miR-129-2对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的调节作用

目的:检测miR-129-2在三阴性乳腺癌(TNBC)患者癌组织中的表达水平,分析miR-129-2的表达与患者临床资料的关系,并探究其对癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:荧光实时定量PCR(RT-qPCR)法检测TNBC癌组织、癌旁组织以及细胞株中miR-129-2的表达水平,统计学方法分析miR-129-2的表达水平与患者临床资料的相关性,采用划痕实验及Transwell实验研究miR-129-2对癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:miR-129-2在40例TNBC患者癌组织及MDA-MB-231细胞中表达下调(P<0.05,P<0.01),且miR-129-2的表达水平与年龄、是否绝经无关,与肿瘤大小、分期、淋巴结转移有关;划痕实验结果显示:过表达miR-129-2使细胞迁移距离减少,划痕愈合率均下降,迁移能力减弱(P<0.01);Transwell侵袭实验显示:过表达miR-129-2能减少穿过小室膜的细胞数量,明显抑制癌细胞的侵袭能力(P<0.01)。下调miR-129-2的水平使MDA-MB-231细胞迁移能力和侵袭能力增强。结论:miR-129-2在TNBC中低表达,miR-129-2的表达与病情严重程度相关,miR-129-2的表达水平影响TNBC癌细胞的迁移和侵袭能力。

lincRNA Cox2通过miR-129-5p/AMPK调控BCG感染的巨噬细胞糖酵解进程

[目的]探究lincRNA Cox2对BCG(Bacillus Calmette-Guérin)感染的RAW264.7巨噬细胞糖酵解进程的调控作用,阐明Mtb与巨噬细胞之间的相互作用,为结核病的诊断和治疗提供新的靶点。[方法]利用小干扰RNA敲减lincRNA Cox2的表达,以及使用miR-129-5p mimics过表达载体,结合BCG感染,通过实时荧光定量PCR检测lincRNA Cox2、miR-129-5p和促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6的表达量;乳酸含量检测试剂盒检测乳酸(LD)的分泌情况;平板涂布法检测巨噬细胞菌载量情况;双荧光素酶报告基因系统验证lincRNA Cox2与miR-129-5p以及miR-129-5p与AMPK的互作关系;蛋白免疫印迹检测AMPK(AMP依赖蛋白激酶)及糖酵解途径中关键基因HK1(己糖激酶1)、PKM2(丙酮酸激酶2)和LDHA(乳酸脱氢酶)的表达变化。[结果]BCG感染12 h能够极显著上调RAW264.7巨噬细胞中lincRNA Cox2的表达(P=0.000013),与BCG组相比,siRNA+BCG组中AMPK(P=0.000771)、HK1(P=0.00323)、PKM2(P=0.000135)和LDHA(P=0.002532)的表达量以及乳酸的分泌量(P=0.020802)发生显著上调,而促炎因子IL-1β(P=0.000451)、TNF-α(P=0.000147)、IL-6(P=0.0001)的表达发生显著下调,菌载量试验表明siRNA+BCG组中的巨噬细胞菌载量显著下调(P=0.000127)。双荧光素酶报告基因系统表明lincRNA Cox2和miR-129-5p存在相互作用关系并以AMPK为靶基因。BCG感染RAW264.7巨噬细胞12 h后极显著下调miR-129-5p的表达(P=0.000156),与BCG组相比,miR-129-5p mimics+BCG组中AMPK(P=0.000262)、HK1(P=0.019524)、PKM2(P=0.001658)和LDHA(P=0.000887)表达量以及乳酸分泌量(P=0.044952)发生显著下调。[结论]lincRNA Cox2通过海绵吸附miR-129-5p并靶向AMPK,促进BCG感染的RAW264.7巨噬细胞糖酵解进程。

