孟鲁司特钠片联合糠酸氟替卡松治疗支气管哮喘患儿的疗效及对miRNA-21、miRNA-26a水平的影响

目的探究孟鲁司特钠片联合糠酸氟替卡松治疗对支气管哮喘患儿血清微小RNA(miRNA)-21及miRNA-26a水平的影响。方法选择2020年3月至2022年3月陕西省人民医院儿童病院收治的支气管哮喘患儿120例,按照随机数字表法分为两组,每组60例。在常规方法的基础上,对照组使用布地奈德雾化吸入治疗,观察组使用孟鲁司特钠片联合糠酸氟替卡松治疗。比较两组治疗后临床疗效和不良反应。检测并比较两组患儿肺功能指标、血清炎症因子以及miRNA-21、miRNA-26a表达水平。结果治疗后两组第1秒用力呼气容积(FEV_(1))和最大呼气流量(PEF)均显著升高(P<0.05),且观察组FEV1和PEF均显著高于对照组(P<0.05)。治疗后两组超敏C感应蛋白(hs-CRP)和白细胞介素6(IL-6)水平均显著降低(P<0.05),且观察组hs-CPR和IL-6水平均显著低于对照组(P<0.05)。治疗后两组miRNA-21和miRNA-26a表达水平均显著降低(P<0.05),且观察组均显著低于对照组(P<0.05)。两组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论糠酸氟替卡松联合孟鲁斯特钠片对儿童支气管哮喘具有更好的临床疗效,可提高肺功能,并具有一定的安全性。并且联合治疗可能通过下调miRNA-21和miRNA-26a的表达水平抑制炎症因子。

miR-21调控TLK2表达对急性髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨mi R-21调控TLK2表达对急性髓系白血病(AML)细胞增殖和凋亡的影响。方法:选取2019年1月至2022年7月在新乡市中心医院收治的70例AML患者,同时选取30例缺铁性贫血患者作为对照组,使用Ficoll密度梯度离心法获取两组患者的骨髓单个核细胞。RT-q PCR测定各组骨髓单个核细胞中mi R-21、TLK2 m RNA的表达水平。使用脂质体转染技术将mimics-mi R-21、mimics-NC、inhibitor-mi R-21、inhibitor-NC及NC转染至HL-60细胞。采用CCK-8法测定各组HL-60转染细胞经阿糖胞苷处理后的活性。TUNEL法测定HL-60转染细胞凋亡率。RT-q PCR测定转染inhibitor-mi R-21后HL-60细胞TLK2 m RNA的表达。结果:AML患者骨髓单个核细胞中mi R-21、TLK2 m RNA的相对表达水平均明显高于对照组患者(均P<0.05)。HL-60细胞经阿糖胞苷处理后,inhibitor-mi R-21组和mimics-mi R-21组的细胞活性均随阿糖胞苷浓度升高显著下降(P<0.05),但在每个阿糖胞苷浓度点,inhibitor-mi R-21组的细胞活性均低于对照组(P<0.05),而mimics-mi R-21组的细胞活性均高于对照组(P<0.05)。inhibitor-mi R-21组的细胞凋亡率显著升高(P<0.05),而mimics-mi R-21组的细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。HL-60细胞经inhibitor-mi R-21处理后,TLK2 m RNA的相对表达量明显下降(P<0.05)。结论:mi R-21在AML患者中呈高表达,可能通过抑制TLK2的表达来促使AML细胞凋亡。

