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一株盐单胞菌属(Halomonas)细菌趋化因子受体基因挖掘及相关蛋白序列分析
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作者 徐爽 李晨 +4 位作者 姜嘉琳 谢晓晨 王博 霍忠明 方蕾 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期203-214,共12页
为了解一株长牡蛎(Crassostrea gigas)致病性盐单胞菌(Halomonas sp.)7T的趋化性,采用毛细管法研究其趋化行为,并基于全基因组数据,利用KEGG Pathway分析其趋化信号通路,通过与同源物种比对分析趋化因子受体种类,进一步挖掘甲基受体趋... 为了解一株长牡蛎(Crassostrea gigas)致病性盐单胞菌(Halomonas sp.)7T的趋化性,采用毛细管法研究其趋化行为,并基于全基因组数据,利用KEGG Pathway分析其趋化信号通路,通过与同源物种比对分析趋化因子受体种类,进一步挖掘甲基受体趋化蛋白(methyl-accepting chemotaxis proteins,MCPs)序列,再结合MeMe数据库和TMHMM分析MCPs结构。结果表明:Halomonas sp.7T具备趋化行为,其全基因组含有完整趋化信号通路,共有22个基因编码MCPs,涵盖5种常见趋化因子受体;22个MCPs均含有信号转导结构域,其中,19个含有跨膜结构域,3个不含跨膜结构域;基于信号转导结构域内七肽单位保守序列和存在的对称插入缺失对这22个MCPs进行分类,发现17个为36H型,1个为40H型,其余4个与已知分类均不匹配;跨膜结构分布特征和疏水性分析发现,这22个MCPs中有20个符合拓扑结构,其中ClassⅠ型、ClassⅡ型、ClassⅢ型、ClassⅣ型分别为10、4、3、3个,另有2个MCPs不符合拓扑结构。研究表明,长牡蛎致病性盐单胞菌7T具备趋化性,其基因组存在完整趋化信号通路,有22个基因编码MCPs,这些MCPs具有独特的结构,可能参与介导与细菌生存和环境胁迫响应相关的趋化行为。 展开更多
关键词 盐单胞菌 趋化性 趋化因子受体基因 甲基受体趋化蛋白 长牡蛎
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Changes in proteins related to early nerve repair in a rat model of sciatic nerve injury 被引量:5
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作者 Yu-Song Yuan Fei Yu +3 位作者 Ya-Jun Zhang Su-Ping Niu Hai-Lin Xu Yu-Hui Kou 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2021年第8期1622-1627,共6页
Peripheral nerves have a limited capacity for self-repair and those that are severely damaged or have significant defects are challenging to repair. Investigating the pathophysiology of peripheral nerve repair is impo... Peripheral nerves have a limited capacity for self-repair and those that are severely damaged or have significant defects are challenging to repair. Investigating the pathophysiology of peripheral nerve repair is important for the clinical treatment of peripheral nerve repair and regeneration. In this study, rat models of right sciatic nerve injury were established by a clamping method. Protein chip assay was performed to quantify the levels of neurotrophic, inflammation-related, chemotaxis-related and cell generation-related factors in the sciatic nerve within 7 days after injury. The results revealed that the expression levels of neurotrophic factors(ciliary neurotrophic factor) and inflammationrelated factors(intercellular cell adhesion molecule-1, interferon γ, interleukin-1α, interleukin-2, interleukin-4, interleukin-6, monocyte chemoattractant protein-1, prolactin R, receptor of advanced glycation end products and tumor necrosis factor-α), chemotaxis-related factors(cytokine-induced neutrophil