miR-103a-3p在先天性巨结肠中的作用及机制

目的探讨miR-103a-3p在先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HSCR)发生、发展中的作用及机制。方法RT-PCR检测miR-103a-3p在HSCR狭窄段及扩张段结肠肠管组织标本中的表达差异。CCK-8和Transwell法评估miR-103a-3p对细胞增殖和迁移的影响。运用KEGG、GO以及蛋白质-蛋白质相互作用网络分析预测潜在靶基因。通过RT-PCR、自动免疫印迹、双荧光素酶报告基因检测在细胞和组织层面验证miR-103a-3p的靶基因PIK3R1。结果在HSCR病变段结肠组织中miR-103a-3p表达显著上调。miR-103a-3p可以抑制细胞的增殖和迁移。生物信息学分析提示:PIK3R1可能是miR-103a-3p在HSCR中的潜在靶点。双荧光素酶实验证实miR-103a-3p可与PIK3R1的3′-UTR结合,并影响其mRNA和蛋白质的表达水平。而在组织样本中,病变段肠管的PIK3R1表达水平明显降低,与miR-103a-3p呈负向关系。结论miR-103a-3p在HSCR的病变肠管中存在表达差异,其可通过靶向PIK3R1影响细胞增殖及迁移,在HSCR的发生发展中起着重要作用。

血清miR-129-5p、miR-103a-3p在重症肺炎并发脓毒症患者中的水平及意义

目的探讨微小RNA(miR)-129-5p和miR-103a-3p在重症肺炎并发脓毒症患者血清中的水平及意义。方法收集2021年1月至2022年12月在该院接受治疗的128例重症肺炎并发脓毒症患者(重症肺炎并发脓毒症组)作为研究对象,根据患者入院28 d内的生存情况分为生存组(n=75)和死亡组(n=53);另选取同期在该院体检的128例健康志愿者作为对照组。比较各组血清miR-129-5p、miR-103a-3p及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平;采用多因素Logistic回归分析影响重症肺炎并发脓毒症患者预后的因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-129-5p、miR-103a-3p水平对重症肺炎并发脓毒症患者预后的预测价值。结果与对照组相比,重症肺炎并发脓毒症组血清miR-129-5p、miR-103a-3p水平明显降低,TNF-α、IL-6、HMGB1水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组血清miR-129-5p、miR-103a-3p水平明显低于生存组,TNF-α、IL-6、HMGB1水平明显高于生存组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-129-5p、miR-103a-3p水平升高是重症肺炎并发脓毒症患者死亡的保护因素(P<0.05),TNF-α、IL-6、HMGB1水平升高是重症肺炎并发脓毒症患者死亡的危险因素(P<0.05)。血清miR-129-5p、miR-103a-3p单项及联合检测预测重症肺炎并发脓毒症患者死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.799(95%CI:0.719~0.865)、0.845(95%CI:0.770~0.903)、0.923(95%CI:0.862~0.963),2项联合检测预测的AUC大于血清miR-129-5p、miR-103a-3p单项检测(Z=3.270,P=0.001;Z=2.843,P=0.005)。结论重症肺炎并发脓毒症患者血清miR-129-5p和miR-103a-3p水平下调,二者联合检测对重症肺炎并发脓毒症患者死亡有较高的预测价值。

