mfgl2凝血酶原酶/纤维介素基因转录调控元件肝细胞核因子的研究

目的 研究鉴定mfg12凝血酶原酶 /纤维介素基因转录激活所必需的调控元件或转录因子。方法 应用免疫印迹法检测Ba1b/c小鼠的巨噬细胞内是否表达肝细胞核因子 4(HNF4) ,共聚焦显微镜免疫荧光技术检测鼠肝炎病毒 (MHV)的核心 (N)蛋白质是否进入被感染细胞核。应用DNA电泳迁移差异检测、竞争实验和定点诱变技术鉴定mfgl2基因转录激活所必需的调控元件或转录因子。结果 免疫印迹法表明巨噬细胞可持续表达HNF4。共聚焦显微镜免疫荧光技术证实MHV的N蛋白质可进入被感染细胞核内。凝胶移位分析和竞争实验显示HNF4和巨细胞病毒早期蛋白基因 1 2 (IE1 2 )均可与特异寡核苷酸竞争结合mfgl2启动子上特定位点而不与非特异寡核苷酸发生竞争。HNF4特异性多克隆抗体竞争试验可见超迁移带。定点突变mfgl2启动子上HNF4所结合的顺式调控元件可降低野生型mfgl2启动子的转录活动达 75 %,联合突变IE1 2结合位点未见协同效应。单纯突变IE1 2结合位点后 ,野生型mfgl2启动子的转录活动仍可保留 75 %～ 80 %。结论 HNF4具有与mfgl2 /fibroleukin启动子结合的特性 ,为MHV 3N蛋白质诱导mfgl2 /fibroleukin基因表达的必备转录因子。

重型肝炎患者fgl2凝血酶原酶基因的表达

目的 探讨重型肝炎患者外周血单个核细胞 (PBMNC)中fgl2凝血酶原酶mRNA的变化及其意义。方法 选择重型肝炎患者 18例 ,非重型急性肝炎 15例、非重型慢性肝炎 14例 ,应用RT PCR方法对其外周血fgl2凝血酶原酶mRNA进行半定量检测。结果 重型肝炎组外周血fgl2凝血酶原酶mRNA与 β actinmRNA表达灰度值比值为 1 55±0 2 3 ,明显高于非重型急性肝炎组 (1 3 4± 0 18)、非重型慢性肝炎组 (1 2 9± 0 16)及正常对照组 (1 3 1± 0 12 ) ,均为P <0 0 1。结论 重型肝炎患者的肝坏死可能与fgl2凝血酶原酶的高表达有关 。

人fgl2凝血酶原酶FRED结构域的原核表达、纯化及其凝血活性的鉴定

目的建立人fgl2凝血酶原酶纤维蛋白原相关结构域(fibrinogen-related domain,FRED)的原核表达系统,并鉴定表达蛋白的凝血活性。方法应用RT-PCR从外周血单个核细胞扩增fgl2凝血酶原酶FRED基因,克隆到原核表达载体pET22b(+),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达,重组蛋白经SDS-PAGE电泳和免疫印迹鉴定并用His-Tag柱纯化,以促凝活性(procoagulant activity,PCA)检测鉴定其凝血功能。结果扩增了人fgl2凝血酶原酶FRED基因,成功构建了重组pET-FRED原核表达质粒,表达的融合蛋白具有直接促凝血活性。结论建立了人fgl2凝血酶原酶FRED的高效原核表达系统,FRED可能为fgl2凝血酶原酶促凝血的活性区域。

