高、低表达miR-296-5p的肿瘤细胞外泌体对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的调控作用

目的探讨高、低表达miR-296-5p的肿瘤细胞外泌体对食管鳞癌细胞(ESCC)迁移和侵袭的调控作用及其机制。方法提取转染miR-296-5p过表达和miR-296-5p干扰及其阴性对照物(NC)后的ESCC细胞外泌体,并采用透射电镜与Western blotting法进行鉴定;将ESCC细胞分为三组,干扰组、过表达组分别加入miR-296-5p干扰或过表达细胞的外泌体培养,NC组加入NC转染细胞的外泌体培养48 h;取各组细胞,MTT法检测细胞活力、Transwell法检测细胞侵袭迁移能力,RT-PCR、Western blotting法检测细胞黏附分子3(CADM3)、CADM1、CADM4、钙黏蛋白E(E-cadherin)及血管内皮细胞生成浸润相关蛋白CD31、CD44。结果细胞活力、迁移和侵袭细胞数过表达组>NC组>干扰组(P均<0.05)。细胞中CADM1、CADM4、E-cadherin基因及蛋白表达水平干扰组>NC组>过表达组,CADM3、CD31、CD44基因及蛋白表达水平过表达组>NC组>干扰组(P均<0.05)。结论高表达miR-296-5p的肿瘤细胞外泌体可能通过调控CADM、E-cadherin、CD31、CD44等基因表达提高ESCC细胞的侵袭、迁移能力。

新生血管形成过程中miR-296-5p对FGF23的调控作用

目的研究miR-296-5p通过调节成纤维细胞生长因子23(FGF23)在新生血管生成过程中发挥的调控作用。方法用血管内皮生长因子(VEGF)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs),构建模拟新生血管形成的体外模型,通过RT-qPCR比较对照组与新生血管组中miR-296-5p的表达水平。通过细胞转染构建miR-296-5p高表达组、miR-296-5p低表达组以及对照组细胞,比较3组细胞的迁移和成管能力,并通过蛋白免疫印迹实验比较3组FGF23的表达水平。结果与未经处理的对照组相比,VEGF诱导的新生血管组中miR-296-5p的表达水平显著增加(P<0.001)。与对照组比较,miR-296-5p低表达组的迁移距离和成管数均降低(P<0.001和P<0.05);而miR-296-5p高表达组的迁移距离和成管数均增加(P<0.001和P<0.01)。与对照组比较,miR-296-5p低表达组的FGF23表达水平明显降低(P<0.01);而miR-296-5p高表达组FGF23表达水平明显升高(P<0.01)。结论miR-296-5p可通过上调FGF23的表达促进新生血管生成。

敲减miR-296-5p通过激活ACE2信号通路减轻脑梗死后神经功能损伤

目的:探究微小RNA-296-5p(miR-296-5p)对脑梗死(CI)后神经功能损伤的影响及其与血管紧张素转换酶2(ACE2)信号通路介导的内皮祖细胞(EPC)活力的调节关系。方法:选取本院70例确诊为CI且伴有神经功能损伤的患者血清标本(CI组)和70例健康志愿者的血清标本(健康组),RT-qPCR法检测两组血清miR-296-5p、ACE2和Mas mRNA的表达。构建大鼠CI模型,将SD大鼠随机分为健康对照组、模型对照组、sh-miR-296-5p组和ACE2过表达组(OE-ACE2组)。对各组大鼠进行神经功能损伤严重程度评分(NSS)。TTC染色法观察各组大鼠CI情况。RT-qPCR法检测大鼠血清miR-296-5p、ACE2和Mas的mRNA表达。分离并常规培养EPC,将EPC随机分为对照组(control组)和sh-miR-296-5p组、OE-ACE2组、OE-miR-296-5p+OE-ACE2组和sh-miR-296-5p+sh-ACE2组。CCK-8法测定EPC活力情况。流式细胞术检测EPC凋亡情况。RT-qPCR法检测EPC中miR-296-5p、ACE2和Mas mRNA的表达。双萤光素酶报告基因实验验证miR-296-5p和ACE2的关系。结果:(1)临床试验:与健康组相比,CI患者血清miR-296-5p水平显著上升(P<0.05),ACE2和Mas的mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。(2)动物实验:与健康对照组相比,模型对照组大鼠的NSS评分、CI面积、血清miR-296-5p水平和Mas mRNA表达水平显著上升(P<0.05),ACE2 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与模型对照组相比,sh-miR-296-5p组和OE-ACE2组大鼠NSS评分、CI面积、血清miR-296-5p水平和Mas mRNA表达水平显著降低(P<0.05),ACE2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。(3)细胞实验:与control组相比,sh-miR-296-5p组和OE-ACE2组EPC细胞的A450和miR-296-5p水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率及ACE2和Mas mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。与sh-miR-296-5p组相比,shmiR-296-5p+sh-ACE2组细胞的A450和miR-296-5p水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率及ACE2和Mas mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与OE-ACE2组相比,OE-miR-296-5p+OE-ACE2组细胞的A450、miR-296-5p水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率及ACE2和Mas mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。结论:敲减miR-296-5p可能通过介导ACE2信号通路,抑制EPC活力,减轻CI后神经功能损伤。