miR17-92簇在痛风中的表达及临床意义

目的:探讨miR17-92簇各成员在痛风患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达,预测其可能靶点及作用通路,评估其在痛风中可能的作用机制及临床意义。方法:选取川北医学院附属医院67例痛风性关节炎(GA)患者,其中急性痛风性关节炎(AG)患者22例,间歇期痛风(IG)患者45例,对照组选取35例正常健康体检者(HC)。RT-qPCR检测miR17-92簇、IFN-γ、IL-10及JAK-STAT通路部分成员表达,收集相关实验室指标分析其相关性。结果:miR17、miR18a、miR19a、miR20a、miR19b在AG、IG、HC中表达差异均有统计学意义(H=8.753,P<0.05;H=6.338,P<0.05;H=6.523,P<0.05;H=9.061,P<0.05;H=9.729,P<0.01)。JAK3、STAT2在AG、IG、HC三组中表达差异有统计学意义(H=10.349,P<0.01;H=14.801,P<0.01)。IFN-γ在三组间表达差异有统计学意义(H=8.734,P<0.05)。AG患者miR18a表达与IBIL、Crea、MO、HGB呈负相关,miR19a表达与TC、UA、HGB呈负相关,miR20a表达与Crea呈负相关,miR19b表达与UA、HGB呈负相关。IG患者miR17表达与IBIL、WBC、LY、MO均呈负相关,miR18a表达与ALP呈正相关,miR19a表达与TC、UA呈负相关,miR20a表达与ADA、UA呈负相关。结论:miR17-92簇可能通过靶向JAK-STAT通路调控痛风发生发展、参与痛风临床生理病理过程。

长链非编码RNA NUTM2A-AS1靶向微小RNA-129-5p调控氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NUTM2A-AS1对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及分子机制。方法 将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)在DMEM培养基中培养,采用100μg/mL oxLDL处理的HUVEC纳入oxLDL组,常规培养的细胞纳入Con组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体及阴性对照、miR-129-5p模拟物及阴性对照转染至HUVEC后采用100μg/mL oxLDL处理后的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1组、oxLDL+si-NC组、oxLDL+miR-129-5p组、oxLDL+miR-NC组。将lncRNA NUTM2A-AS1干扰表达载体与微小RNA(miR)-129-5p抑制剂或阴性对照共转染至HUVEC后采用100μg/mL的oxLDL处理的细胞分别纳入oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-129-5p组、oxLDL+si-NUTM2A-AS1+anti-miR-NC组。采用试剂盒测量细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白质印迹法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验及RNA下拉实验检测NUTM2A-AS1与miR-129-5p的靶向关系。结果 与Con组比较,oxLDL组lncRNA NUTM2A-AS1表达水平升高,miR-129-5p表达水平降低,MDA含量升高,SOD、GSH-Px活性降低,血管内皮细胞凋亡率和cleaved-caspase3、cleaved-caspase9表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达或过表达miR-129-5p后,MDA含量降低,SOD、GSH-Px活性升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA NUTM2A-AS1敲低介导的oxLDL条件下血管内皮细胞的损伤抑制可以被miR-129-5p下调逆转。lncRNA NUTM2A-AS1靶向调控miR-129-5p。结论 干扰lncRNA NUTM2A-AS1表达通过靶向上调miR-129-5p抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤。

CircMATR3调节miR-129-5p/SOX2轴对鼻咽癌细胞CNE1恶性生物学行为的影响

目的:探讨CircMATR3调节miR-129-5p/SOX2轴对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:以鼻咽癌细胞系CNE1为研究对象,将CNE1细胞分NC组、si-NC组、si-CircMATR3组、miR-NC组、miR-129-5p mimic组、si-CircMATR3+inhibitor NC组、si-CircMATR3+miR-129-5p inhibitor组、si-SOX2组。RT-qPCR检测细胞中CircMATR3、miR-129-5p、SOX2 mRNA的表达;Western blot检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间的靶向关系;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Hoechst33342实验观察细胞形态学变化;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡。结果:CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间存在靶向关系;沉默CircMATR3或过表达miR-129-5p或沉默SOX2可以抑制鼻咽癌细胞CNE1的克隆形成、侵袭和细胞周期转变,促进细胞凋亡和凋亡小体的形成;抑制miR-129-5p表达一定程度可以逆转沉默CircMATR3对于CNE1细胞的抑制作用。结论:沉默CircMATR3可以上调miR-129-5p表达,抑制SOX2表达,进而抑制鼻咽癌细胞CNE1的克隆形成、侵袭,促进细胞凋亡。