miR-21-3p靶向STAT3促进银屑病角质形成细胞增殖的研究

目的探讨miR-21-3p及其靶蛋白信号转导子和转录激活子3蛋白(STAT3)在寻常型银屑病发生过程中角质形成细胞的作用意义。方法对皮肤组织中STAT3蛋白表达情况的检测选择免疫组织化学法,对健康人群皮肤组织及银屑病患者皮损组织miR-21-3p表达量的检测选择实时荧光定量PCR法,靶基因STAT3和miR-21-3p关系的检测选择双荧光素酶报告基因。化学合成miR-21-3p模拟物、抑制剂,瞬时转染HaCaT细胞,对不同分组细胞进行CCK8、流式细胞凋亡实验,探究分析miR-21-3p调控细胞表型主要作用。对于转染细胞中STAT3蛋白表达情况,选择Western Blot检测。结果寻常型银屑病患者皮肤组织中miR-21-3p呈高表达(P<0.05)。STAT3免疫组化阳性表达定位于细胞浆,在银屑病组患者皮损组织阳性表达率为82.22%(37/45)高于正常皮肤组织(P<0.01)。双荧光素酶报告基因显示miR-21-3p与STAT3存在结合,呈靶向关系。miR-21-3p mimics促进HaCaT细胞增殖活性,抑制细胞凋亡;miR-21-3p inhibitor抑制HaCaT细胞的增殖能力,促使细胞趋向凋亡。miR-21-3p转染HaCaT过表达可对STAT3蛋白表达量产生促进,相反则降低(F=48.632,P<0.01)。结论miR-21-3p呈现正调控关系,能够靶向调控STAT3;两者共同作用参与并加重银屑病的病程,并抑制患者细胞凋亡,调节角质形成细胞增殖活性。

miR-21、miR-26a及miR-200a在子痫前期患者中的表达水平及与病情的相关性

目的分析miR-21、miR-26a及miR-200a在子痫前期(PE)患者血清中的表达,并探讨其临床意义。方法选取2019年3月至2021年3月在南京市妇幼保健院治疗的PE患者103例,分为轻度PE组(57例)和重度PE组(46例),另选取同期正常孕妇50例作为对照组。检测各组孕妇血清miR-21、miR-26a及miR-200a表达水平,分析其与年龄、孕周、BMI、血压、24h尿蛋白及不良妊娠结局的相关性,并分析血清miR-21、miR-26a及miR-200a对PE的诊断价值。结果重度PE组BMI、舒张压、收缩压以及24h尿蛋白高于轻度PE组及对照组,且差异具有统计学意义(F值分别为4.116、141.063、143.118和342.736,P<0.05)。对照组、轻度PE组及重度PE组孕妇血清中miR-21、miR-26a及miR-200a的表达水平依次升高。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-21、miR-26a及miR-200a的表达水平与血压、24h尿蛋白及不良妊娠结局发生率呈正相关(r值介于0.446~0.832之间,P<0.001)。经受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析发现,血清miR-21、miR-26a及miR-200a联合诊断PE的曲线下面积(AUC)为0.967,敏感度为98.10%,特异性为92.30%。结论PE患者血清miR-21、miR-26a及miR-200a的表达高于正常孕妇,且与患者的临床指标及不良妊娠结局相关,检测血清miR-21、miR-26a、miR-200a水平对早期诊断PE及评估患者预后具有十分重要的意义。