艾滋病患者血清miR-210-5p、miR-23a-3p和miR-296-5p的检测意义分析

目的研究艾滋病(AIDS)患者血清微小RNA(miR)-210-5p、miR-23a-3p及miR-296-5p的检测意义。方法选取2020年5月至2023年5月鹤壁市传染病医院收治的100例AIDS患者作为研究对象,设为AIDS组。另选取同期健康志愿者100例设为参考组。比较两组血清miR-210-5p、miR-23a-3p及miR-296-5p水平。根据AIDS患者预后将AIDS组分为预后不良组、预后良好组,比较两组血清miR-210-5p、miR-23a-3p、miR-296-5p水平。采用多因素Logistic回归分析AIDS患者预后不良的影响因素。结果AIDS组血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平均高于参考组,miR-296-5p水平低于参考组,差异具有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平均高于预后良好组,miR-296-5p水平低于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-210-5p、miR-23a-3p水平升高及miR-296-5p水平降低均是AIDS患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论AIDS患者血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平异常升高,miR-296-5p水平异常降低,其均对AIDS患者的预后具有一定的评估作用。

Circ-0033074靶向miR-296-5p对前列腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响

目的探讨Circ-0033074对前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及作用机制。方法体外培养前列腺癌细胞DU-145、22Rv1和LNCaP及前列腺上皮细胞RWPE-1,RT-qPCR法检测细胞中Circ-0033074和miR-296-5p表达水平。以前列腺癌细胞DU-145为研究对象,分为si-NC组、si-Circ-0033074组、si-Circ-0033074+anti-miR-NC组和si-Circ-0033074+anti-miR-296-5p组。CCK-8试剂盒、Transwell小室、流式细胞术分别检测细胞增殖、细胞迁移和侵袭及细胞凋亡,Western印迹检测CyclinD1、P21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、Bax和Bcl-2蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证Circ-0033074和miR-296-5p调控关系。结果前列腺癌细胞系DU-145、22Rv1和LNCaP中Circ-0033074的表达显著高于前列腺上皮细胞RWPE-1(P<0.05),而miR-296-5p的表达显著低于RWPE-1细胞(P<0.05)。与si-NC组比较,si-Circ-0033074组OD值、迁移和侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9和Bcl-2的蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达显著升高(均P<0.05)。Circ-0033074靶向负调控miR-296-5p,沉默miR-296-5p逆转沉默Circ-0033074对DU-145细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。结论沉默Circ-0033074可靶向上调miR-296-5p表达抑制前列腺癌细胞DU-145增殖、迁移和侵袭,并诱导DU-145细胞凋亡。