人fgl2凝血酶原酶基因的真核表达及其凝血功能研究

目的将人fgl2凝血酶原酶基因进行真核表达,了解表达蛋白的分布特点,初步研究其凝血活性。方法将pcDNA3-fgl2重组质粒转化大肠埃希菌,利用脂质体转染至HL-60细胞;RT-PCR法检测其fgl2凝血酶原酶mRNA的表达,间接免疫荧光法标记fgl2凝血酶原酶蛋白,应用激光共聚焦显微镜观察其分布,流式细胞仪检测fgl2凝血酶原酶蛋白在细胞膜的表达;并通过检测转染细胞的促凝活性(PCA)分析其凝血功能。结果 pcDNA3-fgl2真核表达质粒在HL-60细胞中进行了瞬时表达,转染细胞可见明显的fgl2凝血酶原酶mRNA条带。激光共聚焦显微镜观察到转染细胞胞质中可见明显的绿色荧光,流式细胞仪在转染细胞胞膜上未检测到明显的蛋白表达。转染pcDNA3-fgl2重组质粒细胞的PCA明显增高且依赖于凝血酶原。结论成功地将fgl2凝血酶原酶基因在HL-60细胞中进行了瞬时表达;fgl2凝血酶原酶主要在胞质中表达,细胞膜上无分布并可能分泌到细胞外;凝血功能分析显示fgl2凝血酶原酶具有直接激活凝血酶原的功能。

纤维介素蛋白2凝血酶原酶在人肝癌细胞增殖和凋亡中的作用

目的:探讨纤维介素蛋白2凝血酶原酶(fibrinogen-like protein 2/fibroleukin,fgl2)在人肝癌(hepatocel-lular carcinoma,HCC)细胞系HCCLM6细胞的表达及在肿瘤生长中的作用。方法:用RT-PCR方法检测HCCLM6细胞在静息和细胞因子作用下fgl2mRNA水平的表达;用RNA干扰技术建立fgl2敲除的HCCLM6细胞模型;以流式细胞技术检测fgl2敲除后的HCCLM6细胞体外培养细胞周期和增殖指数的改变以及对TNF-α(肿瘤坏死因子-α)诱导凋亡的抵抗能力改变。结果:IFN-γ(干扰素-γ)、IL-1β(白介素-1β)和TNF-α均可在mRNA水平上调HCCLM6细胞fgl2的表达,以TNF-α诱导作用最为显著;fgl2干扰后HCCLM6细胞增殖指数显著降低,细胞周期分析S期比例显著下降;fgl2干扰对HCCLM6细胞在全培养基和无血清培养基中培养的凋亡率无显著影响,但在合并大剂量TNF-α诱导下,fgl2干扰可显著提高HCCLM6细胞的凋亡率。结论:炎性细胞因子可诱导HCCLM6细胞表达fgl2,fgl2的表达可直接促进肿瘤细胞的生长,并增强对TNF-α诱导凋亡的耐受。

大黄素对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠FGL2凝血酶原酶的影响

目的观察大黄素对重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤大鼠肺组织FGL2凝血酶原酶的影响。方法采用逆行胰胆管注射牛磺胆酸建立SAP肺损伤大鼠模型,分别以大黄素高(40 mg/kg)、中(20 mg/kg)、低剂量(10 mg/kg)进行干预,在造模3、6、12 h 3个时相点分批处死大鼠,采用qRT-PCR检测大鼠肺组织FGL2、TNF-αmRNA表达,免疫组化技术检测肺组织中FGL2蛋白表达,ELISA法检测肺组织TNF-α及TXB2、6-Keto-PGF1α水平。结果模型组大鼠3、6、12 h 3个时相点肺组织FGL2、TNF-αmRNA和蛋白表达,TXB2水平及TXB2/6-Keto-PGF1α比值较假手术组同一时相点明显增高(P<0.05或P<0.01),应用大黄素高、中、低剂量干预后,肺组织FGL2、TNF-αmRNA和蛋白表达,TXB2水平及TXB2/6-Keto-PGF1α比值较模型组同一时相点显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论重症急性胰腺炎肺损伤时大黄素可以通过下调FGL2凝血酶原酶减轻胰腺炎肺损伤程度,这可能是大黄素抗SAP肺损伤的重要作用机制。

fgl2凝血酶原酶临床应用基础研究进展

fgl2凝血酶原酶是新近发现的凝血因子,主要表达于外周血T淋巴细胞、活化的内皮细胞和巨噬细胞等免疫活性细胞,其不依赖经典内、外源性凝血途径,可直接激活凝血酶原,启动凝血反应。近年来随着对fgl2凝血酶原酶日益关注,相关研究渗透到临床各专业,为阻断、延缓疾病的发生、发展和新药开发提供了靶向,为防治疾病带来新希望。该文将近几年fgl2凝血酶原酶在消化、呼吸、泌尿、心血管及风湿免疫系统等的临床应用基础研究做一综述,作为研究者进一步深入探索的启发和参考。