血清miR-21、miR-155与脓毒症病情程度的相关性及在预后转归中的交互作用

目的 探讨血清微小RNA-21 (miR-21)、微小RNA-155 (miR-155)与脓毒症病情程度的相关性及在预后转归中的交互作用。方法 选择2022年5月至2023年5月新乡医学院第一附属医院收治的150例脓毒症患者作为研究组,另选同期同年龄段150例健康志愿者作为对照组。比较两组受检者的一般资料和血清miR-21、miR-155水平,并比较研究组不同病情程度患者的血清miR-21、miR-155水平,应用Spearman法分析血清miR-21、miR-155水平与脓毒症病情程度的相关性;统计患者28 d预后,比较死亡与存活患者入院时的血清miR-21、miR-155及常规炎性因子[白介素-6 (IL-6)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)]水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-21、miR-155及常规炎性因子预测脓毒症预后的价值,通过精准-召回(PR)曲线评价血清miR-21、miR-155及常规炎性因子联合预测脓毒症预后的价值,通过交互作用分析血清miR-21、miR-155在脓毒症预后转归中的作用。结果 研究组患者的血清miR-21、miR-155水平分别为1.93±0.62、1.86±0.55,明显高于对照组的1.05±0.34、0.94±0.31,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组病情程度重度患者血清miR-21、miR-155水平分别为2.54±0.54、2.46±0.47,明显高于中度患者的1.95±0.48、1.88±0.44和轻度患者的1.33±0.39、1.27±0.38,中度患者血清miR-21、miR-155水平明显高于轻度患者,差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman法分析结果显示,血清miR-21、miR-155水平与脓毒症病情程度呈正相关(P<0.05);死亡患者入院时的血清miR-21、miR-155及IL-6、CRP、TNF-α水平分别为2.63±0.56、2.51±0.52、(1.39±0.42)μg/L、(154.29±28.73) mg/L、(1.18±0.33)μg/L,明显高于存活患者的1.67±0.53、1.62±0.49、(0.97±0.30)μg/L、(122.64±25.19) mg/L、(0.89±0.24)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);ROC分析结果显示,入院时血清miR-21、miR-155、IL-6、CRP、TNF-α预测脓毒症预后为死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.772、0.778、0.781、0.730、0.830,各指标联合预测的AUC为0.922,大于单独预测的AUC (P<0.05);PR曲线分析结果显示,入院时血清miR-21、miR-155、IL-6、CRP、TNF-α联合预测脓毒症预后的AUC为0.891;交互作用分析结果显示,入院时血清miR-21高水平与miR-155高水平在脓毒症预后转归中呈超相乘模型的正向交互作用(P<0.05)。结论 血清miR-21、miR-155水平与脓毒症病情程度呈正相关,在脓毒症预后转归中呈超相乘模型的正向交互作用,且在预测脓毒症预后方面具有一定预测效能。

肺炎支原体肺炎患儿血清miR-21、miR-146a表达变化及其与炎症因子的相关性

目的探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿血清miR-21、miR-146a表达变化及其与炎症因子的相关性。方法选取2021年8月—2022年9月包头市第八医院MPP患儿62例(MPP组)、健康体检儿童45名(正常对照组)。收集所有研究对象的一般资料,并检测血清miR-21、miR-146a相对表达量和炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平。根据病情严重程度将MPP患儿分为轻症组(38例)和重症组(24例)。采用Pearson相关分析评估血清miR-21、miR-146a、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α之间的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各项指标诊断重症MPP的效能。结果MPP组血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平和miR-21相对表达量均高于正常对照组(P<0.001),血清miR-146a相对表达量低于正常对照组(P<0.001)。重症组血清IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平和miR-21相对表达量均高于轻症组(P<0.001),血清miR-146a相对表达量低于轻症组(P<0.001)。miR-21与IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α之间均呈正相关(P<0.05),miR-146a与miR-21、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α均呈负相关(P<0.05),IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α之间均呈正相关(P<0.05)。miR-21、miR-146a、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α单项检测诊断重症MPP的曲线下面积(AUC)分别为0.794、0.770、0.829、0.837、0.866、0.865;各项指标联合检测的AUC为0.963,敏感性和特异性分别为87.5%和97.4%。结论MPP患儿血清miR-21和miR-146a均呈异常表达,且与炎症因子密切相关,或可作为临床判断MPP患儿病情严重程度的有效指标。