lncRNA MIR4435-2HG靶向miR-376a-3p调控胆管癌细胞生物学行为的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MIR4435-2HG(MIR4435-2HG)对胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对微小RNA-376a-3p(miR-376a-3p)的调控作用。方法 qRT-PCR法检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic与人胆管癌细胞RBE中MIR4435-2HG、miR-376a-3p的表达。将si-NC、si-MIR4435-2HG、miR-NC、miR-376a-3p mimics、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-NC、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-376a-3p分别转染至RBE细胞,作为si-NC组、si-MIR4435-2HG组、miR-NC组、miR-376a-3p组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组;采用MTT法、Transwell小室法及流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证MIR4435-2HG与miR-376a-3p的靶向关系。Western blot检测相关蛋白表达。结果 RBE细胞中MIR4435-2HG表达量升高(P<0.05),miR-376a-3p表达量降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MIR4435-2HG组MIR4435-2HG表达、细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率升高(P<0.05)。MIR4435-2HG可靶向调控miR-376a-3p;与si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组比较,si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论 敲低MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-376a-3p进而抑制RBE细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导其凋亡。

宫颈脱落细胞FAM19A4/miR124-2甲基化在绝经后HR-HPV感染患者中的表达情况分析

目的探究宫颈脱落细胞FAM19A4/miR124-2甲基化在绝经后高危型人乳头瘤病毒(HRHPV)感染患者中的表达情况。方法回顾性选取120例绝经后HR-HPV感染患者为观察组,另选取120例绝经后无人乳头瘤病毒(HPV)感染者为对照组。比较两组的宫颈脱落细胞FAM19A4/miR124-2甲基化检出率及辅助性T细胞17(Th17)类细胞因子[白细胞介素(IL)-17、IL-22]水平;比较观察组不同病理结果及低度鳞状上皮内病变(LSIL)不同临床转归情况患者的宫颈脱落细胞FAM19A4/miR124-2甲基化检出率、Th17类细胞因子水平。结果观察组的宫颈脱落细胞FAM19A4/miR124-2甲基化检出率及IL-17、IL-22水平分别为38.33%、(89.21±20.06)pg/ml、(44.91±9.13)pg/ml,显著高于对照组的1.67%、(22.23±6.63)pg/ml、(20.32±5.19)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组不同病理结果患者的宫颈脱落细胞FAM19A4/miR124-2甲基化检出率及IL-17、IL-22水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组高度鳞状上皮内病变(HSIL)患者的宫颈脱落细胞FAM19A4/miR124-2甲基化检出率及IL-17、IL-22水平高于宫颈炎及LSIL患者,且LSIL患者高于宫颈炎患者,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组LSIL不同转归情况患者的宫颈脱落细胞FAM19A4/miR124-2甲基化检出率及IL-17、IL-22水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组LSIL进展患者的宫颈脱落细胞FAM19A4/miR124-2甲基化检出率及IL-17、IL-22水平高于消退及持续患者,且LSIL持续患者高于LSIL消退患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈脱落细胞FAM19A4/miR124-2甲基化检出率在绝经后HR-HPV感染患者中相对更高,且不同病理结果及LSIL不同临床转归情况患者的差异显著。

miR-129-2靶向PIK3R1通过PI3K/AKT信号通路减轻肺内皮细胞损伤

目的探讨miR-129-2在肺血管内皮细胞损伤中的作用及其机制。方法SPF级小鼠40只随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、空载组、过表达组,给予气管滴注LPS诱导急性肺损伤(ALI),尾静脉注射高表达慢病毒来过表达miR-129-2,观察ALI小鼠呼吸频率、体质量等一般情况,检测miR-129-2及炎症因子IL-6、IL-10、TNF-α表达水平和肺损伤程度。人肺微血管内皮细胞(HPMECs)分为Control组、LPS组、NC组和mimic组,LPS处理诱导细胞损伤,转染miR-129-2 mimic来上调miR-129-2的水平,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移能力,检测各组细胞中miR-129-2、IL-6、IL-10、TNF-α及PIK3R1 mRNA的表达水平。双荧光素酶实验验证miR-129-2与PIK3R1的靶向关系,Western blot检测miR-129-2对PIK3R1及PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。结果在小鼠中,miR-129-2过表达能使小鼠进食增加、呼吸频率减慢、体质量增加、肺组织损伤减轻,IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高(P<0.05)。在HPMECs中,mimic转染使miR-129-2表达水平上调,炎症因子表达水平降低,细胞迁移能力增强,PIK3R1表达降低(P<0.05);双荧光素酶报告显示miR-129-2与PIK3R1存在结合位点,miR-129-2下调使PIK3R1表达增加,PI3K/AKT信号通路被激活。结论miR-129-2过表达能够减轻小鼠炎症反应和肺损伤,并能介导PIK3R1通过PI3K/AKT信号通路缓解肺内皮细胞损伤。