chemoattractant-1, L-selectin and platelet-derived growth factor-AA) and cell generation-related factors(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor) followed different trajectories. These findings will help clarify the pathophysiology of sciatic nerve injury repair and develop clinical treatments of peripheral nerve injury. This study was approved by the Ethics Committee of Peking University People's Hospital of China(approval No. 2015-50) on December 9, 2015. 展开更多
关键词 animal model cell generation chemotaxis clamp injury INFLAMMATION INJURY neurotrophic factor peripheral nerve protein array repair sciatic nerve Wallerian degeneration
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补阳还五汤通过调控PI3K/Akt、JAK2/STAT3信号促进BMSC趋化迁移对外伤性脊髓损伤大鼠神经元活性及认知功能的影响 被引量:4
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作者 宋颖军 李旭 +1 位作者 刘小舟 张国福 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第17期4206-4213,共8页
目的研究补阳还五汤通过调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、内源性酪氨酸激酶(JAK)2/信号传导和转录启动因子(STAT)3信号促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)趋化迁移对外伤性脊髓损伤大鼠的神经元活性及认知功能的影响。方法选取健... 目的研究补阳还五汤通过调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、内源性酪氨酸激酶(JAK)2/信号传导和转录启动因子(STAT)3信号促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)趋化迁移对外伤性脊髓损伤大鼠的神经元活性及认知功能的影响。方法选取健康大鼠53只,随机分为健康组(健康大鼠常规饲养)、损伤组(建立脊髓损伤模型)、干预组(补阳还五汤治疗)、对照组(甲泼尼龙治疗),每组12只,剩余5只大鼠用于补阳还五汤含药血清制备。流式细胞术鉴定BMSCs细胞。Transwell小室法测大鼠BMSCs迁移。高架十字迷宫和Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能。苏木素-伊红(HE)染色检测脊髓组织病理形态。TUNEL测脊髓组织神经细胞凋亡。免疫组化检测p-JAK2、p-STAT3。Western印迹测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt。结果传代后的培养细胞呈旋窝状或放射状贴壁生长,细胞多呈星形、梭形或三角状,培养3代后,细胞贴壁加快、形态均一,呈旋窝状或单层放射状生长。培养细胞表面抗原CD29、CD90为阳性,CD31、CD45为阴性,提示其为BMSCs细胞。与健康组相比,损伤组总路程、进入开臂次数、穿越平台次数显著降低,不同时间的潜伏期显著升高(P<0.05)。与损伤组相比,干预组与对照组总路程、进入开臂次数、穿越平台次数显著升高,不同时间的潜伏期显著降低(P<0.05)。干预组与对照组各指标对比无统计学差异(P>0.05)。健康组脊髓组织结构完整。损伤组脊髓组织疏松水肿,有细胞空泡变性产生。相较于损伤组,干预组与对照组大鼠脊髓组织病理形态有所改善。与健康组相比,损伤组BMSCs、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt显著降低,神经细胞凋亡率、p-JAK2、p-STAT3显著升高(P<0.05)。与损伤组相比,干预组BMSCs、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt显著升高,神经细胞凋亡率、p-JAK2、p-STAT3显著降低(P<0.05)。干预组与对照组各指标水平无统计学差异(P>0.05)。结论补阳还五汤通过激活PI3K/Akt通路抑制JAK2/STAT3信号通路的激活,促进BMSCs的迁移,减轻神经细胞的凋亡,起到神经保护的作用,从而改善脊髓损伤大鼠的认知功能。 展开更多
关键词 补阳还五汤 磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt) 内源性酪氨酸激酶(JAK)2/信号传导和转录启动因子(STAT)3 骨髓间充质干细胞(BMSCs)趋化迁移 神经元活性 认知功能
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高迁移率族蛋白B1对小鼠腹腔巨噬细胞免疫活性的影响 被引量:6
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作者 刘峰 姚咏明 +2 位作者 董宁 徐姗 盛志勇 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期420-422,共3页