补肾止颤方调控miR-296-5p/GSDMD通路抑制帕金森病大鼠神经元焦亡机制研究

目的从焦亡角度探讨补肾止颤方保护帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠中脑黑质区神经元的作用以及可能机制。方法将60只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,补肾止颤方低(15 g·kg-1)、中(30 g·kg-1)、高(60 g·kg-1)剂量组,美多芭组(0.2 g·kg-1)。除正常组外,余各组予背部皮下注射蛋白酶体抑制因子I(proteasome inhibitors I,PSI)溶液构建慢性PD模型。模型组与正常组予等体积生理盐水灌胃,余各组予对应药物剂量灌胃,连续干预3周。采用行为学观察爬杆实验评估各组大鼠行为学改变,予透射电镜观察大鼠中脑黑质区神经元细胞结构变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative PCR,RT-PCR)检测大鼠中脑黑质区miR-296-5P及Gasdermin D(GSDMD)蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)、酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)蛋白表达;双荧光素酶报告基因技术测定miR-296-5p与GSDMD上的靶向调控作用。结果与正常组比较,余各组大鼠出现自主活动减少、全身不自主震颤、行走迟缓等症状,悬挂实验评分下降(P<0.05);电镜下可见神经元细胞呈不同程度的水肿,部分细胞膜结构模糊,细胞核呈不规则形,细胞中α-syn、Caspase-1、IL-1β、GSDMD mRNA表达明显升高(P<0.05),TH及miR-296-5p表达水平明显下降(P<0.05)。与模型组比较,补肾止颤方低、中、高剂量组大鼠全身不自主震颤、行走迟缓等症状改善,悬挂实验评分升高(P<0.05),细胞水肿减轻,细胞中α-syn、Caspase-1、IL-1β、GSDMD mRNA表达呈不同程度下降(P<0.05),TH及miR-296-5p表达水平升高(P<0.05),以补肾止颤方高剂量组改变显著;荧光素酶报告显示miR-296-5p可靶向调控GSDMD的表达。结论补肾止颤方能改善PD大鼠的运动协调能力及受损的神经元细胞,其机制可能与调控miR-296-5p/GSDMD通路,下调Caspase-1蛋白及炎性因子水平,减轻神经炎症反应,从而抑制PD大鼠神经元细胞焦亡有关。

血浆MicroRNA-296-5P、MicroRNA-107表达水平对急性心肌梗死诊断的预测价值

目的:通过检测急性心肌梗死患者、健康人群血浆中miR-296-5p、miR-107表达水平及在急性心肌梗死患者体内时间变化趋势,探讨其作为急性心肌梗死诊断标志物的可能性。方法:选取2021年11月—2022年3月间在包头市中心医院心内科就诊急性心肌梗死患者60例(心梗组)和同时期在体检中心体检的年龄相匹配的健康就诊者60例(对照组)。心梗组根据采取干预措施不同分为再灌注组30例,常规药物治疗30例。应用荧光定量实时PCR技术(RT-qPCR)检测入院时及采取干预措施后不同时间段血浆miR-296-5p、miR-107的相对表达量。结果:与对照组相比,急性心肌梗死患者血浆miR-296-5p、miR-107表达量显著升高(P<0.05)。经再灌注治疗或常规药物治疗48 h后,血浆miR-296-5p、miR-107相对表达量明显降低(P<0.05)。经再灌注治疗或常规药物治疗7 d后,血浆miR-296-5p、miR-107相对表达量降至正常人水平(P<0.05)。结论:急性心肌梗死患者血浆miR-296-5p、miR-107相对表达含量较正常人显著升高,在采取干预措施后呈下降趋势,对急性心肌梗死的诊断有预测价值。