MIR4435-2HG对胰腺癌预后和免疫浸润的评估价值

目的:探讨长链非编码RNA MIR4435-2HG在胰腺癌预后以及免疫浸润中的评估价值。方法:胰腺癌患者的基因表达谱及临床资料从TCGA数据库和GTEx数据库中获得。比较胰腺癌和正常胰腺组织中MIR4435-2HG的表达水平,使用Wilcoxon秩和检验。MIR4435-2HG表达与免疫细胞的相关性使用Spearman相关性分析,MIR4435-2HG高表达和低表达免疫浸润水平的差异使用Wilcoxon rank-sum检验。通过生存分析及Cox回归分析确定MIR4435-2HG的预后价值,并构建列线图预测胰腺癌总生存率。结果:MIR4435-2HG在胰腺癌中高表达,MIR4435-2HG高表达患者总体生存率和无病生存率劣于低表达患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示N分期、病理分期、组织学分期、放射治疗、TSPAN6和Clorf112表达水平是胰腺癌患者总体生存率的独立影响因素(P<0.05)。MIR4435-2HG高表达与自然杀伤细胞、巨噬细胞、树突状细胞和Th1细胞的免疫浸润水平呈正相关。结论:MIR4435-2HG可能是一种新的胰腺癌预后生物标志物。

血清miR-129-5p水平与HER-2阳性晚期乳腺癌患者曲妥珠单抗敏感性的相关性分析

目的:探索HER-2阳性晚期乳腺癌患者的血清miR-129-5p水平对曲妥珠单抗敏感性的预测价值。方法:入组HER-2阳性晚期乳腺癌患者107例,均接受曲妥珠单抗靶向治疗,依据实体瘤疗效评价标准(RECIST 1.0)将患者分为曲妥珠单抗敏感组(76例)和曲妥珠单抗耐药组(31例),实时荧光定量PCR法检测初次曲妥珠单抗治疗前患者血清miR-129-5p水平,并与同期35名健康体检女性人群的血清miR-129-5p水平比较;分析患者的血清miR-129-5p水平与其临床病理特征的关系;使用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)确定患者血清miR-129-5p水平对曲妥珠单抗治疗敏感性的预测价值和其阈值。结果:曲妥珠单抗敏感组患者的血清miR-129-5p水平显著低于健康对照组(0.627±0.058vs1.027±0.129,P=0.001),而曲妥珠单抗耐药组患者的血清miR-129-5p水平显著低于敏感组患者(0.276±0.031vs0.627±0.058,P=0.002)。HER-2阳性晚期乳腺癌患者的血清miR-129-5p水平与年龄、月经情况、ECOG评分、肿瘤转移部位均无关,但与组织学分级及肿瘤转移部位数量有关,Ⅰ-Ⅱ级患者的miR-129-5p水平显著低于Ⅲ级患者,有一个或两个肿瘤转移部位的患者的血清miR-129-5p水平显著低于有三个或以上肿瘤转移部位的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析表明患者的血清miR-129-5p水平对区分曲妥珠单抗敏感与耐药患者的阈值为0.43,灵敏度为0.89,特异度为0.72,且曲妥珠单抗耐药组患者血清miR-129-5p≤0.43的患者比例显著高于敏感组患者(71.0%vs26.3%,P<0.05)。结论:HER-2阳性晚期乳腺癌患者的血清miR-129-5p水平可有效预测其对曲妥珠单抗的疗效,有望成为预测患者曲妥珠单抗疗效的有效生物标记物。