目的观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对离体小鼠腹腔巨噬细胞免疫活性的影响及其意义。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞,经不同浓度(1、10、100、1000ng/ml)的HMGB1刺激,以未加HMGB1的培养细胞为对照组,于不同时间点(6、12、24、48、72h)观察巨... 目的观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对离体小鼠腹腔巨噬细胞免疫活性的影响及其意义。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞,经不同浓度(1、10、100、1000ng/ml)的HMGB1刺激,以未加HMGB1的培养细胞为对照组,于不同时间点(6、12、24、48、72h)观察巨噬细胞摄取中性红能力,噻唑蓝法测定其对L1210细胞的杀伤作用,应用Transwell小室趋化装置观察趋化活性变化,并采用流式细胞术检测细胞表面I-Ak抗原表达的变化。结果1、10、100ng/ml的HMGB1可使巨噬细胞的吞噬功能、杀伤活性、趋化活性及抗原呈递能力明显提高,其中100ng/ml时的作用最强,与对照组比较差异显著(P<0.01);100ng/ml的HMGB1刺激48h后,对细胞吞噬功能、杀伤活性及趋化活性的影响达高峰(P<0.01)。结论一定浓度的HMGB1可增强巨噬细胞的免疫功能。 展开更多
关键词 HMGB1蛋白 抗原呈递 趋化作用 免疫活性 巨噬细胞
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人牙周膜干细胞的分离鉴定及骨形态发生蛋白-2对其趋化效应的研究 被引量:6
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作者 杜令倩 杨丕山 +1 位作者 赵宁 葛少华 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期13-17,共5页
目的研究人牙周膜干细胞(PDLSCs)对骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的趋化反应。方法通过有限稀释法分离、培养人PDLSCs,利用免疫荧光染色检测人PDLSCs波形丝蛋白及干细胞表面标志物STRO-1的表达,检测人PDLSCs多向分化能力,通过克隆形成实验和5... 目的研究人牙周膜干细胞(PDLSCs)对骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的趋化反应。方法通过有限稀释法分离、培养人PDLSCs,利用免疫荧光染色检测人PDLSCs波形丝蛋白及干细胞表面标志物STRO-1的表达,检测人PDLSCs多向分化能力,通过克隆形成实验和5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)共培养的方法检测其干细胞特性。利用24孔的Transwell细胞培养室来检测人PDLSCs对BMP-2的趋化反应,光镜下计迁移至滤膜下侧面的不同视野的细胞数。结果人PDLSCs抗波形丝蛋白染色阳性,表达干细胞表面标志物STRO-1,体外诱导培养的人PDLSCs能够向成骨细胞和成脂细胞分化,具有较高的自我更新能力,并在体外呈克隆状生长。在100、200 ng.mL-1 BMP-2实验组,Transwell细胞培养室中迁移的细胞数目显著多于空白对照组(P<0.01)。结论 BMP-2对人PDLSCs有趋化效应。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白-2 牙周膜干细胞 趋化作用
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HMGB1细胞因子作用研究进展 被引量:9
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作者 王焕亮 周长青 +1 位作者 王春玲 张丽 《医学综述》 2009年第7期963-966,共4页
高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一组高度保守的非组织核蛋白,存在于多种真核细胞的细胞核中。生理状态下HMGB1发挥着核结合蛋白的作用。一旦释放进入细胞间隙,则表现出晚期炎性因子作用。新近的研究显示,HMGB1还具有损伤信号园子、细... 高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一组高度保守的非组织核蛋白,存在于多种真核细胞的细胞核中。生理状态下HMGB1发挥着核结合蛋白的作用。一旦释放进入细胞间隙,则表现出晚期炎性因子作用。新近的研究显示,HMGB1还具有损伤信号园子、细胞及干细胞趋化吸附因子作用。由于晚期糖基化末端产物受体的广泛存在,HMGB1在多种疾病及组织器官损伤、修复过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 高迁移率族蛋白B1 细胞因子 趋化作用
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单核细胞趋化蛋白-1对高血压心肌纤维化的作用及其与转化生长因子-β的关系 被引量:8
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作者 王斌 赵连友 +9 位作者 郑强荪 薛玉生 李爱国 姜艳华 李言川 于心亚 尚福军 陈军红 杨静霄 陈永清 《心脏杂志》 CAS 2004年第5期417-420,共4页