艾滋病患者血清中miR-210-5p和miR-296-5p的表达及其与临床病理特征及预后的关系

目的 探讨miR-296-5p、miR-210-5p在艾滋病(AIDS)患者血清中的表达及与临床病理特征及预后的关系。方法 选取2018年8月至2021年8月四川省泸州市人民医院收治的165例AIDS患者作为研究组,同时选取165例健康体检者作为对照组。检测miR-296-5p、miR-210-5p水平;评价miR-210-5p、miR-296-5p水平对AIDS患者预后不良的诊断价值;采用多因素Logistic回归风险模型分析AIDS患者的预后影响因素。结果 miR-210-5p在AIDS患者血清中的表达较对照组升高,miR-296-5p表达较对照组降低,二者表达呈负相关(r=-0.487,P<0.05);预后不良组患者miR-296-5p表达水平低于预后良好组,miR-210-5p水平高于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05);AIDS患者血清中miR-210-5p、miR-296-5p表达与有无生殖器疱疹、有无淋巴瘤、人类免疫缺陷病毒(HIV)载量有关(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线结果显示,血清miR-296-5p、miR-210-5p水平预测AIDS患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.911(95%CI:0.858~0.949)、0.780(95%CI:0.710~0.840),对应的灵敏度分别为94.87%、60.26%,特异度分别为78.26%、85.87%,二者联合预测的AUC为0.940(95%CI:0.892~0.970),灵敏度为89.74%,特异度为86.96%;Logistic回归分析结果显示,有无淋巴瘤、白蛋白、C反应蛋白、miR-210-5p、miR-296-5p均为AIDS患者预后的影响因素(P<0.05)。结论 AIDS患者血清中miR-296-5p呈低表达,miR-210-5p呈高表达,二者表达呈负相关,且与AIDS患者病情及预后关系密切。

沉默circ0000745通过靶向miR-296-5p对结直肠癌细胞增殖及转移的影响

目的探讨circ;000745对结直肠癌细胞增殖及转移的影响及其可能的作用机制。方法收集2013年3月~2016年7月在四川省人民医院确诊的结直肠癌及癌旁组织65例,采用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测结直肠癌组织、癌旁组织中circ;000745与miR-296-5p表达,分析circ;000745与miR-296-5p表达与结直肠癌患者预后的关系。将人结直肠癌细胞HCT-116分为si-NC组、si-circ;000745组、miR-NC组、miR-296-5p过表达组、si-circ;000745+anti-miR-NC组、si-circ;000745+anti-miR-296-5p组;采用CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell实验分别检测各组细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;采用双荧光素酶报告实验检测circ;000745与miR-296-5p的靶向关系;采用Western blot法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达量。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织中circ;000745的表达升高(P<0.05),miR-296-5p的表达降低(P<0.05);随访5年,65例患者中死亡9例,存活56例,与存活患者相比,死亡患者的circ;000745明显增高(P<0.05),miR-296-5p明显降低(P<0.05)。与HT-29细胞相比,HCT-116细胞的circ;000745 mRNA表达升高(P<0.05),miR-296-5p的表达降低(P<0.05),选择HCT-116细胞进行下一步研究。与si-NC组比较,si-circ;000745组细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白、细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(均P<0.05);circ;000745可靶向调控miR-296-5p的表达;与miR-NC组比较,miR-296-5p过表达组细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白、细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(均P<0.05);与si-circ;000745+anti-miR-NC组比较,si-circ;000745+anti-miR-296-5p组细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数增多(均P<0.05)。结论结直肠癌组织中circ;000745呈高表达,miR-296-5p呈低表达,高表达circ;000745及低表达miR-296-5p可用于评估结直肠癌患者预后,circ;000745通过靶向miR-296-5p促进结直肠癌细胞增殖及转移,沉默circ;000745可为结直肠癌治疗提供新思路。

橙皮素通过circ_0039411/miR-296-5p影响IL-1β诱导的软骨细胞凋亡

目的探讨橙皮素对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的影响及分子机制。方法关节软骨细胞分为对照(control)组、IL-1β组、IL-1β+橙皮素低、中、高剂量组、IL-1β+si-circ_0039411组、IL-1β+si-NC组、IL-1β+HES+pcDNA-circ_0039411组、IL-1β+HES+pcDNA组。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-6、TNF-α、IFN-γ水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ_0039411和miR-296-5p的表达水平;双荧光素酶报告实验检测circ_0039411和miR-296-5p的靶向关系。结果橙皮素低、中、高浓度组软骨细胞中IL-6、TNF-α、IFN-γ水平降低,cleaved-caspase3和cleaved-caspase9表达水平降低,软骨细胞凋亡率降低,circ_0039411表达水平降低,miR-296-5p表达水平升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。circ_0039411靶向调控miR-296-5p;抑制circ_0039411表达后,IL-6、TNF-α、IFN-γ水平降低,cleaved-caspase3和cleaved-caspase9表达水平降低,软骨细胞凋亡率降低(P<0.05)。circ_0039411过表达逆转了橙皮素对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的作用。结论橙皮素可能通过调控circ_0039411/miR-296-5p抑制IL-1β诱导的软骨细胞损伤。