非小细胞肺癌患者外周血中miR129-1表达水平与预后的相关性

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中miR129-1表达水平与预后的相关性。方法选择2017年1月至12月解放军第九六〇医院收治并随访3年的109例NSCLC患者为研究对象,据预后情况将其分为死亡组与存活组。比较两组临床病例特征,分析NSCLC患者预后的影响因素。采用生存曲线比较外周血miRNA129-1低表达患者与高表达患者的生存情况。结果109例患者失访7例,剩余102例中死亡37例,生存65例。死亡组吸烟史、淋巴结转移、低分化、Ⅲ期、外周血miR129-1低表达占比高于生存组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析显示,淋巴结转移、分化程度、临床分期、外周血miR129-1表达情况均为NSCLC患者预后的影响因素(P<0.05)。外周血miR129-1低表达患者3年生存率低于高表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论外周血miR129-1表达水平与NSCLC患者预后密切相关,有望成为NSCL诊疗的生物标志物。

萎缩性胃炎患者血清PGⅠ、PGⅡ、IL-2、Hp-IgG抗体、hEGF及miR-129表达水平及其临床意义研究

目的:探讨慢性萎缩性胃炎患者血清胃蛋白酶原(PG)Ⅰ、PGⅡ、白细胞介素-2(IL-2)、幽门螺杆菌(Hp)-IgG抗体、人表皮生长因子(hEGF)及miR-129表达水平的临床意义。方法:选取2021年1月至2022年12月在我院治疗的慢性萎缩性胃炎患者72例,胃癌患者50例,同时选取健康志愿者50例,检测血清PGⅠ、PGⅡ、IL-2、Hp-IgG抗体、hEGF和miR-129水平。结果:萎缩性胃炎组患者血清PGⅠ、PGⅡ和miR-129水平分别为(70.55±19.42)μg·L^(-1)、(15.71±1.89)μg·L^(-1)和(1.02±0.20),均低于对照组(P<0.05),但均高于胃癌组(P<0.05)。萎缩性胃炎组患者血清IL-2、Hp-IgG抗体阳性率及hEGF水平分别为(15.58±4.32)ng·mL^(-1)、62.50%和(1.49±0.61)ng·mL^(-1),均高于对照组(P<0.05),但均低于胃癌组(P<0.05)。萎缩性胃炎组Hp-IgG抗体阳性患者血清PGⅠ、PGⅡ和miR-129水平分别为(68.45±14.23)μg·L^(-1)、(14.68±4.03)μg·L^(-1)和(0.99±0.13),均低于Hp-IgG抗体阴性患者(P<0.05),而IL-2和hEGF水平分别为(16.20±2.24)ng·mL^(-1)和(1.61±0.37)ng·mL^(-1),均高于Hp-IgG抗体阴性患者(P<0.05)。萎缩性胃炎组OLGIM分期Ⅲ~Ⅳ期患者血清PGⅠ、PGⅡ和miR-129水平分别为(67.11±12.62)μg·L^(-1)、(14.20±3.10)μg·L^(-1)和(0.96±0.12),均低于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05);OLGIM分期Ⅲ~Ⅳ期患者血清IL-2和hEGF水平分别为(15.90±2.12)ng·mL^(-1)和(1.65±0.34)ng·mL^(-1),均高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05)。相关性分析显示,萎缩性胃炎组患者血清PGⅠ、PGⅡ水平与hEGF水平呈负相关(r=-0.584和-0.640,P<0.05)。结论:萎缩性胃炎患者血清PGⅠ、PGⅡ和miR-129水平均降低,IL-2、Hp-IgG抗体及hEGF水平均升高,且血清PGⅠ、PGⅡ水平与hEGF水平存在负相关关系。

LncRNA MIR22HG调节miR-132-3p/TLR2轴对急性心肌梗死小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响