目的 :研究单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)和转化生长因子 β(TGF β)对高血压心肌纤维化的影响 ,探讨炎性反应在高血压心肌纤维化发生发展中的作用。方法 :用左旋硝基精氨酸甲酯 (L NAME)喂饲建立高血压模型。用组织学的方法评估心肌纤维... 目的 :研究单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)和转化生长因子 β(TGF β)对高血压心肌纤维化的影响 ,探讨炎性反应在高血压心肌纤维化发生发展中的作用。方法 :用左旋硝基精氨酸甲酯 (L NAME)喂饲建立高血压模型。用组织学的方法评估心肌纤维化的程度和RT PCR测定大鼠心脏组织内MCP 1与TGF β的mRNA水平。 结果 :①慢性阻断一氧化氮合酶 (NOS)活性显著升高大鼠尾动脉血压。②慢性阻断NOS活性可引起心脏间质纤维化和血管周围纤维化。 7d组、14d组和 2 8d组的胶原容积分数 (CVF)与对照组比较均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;7d组、14d组和 2 8d组的血管周围胶原面积 (PVCA)与对照组比较均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。③MCP 1mRNA水平在给药后第 3d有明显升高 ,随后逐渐下降。 3d组、7d组 ,14d组和 2 8d组的的MCP 1mRNA的水平与对照组比较均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。④TGF βmRNA水平在慢性阻断NOS后 7d显著升高 ,随后维持于较高水平直至第 2 8d。 7d组、14d组和 2 8d组TGF βmRNA的水平与对照组比较均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,3d组TGF βmRNA的水平与对照组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :①MCP 1和TGF β均参与高血压心肌纤维化的发生发展。②MCP 1可能是高血压心肌纤维化的启动因素 ,TGF β可能对? 展开更多
关键词 单核细胞趋化蛋白=1 转化生长因子-Β 心肌纤维化 大鼠
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麝香对颅骨骨缺损模型大鼠SCF和MCP-1 mRNA表达的影响及意义 被引量:2
8
作者 李应福 李宁 +3 位作者 谢兴文 宋敏 徐世红 蒋国鹏 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期286-290,356,共6页
目的分析干细胞因子(SCF)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)在颅骨骨缺损模型大鼠中的作用及麝香对二者表达的影响。方法通过颅骨钻建立颅骨骨缺损模型,将模型大鼠随机分为给药组与模型组,再将给药组和模型组随机分为3小组,给药组灌服麝香,模... 目的分析干细胞因子(SCF)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)在颅骨骨缺损模型大鼠中的作用及麝香对二者表达的影响。方法通过颅骨钻建立颅骨骨缺损模型,将模型大鼠随机分为给药组与模型组,再将给药组和模型组随机分为3小组,给药组灌服麝香,模型组灌服生理盐水,分别在干预后7 d、14 d、28 d通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中SCF表达及采用实时荧光定量PCR法检测颅骨骨缺损处MCP-1 mRNA含量的表达变化。结果与模型组比较,给药组第14天SCF表达最低,且无显著性,第7天和第28天其表达均比第14天升高,这两时间段与模型组比较差异均有统计学意义(P=0.0002、0.0025),但是第7天SCF表达增加更加显著;给药组在第7天MCP-1 mRNA表达水平最高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),第14天和第28天其表达持续降低,与模型组比较差异均无统计学意义(P=0.0633、0.1597)。结论SCF、MCP-1在颅骨骨缺损修复愈合过程中可能起重要作用,麝香通过增加模型大鼠血清中SCF的表达和颅骨骨缺损组织MCP-1 mRNA的表达,间接反映出骨缺损修复愈合机制可能与增加SCF和MCP-1 mRNA表达有关,麝香在加速骨缺损修复与愈合微环境中起着重要作用。 展开更多
关键词 干细胞因子 单核细胞趋化蛋白1 麝香 骨缺损 动物实验
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哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞神经趋化及气管平滑肌毒蕈碱受体、主要碱性蛋白的异常表达 被引量:4
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作者 史亮 罗雅玲 陈剑莉 《实用医学杂志》 CAS 2008年第5期726-729,共4页