miR-296-5p对胰腺癌细胞体外生物学行为的影响

目的:探讨microRNA-296-5p(miR-296-5p)对胰腺癌细胞体外生物学行为的影响。方法:分别转染miR-296-5p类似物(Agomir)及miR-296-5p拮抗物(Antagomir)至胰腺癌细胞系(As PC-1、Panc-1和Capan-2),应用CCK-8法、Annexin-V APC/7-AAD法、细胞黏附实验、Transwell侵袭迁移实验检测miR-296-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡、黏附、侵袭和迁移能力的影响。结果:转染miR-296-5p Agomir后胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力显著降低,凋亡率和黏附能力增加;而转染miR-296-5p Antagomir后胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力增强,凋亡率和黏附能力降低。结论:体外实验证实miR-296-5p影响胰腺癌细胞体外生物学行为,抑制其转移。

血清miR-296-5p及胃蛋白酶原mRNA表达水平对胃癌诊断和预后评估的临床价值

目的探讨血清miR-296-5p及胃蛋白酶原mRNA表达水平对胃癌诊断和预后评估的临床价值。方法选取该院2014年3月至2019年3月收治且经病理证实的胃癌患者198例为胃癌组,198例胃良性疾病患者为胃病组,198例体检健康者为对照组,采用RT-qPCR法检测血清中miR-296-5p、胃蛋白酶原mRNA表达水平。分析不同组及不同特征胃癌患者血清miR-296-5p及胃蛋白酶原mRNA表达水平差异,采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清miR-296-5p及胃蛋白酶原mRNA对胃癌的诊断价值。结果胃癌组和胃病组miR-296-5p、胃蛋白酶原mRNA表达水平高于对照组(P<0.05);胃癌组miR-296-5p、胃蛋白酶原mRNA表达水平高于胃病组(P<0.05)。miR-296-5p、胃蛋白酶原mRNA表达水平与胃癌患者性别、年龄无关(P>0.05);与肿瘤最大径、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移和复发有关,且肿瘤最大径≥5 cm、TNM分期越高、浸润深度越深、有淋巴结转移、有复发,miR-296-5p、胃蛋白酶原mRNA高表达率越高(P<0.05)。miR-296-5p、胃蛋白酶原mRNA高表达组总生存率及生存期明显低于miR-296-5p、胃蛋白酶原mRNA低表达组(P<0.05)。miR-296-5p、胃蛋白酶原mRNA联合检测诊断胃癌的灵敏度、特异度、准确度、曲线下面积(AUC)均高于miR-296-5p、胃蛋白酶原mRNA单独检测(P<0.05)。结论胃癌患者血清miR-296-5p及胃蛋白酶原mRNA表达水平升高,miR-296-5p、胃蛋白酶原mRNA与胃癌患者临床病理特征、预后有关;miR-296-5p、胃蛋白酶原mRNA联合检测诊断胃癌具有较高的灵敏度、特异度,可在临床上应用。

miR-296-5p靶向MICB促进口腔鳞癌生长的分子机制

目的:研究微小RNAmiR-296-5p对口腔鳞癌细胞存活及自然杀伤细胞因子分泌的影响,并探讨其机制。方法:运用免疫组织化学方法检测癌旁组织、口腔鳞癌组织中MICB的蛋白表达;qRT-PCR法检测组织和口腔鳞癌细胞Cal27中miR-296-5p的表达;将anti-miR-296-5p组(转染anti-miR-296-5p)、miR-296-5p组(转染miR-296-5pmimics)、pcDNA3.1-MICB组(转染pcDNA3.1-MICB)、anti-miR-296-5p+si-MICB组(anti-miR-296-5p和si-MICB共转染),均用脂质体转染至Cal27细胞;MTT法检测各组细胞的存活率;ELISA法检测各组细胞中TNF-α、IFN-γ的含量;Westernblot检测各组细胞中MICB的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与癌旁组织相比,口腔鳞癌组织中MICB的蛋白表达显著降低,miR-296-5p的表达显著升高(P<0.05);抑制miR-296-5p、过表达MICB均可显著下调Cal27细胞的存活率,上调NK细胞因子TNF-α、IFN-γ的含量;miR-296-5p可抑制野生型MICB细胞的荧光活性,且负向调控MICB的表达;敲减MICB可逆转抑制miR-296-5p对Cal27细胞存活率的下调及对NK细胞因子含量的上调作用。结论:下调miR-296-5p可抑制口腔鳞癌细胞的存活,促进NK细胞的杀伤作用,其机制可能与靶向负调控MICB有关,其可为口腔鳞癌的靶向治疗提供依据。

