胃癌根治术后血清微小RNA-92a、X型胶原α1链、胃泌素、胃动素水平与其预后的关系

目的 探究胃癌根治术后血清微小RNA-92a(miR-92a)、X型胶原α1链(COL10A1)、胃泌素(gastrin,GAS)与胃动素(motilin,MOT)水平与其预后的关系。方法 将2017年1月至2022年1月于山西省临汾市中心医院行胃癌根治术的65例患者作为研究对象,比较术前及术后3d血清miR-92a、COL10A1、GAS及MOT水平,随访患者术后1年的预后情况,将患者分为预后良好组与预后不良组,比较两组血清miR-92a、COL10A1、GAS及MOT水平,并采用受试者操作特征(ROC)曲线分析其对预后的预测价值。结果 胃癌根治术后患者血清miR-92a、COL10A1、GAS及MOT水平均较术前降低,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组肿瘤直径≥5cm、TNM分期为Ⅲ期、miR-92a及COL10A1水平高于预后良好组(P<0.05),GAS、MOT水平低于预后良好组(P<0.05);两组患者的年龄、性别、肿瘤位置之间的差异无统计学意义(P>0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,肿瘤直径、TNM分期、miR-92a、COL10A1、GAS、MOT是患者预后不良的影响因素(P<0.05)。绘制ROC特征曲线显示,血清miR-92a、COL10A1、GAS、MOT对预后不良均具有一定的预测效能。结论 血清miR-92a、COL10A1水平上调,GAS、MOT水平下调会增加胃癌根治术后预后不良的发生风险,四项指标对胃癌根治术后预后水平均具有一定预测价值。

LINC00092靶向微小RNA-373-5p对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响

目的探究长基因间非蛋白编码RNA 92(LINC00092)在骨肉瘤细胞迁移和侵袭进展中的作用及潜在分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测人成骨细胞(hFOB1.19)和骨肉瘤细胞系(SOSP-9607、U2-OS、Saos-2和MG-63)中LINC00092的表达水平。选取MG-63细胞并分成LINC00092组(LINC00092过表达)、pcDNA组(阴性对照)和Control组(空白对照)。采用MTT、Transwell实验和划痕实验体外评估MG-63细胞的增殖、侵袭和迁移能力。通过双荧光素酶报告基因实验、qPCR和Western blot筛选并证实微小RNA-373-5p(miR-373-5p)与LINC00092的靶向作用关系。结果与hFOB1.19细胞相比,LINC00092在不同骨肉瘤细胞系中的表达均显著异常下调(P<0.05)。与pcDNA组相比,LINC00092组MG-63细胞活力、细胞划痕愈合率和细胞穿膜数量均下降。miR-373-5p是LINC00092的直接靶点且受其负调控(P<0.05)。此外,LINC00092组增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的mRNA和蛋白水平下调(P<0.05)。结论LINC00092可以靶向负调控miR-373-5p,并影响PCNA和MMP9表达,抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭过程。

外周血cTnT、Hcy及miRNA-92表达水平对急性冠状动脉综合征患者病情严重程度及短期预后的诊断价值

目的探讨外周血心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)和同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)及微小RNA(microRNA,miRNA)-92表达水平对急性冠状动脉综合征(acute coronary syndromes,ACS)患者病情严重程度及短期预后的诊断价值。方法选取广安市人民医院心血管科于2020年1月至2021年1月收治的206例ACS患者作为研究对象。分析外周血c TnT、Hcy及miRNA-92表达水平与Gensini评分的相关性,并对患者治疗后30 d进行随访,观察再次发生主要不良心血管事件(major adverse cardiac events,MACE)情况,建立ACS患者30 d MACE的预测模型,并对模型的诊断效能进行分析。结果206例患者中急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者135例(65.5%),不稳定型心绞痛(unstable angina,UA)患者71例(34.5%),冠状动脉单支病变25例(12.1%),双支病变62例(30.1%),多支病变119例(57.8%)。与UA组患者比较,AMI组患者外周血cTnT、Hcy和miRNA-92表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。而不同冠状动脉病变支数组患者间上述指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。多元线性回归分析提示,外周血c TnT、Hcy和miRNA-92表达水平与Gensini评分呈正相关,回归方程为Y_(Gensini)=27.269+1.870×X_(miRNA)-92+1.595×X_(cTnT)+0.827×X_(Hcy)。不同预后患者二元Logistic回归分析提示,外周血c TnT、Hcy和miRNA-92表达水平升高是ACS患者30 d内并发MACE的独立危险因素,联合上述3个指标预测MACE发生的AUC较单个指标显著提升,结果具有统计学意义(P<0.01)。结论外周血cTnT、Hcy和miRNA-92表达水平与ACS患者病情严重程度密切相关,且联合上述3个指标可显著提升对ACS患者短期预后的预测价值。