Fgl-2凝血酶原酶介导的微血栓形成在2型糖尿病大鼠肾脏损害中的作用

目的:观察纤维蛋白原样-2(Fgl-2)凝血酶原酶在糖尿病大鼠肾脏中的表达及其病理变化,探讨Fgl-2凝血酶原酶介导的微血栓形成在糖尿病肾脏微血管病变中的作用。方法:实验大鼠随机分为正常对照组(NC组)和2型糖尿病组(T2DM组)。建立T2DM大鼠模型,分别于实验第19周、第23周、第28周处死大鼠,测定24h尿蛋白、血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、相对肾重;HE、PAS、MASSON染色观察不同病程T2DM组及NC组大鼠的肾脏病理改变,检测大鼠肾脏微血管内血栓形成,计算单位肾小球面积内微血栓所占阳性面积比例;以逆转录PCR方法、免疫组织化学方法测定Fgl-2凝血酶原酶在T2DM大鼠肾脏组织细胞上的表达,并将其表达的平均光密度值与单位肾小球内微血栓阳性面积比例进行相关性分析。结果:T2DM组大鼠Cr、BUN、相对肾重、24h尿蛋白均升高,Fgl-2凝血酶原酶的表达量亦明显增多,主要表达在T2DM大鼠的肾小球毛细血管内皮细胞及肾间质微血管内皮细胞。病理组织学检查显示T2DM大鼠肾小球肥大、系膜扩张、肾小球基底膜增厚、细胞外基质增生、肾小球毛细血管微血栓形成,且微血栓阳性面积比例明显高于NC组。分析显示Fgl-2凝血酶原酶的蛋白表达量与单位肾小球内微血栓阳性面积比例呈正相关。结论:首次发现Fgl-2凝血酶原酶mRNA及蛋白质在T2DM大鼠肾脏中表达上调,与单位肾小球内微血栓阳性面积比例呈正相关,提示Fgl-2凝血酶原酶介导的肾脏内微血栓形成可能促进糖尿病肾病的发生和发展。

fgl2凝血酶原酶在重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的表达意义

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肝损伤中fgl2凝血酶原酶的表达情况及意义。方法 SD大鼠采用数表法随机均分为假手术(SO)组和SAP组,各24只。采用逆行胆胰管注射4%牛磺胆酸钠法制备大鼠SAP模型。收集术后1、4及8h时点肝脏标本,行常规病理检查及Masson染色随机计数肝脏微血管内微血栓形成的阳性血管数;血样检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(AST);实时定量(real-time)PCR法、免疫组织化学法测定fgl2凝血酶原酶在大鼠肝脏的表达情况。结果组织病理学检查示SAP大鼠肝组织内炎细胞浸润及坏死;fgl2凝血酶原酶在SAP大鼠肝脏微血管内皮细胞高表达(P<0.01);SAP组肝脏微血管可见微血栓形成;SAP大鼠阳性血管率显著高于SO组(P<0.01),且与肝脏fgl2凝血酶原酶表达呈正相关(r=0.948,P<0.01);SAP组肝脏病理学评分显著高于SO组(P<0.01)且与fgl2凝血酶原酶表达呈正相关(r=0.704,P<0.01)。结论 fgl2凝血酶原酶在SAP大鼠肝脏中的异常表达可能通过介导微血栓形成导致SAP相关性肝损伤的进展;其表达水平可能与SAP相关性肝损伤的病理损害程度相关。