miR-296-5p靶向PLK1调控PI3K/AKT通路诱导骨肉瘤细胞中的自噬并抑制上皮-间质转化

目的 探讨miR-296-5p靶向PLK1对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞自噬及抑制上皮-间质转化(EMT)的作用机制.方法 qRT-PCR检测miR-296-5p在OS细胞中的表达.采用生物信息学分析预测miR-296-5p的靶基因,验证miR-296-5p对靶基因PLK1的直接靶向调控;细胞转染构建miR-296-5p过表达和干扰细胞,CCK-8、克隆形成、Transwell小室、流式、蛋白免疫印迹实验检测miR-296-5p的不同表达对U2OS细胞中PTBP1表达水平及细胞增殖、侵袭、凋亡、自噬及EMT的影响.结果 与对照组比较,miR-296-5p在OS中表达降低,而PLK1则升高(P<0.05);与miR-NC组比较,mimic组的克隆形成率、侵袭细胞数目及PTBP1、p62、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平降低,细胞凋亡率、Bec-lin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、E-cadherin水平升高(P<0.05);与PLK1组比较,PLK1+mimic组的克隆形成率、侵袭细胞数目及PTBP1、p62、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平降低,细胞凋亡率、Bec-lin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、E-cadherin水平升高(P<0.05).结论 miR-296-5p可能能够靶向PLK1调控PI3K/AKT通路诱导OS细胞中的自噬并抑制EMT.

循环miRNA-296-5p与原发性高血压发病机制的相关性研究

目的:探讨血浆中miRNA-296-5p与原发性高血压(EH)的相关性。方法:选取EH患者80例和非EH患者80例,收集两组患者基本病史、心血管疾病用药情况等一般资料,采用qRT-PCR检测其血浆中循环miRNA-296-5p的表达水平,生物信息学预测miRNA-296-5p的靶基因以及其调控的信号通路,ELISA检测两组患者血浆中TGF-β1和ACE2的表达,并分析两者与miRNA-296-5p的相关性。结果:EH组与非EH组在年龄、性别、BMI、基本病史和部分血液学生化指标比较,差异无统计学意义(P>0.05);EH组血浆中循环miRNA-296-5p表达水平明显高于非EH(P<0.01);ROC曲线分析发现曲缺中miRNA-296-5p曲线下面积为0.844 5,95%可信区间为(CI)0.782 5~0.906 4(P<0.01),灵敏度80.00%,特异性90.00%;生物信息学预测发现miRNA-296-5p的靶基因可能为血管转化生长因子-β1(TGF-β1)和血管紧张素转化酶2(ACE2),可能调控血管转化生长因子/SMAD(TGF-β/SMAD)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K-Akt)、胰岛素/胰岛素生长因子信号通路(Insulin/IGF)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和NOTCH等信号通路,并可能参与多种circRNA的调控;ELISA检测发现EH组TGF-β1和ACE2的表达明显高于非EH组(P<0.01),miRNA-296-5与TGF-β1、ACE2均呈正相关(r=0.317 6、0.417 1,P<0.01)。结论:血浆中循环miRNA-296-5p可能通过调控TGF-β1和ACE2导致EH的发生,并可以作为EH新的临床诊断标志物。