外周血miR-92b-5p与miR-148b-3p在2型糖尿病进展至糖尿病肾病中的表达及交互作用

目的探究2型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)进展至糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)过程中血清微小RNA(microRNA,miR)-92b-5p、miR-148b-3p水平变化和作用。方法选取我院T2DM患者400例开展前瞻性研究,其中200例非DN患者作为T2DM组,200例DN患者作为DN组。比较两组临床资料、血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平,并比较DN组不同分期患者血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平,分析DN组血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平与临床分期的相关性,并分析T2DM进展至DN过程中血清miR-92b-5p与miR-148b-3p的交互作用,及血清miR-92b-5p、miR-148b-3p水平预测DN的价值。结果DN组血肌酐(serum creatinine,SCr)、血清miR-148b-3p水平高于T2DM组,估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)及血清miR-92b-5p水平低于T2DM组(P<0.05);DN组临床期患者血清miR-148b-3p水平高于早期患者,血清miR-92b-5p水平低于早期患者(P<0.05);DN组血清miR-92b-5p水平与临床分期呈负相关,血清miR-148b-3p水平与临床分期呈正相关(P<0.05);在T2DM进展至DN过程中,miR-92b-5p低表达与miR-148b-3p高表达呈次相乘模型的正向交互作用(P<0.05);miR-92b-5p、miR-148b-3p预测T2DM进展至DN的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.840、0.812,二者联合预测的AUC最大,为0.911。结论DN患者血清miR-92b-5p水平明显降低,miR-148b-3p水平明显升高,且与DN临床分期密切相关,miR-92b-5p低表达、miR-148b-3p高表达共同促进T2DM进展至DN过程。

血清miRNA-196a、miRNA-92a表达水平与宫颈癌根治术后复发的关系

目的 探讨血清微小RNA(miRNA)-196a、miRNA-92a表达水平与宫颈癌根治术后复发的关系。方法 选取2015年1月至2016年6月甘肃省肿瘤医院收治的113例行宫颈癌根治术患者为宫颈癌组,68名体检健康女性为对照组,qRT-PCR检测两组血清miRNA-196a、miRNA-92a表达。分析宫颈癌患者血清miRNA-196a、miRNA-92a水平与临床病理特征的关系。术后随访5年,根据血清miRNA-196a、miRNA-92a水平均值将宫颈癌患者分为高表达和低表达。比较高表达和低表达宫颈癌患者复发率。多因素Cox回归分析宫颈癌根治术后复发的影响因素。受试者操作特征(ROC)曲线分析血清miRNA-196a、miRNA-92a水平对宫颈癌根治术后复发的预测价值。结果 宫颈癌组血清miRNA-196a、miRNA-92a表达高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。不同国际妇产科联盟(FIGO)分期、间质浸润深度、淋巴结转移的宫颈癌患者血清miRNA-196a、miRNA-92a水平比较,差异有统计学意义(P <0.05)。截至末次随访,113例宫颈癌患者术后复发25例(22.12%),miRNA-196a、miRNA-92a高表达复发率高于低表达,差异有统计学意义(P <0.05)。FIGO分期ⅡA期、间质浸润深度≥1/2、淋巴结转移、miRNA-196a≥5.239、miRNA-92a≥1.816是宫颈癌根治术后复发的独立危险因素(HR> 1,P <0.05)。ROC曲线显示,miRNA-196a联合miRNA-92a预测宫颈癌根治术后复发的曲线下面积大于两者单独预测(Z=2.319、2.582,P=0.020、0.010)。结论 宫颈癌血清miRNA-196a、miRNA-92a水平高表达,二者与FIGO分期、间质浸润深度、淋巴结转移、复发有关,可作为宫颈癌根治术后复发的预测指标。