目的:探讨长链非编码RNA miR-22宿主基因(lncRNA MIR22HG)调节miR-132-3p/Toll样受体2(TLR2)轴对急性心肌梗死(AMI)小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响。方法:取C57BL/6J小鼠随机分为sham组、AMI组、AMI+sh-NC组、AMI+shMIR22HG组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组,每组10只,除去sham组外,其它组都进行冠状动脉左前降支结扎,sham组只开胸不结扎冠状动脉,其中AMI+sh-NC组、AMI+sh-MIR22HG组、AMI+shMIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组小鼠分别相对应的对尾静脉注射sh-NC、sh-MIR22HG、sh-MIR22HG+antagomir-NC、sh-MIR22HG+antagomir-132-3p。超声心动图评估小鼠心室重构和心脏功能;HE染色和Masson染色观察心肌组织病理学变化及纤维化;RT-qPCR检测心肌组织MIR22HG、miR-132-3p表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;Western blotting检测心肌组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleved caspase-3)/半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、collagenⅢ和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证MIR22HG和miR-132-3p、miR-132-3p和TLR2的关系。结果:与sham组比较,AMI组小鼠心功能显著降低,心肌组织损伤、心肌纤维化加重,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著升高,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与AMI+sh-NC组比较,AMI+sh-MIR22HG组小鼠心功能改善,心肌组织损伤、心肌纤维化减轻,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著降低,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达上升(P<0.05);下调miR-132-3p减弱了敲减MIR22HG对心肌组织的保护作用;双荧光素酶报告基因实验结果显示,MIR22HG靶向调控miR-132-3p表达,miR-132-3p靶向负调控TLR2表达。结论:抑制MIR22HG表达可通过调节miR-132-3p/TLR2轴抑制AMI小鼠心肌细胞凋亡,改善小鼠心室重构。

FOXD2-AS1、MIR4435-1HG和HOXC-AS2联合诊断胃癌的临床价值及机制研究

目的:筛选胃癌中差异性表达的长链非编码RNA(lncRNA),探讨代表性lncRNA在胃癌诊断中的潜在价值及相关机制。方法:从TCGA数据库中筛选在胃癌中差异性表达的lncRNA,通过GSE179252和GSE184336数据集以及qRT-PCR检测胃癌患者血清中lncRNA的表达水平对结果进行验证。绘制ROC曲线评价代表性lncRNA单独及联合检测的诊断效能。分析HOXC-AS2与胃癌患者临床病理参数的相关性。利用在线数据库对HOXC-AS2进行下游靶基因预测以及PPI蛋白互作分析,构建HOXC-AS2-miRNA-mRNA调控网络。结果:从TCGA数据库中筛选出3个在胃癌中差异性表达的lncRNA。TCGA-STAD、GSE179252和GSE184336数据集中FOXD2-AS1、MIR4435-1HG和HOXC-AS2联合检测胃癌的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.994、0.958和0.921。血清中检测结果发现与胃良性疾病患者相比,FOXD2-AS1、MIR4435-1HG和HOXC-AS2在胃癌患者血清中表达升高(P<0.001),三者联合检测诊断胃癌的AUC为0.843,灵敏度和特异度分别为80%和86%。HOXC-AS2与胃癌肿瘤分级有相关性(P<0.05)。HOXC-AS2可与下游mRNA竞争miR-9-5p等miRNA结合位点,调控DLX6与HOXC蛋白家族之间的相互作用。结论:FOXD2-AS1、MIR4435-1HG和HOXC-AS2的联合检测可用作胃癌的诊断标志物,HOXC-AS2可作为ceRNA促进胃癌进展。

LncRNA NR2F2-AS1靶向抑制miR-129-5p调控胶质瘤细胞增殖和凋亡的机制研究

目的研究lncRNA NR2F2-AS1和miR-129-5p在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法qRT-PCR检测lncRNANR2F2-AS1和miR-129-5p在胶质瘤组织和细胞中表达水平,MTT法和流式细胞术检测U251细胞增殖和凋亡,Westernblot检测细胞中CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平,双荧光素酶报告系统验证NR2F2-AS1和miR-129-5p的调控关系。结果与正常脑组织相比,在胶质瘤组织中lncRNA NR2F2-AS1的含量显著升高(P<0.05),miR-129-5p的含量则显著下降(P<0.05);干扰NR2F2-AS1表达和过表达miR-129-5p均可抑制胶质瘤U251细胞增殖并促进细胞凋亡,使细胞中CyclinD1和Bcl-2含量降低(P<0.05),p21和Bax含量升高(P<0.05);lncRNA NR2F2-AS1靶向负调控miR-129-5p的表达;抑制miR-129-5p表达逆转了干扰NR2F2-AS1表达对U251细胞增殖、凋亡的作用。结论干扰lnc RNANR2F2-AS1通过靶向促进miR-129-5p表达抑制胶质瘤U251细胞增殖,诱导细胞凋亡。LncRNA NR2F2-AS1可能是胶质瘤的分子靶点。

