多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM的表达及mexR基因的突变

目的分析MexAB-OprM主动外排系统在铜绿假单胞菌耐药性中的作用,并讨论MexAB-OprM高表达与mexR基因突变的关系。方法 L-酚丙氨基-L-氨基酰-β-萘胺(MC207,110)联合环丙沙星(CIP)筛选13株多重耐药铜绿假单胞菌主动外排系统表型;RT-PCR检测13株多重耐药和7株全敏感的铜绿假单胞菌结构基因mexB的mRNA相对含量,推测MexAB-OprM表达水平;对6株MexAB-OprM高表达的多重耐药铜绿假单胞菌进行mexR基因扩增、测序和比对。结果 13株多重耐药铜绿假单胞菌9株主动外排系统表型阳性,阳性率69.2%;所有检测株中均有MexAB-OprM表达,其中有6株多重耐药株高表达;6株多重耐药高表达株中有5株存在mexR基因的突变。结论 MexAB-OprM主动外排系统高表达是导致本院铜绿假单胞菌多重耐药的重要原因,而mexR基因的突变又是导致MexAB-OprM高表达的主要原因。

临床铜绿假单胞菌多重耐药株外排泵机制研究

目的研究临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌MexA-MexB-OprM外排泵的外膜蛋白OprM的表达及泵调节基因mexR突变情况。方法筛选铜绿假单胞菌多重耐药株13株和敏感菌株5株进行外膜蛋白SDS-PAGE分析,比较OprM的表达差异。聚合酶链反应(PCR)法扩增mexR基因,鉴定产物,测序。结果多重耐药菌株组OprM蛋白在相对分子量为49 kD处的各电泳条带较敏感菌株和质控菌株铜绿假单胞菌ATCC 27853的灰度明显增强,其光密度值多重耐药菌株组为157.79,敏感菌株组为132.03,两组比较,差异有显著性(t=19.345,P<0.01);多重耐药菌株mexR基因产物测序,除个别碱基插入外,以A-96→G,G-411→A,C-308→G,T-377→A 4个核苷酸点突变为主,后二者还导致了其编码的氨基酸发生改变,分别为Ala-103→Gly,Val-126→Glu。结论OprM表达增强提示MexA-MexB-OprM外排泵耐药机制参与多重耐药形成。多重耐药菌株的mexR基因均存在点突变,提示mexR基因突变引起MexA-MexB-OprM外排泵表达增强。

生物膜铜绿假单胞菌多药外排泵的表达研究

目的研究铜绿假单胞菌在浮游态、生物膜态及经亚胺培南、环丙沙星诱导后,多药外排泵MexAB-OprM及其阻遏蛋白MexR基因表达情况。方法用铜绿假单胞菌PAO1在eppendorf管内建立生物膜;用1/2 MIC亚胺培南、环丙沙星对浮游菌诱导4 h;4 MIC亚胺培南2、MIC环丙沙星对生物膜菌诱导12 h,分别于生物膜形成的第35、天,用实时荧光定量PCR的方法,测定铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM及MexR的基因表达。结果铜绿假单胞菌由浮游菌变为生物膜菌后,其外排泵MexAB-OprM的表达水平明显降低,其相对表达量最高相差近10倍,其差异有统计学意义(P<0.05);铜绿假单胞菌由浮游菌变为生物膜菌后,阻遏蛋白MexR表达差异无统计学意义;在亚胺培南及环丙沙星诱导后,浮游菌和生物膜菌其基因MexAB-OprM、MexR表达差异均无统计学意义。结论铜绿假单胞菌由浮游菌转变为生物膜菌后,外排泵MexAB-OprM表达明显减少,MexR基因表达无影响;亚胺培南、环丙沙星对浮游菌及生物膜菌的MexAB-OprM、MexR均无诱导作用。

外排泵系统介导的铜绿假单胞菌多重耐药性研究

目的调查镇江地区临床分离的铜绿假单胞菌的耐药性率,检测外排泵系统M exAB-OprM和M exXY-OprM的调控基因mexR和mexZ的表达情况。方法纸片扩散法（K-B法）测定其对12种常用抗菌药物的耐药性,用PCR扩增mexR和mexZ全长基因。结果药敏结果显示该菌对头孢类抗生素耐药情况严重,铜绿假单胞菌对复方新诺明、头孢唑林、头孢西丁完全耐药,对头孢他啶、头孢吡肟的耐药率在40.0%-60.0%之间。对亚胺培南、阿米卡星、美罗培南的耐药率达到40.0%。对左氧氟沙星、哌拉西林、头孢噻肟的耐药率均在60%以上。多重耐药率达75.0%。但98.0%的铜绿假单胞菌（71株）对多粘菌素B敏感。72株铜绿假单胞菌中91.0%（65株）同时表达mexR和mexZ基因,5.8%（4株）单独表达mexR基因,4.0%（3株）单独表达mexZ基因。结论mexR和mexZ基因与铜绿假单胞菌多重耐药密切相关。