miR-146a-5p与miR-21交互对原发性肾病综合征发病风险及病情程度的影响

目的探讨微小RNA-146a-5p(miR-146a-5p)与微小RNA-21(miR-21)交互作用对原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,NS)发病风险及病情程度的关系。方法选取2021年8月至2023年8月NS患者103例作为研究组,另选取同期体检的健康志愿者103名作为对照组。比较研究组与对照组、研究组不同病理类型[微小病变型(minimal change disease,MCD)、膜性肾病(membranous nephropathy,MN)、局灶-节段性肾小球硬化症(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)]、研究组不同肾脏损伤程度患者的血清miR-146a-5p、miR-21相对表达量,分析miR-146a-5p、miR-21对NS的诊断价值及交互影响,进一步分析miR-146a-5p、miR-21与病情程度的相关性。结果研究组血清miR-146a-5p相对表达量低于对照组,miR-21相对表达量高于对照组(P<0.05);研究组不同病理类型患者血清miR-146a-5p、miR-21相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);研究组不同肾脏损伤程度患者血清miR-146a-5p、miR-21相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);miR-146a-5p、miR-21联合诊断NS的AUC为0.923(95%CI:0.877~0.955),敏感度为78.64%,特异度为90.29%,明显优于miR-146a-5p、miR-21单独诊断;以最佳截断值将miR-146a-5p、miR-21分为高表达与低表达,miR-146a-5p低表达与miR-21高表达在NS发病风险呈正向交互作用,为次相乘模型;miR-146a-5p与NS病理类型、肾脏损伤程度呈负相关(r=-0.613、-0.657,P<0.05),miR-21与NS病理类型、肾脏损伤程度呈正相关(r=0.664、0.702,P<0.05)。结论NS患者血清中miR-146a-5p、miR-21异常表达,且与患者病理类型、肾脏损伤程度有关;此外,miR-146a-5p、miR-21在NS发病风险中具有正向交互作用,同时暴露可增加NS发病风险。

miR-21在食管鳞状细胞癌中的作用机制研究进展

食管癌是一种发病率和死亡率均较高的消化道疾病,且早期难以发现。微RNA(miRNA/miR)-21广泛存在于人体各种细胞和组织中,并与人体的生长和发育、细胞周期及组织分化过程紧密相关,其作为miRNA家族的重要成员,也是一种内源性调控序列,在食管癌组织中的表达量异常升高,但目前miR-21的相关研究成果有限,还不足以将其单独作为靶点用于食管癌治疗。基于此,miR-21的早期准确检测、其各类调控基因的调控机制及其是否可作为新靶点治疗食管癌成为研究热点。

LncRNA GAS5通过miR-21调控脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制研究

目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)与微小RNA-21(miR-21)的关系,阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制。方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧(OGD/R)处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)模型;沉默和过表达GAS5,构建下调shGAS5表达的慢病毒,通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等。通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、Bcl-2和蛋白激酶B(AKT)的RNA表达水平;Western blot检测Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达水平;TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度。结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及pAKT表达水平降低(P<0.05),GAS5、PTEN、Bax及Cleaved caspase-3表达均升高(P<0.05)。PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果,且于OGD/R处理后2 h最显著。GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21,进而调控下游PTEN信号通路。下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡(P<0.05)。结论 GAS5通过结合miR-21,上调PTEN并抑制AKT磷酸化,进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡。

雪旺细胞来源的外泌体miR-21通过靶向SPRY2促进大鼠坐骨神经损伤后修复的研究

目的:研究高表达miR-21的雪旺细胞(Schwann cells,SC)来源外泌体对坐骨神经损伤(sciatic nerve injury,SNI)的修复作用及机制。方法:分别采用空载慢病毒和高表达miR-21的慢病毒感染SC株,收集SC上清外泌体并进行鉴定。采用神经断端吻合术建立SNI大鼠模型,术后随机分为模型组、SC来源外泌体组和高表达miR-21的SC来源外泌体组(n=10)。其中,SC来源外泌体组和高表达miR-21的SC来源外泌体组分别采用体外收集的外泌体局部注射进行治疗,3周后行为学实验检测神经功能恢复,免疫荧光染色评价SNI后轴突髓鞘再生,RT-q PCR检测血清外泌体miR-21及神经组织中miR-21和SPRY2的表达水平,双荧光素酶报告基因实验体外验证miR-21和SPRY2之间的靶向互作。结果:与模型组相比,其余各组大鼠坐骨神经功能和神经再生情况均出现明显改善,RT-q PCR结果显示血清外泌体及神经组织中miR-21的表达水平显著升高,神经组织中SPRY2的表达水平显著降低,其中高表达miR-21的SC细胞来源外泌体组较SC来源外泌体组变化更显著;双荧光素酶报告基因实验表明miR-21靶向调节SPRY2的表达。结论:高表达miR-21的SC来源外泌体通过靶向SPRY2显著促进SNI后修复。