长链非编码RNA NRSN2-AS1通过miR-129-5p/Wnt5a轴靶向调控Wnt/β-catenin信号通路对食管鳞状细胞癌发生、发展的影响

目的探讨NRSN2-AS1对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞增殖、迁移及侵袭的作用及其相关分子机制。方法应用qRT-PCR法检测96例ESCC和癌旁组织及ESCC细胞系中NRSN2-AS1的表达水平。通过体外细胞功能实验分析NRSN2-AS1过表达对ESCC细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;应用生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验,验证NRSN2-AS1和miR-129-5p的靶向关系及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。应用qRT-PCR法分别检测NRSN2-AS1/miR-129-5p/Wnt5a分子轴的表达。结果NRSN2-AS1在ESCC组织中(2.48±0.90)的表达显著高于癌旁组织(1.02±0.73,t=4.480,P<0.01)。NRSN2-AS1在食管癌细胞系Eca109(1.99±0.04)、TE1(2.43±0.09)、TE13(3.68±0.21)和KYSE150(4.44±0.26)中的表达显著高于对照组(1.00±0.08,P均<0.01)。NRSN2-AS1过表达可促进Eca109细胞的增殖能力(P<0.01);上调NRSN2-AS1可促进Eca109细胞的迁移及侵袭能力(P均<0.01)。NRSN2-AS1可通过竞争性结合miR-129-5p,上调Wnt5a的表达,进而激活Wnt/β-catenin信号通路。结论NRSN2-AS1可通过miR-129-5p/Wnt5a轴激活Wnt/β-catenin信号通路,促进ESCC细胞的增殖、迁移及侵袭,其有望成为ESCC治疗的潜在靶点。

miR-129-3p通过E2F5下调BIM表达在结直肠癌中所起的促癌作用研究

目的探讨miR-129-3p通过E2F5下调BIM表达在结直肠癌中所起的促癌作用。方法收集郑州大学第二附属医院消化内科30例结直肠癌组织和10例癌旁组织样本,生物信息学分析miR-129-3p在样本中的表达差异。qRT-PCR评估miR-129-3p在样本中的表达情况。CCK8实验检测细胞活力。转染mimic和inhibitor改变miR-129-3p表达,探讨miRNA的生物学功能。荧光素酶报告基因检测miRNA靶基因。通过转染siRNA,抑制E2F5的表达。Western blotting检测细胞蛋白表达含量。结果miR-129-3p在结直肠癌组织样本中呈低表达。通过转染mimic和inhibitor发现,提高miR-129-3p表达可以抑制细胞活力。反之,抑制miR-129-3p促进细胞增殖。荧光素酶报告基因和Western blotting检测E2F5可作为miR-129-3p靶基因。敲除miR-129-3p靶基因E2F5同样抑制结直肠癌的增殖。结论miR-129-3p可以通过下调E2F5的表达抑制结直肠癌细胞增殖。miR-129-3p有望成为治疗结直肠癌的新靶点,我们的研究为结直肠癌的靶向治疗提供新思路。

5-Aza-CdR对人脑胶质瘤细胞miR-129-2表达水平及其生物学行为的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-Cd R)对人脑胶质瘤细胞U87和U373中mi R-129-2表达水平及细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。方法:以0.5 mmol/L的5-Aza-Cd R处理人脑胶质瘤细胞U87和U373 72 h,采用RT-PCR法检测mi R-129-2的表达水平,CCK-8法观察胶质瘤细胞增殖能力,Transwell试验检测细胞的侵袭能力,划痕实验检测细胞的迁移能力。结果:经5-AzaCd R处理后人脑胶质瘤细胞U87和U373的mi R-129-2表达水平显著上调,细胞增殖能力、侵袭迁移能力受到抑制。结论:5-Aza-Cd R能使mi R-129-2启动子去甲基化,使其表达上调,并能抑制胶质瘤细胞增殖、侵袭迁移能力。