孕晚期妊娠糖尿病患者血清lncRNA FGD5-AS1、miR-103a-3p表达与产褥期感染的相关性研究

目的探讨孕晚期妊娠糖尿病(GDM)患者血清长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)、微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)与产褥期感染(PI)的相关性。方法回顾性选取2022年1月至2023年6月在该院就诊并住院分娩的168例孕晚期GDM患者作为试验组,并根据是否发生PI将患者分为感染组(96例)和未感染组(72例),同时选取同期在该院产检且血糖正常的120例孕晚期女性作为对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA FGD5-AS1与miR-103a-3p表达水平,多因素Logistic回归分析孕晚期GDM患者发生PI的影响因素,StarBase网站分析lncRNA FGD5-AS1与miR-103a-3p的关系,Pearson相关分析lncRNA FGD5-AS1与miR-103a-3p的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线评估lncRNA FGD5-AS1及miR-103a-3p预测PI发生的价值。结果试验组和对照组血清lncRNA FGD5-AS1与miR-103a-3p表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05),感染组血清lncRNA FGD5-AS1表达水平显著高于未感染组(P<0.05),但感染组血清miR-103a-3p表达水平显著低于未感染组(P<0.05)。lncRNA FGD5-AS1表达水平是孕晚期GDM患者发生PI的独立危险因素(P<0.05),miR-103a-3p表达水平是孕晚期GDM患者发生PI的独立保护因素(P<0.05)。lncRNA FGD5-AS1与miR-103a-3p表达水平呈负相关(r=-0.409,P<0.001)。lncRNA FGD5-AS1与miR-103a-3p二者联合预测孕晚期GDM患者发生PI的效能优于血清lncRNA FGD5-AS1及miR-103a-3p单项预测(P<0.05)。结论lncRNA FGD5-AS1是孕晚期GDM患者发生PI的独立危险因素,而miR-103a-3p是孕晚期GDM患者发生PI的独立保护因素;二者联合检测预测孕晚期GDM患者发生PI的价值更高。

miR-103a-3P调控PFK-2对结直肠癌细胞增殖及糖酵解的作用机制

目的探究微小RNA(miR)-103a-3P调控6-磷酸果糖激酶(PFK)-2对结直肠癌细胞增殖及糖酵解的作用机制研究。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测正常结肠上皮细胞及4种结直肠癌细胞系中miR-103a-3p、PFK-2表达水平,将阴性对照、miR-103a-3P、PFK-2类似物转染至结直肠癌细胞中,EdU法检测细胞增殖,葡萄糖检测试剂盒和乳酸检测试剂盒检测糖酵解相关指标,双荧光素酶报告实验证实miR-103a-3P和PFK-2的相互作用。结果结直肠癌细胞系中的miR-103a-3P、PFK-2 mRNA表达量显著高于正常结直肠癌上皮细胞系NCM460(P<0.05),其中HCT116的miR-103a-3P、PFK-2 mRNA升高最大(P<0.05),选其备用。与CC组相比,MN组及PN组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量无统计学差异(P>0.05),MI组、PI组、MP组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05)。与MN组相比,MM组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显升高(P<0.05)。与MM组相比,MI组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05)。与PN组相比,PM组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显升高(P<0.05)。与PM组相比,PI组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05);MI组与PI组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量无统计学差异(P>0.05)。与PI组相比,MP组细胞增殖及葡萄糖摄取水平、乳酸含量明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告结果显示,转染miR-103a-3P后可显著促进PFK-2-3′-UTR-WT的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变基因无显著影响(P>0.05),且PFK-2与miR-103a-3P呈正相关。结论抑制miR-103a-3P表达可降低结直肠癌细胞增殖,并有效改善糖酵解,其作用机制可能与抑制PFK-2有关。

miR-103a-3p在胰腺癌细胞中的表达及意义

目的:观察mi R-103a-3p抑制表达的慢病毒载体对高表达mi R-103a-3p的PANC-1胰腺癌细胞株的表达抑制作用,为阐明胰腺癌的发病机制及筛选治疗靶基因提供理论依据。方法:采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测不同侵袭能力的胰腺癌细胞株(PANC-1、Bx PC-3)和永生化正常胰腺细胞(H6C7)中mi R-103a-3p表达情况;构建慢病毒载体mi R-103a-3p-inhibitor,包装后感染高表达mi R-103a-3p的PANC-1细胞株,荧光显微镜观察其转染效率,q RT-PCR检测其表达情况。结果:q RT-PCR检测显示,mi R-103a-3p在PANC-1、Bx PC-3细胞及正常胰腺细胞H6C7细胞中相对表达量分别为(4.949±0.130)、(1.417±0.120)和(1.010±0.151),PANC-1表达水平最高(P<0.05)。mi R-103a-3p-inhibitor慢病毒感染PANC-1细胞第4天,荧光显微镜下可见报告基因绿色荧光蛋白(GFP)高强度表达。q RT-PCR结果显示:mi R-103a-3p相对表达量在未感染mi R-103a-3p-inhibitor慢病毒的PANC-1组(1.002±0.160)与阴性病毒感染的PANC-1组(0.956±0.250)间差异无显著性,但慢病毒感染的PANC-1组的相对表达量(0.317±0.320)显著下降(P<0.05)。结论:mi R-103a-3p在侵袭能力较强的胰腺癌细胞株中表达增高,mi R-103a-3p-inhibitor能稳定转染PANC-1细胞系并抑制其mi R-103a-3p表达。