目的:研究哮喘豚鼠气管平滑肌毒蕈碱受体(MR)mRNA及嗜酸性粒细胞主要碱性蛋白(major basic protein,MBP)mRNA的表达及嗜酸性粒细胞(Eos)向迷走神经的趋化作用。方法:20只健康豚鼠随机分为正常组和哮喘组。哮喘组制作成哮喘豚鼠模型,再... 目的:研究哮喘豚鼠气管平滑肌毒蕈碱受体(MR)mRNA及嗜酸性粒细胞主要碱性蛋白(major basic protein,MBP)mRNA的表达及嗜酸性粒细胞(Eos)向迷走神经的趋化作用。方法:20只健康豚鼠随机分为正常组和哮喘组。哮喘组制作成哮喘豚鼠模型,再激发用药。测定支气管肺泡灌洗液(BALF)的细胞总数及细胞分类,观察肺组织的病理改变,乙酰胆碱酯酶及HE染色观察Eos神经趋化情况,进行气管平滑肌的M2R mRNA、M3RmRNA、MBP mRNART-PCR半定量分析。结果:两组BALF的Eos计数,哮喘组[(29.2±7.3)%]与正常组[(2.8±3.0)%]比较差异有显著性(P<0.01)。哮喘组肺组织充血水肿明显,Eos肺组织浸润较正常组明显,Eos具有明显的神经趋化现象。气管平滑肌的MR mRNA、MBP mRNART-PCR半定量分析显示,M2RmRNA,哮喘组(1.26±0.24)与正常组(0.50±0.16)比较差异有显著性(P<0.01);M3R mRNA,哮喘组(0.12±0.055)与正常组(0.42±0.062)比较差异有显著性(P<0.01);MBP mRNA,哮喘组(1.46±0.208)与正常组(0.25±0.089)比较差异有显著性(P<0.01)。结论:哮喘豚鼠Eos具有迷走神经趋化现象,M2R表达增加,M3R表达减少,MBP表达增加。 展开更多
关键词 哮喘 受体 毒蕈碱 嗜酸性粒细胞 主要碱性蛋白 神经趋化
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蛋白激酶C对SDF-1诱导巨噬细胞趋化及血管内皮生长因子转录的调节作用 被引量:2
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作者 李鹏程 徐茜 胡燕华 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期93-96,共4页
目的探讨基质细胞衍生因子(SDF-1)对体外培养的大鼠巨噬细胞的趋化作用和对培养的巨噬细胞株U937细胞血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达的作用,以及蛋白激酶C(PKC)对其的影响。方法用Boyden小室法观察人SDF-1对培养的大鼠脾巨噬细胞的... 目的探讨基质细胞衍生因子(SDF-1)对体外培养的大鼠巨噬细胞的趋化作用和对培养的巨噬细胞株U937细胞血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达的作用,以及蛋白激酶C(PKC)对其的影响。方法用Boyden小室法观察人SDF-1对培养的大鼠脾巨噬细胞的趋化效应,以及蛋白激酶C抑制剂氯化白屈菜季铵碱对其趋化反应的影响;用RT-PCR方法观察浓度为100ng/ml的SDF-1作用12h后人U937细胞VEGF的表达以及氯化白屈菜季铵碱对其作用的影响。结果SDF-1对体外培养的大鼠巨噬细胞表现出剂量依赖的趋化作用,100ng/ml时作用最强,趋化细胞数为(398±159)个/视野;不同浓度的氯化白屈菜季铵碱预处理后均能抑制巨噬细胞的趋化反应,10μmol/L时抑制作用最强,SDF-1的趋化细胞数下降至(68±31)个/视野。SDF-1能使U937细胞VEGF的mRNA转录水平提高20%;当氯化白屈菜季铵碱预处理后,此促进效应受到明显抑制,氯化白屈菜季铵碱浓度为10μmol/L时作用最强,仅可检测到微量VEGF。结论SDF-1通过其受体CXCR4实现对巨噬细胞的趋化作用和促VEGF表达的作用,PKC参与调控该过程。 展开更多
关键词 蛋白激酶C 巨噬细胞 基质细胞衍生因子-1 趋化作用 血管内皮生长因子
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肝螺杆菌甲基基团接受趋化信号转导蛋白的克隆表达及纯化 被引量:1
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作者 牛凌云 夏国盛 +4 位作者 李菁 郭蒸 秦和平 王继德 白杨 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2009年第10期930-933,共4页
目的克隆肝螺杆菌(H.hepaticus)甲基基团接受趋化信号转导蛋白(MCP)基因,制备MCP重组蛋白,为以后检测我国人群肝螺杆菌感染率提供实验基础。方法利用PCR方法扩增目的基因片段,连接至原核表达载体pET22b(+),构建MCP的原核表达质粒pET22b+... 目的克隆肝螺杆菌(H.hepaticus)甲基基团接受趋化信号转导蛋白(MCP)基因,制备MCP重组蛋白,为以后检测我国人群肝螺杆菌感染率提供实验基础。方法利用PCR方法扩增目的基因片段,连接至原核表达载体pET22b(+),构建MCP的原核表达质粒pET22b+/MCP。将质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析系统纯化重组蛋白。结果构建了原核表达质粒pET22b+/MCP,含有该质粒的大肠杆菌经1 mmol/L IPTG诱导4 h后表达一相对分子质量约14 kD的重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析系统纯化获得了MCP的纯化重组蛋白rhMCP。结论获得了肝螺杆菌MCP的纯化重组蛋白,为进一步利用血清学方法调查我国人群肝螺杆菌感染率提供可能。 展开更多
关键词 肝螺杆菌 甲基基团接受趋化信号转导蛋白 克隆 重组蛋白
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人类新细胞因子CKLFSF2羧基端蛋白在大肠杆菌中的表达纯化、抗体制备与鉴定 被引量:1
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作者 钟英成 石爽 +5 位作者 张颖妹 莫晓宁 刘大振 宋泉声 韩文玲 王应 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第1期93-99,共7页