牙龈卟啉单胞菌通过miR-21-5p/RASA1/ERK信号通路促进食管鳞癌自噬

目的探讨牙龈卟啉单胞菌(Pg)促进食管鳞癌(ESCC)细胞自噬发生的分子机制。方法Pg感染siAtg7或氯喹(CQ)预处理的KYSE70细胞和KYSE140细胞,Western blot检测Atg7、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p62蛋白,荧光共聚焦显微镜检测mRFP-GFP-LC3标记ESCC细胞自噬流,CCK-8法检测ESCC细胞活性,迁移小室检测ESCC细胞迁移及侵袭能力。miR-21-5p inhibitor、RASA1过表达或U0126分别阻断miR-21-5p/RASA1/ERK信号通路,如上检测自噬相关表型变化。免疫组化检测ESCC组织中Pg丰度和LC3蛋白表达,RT-PCR检测ESCC及其癌旁组织中miR-21-5p的表达,统计分析Pg、LC3和miR-21-5p相关性。结果Pg感染诱导KYSE70细胞和KYSE140细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达上调、p62蛋白表达下调,增加了mRFP-GFP-LC3标记细胞中的红色、绿色和黄色荧光斑点数目和荧光强度,同时促进KYSE70细胞和KYSE140细胞增殖、迁移和侵袭能力增加,上述Pg诱导的ESCC细胞表型改变被CQ或siAtg7预处理逆转。miR-21-5p inhibitor、U0126或RASA1过表达质粒的预处理,也同样逆转了Pg对ESCC细胞自噬的促进作用。Pg丰度与miR-21-5p、LC3蛋白表达呈正相关。结论Pg通过miR-21-5p/RASA1/ERK信号通路促进ESCC自噬发生。