冠心舒通胶囊对STEMI合并阻塞性睡眠呼吸暂停患者外周血循环微小RNA-92a表达的影响

目的探讨冠心舒通胶囊对ST段抬高型心肌梗死(STEMI)合并阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)患者外周血循环微小RNA-92a(miR-92a)表达及临床预后的影响.方法根据多导睡眠监测(PSG)结果,连续入选2017年8月至2019年8月在广西壮族自治区人民医院心内科住院的90例STEMI合并OSA患者,按随机数字表法分为治疗组和对照组,每组45例.所有STEMI患者均接受急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)及常规冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)二级预防治疗,治疗组在常规治疗基础上加用冠心舒通胶囊(每次0.9 g,每日3次),均随访6个月.所有患者分别在治疗前、PCI术后24 h以及用药后6个月随访时抽取外周血,检测外周血循环miR-92a的表达.比较两组患者用药后6个月随访期间主要不良心脑血管事件(MACCE),包括心源性死亡、非致死性心肌梗死/再发心绞痛致再次入院、再次血运重建、脑卒中和心力衰竭(心衰)的发生情况.结果PCI术后24 h,两组患者的miR-92a表达水平均较治疗前明显降低〔2^(-ΔCt):治疗组为80.67(5.62,168.59)比219.79(77.62,293.00),对照组为92.86(10.93,193.31)比189.33(89.34,269.25),均P<0.05〕;用药后6个月随访,治疗组循环miR-92a表达水平明显低于对照组〔2^(-ΔCt):1.10(0.13,4.04)比8.39(4.04,44.66),P<0.05〕.随访期间治疗组MACCE总发生率明显低于对照组〔40.0%(18/45)比71.1%(32/45),P<0.05〕,其中非致死性心肌梗死/再发心绞痛致再次入院率以及心衰发生率均明显低于对照组〔非致死性心肌梗死/再发心绞痛致再次入院:2.2%(1/45)比20.0%(9/45),心衰:20.0%(9/45)比40.0%(18/45),均P<0.05〕.结论冠心舒通胶囊可进一步下调接受PCI治疗的STEMI患者的过表达miR-92a水平,对减少非致死性心肌梗死/再发心绞痛致再次入院和心衰以及MACCE的发生有益.

miRNA-34a、miRNA-145、miRNA-335在脑胶质瘤组织中的表达分析

目的分析微小RNA(miRNA)-34a、miRNA-145及miRNA-335在脑胶质瘤组织的表达意义。方法选取2018年1月~2023年2月沧州市中心医院神经外一科收治的60例脑胶质瘤患者为观察组,同时期到院体检的20例健康者为对照组,比较2组miRNA-34a、miRNA-145、miRNA-335水平,并分析不同疾病脑胶质瘤患者的mi RNA-34a、mi RNA-145、mi RNA-335水平表达情况。结果观察组mi RNA-34a、mi RNA-145、mi RNA-335水平低于对照组,且高级别胶质瘤组各指标水平更低(P<0.05)。结论在脑胶质瘤患者中,miRNA-34a、miRNA-145、miRNA-335水平表达均呈现较低状态,且分级越高,其水平越低,可为患者病情诊断及病理分级提供可靠参考。