哺乳动物细胞表达的人类新细胞因子——趋化素样因子超家族成员-2(CKLFSF2)存在分泌形式,位于CKLFSF2分子的羧基端,具有细胞趋化作用.为进一步研究CKLFSF2羧基端蛋白的结构和生物学功能及抗体制备,构建了GST-CKLFSF2C51原核表达质粒,经... 哺乳动物细胞表达的人类新细胞因子——趋化素样因子超家族成员-2(CKLFSF2)存在分泌形式,位于CKLFSF2分子的羧基端,具有细胞趋化作用.为进一步研究CKLFSF2羧基端蛋白的结构和生物学功能及抗体制备,构建了GST-CKLFSF2C51原核表达质粒,经原核表达、亲和层析、凝胶过滤,获得GST-CKLFSF2C51融合蛋白和CKLFSF2羧基端蛋白(CKLFSF2C51),纯度可达到95%以上.GST-CKLFSF2C51融合蛋白用于制备多克隆抗体,ELISA方法检测抗体效价阳性,蛋白质印迹检测CKLFSF2哺乳动物细胞超表达细胞裂解液,获得特异性条带与预期大小一致.CKLFSF2C51经N端测序,质谱鉴定与预期结果一致,该蛋白质具有对PC-3细胞趋化的活性,并且该活性可被制备的多克隆抗体中和.上述结果表明,原核CKLFSF2羧基端蛋白具有与CKLFSF2真核表达蛋白类似的细胞趋化活性,原核CKLFSF2羧基端蛋白制备的多克隆抗体可用于免疫组织化学、蛋白质印迹检测,并能中和CKLFSF2蛋白的趋化活性作用. 展开更多
关键词 趋化素样因子超家族成员-2 重组蛋白纯化 多克隆抗体 趋化 免疫组织化学 抗体中和作用
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病毒巨噬细胞炎性蛋白与趋化因子受体结合的效应分析 被引量:2
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作者 杨清玲 丁勇兴 +1 位作者 张玉心 连超群 《蚌埠医学院学报》 CAS 2006年第3期226-229,共4页
目的:探讨人疱疹病毒8 K6基因编码的产物病毒巨噬细胞炎性蛋白(viral m acrophage inflamm atory prote in,vM IP)是否具有结合趋化因子受体以及趋化作用。方法:受体配体交联试验检测vM IP与受体结合能力。趋化实验及细胞内钙流检测判断... 目的:探讨人疱疹病毒8 K6基因编码的产物病毒巨噬细胞炎性蛋白(viral m acrophage inflamm atory prote in,vM IP)是否具有结合趋化因子受体以及趋化作用。方法:受体配体交联试验检测vM IP与受体结合能力。趋化实验及细胞内钙流检测判断vM IP的生物学活性。结果:vM IP可与外周血单个核细胞(PBMCs)膜上的趋化因子受体结合,抑制hM IP-1α对PBMC的趋化能力,EC50为3.39 ng/m l。其本身只有较弱的趋化能力。钙流实验证实vM IP轻度升高胞内钙离子浓度,但可明显抑制hM IP-1α所引起的胞内钙离子高峰。结论:重组vM IP与hM IP-1α受体(CCR5)结合后,可有效的阻断人源性趋化因子的结合与信号传导,但其本身对细胞未有明显的激活作用,因此可作为趋化因子受体的天然阻断剂,可用于免疫移植中的排斥反应或H IV-1病毒感染等。 展开更多
关键词 趋化因子 巨噬细胞 病毒巨噬细胞炎性蛋白 趋化因子受体 趋化实验 钙流
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细菌伴侣蛋白Skp诱导白细胞趋化作用的研究 被引量:1
14
作者 施磊 孔珺 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期225-226,共2页
目的:证明大肠杆菌伴侣蛋白Skp诱导单核细胞和分叶核白细胞产生趋化运动。方法:分离提纯Skp,通过分子量测定和氨基端的氨基酸测序予以证实。体外趋化实验分析其对白细胞的趋化作用。结果:Skp对单核细胞和分叶核白细胞具有趋化活性。结论... 目的:证明大肠杆菌伴侣蛋白Skp诱导单核细胞和分叶核白细胞产生趋化运动。方法:分离提纯Skp,通过分子量测定和氨基端的氨基酸测序予以证实。体外趋化实验分析其对白细胞的趋化作用。结果:Skp对单核细胞和分叶核白细胞具有趋化活性。结论:Skp是一种细菌源性的趋化因子。 展开更多
关键词 白细胞趋化 伴侣蛋白Skp
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GTP酶激活蛋白(Src同源结构域3)结合蛋白1在乳腺癌细胞MDA-MB-231体外迁移中的作用 被引量:1
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作者 韩堃 黎燕 张宁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期481-485,共5页
目的:研究GTP酶激活蛋白(Src同源结构域3)结合蛋白1[Ras-GTPase activating protein(Src homology do-main 3)binding protein 1,G3BP1]在乳腺癌细胞MDA-MB-231体外迁移过程中的作用。方法:人乳腺癌细胞MDA-MB-231培养于RPMI1640培养基... 目的:研究GTP酶激活蛋白(Src同源结构域3)结合蛋白1[Ras-GTPase activating protein(Src homology do-main 3)binding protein 1,G3BP1]在乳腺癌细胞MDA-MB-231体外迁移过程中的作用。方法:人乳腺癌细胞MDA-MB-231培养于RPMI1640培养基中;Western blot检测无表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)刺激,以及10 ng/ml EGF分别刺激30秒、1分钟、2分钟和5分钟条件下乳腺癌细胞内G3BP1、蛋白激酶Cζ(Protein kinase Cζ,PKCζ)、Akt、pPKCζThr410/403及pAktSer473的表达水平;免疫共沉淀法检测乳腺癌细胞内G3BP1与PKCζ的相互作用;转染小干扰RNA抑制内源性G3BP1的表达;趋化实验和侵袭实验分别检测G3BP1抑制前后MDA-MB-231细胞穿过10μm聚碳酸酯膜及人工基底膜的细胞数。