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨mi R-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,q RT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中mi R-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM3000将mi R-103a-3p mimic、mimic NC、mi R-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,q RT-PCR检测mi R-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。结果 mi R-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);q RT-PCR结果显示,转染mi R-103a-3p mimic组细胞中mi R-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染mi R-103a-3p inhibitor组细胞中mi R-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。结论 mi R-103a-3p在肺癌组织中低表达,mi R-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。

安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及Tau蛋白磷酸化的影响

目的观察安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响,探讨其可能作用机制。方法采用β淀粉样蛋白_(25-35)诱导PC12细胞构建阿尔茨海默病体外模型,将细胞分为空白组、模型组、安神定志方组、过表达组和安神定志方+过表达组(联合组),采用安神定志方含药血清和miR-103a-3p模拟剂进行干预。流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,RT-qPCR检测细胞miR-103a-3p mRNA表达,Western blot检测细胞脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)、p-TrkB、Tau、p-Tau蛋白表达。结果与空白组比较,模型组PC12细胞各时点细胞活力明显降低,凋亡率明显增加,LDH活性和MDA含量明显增加,SOD和GSH-Px活性明显降低,miR-103a-3p mRNA表达明显升高,p-Tau蛋白表达明显升高,BDNF、p-TrkB蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,安神定志方组和联合组PC12细胞各时点细胞活力明显升高,凋亡率明显降低,LDH活性和MDA含量明显降低,SOD和GSH-Px活性明显增加,miR-103a-3p mRNA表达明显降低,p-Tau蛋白表达明显降低,BDNF、p-TrkB蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论安神定志方能通过下调miR-103a-3p表达激活BDNF/TrkB信号通路,从而抑制Tau蛋白磷酸化,发挥对PC12细胞的保护作用。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的机制研究

目的探讨LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤及细胞凋亡的影响与分子机制。方法体外培养大鼠关节软骨细胞,分为NC组、IL-1β组(IL-1β浓度为10 ng/mL)。采用qRT-PCR检测细胞中FGD5-AS1、miR-103a-3p的表达水平。分别将pcDNA-FGD5-AS1、miR-103a-3p mimics转染至软骨细胞,随后使用IL-1β处理48 h。采用ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-8水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-103a-3p的靶向关系;Western blot检测Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达量。结果与NC组相比,IL-1β组软骨细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P<0.05),miR-103a-3p、Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05),IL-6、TNF-α、IL-8水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05);FGD5-AS1过表达后可明显降低IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、p-IκBα水平(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05),抑制Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3表达(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实FGD5-AS1靶向结合miR-103a-3p并可负向调控miR-103a-3p的表达(P<0.05);miR-103a-3p过表达可明显逆转FGD5-AS1过表达对细胞凋亡及炎症反应的抑制作用(P<0.05)。结论LncRNA FGD5-AS1可通过靶向负调控miR-103a-3p的表达从而抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞炎症反应及细胞凋亡,其作用机制可能通过抑制NF-κB信号通路激活有关。

安神定志方对阿尔茨海默病大鼠海马组织miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响

目的观察安神定志方对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马组织miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响,探讨其相关作用机制。方法通过GEO数据库筛选AD海马组织差异表达miRNA。50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、miR-103a-3p mimic组、安神定志方组和miR-103a-3p mimic+安神定志方组,每组10只,采用Aβ1-42侧脑室注射制备AD大鼠模型。造模后各给药组给予相应药物干预4周。Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察海马组织形态,RT-PCR检测海马组织miR-103a-3p基因的表达,Western blot和免疫组化检测海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)及Tau蛋白的表达。结果通过GEO数据库共筛选出34个差异miRNA,其中17个上调、17个下调。与模型组比较,安神定志方显著增加AD大鼠跨越平台次数和有效停留时间,减少逃避潜伏期,改善海马CA1区组织形态,上调BDNF的表达,抑制miR-103a-3p、p-TauSer396和p-TauThr231的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论安神定志方可能通过抑制海马组织miR-103a-3p的表达进而促进BDNF的表达,调控Tau蛋白的磷酸化水平,从而促进AD大鼠学习记忆能力。