血清miR-92a、miR-17、miR-19b对冠心病患者冠状动脉病变程度的评估价值

目的 探讨血清微小RNA-92a(miR-92a)、miR-17、miR-19b对冠心病(CAD)患者冠状动脉(冠脉)病变程度的评估价值。方法 选取因胸闷胸痛不适行冠脉造影检查的92例患者,依据造影检查结果分为对照组30例、CAD组62例。用Gensini评分评估CAD组冠脉病变情况,并将CAD患者分为低评分组(≤40分)32例、高评分组(>40分)30例。收集各组临床资料;用实时荧光定量PCR法检测各组血清miR-92a、miR-17、miR-19b表达;用多因素Logistic回归模型分析CAD发生的影响因素;用Spearman相关分析法分析血清miRNA表达与Gensini积分的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价血清miRNA对CAD病情的评估价值。结果 CAD组HDL-C低于对照组(P<0.05),两组其他临床资料比较差异无统计学意义(P均>0.05)。CAD组miR-92a、miR-17相对表达量高于对照组,miR-19b相对表达量低于对照组(P均<0.05)。miR-92a、miR-17表达升高为CAD发生的危险因素(P均<0.05),miR-19b表达升高为CAD发生的保护因素(P均<0.05)。高评分组血清miR-92a、miR-17相对表达量高于低评分组(P均<0.05),血清miR-19b相对表达量低于低评分组(P<0.05)。CAD患者血清miR-92a、miR-17相对表达量与Gensini积分呈正相关(rs分别为0.529、0.519,P均<0.05),血清miR-19b相对表达量与Gensini积分呈负相关(rs=-0.579,P<0.05)。血清miR-92a、miR-17、miR-19b及三者联合评估CAD患者冠脉病变程度的曲线下面积分别为0.806(95%CI:0.695~0.917)、0.800(95%CI:0.689~0.911)、0.834(95%CI:0.737~0.932)、0.967(95%CI:0.930~1.000)。三者联合评估CAD冠脉病变程度的曲线下面积高于单独评估(P均<0.05)。结论 血清miR-92a、miR-17、miR-19b可作为CAD患者冠状动脉病变程度的评估指标,三者联合检测评估价值更高。

急性髓系白血病患者血清外泌体中miR-92a-3p的表达及其意义

目的:检测急性髓系白血病(AML)患者血清外泌体中微小RNA-92a-3p (miR-92a-3p)表达水平,探讨其对AML的诊断价值。方法:选取AML患者51例(AML组)和34名同期健康体检志愿者(对照组)作为研究对象,收集研究对象外周血标本;差速离心法提取血清外泌体,通过透射电子显微镜、纳米粒度分析仪和Western blotting法鉴定外泌体;采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组研究对象血清外泌体中miR-92a-3p表达水平;根据血清外泌体中miR-92a-3p表达水平绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算ROC曲线下面积(AUC),确定其临界值,根据灵敏度和特异度评估miR-92a-3p表达水平对AML的诊断效能。结果:在透射电子显微镜下外泌体呈外观圆形且中间凹陷的膜状结构,纳米粒度分析仪检测外泌体粒径为30~100 nm,Western blotting法在提取外泌体中检测到CD63和CD9蛋白表达。与对照组比较,AML组患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平明显降低(P<0.01);ROC曲线分析,血清外泌体miR-92a-3p诊断AML的最佳临界值为0.51,灵敏度为76.47%,特异度为94.12%,AUC为0.913,AUC 95%置信区间(CI)为(0.856,0.971)(P<0.001)。结论:AML患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平诊断AML的灵敏度和特异度较高,可应用于早期AML的临床诊断。

miR-494在阿霉素诱导大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制研究

目的探讨mi R-494在阿霉素(DOX)诱导大鼠心肌细胞损伤中的作用及机制。方法将大鼠H9C2细胞分为4组:对照组、DOX组、DOX+阴性对照(NC)模拟物组、DOX+mi R-494模拟物组;除对照组,其余3组均采用5μmol/L DOX与细胞共孵育法构建心肌细胞损伤模型;后两组分别进行NC模拟物、mi R-494模拟物转染。采用细胞计数试剂盒8法检测细胞活力,实时荧光定量聚合酶链反应检测mi R-494、磷酸酶和张力蛋白同系物(PTEN)m RNA表达水平,原位末端转移酶标记染色法检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、PTEN、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量;采用双荧光素酶报告基因实验验证mi R-494与PTEN的相互作用。结果与对照组比较,DOX组H9C2细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平以及LDH、CK-MB含量均明显升高(均P<0.01),而细胞活力、Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(均P<0.01);与DOX+NC模拟物组比较,DOX+mi R-494模拟物组H9C2细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平以及LDH、CK-MB含量均明显降低(均P<0.01),而细胞活力、Bcl-2蛋白表达水平均明显升高(均P<0.01)。PTEN与mi R-494存在结合位点;PTEN-WT的荧光素酶活性被mi R-494模拟物明显抑制(P=0.010),而PTEN-MUT的荧光素酶活性不受mi R-494模拟物影响(P=0.707)。与对照组比较,DOX组H9C2细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平均明显降低(均P<0.01);与DOX+NC模拟物组比较,DOX+mi R-494模拟物组H9C2细胞中p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平均明显升高(均P<0.01)。结论mi R-494可能通过靶向抑制PTEN表达来调控PI3K/Akt信号通路,以改善DOX诱导的心肌细胞损伤。