结果:Western blot检测显示G3BP1在MDA-MB-231细胞内过表达;无EGF刺激时MDA-MB-231细胞内G3BP1,PKCζ与Akt均过表达,pPKCζThr410/403及pAktSer473不表达或低于Western blot检测下限;10 ng/ml EGF刺激后G3BP1、PKCζ与Akt表达水平不变,pPKCζThr410/403及pAktSer473的表达刺激时间增加而升高,至5分钟时达到峰值;在乳腺癌细胞内G3BP1与PKCζ具有相互作用;G3BP1表达抑制后乳腺癌细胞的趋化能力和侵袭能力均显著下降(P<0.05,P<0.05)。结论:G3BP1通过与PKCζ相互作用,在乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外迁移过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 G3BP1 乳腺癌 趋化 侵袭
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fliY基因在空肠弯曲菌致病性相关趋化和定植中的作用 被引量:1
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作者 楼宏强 葛玉梅 +2 位作者 张金良 严杰 赵金方 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期141-148,共8页
目的:构建空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)鞭毛马达开关蛋白FliY编码基因(fliY)敲除突变株,了解FliY蛋白控制细菌鞭毛运动的作用及其与细菌趋化和定植的关系。方法:采用pBluescript-Ⅱ-SK质粒构建用于敲除空肠弯曲菌NCTC11168株fliY... 目的:构建空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)鞭毛马达开关蛋白FliY编码基因(fliY)敲除突变株,了解FliY蛋白控制细菌鞭毛运动的作用及其与细菌趋化和定植的关系。方法:采用pBluescript-Ⅱ-SK质粒构建用于敲除空肠弯曲菌NCTC11168株fliY基因的自杀质粒。根据同源交换原理,利用自杀质粒构建空肠弯曲菌fliY基因敲除突变株(fliY-)。采用PCR、PCR产物测序与Western Blot,对fliY-突变株进行鉴定。采用体外菌落迁徙试验、细菌趋化试验以及小鼠空肠定植试验,检测fliY-突变株趋化和定植能力。结果:fliY-突变株生长曲线与野生株相似,但PCR与测序及Western Blot结果显示,fliY-突变株中fliY基因已被敲除。与野生株比较,fliY-突变株半固体平板上菌落明显较小(P<0.05),对脱氧胆酸钠和牛胆汁趋化能力显著下降(P<0.05),在感染小鼠空肠组织标本中的细菌数(CFU)也明显减少(P<0.05)。结论:空肠弯曲菌fliY基因功能与调控鞭毛运动作用有关,从而对细菌趋化和定植过程产生重大影响。 展开更多
关键词 弯曲杆菌 空肠 致病力 小鼠 基因敲除 鞭毛 聚合酶链反应 印迹法 蛋白质 鞭毛马达开关蛋白 运动力 趋化 定植
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尿液MCP-1浓度与小儿IgA肾病肾小管间质病变的相关性分析 被引量:1
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作者 张景秀 齐学良 +4 位作者 刘亚萍 李学敏 徐本福 孙相国 杨军霞 《中国妇幼健康研究》 2017年第3期288-290,共3页
目的探讨尿液中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与Ig A肾病肾小管间质病变的关系。方法选取2012年3月至2015年8月临沂市沂水中心医院小儿内三科进行肾穿刺活检确诊的98例原发性Ig A肾病患儿进行回顾性研究,根据活检病理肾小管间质的损害程度... 目的探讨尿液中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与Ig A肾病肾小管间质病变的关系。方法选取2012年3月至2015年8月临沂市沂水中心医院小儿内三科进行肾穿刺活检确诊的98例原发性Ig A肾病患儿进行回顾性研究,根据活检病理肾小管间质的损害程度分为:无病变组11例、轻度组41例、中度组32例、重度组14例,检测各组患儿尿液中MCP-1及相关指标并进行分析。结果中度组、重度组Ig A肾病患儿的收缩压、舒张压水平均显著高于无病变组、轻度组患儿,差异均具有统计学意义(重度组与无病变组的收缩压、舒张压水平比较,t值分别为4.119、5.820;中度组与轻度组比较,t值分别为4.613、5.714;重度组与无病变组比较,t值分别为2.668、2.914;重度组与轻度组比较,t值分别为2.257、2.573,均P<0.05);无病变组、轻度组、中度组、重度组患儿的血肌酐、β2微球蛋白(β2-MG)、尿NAG、24h尿蛋白定量、尿MCP-1均呈逐渐升高的趋势,组间差异均具有统计学意义(F值分别为40.862、37.851、62.396、77.084、21.362,均P<0.05);肌酐清除率在无病变组、轻度组、中度组、重度组患儿中呈逐渐降低的趋势,组间差异具有统计学意义(F=43.396,P<0.05)。肾小管间质的损害Ig A肾病患儿的血肌酐、β2-MG、尿NAG、24h尿蛋白定量与尿M CP-1均呈显著的正相关关系(r值分别为0.671,0.598,0.664,0.692,均P<0.05),肌酐清除率与尿M CP-1呈显著的负相关关系(r=-0.720,P<0.05)。结论 M CP-1能反应Ig A肾病患儿肾小管间质病变的程度。 展开更多