血清胰岛素样生长因子-2、甲胎蛋白、γ-谷氨酰转肽酶同工酶II及异常凝血酶原联合检测在肝癌诊断中的价值

目的探讨血清胰岛素样生长因子-2(IGF-2)及甲胎蛋白(AFP)、γ-谷氨酰转肽酶同工酶II(GGT-II)和异常凝血酶原(APT)联合检测在肝癌诊断中的临床价值,筛选理想的血清肿瘤标志物组合。方法应用放射免疫法检测114例肝癌患者、47例健康体检者和28例肝部良性疾病患者血清IGF-2,同时应用电化学发光免疫分析法测定同一批研究对象的血清AFP、GGT-II、APT的水平,用ROC曲线对各项指标的诊断效能进行分析和评价。结果肝癌患者的血清IGF-2水平及三种血清肿瘤标志物水平均明显高于健康体检组和肝良性疾病组,差异有统计学意义(均P<0.05)。IGF-2和AFP、GGT-II、APT在特异性为95.6%(43/45)时,灵敏度分别为76.0%(57/75)、53.3%(40/75)、66.7%(50/75)和42.7%(32/75),以IGF-2最高,在受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积(AUC)分别为0.88、0.836、0.891和0.697,以IGF-2与GGT-II较高;联合检测显著提高诊断灵敏度和诊断效能,联合检测以(IGF-2)+(GGT-II)与(IGF-2)+(AFP)+(GGT-II)较好,灵敏度分别达到了94.7%(71/75)和97.3%(73/75),AUC分别为0.969和0.984。结论血清中IGF-2、AFP、GGT-II和APT对于肝癌的诊断均有一定的临床价值,IGF-2与AFP、GGT-II、APT联合检测可显著提高肝癌诊断的灵敏度和效能。

人fgl2凝血酶原酶cDNA的克隆、序列分析及真核表达载体的构建

目的:克隆人fgl2凝血酶原酶cDNA,分析其序列组成,构建真核表达载体。方法:从外周血单个核细胞中提取总RNA后,应用RT-PCR方法扩增fgl2凝血酶原酶cDNA,目的基因与pcDNA3真核表达载体连接,经酶切和测序鉴定,应用软件分析其序列。结果:克隆了人fgl2凝血酶原酶cDNA全长序列,所扩增的cD-NA序列与genebank中发布的序列一致,构建的pcDNA3-fgl2真核表达载体与所设计的完全一致。结论:成功地克隆了人fgl2凝血酶原酶cDNA,构建了其真核表达载体,为研究其生物学功能奠定了基础。

纤维蛋白原样蛋白2凝血酶原酶与暴发性肝衰竭的研究进展

纤维蛋白原样蛋白2(fgl2)凝血酶原酶是近年发现的一种新的促凝因子。在病毒引起的暴发性肝衰竭(FHF)中,由巨噬细胞和内皮细胞分泌的fgl2凝血酶原酶在肝脏选择性高表达,可通过直接激活凝血酶原转化为凝血酶而启动免疫凝血过程,加重肝损伤。fgl2凝血酶原酶的活性与肝损伤的程度、病毒易感性密切相关。肝细胞核因子4α是病毒核心蛋白激活小鼠凝血酶原酶fgl2基因的必需转录因子。fgl2凝血酶原酶的研究可为FHF的治疗提供新的靶点。

凝血因子fgl2凝血酶原酶研究现状

fgl2凝血酶原酶是一种直接激活凝血酶原的凝血因子。反式因子通过与小鼠fgl2凝血酶原酶基因启动子中正性调控结构域结合而对其表达进行调控,人fgl2凝血酶原酶基因的表达调控可能之相似。作为一种免疫-凝血的中介物,fgl2凝血酶原酶在病毒引起的肝损伤、自发性流产及移植排斥反应等病理过程中发挥重要的作用。