Linc00152靶向miR-103a-3p对膀胱癌细胞放射敏感性和增殖、凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA Linc00152(LncRNA Linc00152)影响膀胱癌细胞放射敏感性、增殖及凋亡的分子机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测膀胱癌组织中Linc00152的表达;采用RNA干扰技术抑制膀胱癌BIU-87细胞中Linc00152的表达,利用脂质体转染技术上调miR-103a-3p的表达。应用双荧光素酶报告实验验证Linc00152与miR-103a-3p是否存在靶向作用。噻唑蓝(MTT)法检测转染后各组细胞增殖活性;流式细胞术检测转染后各组细胞凋亡情况;克隆形成实验检测放射照射后细胞存活分数及放射敏感性;Western印迹检测细胞中Cyclin D1、Bcl-2、P21、Bax表达。结果膀胱癌组织中Linc00152的相对表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。与si-NC组比较,si-Linc00152组膀胱癌BIU-87细胞活性显著降低,而细胞凋亡率显著升高,并可促进P21、Bax表达,而抑制Cyclin D1、Bcl-2表达(均P<0.05),miR-103a-3p过表达对膀胱癌BIU-87细胞具有相同作用。克隆形成试验结果显示,与阴性对照组比较,在膀胱癌BIU-87细胞中miR-103a-3p组与si-Linc00152组的放射增敏比分别为1.879、1.740,细胞存活分数均显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示Linc00152可竞争性结合miR-103a-3p并可负向调控其表达。抑制miR-103a-3p表达并抑制Linc00152表达可促进BIU-87细胞增殖及存活,而抑制细胞凋亡。结论抑制Linc00152表达可通过上调miR-103a-3p表达进而抑制膀胱癌细胞增殖及促进其凋亡,并可增强细胞放射敏感性。

胆囊癌组织中miR-103a-3p、SIX4表达及与患者临床病理特征和预后的关系

目的探讨胆囊癌组织中微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)、SIX同源盒蛋白4(SIX4)表达及与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择80例胆囊癌患者,取手术切除癌组织和癌旁组织,采用qRT-PCR法检测癌组织和癌旁组织中miR-103a-3p、SIX4表达,分析不同临床病理特征胆囊癌组织中miR-103a-3p、SIX4表达差异,Kaplan-Meier法分析不同miR-103a-3p、SIX4表达患者的生存差异,Cox比例风险回归模型分析胆囊癌患者预后的影响因素。结果胆囊癌组织中miR-103a-3p表达低于癌旁组织(P<0.05),SIX4表达高于癌旁组织(P<0.05)。TNM分期Ⅲ期、低分化、肝脏浸润、胆总管浸润、淋巴结转移患者miR-103a-3p表达低于TNM分期Ⅰ、Ⅱ期、中高分化和无肝脏浸润、无胆总管浸润、无淋巴结转移患者(P均<0.05),SIX4表达高于TNM分期Ⅰ、Ⅱ期、中高分化和无肝脏浸润、无胆总管浸润、无淋巴结转移患者(P均<0.05)。胆囊癌患者miR-103a-3p表达与SIX4表达呈负相关(r=-0.532,P<0.05)。随访期间患者死亡59例,miR-103a-3p低表达、SIX4高表达胆囊癌患者3年总生存率低于miR-103a-3p高表达、SIX4低表达患者(Log-Rankχ2分别为6.761、5.853,P均<0.05)。肝脏浸润、淋巴结转移、SIX4高表达是胆囊癌患者预后的危险因素(P均<0.05),miR-103a-3p高表达是保护因素(P<0.05)。结论胆囊癌组织中miR-103a-3p表达上调,SIX4表达下调,且与胆囊癌恶性临床病理特征和生存率低下有关。

