miR-486、miR-499在肺癌患者血浆中的表达及临床价值

目的：探讨miR-486和miR-499在肺癌患者血浆中的表达及临床意义，分析其在非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌（SCLC）中表达的差异。方法收集35例肺癌患者（其中NSCLC组21例，SCLC组14例）及30例健康者（对照组）血样标本，运用qPCR的方法测定各组血浆miR-486、miR-499的表达量，分析NSCLC和SCLC患者血浆中miR-486和miR-499的表达量与各临床特征的关系。对所有入组者血浆miRNA的相对表达量进行ROC曲线分析，计算曲线下面积（AUC）、最佳临界值及其敏感度和特异度。结果 NSCLC和SCLC组中血浆miR-486、miR-499的相对表达量均低于对照组（P＜0.05）。NSCLC组血浆miR-486在不同临床特征患者间表达差异均无统计学意义；而TNM分期越晚、分化程度越低，miR-499表达越低（P＜0.05）。SCLC组分期越晚，miR-486表达越低；而miR-499在不同临床特征患者间表达差异均无统计学意义。miR-486诊断肺癌的AUC为0.83（95%CI为0.73-0.93），敏感度和特异度分别为90.0%和68.6%，最佳诊断界值为1.02；miR-499诊断肺癌的AUC为0.75（95%CI为0.62-0.88），敏感度和特异度分别为60.0%和94.3%，对肺癌的最佳诊断界值为0.32。结论血浆miR-486、miR-499在肺癌患者中表达下调，可能预示预后不良，有望作为肺癌潜在筛查及预后的指标。

MicroRNA-486-5p通过下调Neuropilin-2的表达抑制人大肠癌中微淋巴管的生成

目的:探讨过表达micro RNA-486-5p(mi R-486-5p)对人大肠癌细胞系SW620体内生长的作用及其作用机制的研究.方法:构建mi R-486-5p的过表达质粒,体外脂质体法瞬时转染人大肠癌细胞SW620;建立人大肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,实验组每3 d瘤周注射mi R-486-5p过表达质粒,对照组注射等量的空白载体.每天观察肿瘤的生长情况并每3 d测量肿瘤的体积;实时荧光定量-PCR(Real-time PCR)检测各组肿瘤组织中mi R-486-5p的表达水平;免疫组织化学技术检测移植瘤内神经纤毛蛋白-2(neuropilin-2,NRP2)及微淋巴管的的分布情况;Western blot技术检测各组移植瘤中NRP2蛋白的表达.结果:转染后,实验组中mi R-486-5p的相对表达量较对照组提高12.57±2.31倍,过表达m i R-486-5p后实验组裸鼠皮下移植瘤的生长速度较对照组明显减缓(P<0.05),瘤体质量明显减轻(P<0.05).过表达mi R-486-5p可明显抑制NRP2蛋白的表达(P<0.05),此外,mi R-486-5p组微淋巴管密度降低.结论:过表达mi R-486-5p可明显抑制大肠癌细胞的生长,抑制微淋巴管的生成,这可能与下调NRP2蛋白的表达有关.

猪miR-486慢病毒表达载体的构建及鉴定

mi R-486在肌肉生长发育和肌肉疾病的发生中具有重要的功能,本研究旨在构建猪mi R-486慢病毒表达载体,鉴定其在巴马小型猪成纤维细胞中过表达水平,并利用胞质注射生产转基因胚胎,为研究mi R-486在肌肉生长发育中的功能奠定基础。以巴马小型猪基因组DNA为模板,扩增mi R-486前体及部分侧翼序列,利用T4连接酶将其连入p CDH-CMV-MCS-EF1载体,构建LV-mi R-486慢病毒表达载体;在巴马小型猪成纤维细胞中过表达mi R-486并利用Real-time PCR验证其过表达效率,通过胞质注射生产转mi R-486的猪胚胎。双酶切和测序结果证明成功构建了LV-mi R-486重组载体,将慢病毒载体转染巴马小型猪成纤维细胞后mi R-486上调,经胞质注射后在胚胎发育早期和囊胚期均有绿色荧光表达。本研究成功构建了猪mi R-486慢病毒表达载体,在巴马小型猪成纤维细胞中过表达并生产出转mi R-486的阳性胚胎,为后续研究mi R-486的功能奠定基础。