宫颈癌患者Fgl2凝血酶原酶、D-二聚体表达及与临床预后关系

目的:检测宫颈癌患者纤维蛋白原样蛋白2(Fgl2)凝血酶原酶和D-二聚体表达情况,并探讨二者在宫颈癌发病中的作用及与临床预后关系。方法:选取2015年1月-2017年5月在本院经病理确诊的宫颈癌患者80例为宫颈癌组,同期本院行常规体检的健康女性75例为对照组。采用反转录-聚合酶链反应检测Fgl2凝血酶原酶mRNA水平,酶联免疫吸附法检测D-二聚体水平;Kaplan-Meier法绘制生存曲线评估Fgl2凝血酶原酶和D-二聚体对宫颈癌患者预后的影响;Cox回归分析宫颈癌患者预后的影响因素。结果:宫颈癌组Fgl2凝血酶原酶mRNA和D-二聚体表达水平均高于对照组,宫颈癌患者Fgl2凝血酶原酶mRNA、D-二聚体表达与临床分期及病理类型有关,Fgl2凝血酶原酶mRNA和D-二聚体高表达组术后24个月总生存率均低于低表达组(均P<0.05);Fgl2凝血酶原酶和D-二聚体高表达水平及临床分期III^IV期是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素(HR=5.013,95%CI为1.275~5.636;HR=2.305,95%CI为1.841~4.935;HR=2.305,95%CI为1.752~5.921,P均<0.05)。结论:Fgl2凝血酶原酶和D-二聚体在宫颈癌患者中表达均明显升高,表达水平与宫颈癌患者预后有关,提示两项指标可作为宫颈癌的病情评估及不良预后预测的潜在生物学指标。

凝血酶原酶基因在小鼠严重急性呼吸综合征肺损伤中的作用

目的:利用鼠肝炎3型病毒(MHV-3)建立小鼠严重急性呼吸综合征(SARS)模型,探讨小鼠fgl2凝血酶原酶基因(mfgl2)与SARS肺损伤,尤其是透明膜和血栓形成之间的关系及其临床意义。方法:Balb/cJ小鼠气管途径感染MHV-3建立小鼠SARS模型,动态观察小鼠一般情况、组织器官的病理学改变及病毒分布情况;免疫组化和原位杂交方法检测其肺组织中mfgl2和纤维蛋白的表达。结果:感染小鼠5 d内死于以肺损伤为主的多器官功能衰竭;肺呈现典型间质性肺炎样改变伴透明膜、血栓形成;所有收集的器官均可检测到病毒的复制;肺支气管浆液腺上皮细胞、间质浸润细胞及肺泡上皮细胞可检测到mfgl2的特异性表达;免疫组化双染色发现肺内透明膜及微血栓形成区域多见mfgl2与纤维蛋白的共沉积。结论:MHV-3诱导的小鼠SARS模型能较好地模拟人类SARS肺损伤的疾病特征,mfgl2在模型肺组织中的特异性高表达可激活凝血酶原,启动局部凝血过程,导致纤维蛋白的沉积,促进肺内血栓和透明膜的形成,提示mfgl2可能是SARS肺损伤又一重要分子机制。

凝血酶原酶是一种什么样的物质？它由哪些成分构成？

答：凝血酶原酶是一种蛋白质一磷质复合物。凝血因子xa与因子V及磷脂和Ca2＋共同构成凝血酶原酶。

FGL2凝血酶原酶在糖尿病大鼠心脏的表达及意义

目的探讨纤维蛋白原样2(FGL2)凝血酶原酶在糖尿病大鼠心脏的表达及其意义。方法实验大鼠随机分为对照(NC)组和2型糖尿病(T2DM)组。HE染色及纤维素染色(改良MSB染色)观察大鼠心脏病理改变,随机计数微血管中微血栓形成的阳性血管数;逆转录PCR法、免疫组织化学法测定FGL2凝血酶原酶在大鼠心脏的表达。结果与NC组相比,FGL2凝血酶原酶在T2DM大鼠的心脏微血管内皮细胞中高表达;T2DM组大鼠心脏微血管内可见微血栓形成;T2DM组大鼠阳性血管数显著高于NC组,且与FGL2凝血酶原酶蛋白表达呈正相关。结论 FGL2凝血酶原酶可能通过介导糖尿病心脏微血栓形成而促进糖尿病微血管病变的发生与发展。