冠心病合并2型糖尿病患者血清中miR-92a、HbA1c及内皮抑素水平评估预后的临床意义

目的分析微小RNA-92a(miR-92a)、糖化血红蛋白(HbA1c)、内皮抑素(ES)在冠心病(coronary heart disease,CHD)合并2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者中的表达水平及与患者预后的相关性。方法将2020年5月—2021年5月徐州市第一人民医院收治的84例CHD合并T2DM患者纳入观察组,本院同期收治的65例单纯CHD患者纳入单纯CHD组,同期于本院行体检的70名健康体检者设为对照组。检测3组miR-92a、HbA1c、ES表达水平,并对比分析;同时随访1年,依据心血管不良事件发生情况将84例CHD合并T2DM患者分为两个亚组,即预后良好组与预后不良组,对比两组miR-92a、HbA1c、ES表达水平;此外,绘制受试者工作曲线(ROC),分析miR-92a、HbA1c、ES 3项指标单独与联合诊断预测CHD合并T2DM患者预后的效能。结果观察组miR-92a、HbA1c、ES分别为(1.89±0.45)、(11.78±2.12)%、(44.59±4.35)ng/mL高于单纯CHD组(1.23±0.26)、(5.35±1.01)%、(30.36±3.37)ng/mL与对照组(0.84±0.13)、(4.29±0.78)%、(25.48±2.25)ng/mL,差异有统计学意义(P<0.05);预后不良组的miR-92a、HbA1c、ES高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC结果显示:miR-92a、HbA1c、ES联合预测患者预后的曲线下面积(AUC)0.909(95%CI:0.848~0.971)高于3项指标的单独检测[0.776(95%CI:0.659~0.892)、0.860(95%CI:0.740~0.980)、0.795(95%CI:0.697~0.893)]。结论miR-92a、HbA1c、ES在CHD合并T2DM患者中呈高表达,3项指标联合检测可有效预测患者预后,临床应用价值较高。

过/降表达miR-92a的食管鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及PTEN/PI3K/Akt通路蛋白表达变化

目的观察过/降表达miR-92a的食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、迁移、侵袭能力及磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt通路蛋白表达变化。方法将人ESCC细胞系Eca-109随机分为miR-92a过表达组、miR-92a降表达组、过表达阴性对照组、降表达阴性对照组,分别转染miR-92a mimics、miR-92a inhibitor、mimic-NC、inhibitor-NC 24 h。采用CCK-8法检测各组培养24、48、72、96 h的的吸光度(A)值,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。采用Westen blotting法检测细胞PTEN/PI3K/Akt通路蛋白PTEN、PI3K、Akt、磷酸化PTEN(p-PTEN)、p-PI3K、p-Akt。结果各时点细胞A值、细胞迁移距离、穿膜细胞数比较,miR-92a过表达组>过表达阴性对照组、降表达阴性对照组>miR-92a降表达组(P均<0.05)。p-PTEN蛋白miR-92a降表达组>过表达阴性对照组、降表达阴性对照组>miR-92a过表达组,p-PI3K、p-Akt蛋白miR-92a过表达组>过表达阴性对照组、降表达阴性对照组>miR-92a降表达组(P均<0.05),各组PTEN、PI3K、Akt蛋白差异均无统计学意义。结论miR-92a过/降表达可促进促进/抑制ESCC细胞的增殖、迁移及侵袭,其作用可能通过抑制/促进PTEN蛋白磷酸化调控PTEN/PI3K/Akt信号通路实现。