关键词 尿液 单核细胞趋化蛋白-1 IGA肾病 肾小管间质
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MIP-2γ/GM-CSF融合蛋白的构建、表达及其双重生物学功能的初步研究
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作者 张意 陈国友 +4 位作者 王建莉 卢琳 蒋应明 于益芝 曹雪涛 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第2期133-137,共5页
目的:利用基因工程技术制备具有双重生物学活性的MIP-2γ/GM—CSF融合蛋白。方法:通过引物设计和分级克隆的策略构建了MIP-2γ/GM—CSF融合基因真核表达载体,MIP-2γ与GM-CSF由(Gly4Ser)3相连;瞬时转染293-T细胞后收集含融合蛋白的细胞... 目的:利用基因工程技术制备具有双重生物学活性的MIP-2γ/GM—CSF融合蛋白。方法:通过引物设计和分级克隆的策略构建了MIP-2γ/GM—CSF融合基因真核表达载体,MIP-2γ与GM-CSF由(Gly4Ser)3相连;瞬时转染293-T细胞后收集含融合蛋白的细胞培养上清;研究了该融合蛋白在体外的促造血细胞增殖活性和对免疫细胞的趋化活性。结果:MIP-2γ/GM—CSF融合基因载体构建正确;融合蛋白分子量约为24.9 kD;初步生物学功能研究表明,融合蛋白能有效促进TF—1细胞增殖,比活性约为2.2×107IU/mg,并能显著刺激骨髓细胞的集落形成;融合蛋白能有效趋化未成熟树突状细胞和CD3+T细胞。结论:MIP-2γ/GM—CSF融合蛋白具有促进造血和趋化免疫细胞的双重活性,有望成为在造血调控和抗肿瘤免疫中具有良好开发应用前景的新型细胞因子。 展开更多
关键词 融合蛋白 MIP-2γ GM-CSF 造血 趋化
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绿色荧光蛋白基因在木葡糖酸醋杆菌中的表达
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作者 钟成 刘淼 +3 位作者 李晶 韩培培 谭之磊 贾士儒 《天津科技大学学报》 CAS 北大核心 2015年第4期13-16,共4页
绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)广泛应用于报告基因、基因的表达与调控以及微生物信号传导.以p MV24穿梭质粒为载体,实现了GFP在木葡糖酸醋杆菌(Gluconacetobacter xylinus)中的成功表达.采用PCR技术扩增出绿色荧光蛋白基... 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)广泛应用于报告基因、基因的表达与调控以及微生物信号传导.以p MV24穿梭质粒为载体,实现了GFP在木葡糖酸醋杆菌(Gluconacetobacter xylinus)中的成功表达.采用PCR技术扩增出绿色荧光蛋白基因,连接至木葡糖酸醋杆菌表达载体p MV24中,构建成功的质粒命名为p MV24-gfp+.采用电转化技术将重组载体导入木葡糖酸醋杆菌中,转化子在荧光显微镜的蓝色激发光下发出绿色荧光,为木葡糖酸醋杆菌趋化性的观察及菌体中运动蛋白的分析提供了重要的理论依据. 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 木葡糖酸醋杆菌 穿梭质粒 趋化性
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SDF-1γ/rhGM-CSF融合蛋白的制备及其趋化作用
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作者 居小萍 徐新颜 +5 位作者 张晓青 刘永明 于春山 曹洋森 卢明智 陈樱 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期419-423,共5页
目的:利用基因工程技术制备SDF-1与hGM-CSF的融合蛋白(SDF-1γ/rhGM-CSF),研究该融合蛋白对肿瘤患者造血和免疫功能的增强作用。方法:构建表达SDF-1γ/rhGM-CSF融合蛋白的pPIC9k-SDF1-rhGM-CSF1质粒,转染酵母菌,诱导SDF-1γ/rhGM-CSF融... 目的:利用基因工程技术制备SDF-1与hGM-CSF的融合蛋白(SDF-1γ/rhGM-CSF),研究该融合蛋白对肿瘤患者造血和免疫功能的增强作用。方法:构建表达SDF-1γ/rhGM-CSF融合蛋白的pPIC9k-SDF1-rhGM-CSF1质粒,转染酵母菌,诱导SDF-1γ/rhGM-CSF融合蛋白的表达,Western blotting鉴定SDF-1γ/rhGM-CSF融合蛋白的表达。集落形成实验观察SDF-1γ/rhGM-CSF对骨髓细胞集落形成的影响,趋化实验检测其对未成熟树突状细胞(dendritic cell,DC)的趋化作用。结果:成功构建pPIC9k-SDF1-rhGM-CSF1质粒,高表达SDF-1γ/rhGM-CSF融合蛋白,分子量约为25 000,并可被GM-CSF特异性抗体所识别。SDF-1γ/rhGM-CSF融合蛋白能显著刺激骨髓细胞的集落形成,其效果强于GM-CSF(P<0.05)。与SDF-1相比,SDF-1γ/rhGM-CSF融合蛋白可更有效地趋化未成熟DC(P<0.05)。结论:SDF-1γ/rhGM-CSF融合蛋白可有效促进骨髓细胞的集落形成,趋化未成熟DC,有促进肿瘤化疗患者造血和免疫功能恢复的潜在临床应用前景。 展开更多
关键词 SDF—1 GM—CSF 融合蛋白 肿瘤 造血 免疫 趋化
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