毒性级别为4级,表现为重度毒性。枸橼酸质量浓度3,1.5,0.75 mg·mL^(-1)的相对增殖率分别为7%、45%、74%,而对应的含等量枸橼酸的制剂浓度(以甲硫氨酸计)20,10,5 mg·mL^(-1)的相对增殖率分别为6%、28%、53%,细胞毒性试验结果吻合。结论:不同厂家生产的甲硫氨酸维B_1注射剂由于处方工艺不同等,其细胞毒性存在差别。枸橼酸作为注射剂的常用辅料,在高于0.188 mg·mL^(-1)的浓度下存在细胞毒性,枸橼酸含量与细胞毒性呈正相关性,J厂家样品的重度细胞毒性可能主要源于过高浓度的辅料枸橼酸。建议生产厂家降低枸橼酸添加量,以减少制剂的细胞毒性,提高药品的安全性。