外周血miRNA-124表达水平与创伤性颅脑损伤病情严重程度及预后的关系

目的探究外周血miRNA-124表达水平与创伤性颅脑损伤病情严重程度及预后的关系方法 选取2019年5月~2022年5月我院诊治的118例创伤性颅脑损伤患者,收集记录患者的一般临床资料以及病情、预后情况,观察外周血miRNA-124表达水平与患者病情严重程度的关系,并采用因素logistic回归分析影响患者预后的独立相关因素,采用受试者工作特性曲线(ROC)评估相关指标预测患者预后的预测价值,并以患者预后对相关指标进行比较分析。结果 118例患者中,轻度27例,中度50例,重度41。轻度组miRNA-124低于中、重度组,中度组miRNA-124低于重度组,差异有统计学意义(P <0.05)。118例患者中,92例预后良好,26例预后不良。影响创伤性颅脑损伤病情严重程度的单因素分析结果提示,D-二聚体、APACHEⅡ评分、国家早期预警评分(NEWS)、miRNA-124、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、血糖均是影响创伤性颅脑损伤病情严重程度的相关因素(P <0.05)。进一步多因素logistic回归分析结果提示,miRNA-124(OR=5.436,95%CI:1.600~18.468,P=0.008)、血糖(OR=3.296,95%CI:1.044~10.405,P=0.042)、APACHEⅡ评分(OR=1.633,95%CI:1.023~2.607,P=0.040)均是影响创伤性颅脑损伤病情严重程度的独立危险因素。受试者工作特征曲线(ROC)结果显示,mi RNA-124相对表达量的ROC曲线下面积(AUC)为0.894,其敏感度为0.808,特异度为0.917,3组指标联合的AUC为0.943,其敏感度为0.924,特异度为0.859。结论 患者的miRNA-124、血糖、APACHEⅡ评分均为影响创伤性颅脑损伤病情严重程度的独立影响因素,且miRNA-12相对表达量与3组指标联合对创伤性颅脑损伤病情严重程度具有较好的预测效能,临床治疗可对相关指标予以关注。

微小RNA-92a调控音猥因子途径对心肌缺血再灌注损伤后促血管再生的影响及机制

目的探究微小RNA-92a(miR-92a)调控音猥因子(SHH)途径对心肌缺血再灌注(I/R)损伤后促血管再生的影响及机制。方法从1~3d龄SD大鼠中培养原代心肌细胞后建立心肌细胞缺氧/复氧模型,将其分成心肌细胞常氧培养组和心肌细胞I/R组。miR-92a模拟物(mimic)和拮抗剂(inhibitor)转染入大鼠原代心肌细胞,使miR-92a过表达或低表达,分成对照组、I/R组、miR-92amimic组和miR-92ainhibitor组。细胞计数法8测定各组细胞活力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,ELISA和QT-PCR测定血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和血管生成素1等血管新生因子表达,Westernblot法测定SHH信号通路蛋白表达。结果心肌细胞I/R组miR-92a表达显著高于心肌细胞常氧培养组(3.89±0.29vs1.53±0.19,P<0.01)。对照组、miR-92ainhibitor组、I/R组和miR-92amimic组SHH蛋白(0.57±0.13vs0.51±0.11vs0.24±0.03vs0.14±0.02,P<0.01)、Smoothened蛋白(0.53±0.12vs0.49±0.10vs0.14±0.04vs0.09±0.01,P<0.01)、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(0.56±0.14vs0.50±0.13vs0.15±0.03vs0.08±0.01,P<0.01)和神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(0.58±0.11 vs0.49±0.12vs0.18±0.02vs0.11±0.03,P<0.01)比较差异有统计学意义。结论miR-92a在心肌I/R损伤中异常高表达,抑制miR-92a表达可激活SHH信号通路有效促进血管再生因子表达。

慢性心力衰竭患者血miRNA-21的变化及意义

目的:探讨mi RNA-21在慢性心力衰竭患者中表达的差异及临床意义。方法:入选2014年11月至2015年12月在我科住院的慢性心力衰竭患者150例(CHF组)和体检中心无心力衰竭者45例(对照组)。根据NYHA心功能分级,CHF组被分为A组(心功能Ⅱ级,49例),B组(心功能Ⅲ级,51例)和C组(心功能Ⅳ级,50例)3个亚组;运用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)方法检测mi RNA-21含量。测定B型脑钠肽(BNP)、左室射血分数(LVEF)及左室舒张末内径(LVEDD)等。结果:CHF各组患者mi RNA-21水平均较对照组高,并且C组较A、B组明显升高,B组较A组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。相关分析表明:mi RNA-21的表达量与BNP(r=0.763,P<0.01)、LVEDD(r=0.691,P<0.01)呈正相关,与LVEF呈负相关(r=-0.918,P<0.01)。结论:mi RNA-21可能为心力衰竭潜在的诊断学标记物,并可为慢性心力衰竭诊断及预后评估提供重要参考依据。