circMAT2B靶向miR-103a-3p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的探讨环状RNA MAT2B(circular RNA MAT2B,circMAT2B)靶向微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及其作用机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,采用高糖诱导HK-2细胞建立细胞损伤模型(HG组),正常培养的HK-2细胞记为Con组;si-NC、si-circMAT2B、miR-NC、miR-103a-3p mimics、si-circMAT2B与anti-miR-NC、si-circMAT2B与anti-miR-103a-3p分别转染入HK-2细胞后加入25 mmol/L葡萄糖处理细胞(HG+si-NC组、HG+si-circMAT2B组、HG+miR-NC组、HG+miR-103a-3p组、HG+si-circMAT2B+anti-miR-NC组、HG+si-circMAT2B+anti-miR-103a-3p组);采用定量反转录聚合酶链式反应法检测circMAT2B与miR-103a-3p的表达量;采用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测circMAT2B与miR-103a-3p的靶向关系。结果与Con组比较,HG组circMAT2B的表达水平与凋亡率升高(P<0.05),IL-6、TNF-α的水平升高(P<0.05),miR-103a-3p的表达水平降低(P<0.05);与HG+si-NC组比较,HG+si-circMAT2B组IL-6、TNF-α的水平降低(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05);circMAT2B能够吸附miR-103a-3p而靶向调控其表达;与HG+miR-NC组比较,HG+miR-103a-3p组IL-6、TNF-α的水平与Bax蛋白水平降低(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05);与HG+si-circMAT2B+anti-miR-NC组比较,HG+si-circMAT2B+anti-miR-103a-3p组IL-6、TNF-α的水平升高(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05)。结论抑制circMAT2B表达可通过负向调控miR-103a-3p的表达而抑制细胞炎症因子的分泌及凋亡从而减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤。

鸢尾苷元调控miR-103a-3p/SHC3通路对帕金森病模型细胞损伤的影响

目的探讨鸢尾苷元对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型细胞损伤的影响,分析其是否与调控miR-103a-3p/含有Src同源结构域2的衔接蛋白3(SHC adaptor protein 3,SHC3)通路有关。方法用250 mmol/L的1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^(+))诱导PC12建立PD细胞模型。PC12细胞分为对照组、PD组、PD+鸢尾苷元50μmol/L组、PD+鸢尾苷元100μmol/L组、PD+鸢尾苷元200μmol/L组、PD+anti-miR-NC组、PD+miR-103a-3p Inhibitor组、PD+鸢尾苷元+miR-103a-3p mimic组。CCK-8法检测各组细胞活力,流式细胞术分析各组细胞凋亡率,试剂盒检测各组细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量,RT-qPCR检测miR-103a-3p表达,Werstern blot检测SHC3蛋白水平。双荧光素酶报告实验分析miR-103a-3p和SHC3靶向关系。结果与对照组比较,PD组PC12细胞活力、SOD活性、SHC3蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、MDA水平、LDH释放量、miR-103a-3p表达显著升高(P<0.05)。与PD组比较,PD+鸢尾苷元50μmol/L组、PD+鸢尾苷元100μmol/L组、PD+鸢尾苷元200μmol/L组PC12细胞活力、SOD活性、SHC3蛋白表达显著升高(P<0.05),凋亡率、MDA水平、LDH释放量、miR-103a-3p表达显著降低(P<0.05)。与PD+anti-miR-NC组比较,PD+miR-103a-3p Inhibitor组PC12细胞活力、SOD活性、SHC3蛋白表达显著升高(P<0.05),凋亡率、MDA水平、LDH释放量显著降低(P<0.05)。与PD+鸢尾苷元组比较,PD+鸢尾苷元+miR-103a-3p mimic组PC12细胞活力、SOD活性、SHC3蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、MDA水平、LDH释放量显著升高(P<0.05)。miR-103a-3p与SHC3直接结合。结论鸢尾苷元可保护PD模型细胞凋亡和氧化损伤,其机制与抑制miR-103a-3p/SHC3通路有关。