蜂胶黄酮PB3A作用下结肠癌细胞株中miRNA-198和miRNA-296-5p的表达及功能预测

目的:探讨蜂胶黄酮短叶松素-3-乙酸酯(pinobanksin-3-acetate,PB3A)对结肠癌SW480细胞微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱的影响,为结肠癌的治疗及靶向药物研发提供理论依据。方法:使用miRNA芯片技术分析检测蜂胶黄酮PB3A处理人类结肠癌SW480细胞后miRNA表达谱的变化。通过实时荧光定量PCR方法检测miRNA-198和miRNA-296-5p的表达水平,以此来验证miRNA芯片结果的准确性和可靠性。利用miRWalk、Micro T、miRanda等12个网上数据库预测这2条miRNAs的靶基因并进行靶基因功能富集分析。结果:miRNA芯片分析结果显示,蜂胶黄酮PB3A干预24 h后结肠癌SW480细胞中差异表达倍数在2倍及以上的miRNA有267条,其中差异表达倍数达10倍及以上的miRNA有30条,28条为上调表达,2条下调表达;RT-qPCR实验结果显示miRNA-198和miRNA-296-5p的表达量趋势跟miRNA芯片结果一致,表达差异有统计学意义(P<0.05)。miRNA靶基因预测发现miRNA-198有859个靶基因,miRNA-296-5p有906个靶基因;对这些可能被调控的靶基因进行Gene Class分析,结果显示miRNA-198和miRNA-296-5p的靶基因功能主要为转录因子、拷贝数变异、细胞分化、癌基因、蛋白激酶、组蛋白、转移癌基因、肿瘤抑制基因等(P<0.05)。信号通路富集分析结果显示,miRNA-198靶基因显著富集于肿瘤通路、Wnt信号通路、胞吞通路、Erb B信号通路、黏着斑通路、黑素生成通路等信号通路,而miRNA-296-5p靶基因在MAPK信号通路、胞吞通路、轴突导向通路、Wnt信号通路、胰岛素信号通路、钙离子信号通路等信号通路中出现聚集(P<0.05)。结论:蜂胶黄酮PB3A影响结肠癌SW480细胞的miRNA表达谱。PB3A作用下miRNA-198和miRNA-296-5p的异常表达可能参与PB3A抗结肠癌的过程。

MiR-296-5p在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及其对肿瘤细胞生物学行为的影响

目的:检测弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)细胞中micro RNA-296-5P(mi RNA-296-5p)的表达水平,并研究干扰mi RNA-296-5p的表达对DLBCL细胞株DB的增殖、迁移及凋亡的影响。方法:应用人淋巴细胞分离液提取健康人外周血单个核细胞,实时荧光定量PCR检测单个核细胞与DLBCL-DB细胞mi RNA-296-5p的表达。利用mi RNA-296-5p inhibitor干扰DB细胞mi RNA-296-5p的表达,实时荧光定量PCR检测转染后mi RNA-296-5p的表达,并进一步用CCK-8法、Transwell法和Annexin V-FITC/PI双染法检测转染后细胞增殖、迁移和凋亡的变化。结果:mi RNA-296-5p在DLBCL细胞株DB中明显高表达,转染mi RNA-296-5p inhibitor后细胞的增殖和迁移能力明显受到抑制,而细胞凋亡没有明显改变。结论:mi RNA-296-5p的高表达可能与DLBCL的发生发展有关,可能成为DLBCL的预后评估指标之一。

miRNA-296-5p靶向BOX抑制胃癌细胞的凋亡

目的分析miRNA-296-5p在癌旁组织和肿瘤组织中的表达差异,并研究miRNA-296-5p抑制胃癌细胞凋亡的机制。方法采用实时荧光定量PCR检测5例胃癌患者胃癌组织和相应的癌旁组织中的miRNA-296-5p的表达水平;应用miRNA-296-5p mimic、miRNA-296-5p inhibitor和阴性对照分别转染BGC-823和MGC-803细胞,通过CCK-8检测细胞的增殖水平,通过流式细胞术检测细胞凋亡水平;采用蛋白印迹技术检测BOK蛋白表达水平;采用双荧光素酶实验验证miRNA-296-5p和BOX之间的关系。结果与癌旁组织相比,miRNA-296-5p在胃癌组织中明显升高(t=-6.37,P<0.05),且与BOK蛋白表达呈负相关。miRNA-296-5p过表达之后,明显抑制MGC-803和BGC-823细胞凋亡;miRNA-296-5p表达下降之后,MGC-803和BGC-823细胞的凋亡水平明显升高。实时荧光定量PCR和Western-blot结果表明miRNA-296-5p过表达之后,BOK蛋白的表达水平明显降低,而miRNA-296-5p被抑制之后,BOK蛋白的表达水平明显升高。双荧光素酶报告实验显示,miRNA-296-5p靶向BOK的miRNA的3’非编码区。结论相较于癌旁组织,miRNA-296-5p在胃癌组织中高表达,通过抑制BOK的蛋白水平实现促进胃癌进展,从而降低胃癌细胞的凋亡水平。