急性缺血性脑卒中患者血清miRNA-335表达水平及临床意义

目的检测mi RNA-335(mi R-335)在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清中的表达,探讨其与AIS发病的相关性。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应法测定106例AIS患者及98例健康对照者血清mi R-335表达情况,卒中患者病情评估采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)进行评分,并比较病程为3天内、4~7天和8~14天的AIS患者血清mi R-335表达水平,分析患者血清mi R-335水平与NIHSS评分的相关性。运用生物学数据库预测mi R-335的靶基因,采用DAVID数据库对靶基因集合进行功能注释分析。结果 1与健康对照组相比较,AIS组患者血清mi R-335表达明显下调(P<0.01),病程为3天内、4~7天和8~14天的AIS患者血清中mi R-335水平均低于健康对照组(P<0.01);2血清mi R-335水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.28,P<0.01),NIHSS>5分组患者血清mi R-335水平明显低于NIHSS≤5分组(P<0.01);3数据库分析显示:mi R-335预测靶基因功能分析主要富集在核酸代谢、转录调控、细胞增殖、神经元发育与分化、血管形成的生物学过程,并富集在通道活性的调节、钙离子结合活性、阳离子金属离子结合活性和转录调节的活性等分子功能,定位于细胞核质成分,并富集于MAPK信号转导、氧化应激和血管形成的信号通路中。结论 AIS患者血清mi R-335表达明显下降,与卒中后患者病情密切相关,是其可能的血清生物学标志之一。

食管鳞癌患者血浆miR-424、miR-92a及miR-130b水平变化及意义

目的探讨食管鳞癌(ESCC)患者血浆miR-424、miR-92a及miR-130b水平变化及意义。方法采用qRT-PCR法检测43例食管鳞癌患者及43例同期体检健康者血浆miR-424、miR-92a、miR-130b,分析血浆miR-424、miR-92a、miR-130b水平与食管鳞癌临床病理特征间的关系,应用受试者工作特征(ROC)曲线计算血浆miR-424、miR-92a及miR-130b用于食管鳞癌诊断的特异度及灵敏度,评价其在食管鳞癌中的诊断价值。结果食管鳞癌患者血浆miR-424、miR-92a及miR-130b水平均明显高于体检健康者,差异均有统计学意义(P均<0.05)。血浆miR-92a、miR-130b表达均与食管鳞癌患者的病理分级、淋巴结转移和TNM分期相关,此外,低分化患者血浆miR-130b表达较高分化者明显上调。血浆miR-424、miR-92a及miR-130b单独用于食管鳞癌诊断的特异度分别为72.09%、51.84%、90.7%,灵敏度分别为62.79%、88.37%、81.4%,曲线下面积(AUC)分别为0.703、0.720、0.862。结论食管鳞癌患者血浆miR-424、miR-92a及miR-130b水平升高,检测患者血浆miR-92a及miR-130b水平有助于食管鳞癌的诊断及病情评估。

miRNA-140-5p在人骨髓间充质干细胞成脂分化中的表达及其靶基因的预测

目的筛选出人骨髓间充质干细胞(h MSCs)成脂分化中具有潜在价值的mi RNA及其靶基因,为人类成骨细胞与脂肪细胞分化平衡调控机制的深入研究提供有力实验依据。方法收集h MSCs成脂分化过程中的0、7、14、21 d的细胞样品,应用mi RNA芯片和转录组测序(m RNA-seq)技术,分析4个点细胞中mi RNA和m RNA的表达水平,并将mi RNA与m RNA的表达趋势进行关联分析,聚焦具有研究价值的mi RNA与m RNA相互调控关系,同时,采用Target Scan、Pic Tar和mi Randa等数据库进行靶基因的预测。结果发现mi R-140-5p在成脂分化中表达量呈逐渐下降的趋势,而白血病抑制因子受体(LIFR)表达量呈逐渐升高趋势,二者呈现负调控的对应关系。同时经3个靶基因数据库预测,LIFR为mi R-140-5p共有的靶基因。结论 mi RNA-140-5p可能与人骨髓间充质干细胞的成脂分化密切相关,且通过调控其靶基因LIFR的表达而参与成脂分化。