miR-103a-3p通过调控FEZF1/CDC25A途径影响肝癌细胞的增殖和凋亡

目的探究miR-103a-3p在肝癌细胞的表达及其与锌指蛋白1(FEZF1)/细胞分裂周期25A蛋白(CDC25A)途径的关系。方法体外培养人肝癌Hep G2、BEL-7402细胞,将转染试剂、miR-103a-3p阴性对照质粒、miR-103a-3p mimis质粒分别转染细胞,命名为空白对照组、miR-103a-3p阴性转染组、miR-103a-3p过表达组。实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-103a-3p mRNMA表达;MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆形成试验检测菌落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞中FEZF1、CDC25A蛋白表达情况;荧光素酶活性检测miR-103a-3p与FEZF1靶向调控关系。结果在Hep G2细胞、BEL-7402细胞中,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组miR-103a-3p mRNA表达显著升高(P<0.05)。随着细胞培养时间延长,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率逐渐升高,在同一时间点,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率均升高(P<0.05)。与空白对照组、阴性转染组相比,细胞菌落数量显著降低,细胞凋亡率显著升高,G0/G1期DNA含量升高,S期细胞DNA含量下降,FEZF1、CDC25A蛋白表达均降低(P<0.05)。荧光素酶活性测定显示,在3'UTR-Wt的细胞中,与阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而3'UTR-Mut的细胞中,阴性转染组与miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性无显著差异(P>0.05)。结论 miR-103a-3p过表达后能够抑制肝癌细胞的增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞,促进其凋亡,其机制可能与靶向调控FEZF1/CDC25A表达有关。

hsa-miR-103a-3p影响食管鳞状细胞癌细胞化疗耐药性的机制研究

目的:探讨hsa-miR-103a-3p影响食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞对奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)耐药的机制。方法:采用RT-qPCR验证测序结果中hsa-miR-103a-3p在不同ESCC细胞系中的表达;转染hsa-miR-103a-3p mimics或inhibitor,验证hsa-miR-103a-3p是否可以逆转ESCC细胞系的耐药表型。应用双萤光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证hsa-miR-103a-3p与RASSF8(Ras association domain family member 8)的靶向调控关系;挽救实验验证改变RASSF8的表达是否可以逆转由hsa-miR-103a-3p引起的耐药表型。PCR-array实验检测hsa-miR-103a-3p参与ESCC的耐药机制;Kaplan-Meier生存分析预测hsa-miR-103a-3p高表达与患者生存时间的关系。结果:hsa-miR-103a-3p在OXA敏感ESCC细胞系中高表达(P<0.05);hsa-miR-103a-3p的表达影响ESCC细胞对OXA的敏感性(P<0.05);与对照组相比,过表达hsa-miR-103a-3p能够降低RASSF83’端非翻译区萤光素酶报告基因质粒的活性(P<0.05);挽救实验结果显示,改变RASSF8的表达可有效挽救由hsa-miR-103a-3p引起的耐药表型(P<0.05)。PCR-array实验结果显示,RASSF8高表达能够促进XPA(xeroderma pigmentosum complementation group A)和XPC(xeroderma pigmentosum complementation group C)表达。配对t检验分析结果显示,hsamiR-103a-3p在肿瘤组织中高表达;Kaplan-Meier生存分析显示,与hsa-miR-103a-3p低表达的患者相比,hsa-miR-103a-3p高表达的患者生存时间显著缩短(P<0.05)。结论:hsa-miR-103a-3p低表达通过靶向上调RASSF8的表达促进ESCC细胞对OXA耐药。