lncRNA MIR34AHG通过miR-296-5p/SRCIN1轴影响喉癌细胞的恶性生物学行为

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MIR34AHG通过miR-296-5p/SRCIN1轴对喉癌细胞增殖和迁移的作用。方法qPCR检测MIR34AHG在喉癌细胞系(TU686、Hep-2、TU177、AMC-NH-8、TU212)以及支气管上皮细胞系(16HBE)中的表达。选取MIR34AHG表达最低细胞系,分别构建MIR34AHG过表达细胞系(MIR34AHG组)和对照细胞系(对照组)。MTT法、细胞划痕实验分别检测上调MIR34AHG对细胞增殖和迁移的影响。生物信息学工具预测MIR34AHG的靶基因,双荧光素酶报告基因实验检测MIR34AHG与靶基因之间的相互作用。qPCR和Western blot法检测上调MIR34AHG对相关基因和蛋白表达的影响。结果与16HBE细胞比较,喉癌细胞系中MIR34AHG呈低表达(P<0.01),且以TU686细胞中表达最低(P<0.01)。与对照组比较,MIR34AHG过表达抑制TU686细胞的增殖和迁移(P<0.05)。MIR34AHG和miR-296-5p之间存在靶向关系(P<0.01),miR-296-5p的靶基因可能是SRCIN1。与对照组比较,MIR34AHG过表达抑制miR-296-5p表达(P<0.01),促进SRCIN1基因的表达(P<0.01)。结论MIR34AHG可能通过下调miR-296-5p的表达、上调SRCIN1的表达从而抑制喉癌细胞的增殖和迁移。

沉默circAMOTL1对结直肠癌Caco-2细胞生物学行为影响的体外实验研究

目的探讨沉默circAMOTL1对结直肠癌细胞生物学行为的影响及其可能机制。方法实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测结直肠癌组织与癌旁组织中circAMOTL1、miR-296-5p的表达量。Pearson相关分析探讨结直肠癌组织中circAMOTL1、miR-296-5p表达量的相关性。体外培养人结直肠癌细胞Caco-2,sh-NC、sh-circAMOTL1、miR-NC、miR-296-5p mimic分别转染至Caco-2细胞(sh-NC组、sh-circAMOTL1组、miR-NC组、miR-296-5p mimic组),sh-circAMOTL1与miR-296-5p inhibor共转染至Caco-2细胞(sh-circAMOTL1+miR-296-5p inhibor组)。流式细胞术、Transwell实验、Western blot法分别检测细胞凋亡、迁移及侵袭、Cleaved-caspase 3蛋白表达。双荧光素酶报告实验检测circAMOTL1和miR-296-5p靶向调控作用。结果结直肠癌组织中circAMOTL1表达量高于癌旁组织(2.79±0.30 vs.0.89±0.15,P<0.05),miR-296-5p表达量低于癌旁组织(0.42±0.09 vs.1.12±0.14,P<0.05)。circAMOTL1与miR-296-5p呈负相关(r=-0.8125,P<0.0001)。转染sh-circAMOTL1或miR-296-5p mimic后,迁移及侵袭细胞数减少(P均<0.05),细胞凋亡率、Cleaved-caspase 3蛋白水平升高(P均<0.05)。circAMOTL1可靶向调控miR-296-5p的表达。共转染sh-circAMOTL1和miR-296-5p inhibor后,迁移及侵袭细胞数增多(P均<0.05),细胞凋亡率、Cleaved-caspase 3蛋白水平降低(P均<0.05)。结论沉默circAMOTL1可通过靶向调控miR-296-5p表达而抑制结直肠癌细胞迁移、侵袭及诱导细胞凋亡。