miR-92b-5p通过靶向HMGB1减轻糖尿病肾病大鼠肾损伤和炎症反应

目的:探讨微小RNA-92b-5p(miR-92b-5p)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤和炎症反应的作用及机制。方法:将大鼠分为对照组、DN组、慢病毒阴性对照(LV-NC)组、LV-miR-92b组、LV-高迁移率族蛋白B1(HMGB1)组和miR-92b+HMGB1组,每组15只。禁食12 h后,模型大鼠腹膜内注射60 mg/kg链脲佐菌素,对照大鼠腹膜内注射等体积柠檬酸盐缓冲液。3 d后,各处理组大鼠分别或联合静脉注射100μL LV-NC、LV-miR-92b和LVHMGB1(1×10^11 U/L),每周2次,连续8周。全自动生化分析仪检测尿蛋白、血糖、血尿素氮和血清肌酐;RT-qPCR检测miR-92b-5p和HMGB1 mRNA的表达;双萤光素酶报告基因实验验证miR-92b-5p和HMGB1的靶向关系;West⁃ern blot法检测肾组织中HMGB1蛋白表达;HE染色观察肾损伤;流式细胞术检测肾细胞凋亡;ELISA检测肾组织中白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。结果:DN模型大鼠中miR-92b-5p低表达,HMGB1高表达;miR-92b-5p与HMGB1的3'端非翻译区存在结合位点,miR-92b-5p高表达显著抑制了含有野生型HMGB1质粒的萤光素酶活性(P<0.01),但对突变型HMGB1质粒的萤光素酶活性无影响。与DN组相比,LV-miR-92b组大鼠24 h尿蛋白、血糖、血尿素氮和血清肌酐水平均显著降低(P<0.01),肾小球系膜和基底膜小管增生、肿胀及炎性细胞浸润程度显著减轻,肾组织细胞凋亡率显著降低(P<0.01),肾组织中IL-6、IL-1β和TNF-α含量均显著减少(P<0.01)。共转染LV-HMGB1可逆转miR-92b-5p对DN大鼠的上述作用。结论:miR-92b-5p通过靶向下调HMGB1来减轻DN大鼠肾损伤和炎症反应。

循环型m icroRNA-92a在先天性巨结肠中的表达及上调CDX2基因的研究

目的探讨循环型micro RNA-92a(mi R-92a)在先天性巨结肠(HD)中的表达,以及通过上调尾侧型同源转录因子-2(CDX2)基因抑制肠神经干细胞(ENSCs)增殖的可能机制。方法选取2013年1月-2015年12月在山东省临沂市沂水中心医院行先天性巨结肠根治术16例HD患儿的术前血清标本。实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测血清mi R-92a m RNA的表达。提取孕15 d胎鼠肠管ENSCs,通过免疫学方法鉴定ENSCs;免疫磁珠法分选Nestin+ENSCs,脂质体转染使Nestin+ENSCs内过表达mi R-92a,噻唑蓝法检测细胞的增殖活性,q RT-PCR、Western blot检测CDX2基因的表达。结果 HD患儿血清中mi R-92a m RNA的相对表达量为(23.5±4.66),高于对照组(t=12.661,P=0.000);ENSCs细胞培养早期Nestin染色阳性,具有向Tuj-1阳性、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞分化的潜能;ENSCs过表达mi R-92a后,CDX2 m RNA的相对表达为(13.024±3.882),高于对照组(F=47.212,P=0.000),CDX2蛋白表达为(0.436±0.0828),高于对照组(F=48.793,P=0.000),细胞的增殖活性在转染后24、48和72 h明显受抑制。结论 mi R-92a通过上调CDX2基因的表达,抑制ENSCs的增殖,可能促进HD发生、发展。