妊娠期糖尿病患者胎盘FGL2凝血酶原酶在滋养细胞的表达及其意义分析

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)患者胎盘滋养细胞纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)凝血酶原酶的表达及其意义分析。方法选取2020年11月至2022年1月在广西壮族自治区南溪山医院妇产科就诊的GDM患者100例作为观察组,同时选取正常孕妇100例作为对照组,比较两组FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达,同时分析观察组有和无不良妊娠结局患者临床资料、FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达差异。结果观察组FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达分别为(1.03±0.31)和(0.97±0.22),明显高于对照组(P<0.05)。观察组有和无不良妊娠结局患者年龄、孕期体质量指数(BMI)和不良孕产史比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组有不良妊娠结局患者FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达、空腹血糖(FBG)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)分别为(1.34±0.29)、(1.21±0.26)、(7.25±0.87)mmol/L和(1.95±0.30),明显高于无不良妊娠结局患者(P<0.05)。FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达与FBG、HOMA-IR呈正相关(P<0.05)。Logistic回归分析显示,年龄、孕期BMI、FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达是GDM患者不良妊娠结局的影响因素(P<0.05)。结论GDM患者胎盘滋养细胞FGL2凝血酶原酶mRNA、蛋白表达明显上调,与患者胰岛素抵抗、不良妊娠结局有关,值得进一步研究。

重组hfgl2-miRNA腺病毒在裸鼠人肝癌模型中的安全性初探

目的:探讨针对人hfgl2-miRNA的腺病毒颗粒(Ad-hfgl2-miRNA)在裸鼠人肝癌模型中的体内分布及安全性。方法:利用人肝癌细胞系HCCLM6建立裸鼠人肝癌细胞皮下移植瘤模型,每只裸鼠瘤内注射1×10~9 IU的Ad-hfgl2-miRNA,于给药后第1、3、7、9、11、15、19、24天采用qRT-PCR检测Ad-hfgl2-miRNA在裸鼠心、肝、脾、肺、肾、瘤、小肠中的表达,通过检测体内生化指标及组织病理改变,初步评估药物的安全性。结果:Ad-hfgl2-miRNA在裸鼠心、肝、脾、肺、肾、瘤、小肠中均有表达,以心、肝、肾、瘤、小肠表达较强,维持至停药后第24天。各生化指标检测值无明显异常或仅有轻度异常。组织病理学未见明显病理改变。结论:Ad-hfgl2-miRNA在荷瘤裸鼠体内及瘤内能够安全表达,未见有器官损害表现,为今后开展Ad-hfgl2-miRNA的基因治疗奠定了基础。

动态监测骨科围术期患者血浆F1+2、D-二聚体、AT-3的临床意义

目的通过对骨科围术期患者凝血酶原片段1+2(F1+2)、D-二聚体及血浆抗凝血活酶Ⅲ(AT-3)的动态监测,探讨深静脉血栓前动态监测的可行方法。方法选择182例骨科股骨骨折行内固定手术治疗的患者作为研究对象,其中血栓发生组13例,无血栓发生组169例。对所有患者术前晨、术后1d晨、术后3d晨和术后5d晨、术后7d晨5个时点空腹血浆中的F1+2、D-二聚体、血浆AT-3活性参数进行监测,并进行对比研究。结果血栓发生组的血浆F1+2水平和D-二聚体水平较无血栓发生组高,AT-3活性较无血栓发生组低,差异有统计学意义(P<0.05)。F1+2及D-二聚体水平均从术后3d开始明显上升,血浆F1+2水平上升持续时间较短,手术7d后血浆F1+2水平与术前相比,差异无统计学意义(P<0.05);而D-二聚体水平在术后7d与术前相比,其上升水平差异有统计学意义(P<0.05);AT-3水平在术前及术后水平改变,差异无统计学意义(P>0.05)。结论术后发生DVT患者中,血浆F1+2及D-二聚体水平与深静脉血栓形成的危险呈正相关关系,AT-3变化呈负相关关系,三者联合可作为预测术后深静脉血栓的指标。