MiR-29b参与大鼠膝骨关节炎引起的软骨退变和股四头肌萎缩

目的:探讨mi R-29b在膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠软骨自噬和肌肉萎缩中的作用及机制。方法:SD大鼠按随机数字表法分为对照组、KOA组、KOA+miR-NC antagomir组、KOA+mi R-29b antagomir组。前交叉韧带离断术诱导KOA,术前1周膝关节注射mi R-NC antagomir或mi R-29b antagomir。30天后取材,验证造模是否成功;检测肌肉和软骨中miR-29b含量及miR-29b antagomir对软骨退变、自噬、凋亡和肌肉萎缩的影响;检测萎缩相关蛋白MuRF1和Atrigon-1的表达,以及肌肉中PI3K、p-AKT、P70的表达。结果:q PCR显示antagomir可下调关节和肌肉中的mi R-29b;负重实验表明,抑制mi R-29b改善关节功能;HE、PAS染色和WB显示下调mi R-29b抑制肌肉萎缩;免疫组化显示抑制mi R-29b可通过激活软骨中LC3和beclin-1增加自噬;免疫荧光和WB显示mi R-29b下调影响IGF/PI3K/AKT信号。结论:mi R-29b antagomir对KOA后软骨自噬和肌肉萎缩具有治疗作用,mi R-29b可作为KOA潜在治疗靶点。

人miR-29b过表达慢病毒载体的构建及其对A549细胞迁移的影响

[目的]构建能高效表达人mi R-29b的慢病毒载体,研究其对人肺腺癌A549细胞迁移的影响。[方法]PCR扩增mi R-29b前体序列,克隆入慢病毒表达载体,测序鉴定。包装好的慢病毒感染A549细胞,流式细胞仪分选后用荧光定量PCR检测mi R-29b表达水平,划痕实验观察过表达mi R-29b对A549细胞迁移的影响。[结果]测序结果证明成功构建人mi R-29b过表达慢病毒载体。mi R-29b过表达慢病毒感染效率为88.56%,使A549细胞中mi R-29b表达升高2.78倍。与A549细胞相比,稳定过表达mi R-29b的A549-mi R-29b细胞的迁移能力显著性降低。[结论]成功构建mi R-29b过表达慢病毒载体,过表达mi R-29b可抑制A549细胞的迁移,为进一步研究mi RNA对肿瘤转移的调控作用奠定了基础。