LncRNA NEAT1通过靶向miR-103a-3p/SDF2轴调节滋养层细胞增殖、凋亡和侵袭

目的:探讨lncRNA NEAT1在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达及对滋养层细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法:qRT-PCR检测lncRNA NEAT1在PE患者胎盘组织中的表达,将人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo随机分为对照(control)组、pcDNA-NC组、pcDNA-NEAT1组、si-NC组、si-NEAT1组、si-NEAT1+inhibitor NC组、si-NEAT1+miR-103a-3p inhibitor组,分别检测各组HTR-8/SVneo细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,Western blot检测SDF2蛋白表达。双荧光素酶报告基因验证LncRNA NEAT1、SDF2与miR-103a-3p的靶向关系。结果:LncRNA NEAT1在PE患者胎盘组织中表达水平升高。与pcDNA-NC组比较,pcDNA-NEAT1组lncRNA NEAT1表达、SDF2蛋白表达、细胞凋亡率显著升高,miR-103a-3p表达及细胞增殖活性、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-NEAT1组lncRNA NEAT1表达、SDF2蛋白表达、细胞凋亡率显著降低,miR-103a-3p表达及细胞增殖活性、迁移和侵袭能力显著升高(P<0.05)。下调miR-103a-3p表达可明显减弱沉默lncRNA NEAT1表达对HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移与侵袭的促进作用,并增加细胞凋亡(P<0.05)。双荧光素酶检测结果显示,lncRNA NEAT1、SDF2与miR-103a-3p有靶向关系。结论:LncRNA NEAT1在PE胎盘组织中高表达,沉默lncRNA NEAT1表达可通过上调miR-103a-3p,抑制SDF2表达,促进滋养层细胞增殖与侵袭。

miR-103a-3p靶向RCAN1对MPP^+诱导的帕金森病细胞模型损伤的影响及机制研究

目的研究miR-103a-3p对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞模型损伤的影响和机制。方法采用不同浓度MPP+作用于SK-N-SH细胞24 h,细胞计数(CCK-8)试剂盒检测细胞存活情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,确定MPP+浓度,建立PD细胞模型。RT-qPCR检测PD细胞模型miR-103a-3p和钙调蛋白1(RCAN1)表达。将miR-103a-3p模拟物(miR-103a-3p mimics)、RCAN1小干扰RNA分别转染SK-N-SH细胞,经MPP+处理24 h,采用CCK-8和流式细胞术分别检测SK-N-SH存活和凋亡情况。Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达变化。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-103a-3p对RCAN1的靶向调控作用。将miR-103a-3p mimics与RCAN1过表达载体共转染SK-N-SH细胞,经MPP+处理24 h,检测细胞存活和凋亡情况。结果0.1、0.2、0.4 mmol/L的MPP+处理后SK-N-SH细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。选择0.2 mmol/L MPP+建立PD细胞模型。PD细胞模型中miR-103a-3p的表达显著降低,RCAN1 mRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.01)。过表达miR-103a-3p或干扰RCAN1表达后,MPP+诱导的SK-N-SH细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低,CyclinD1蛋白的表达显著升高,Cleaved-caspase-3蛋白的表达显著降低(P<0.01)。miR-103a-3p mimics和WT-RCAN1共转染组SK-N-SH细胞荧光素酶活性高于miR-NC和WT-RCAN1共转染组(P<0.01)。与过表达miR-103a-3p比较,同时过表达miR-103a-3p和RCAN1后MPP+诱导的SK-N-SH细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,CyclinD1蛋白的表达显著降低,Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论在PD细胞模型中,过表达miR-103a-3p通过靶向RCAN1可减轻MPP+引起的SK-N-SH细胞存活抑制和凋亡。miR-103a-3p和RCAN1是PD的潜在治疗靶点。

MiR-103a-3p靶向FLOT2调控甲状腺癌细胞增殖、 凋亡的分子机制

目的:研究miR-103a-3p对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:运用RT-q PCR法检测甲状腺癌细胞SW579,FTC-133及人甲状腺上皮细胞TEC中miR-103a-3p、脂筏结构蛋白2(FLOT2)的表达。将miR-NC(miR-NC组)、miR-103a-3p mimics(miR-103a-3p组)、anti-miR-NC(anti-miRNC组)、anti-miR-103a-3p(anti-miR-103a-3p组)、si-NC(si-NC组)、si-FLOT2(si-FLOT2组)、miR-103a-3p+pc DNAmimics(miR-103a-3p+pc DNA组)、miR-103a-3pmimics+pc DNA-FLOT2(miR-103a-3p+pc DNA-FLOT2组)用脂质体法转染至SW579细胞。蛋白质印迹法检测细胞中FLOT2、多肿瘤抑制基因(P16)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶[poly-(ADPr i bose)poly merase,PA R P]、裂解的PA R P(cleaved-PA R P)、半胱天冬酶-3的前体(pro-caspase-3)、裂解的半胱天冬酶3(cleaved-caspase-3)的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果:与人甲状腺上皮细胞TEC相比,甲状腺癌细胞中miR-103a-3p的表达明显下调,FLOT2的表达明显上调(P<0.05);过表达miR-103a-3p、敲减FLOT2均可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡;miR-103a-3p明显抑制野生型FLOT2细胞的荧光活性,且负向调控FLOT2的表达;过表达FLOT 2逆转miR-103a-3p对甲状腺癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:miR-103a-3p可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向FLOT2相关,可为甲状腺癌的治疗提供参考。