miR-129-2靶向调节SOX4表达对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-129-2靶向调节SOX4表达对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响及其对子宫内膜癌的早期诊断价值。方法将miR-129-2 mimics及miR-129-2 mimics NC基因序列分别转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞内,分别为miR-129-2 mimics高表达组、miR-129-2 mimics阴性对照组,并设置非转染子宫内膜癌Ishikawa细胞为空白对照组。使用甲基化敏感性特异性聚合酶链反应(MSRE-qPCR)测定子宫内膜癌Ishikawa细胞和子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中miR-129-2基因的甲基化水平,采用荧光定量PCR法测定患者癌组织及匹配癌旁组织miR-129-2基因的mRNA表达水平。并通过MTT法检测各组细胞的增殖能力,通过蛋白印迹法检测SOX4蛋白表达,采用裸鼠体内移植瘤形成实验对细胞的增殖能力进行检测。结果 Ishikawa细胞系中miR-129-2启动子区甲基化强度为74.47%。本研究中所选取的66例子宫内膜癌组织中38例存在miR-129-2启动子区高甲基化(占57.58%),且癌旁组织内无甲基化。高表达组的Ishikawa细胞中SOX4蛋白表达量显著低于阴性对照组和空白对照组(t值分别为2.436、3.786,均P<0.05),阴性对照组则显著低于空白对照组(t=2.897,P<0.05)。miR-129-2在子宫内膜癌组织中的表达显著低于正常子宫内膜组织(t=6.020,P=0.000)。3组Ishikawa细胞培养24h、48h、72h、96h和120h细胞增殖能力比较均有显著性差异(F值分别为4.663、3.089、5.955、6.719、8.510,均P<0.05),其中miR-129-2高表达组细胞增殖能力最低。进一步每两组之间比较显示miR-129-2高表达组在48h、72h、96h、120h时间点细胞增殖能力均显著低于阴性对照组和空白对照组(t值为2.356~10.987,均P<0.05),而阴性对照组和空白对照组比较差异均无统计学意义(t值为0.980~1.235,均P>0.05)。3组裸鼠瘤体湿重、终体积、肿瘤相对体积比较均有显著性差异(F值分别为8.256、17.854、14.771,均P<0.05),其中miR-129-2上述指标最低。进一步每两组之间比较显示miR-129-2高表达组瘤体湿重、终体积、肿瘤相对体积均显著低于阴性对照组和空白对照组(t值为3.124~19.446,均P<0.05),而阴性对照组和空白对照组比较差异均无统计学意义(t值为0.884~1.459,均P>0.05)。miR-129-2对子宫内膜癌具有较高的诊断价值,AUC为0.768,理论阈值点为0.002,对应的敏感度和特异度分别为0.772、0.745。结论 miR-129-2在子宫内膜癌组织和细胞系内均存在明显甲基化,因基因启动子区miR-129-2在子宫内膜癌组织中表达降低,miR-129-2可抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,促进凋亡,其作用可能与靶向下调SOX4基因表达相关。

miR-129-5p靶向调节果蝇形态同系物2基因抑制喉鳞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的探讨miR-129-5p对喉鳞癌细胞增殖、凋亡的调控机制。方法运用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantification polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测人支气管上皮细胞HBE、喉鳞状细胞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p、DIAPH2的表达;将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-129-5p组(转染miR-129-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-129-5p组(转染anti-miR-129-5p)、si-NC组(转染si-NC)、si-DIAPH2(果蝇形态同系物2,Drosophila Homologue of Diaphanous2,DIAPH2)组(转染si-DIAPH2)、miR-129-5p+pc DNA组(共转染miR-129-5p和pc DNA)、miR-129-5p+pc DNA-DIAPH2组(共转染miR-129-5p和pc DNA-DIAPH2),用脂质体法转染HN4、TU177细胞;Western blot检测细胞中DIAPH2、细胞周期蛋白依赖激酶1(cyclinD1)、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(cleaved-caspase-9)的蛋白表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-129-5p与DIAPH2的结合力。结果与人支气管上皮HBE相比,喉鳞癌细胞HN4、TU177中miR-129-5p表达均显著降低,DIAPH2表达显著升高(P<0.05);过表达miR-129-5p、敲减DIAPH2均可显著抑制HN4、TU177细胞增殖、促进凋亡、下调cyclinD1、上调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9;miR-129-5p可抑制野生型DIAPH2细胞的荧光活性,并负向调控DIAPH2的表达;过表达DIAPH2可逆转miR-129-5p对Hep-2细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论 miR-129-5p可抑制喉鳞状细胞癌的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向DIAPH2相关,将可为miR-129-5p靶向治疗喉鳞状细胞癌提供新的依据。