miR-103a-3p在乳腺癌组织和血清中的表达及通过下调PDK4抑制乳腺癌细胞的有氧糖酵解及增殖

目的:探讨miR-103a-3p在乳腺癌组织及血清中的表达及其作用机制。方法:选用2017年3月1日至2017年8月31日在海南医学院第二附属医院肿瘤外科手术切除、经病理确诊为乳腺癌的31例癌组织及对应的21例癌旁组织标本、38例乳腺癌患者及22例健康体检者的血清标本,以及乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231,分别利用慢病毒载体pHBLV-U6-Luc-T2A-Puro和PLL3.7敲低乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中的miR-103a-3p和PDK4,qPCR法和Western blotting法检测miR-103a-3p和PDK4在癌组织、血清及乳腺癌细胞系中mRNA和蛋白的表达,CCK-8细胞增殖实验检测转染的乳腺癌细胞MCF-7和MDAMB-231的细胞增殖水平,用Olympus AU5400检测葡萄糖消耗与乳酸生成。结果:乳腺癌患者组织和血清中miR-103a-3p表达水平均显著低于癌旁组织(P<0.01,P<0.05)。敲低miR-103a-3p后,乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中葡萄糖消耗(P<0.01)与乳酸生成增多(P<0.01)、细胞增殖增强(P<0.01)、PDK4表达上调(P<0.01);在miR-103a-3p沉默的MCF-7和MDA-MB-231细胞中,敲低PDK4导致减弱葡萄糖消耗(P<0.01)、乳酸生成(P<0.01)和细胞增殖(P<0.01)。结论:乳腺癌细胞中miR-103a-3p通过抑制PDK4减弱糖酵解活动,从而抑制乳腺癌细胞增殖。

miR-103a-3p过表达靶向负调控PDK4抑制胶质瘤生长及侵袭

目的探讨miR-103a-3p过表达对胶质瘤C6细胞恶性生物学行为的影响及对裸鼠移植瘤生长的影响。方法体外培养鼠源性C6胶质瘤细胞,转染miR-103a-3p mimics质粒过表达miR-103a-3p,转染miR-103a-3p mimics+pcDNA-PDK4质粒分析PDK4过表达对miR-103a-3p过表达的影响;EDU法检测细胞增殖活性;qRT-PCR检测miR-103a-3p、PDK4 mRNA表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell实验检测细胞侵袭能力;免疫印迹法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin蛋白表达水平。取40只裸鼠,其中20只皮下注射未转染质粒的C6细胞、20只皮下注射转染miR-103a-3p mimics质粒的C6细胞构建移植瘤模型,分析miR-103a-3p mimics过表达对移植瘤生长的影响。结果生物信息学及双荧光素酶试验证实PDK4是miR103a-3p的靶点。过表达miR-103a-3p明显降低C6细胞PDK4、Ki67、PCNA、N-cadherin、vimentin表达水平(P<0.05),明显抑制C6细胞增殖活性、侵袭能力(P<0.05),明显增加C6细胞E-cadherin表达水平、细胞凋亡率(P<0.05)。过表达PDK4明显抑制过表达miR-103a-3p对C6胶质瘤细胞的作用(P<0.05)。过表达miR-103a-3p明显抑制裸鼠移植瘤生长(P<0.05),抑制肿瘤组织PDK4、Ki67、vimentin表达(P<0.05)。结论过表达miR-103a-3p通过靶向抑制PDK4表达,一方面抑制胶质瘤细胞增殖、促进胶质瘤细胞凋亡,从而抑制胶质瘤生长;另一方抑制胶质瘤上皮-间质转化过程,从而抑制胶质瘤细胞侵袭。