MiR-21-5p通过下调电压门控钾离子通道Kv1.1表达减轻大鼠三叉神经痛

目的:三叉神经痛(trigeminal neuralgia,TN)是一种临床上常见的神经病理性疼痛。电压门控性钾通道(voltage-gated potassium channel,Kv)已被证实参与TN的发生、发展,但具体机制仍不明确。微RNA(microRNA,miR)可通过调节三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)上Kv通道的表达及神经元兴奋性,参与神经病理性疼痛。本研究旨在探索TN模型中TG上Kv1.1和miR-21-5p的关系,评估miR-21-5p是否对Kv1.1有调控作用,为TN的治疗提供新的靶点。方法:将48只SD大鼠随机分为6组:1)假手术组(sham组,n=12),大鼠仅在术侧切口缝合,不结扎神经;2)Sham+agomir NC组(n=6),sham大鼠通过脑立体定位注射方法于术侧TG微量注射agomir NC;3)Sham+miR-21-5p agomir组(n=6),sham大鼠通过脑立体定位注射方法于术侧TG微量注射miR-21-5p agomir;4)TN组(n=12),采用铬肠线慢性缩窄性眶下远端神经损伤(chronic constriction injury of the distal infraorbital nerve,dIoN-CCI)法构建TN大鼠模型;5)TN+antagomir NC组(n=6),TN大鼠通过脑立体定位注射方法于术侧TG微量注射antagomir NC;6)TN+miR-21-5p antagomir组(n=6),TN大鼠通过脑立体定位注射方法于术侧TG微量注射miR-21-5p antagomir。检测术后各组大鼠面部机械痛阈变化。采用蛋白质印迹法和实时反转录聚合酶链反应检测术后大鼠术侧TG中Kv1.1和miR-21-5p的表达情况。利用双荧光素酶报告基因确定Kv1.1和miR-21-5p是否存在靶标关系,即miR-21-5p是否可以直接影响KCNA1的3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)。通过免疫荧光法测定,对脑立体定位注射的效果进行评价,随后分别将miR-21-5p的类似物(agomir)和agomir NC通过脑立体定位仪注射至sham组大鼠TG内,使miR-21-5p过表达;向TN组大鼠TG内分别注射miR-21-5p的抑制剂(antagomir)和antagomir NC,抑制miR-21-5p表达。观察给药前后大鼠行为学变化,检测干预后大鼠TG内miR-21-5p和Kv1.1表达的变化。结果:与基础痛阈值相比,TN组大鼠在术后第5至15天,面部机械痛阈值显著降低(P<0.05),sham组大鼠面部机械痛阈值稳定在正常水平,证明dIoN-CCI模型构建成功。与sham组相比,TN组TG中Kv1.1 mRNA和蛋白质表达均下调(均P<0.05),miR-21-5p的表达上调(P<0.05)。双荧光素酶报告结果显示:与转染mimic NC和野生型KCNA1(KCNA1 WT)组相比,共转染6 nmol/L或20 nmol/L的rno-miR-21-5p mimics的KCNA1 WT组的荧光素酶活性显著降低(P<0.001);与6 nmol/L rno-miR-21-5p mimics共转染组相比,较大剂量(20 nmol/L)的rno-miR-21-5p mimics共转染组的荧光素酶相对活性显著降低(P<0.001)。免疫荧光法结果显示通过脑立体定位可以将药物准确注入TG。TN组抑制miR-21-5p表达后,大鼠面部机械痛阈升高,TG中Kv1.1 mRNA及蛋白质的表达水平升高;sham组过表达miR-21-5p后,大鼠面部机械痛阈降低,TG中Kv1.1 mRNA及蛋白质的表达降低。结论:Kv1.1和miR-21-5p均参与TN的发生、发展,miR-21-5p可以通过结合KCNA13'-UTR来调控Kv1.1的表达,进而影响TN。

雷公藤甲素通过lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴抑制细胞焦亡改善佐剂型关节炎大鼠炎症

目的探讨雷公藤甲素(TP)通过lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴抑制细胞焦亡改善AA大鼠炎症的机制。方法将大鼠分为4组,每组6只:正常组(NC),模型组(MC),雷公藤甲素组(TP)和甲氨蝶呤组(MTX)。建立AA大鼠模型,观察大鼠一般状态、右足跖肿胀度和关节炎指数;HE染色检测各组大鼠关节滑膜组织病理形态;ELISA法检测IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α炎症因子水平;荧光定量PCR检测Caspase-1、IL-1β、NLRP3、GSDMD、GAS5、TLR4、NF-κB、miR-21 mRNA表达水平;Western blot检测Caspase-1、NLRP3、GSDMD、NF-κB、Caspase-4、TLR4蛋白的表达情况。结果与NC组比较,MC组大鼠肿胀度、关节炎指数显著升高(P<0.05),炎性细胞浸润增加;与MC组比较,TP组和MTX组IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α炎症因子水平下降(P<0.05),Caspase-1、IL-1β、NLRP3、GSDMD、TLR4、NF-κB、miR-21 mRNA表达水平减少,GAS5 mRNA表达增加(P<0.05),Caspase-1、NLRP3、GSDMD、NF-κB、Caspase-4、TLR4蛋白水平下降(P<0.05);与MTX组比较,TP组IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α炎症因子水平下降(P<0.05),Caspase-1、IL-1β、NLRP3、GSDMD、TLR4、NF-κB、miR-21 mRNA表达水平减少(P<0.05)。结论雷公藤甲素可能通过lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴,抑制细胞焦亡,抑制促炎因子产生,改善AA大鼠炎症。

miR-21-5p调控MMP-9对急性缺血性卒中认知障碍的影响

目的探讨微小RNA-21-5p(miR-21-5p)调控基质金属蛋白酶-9(MMP-9)对急性缺血性卒中(AIS)后认知障碍的影响。方法选取2020年10月至2021年10月,河北医科大学第二医院神经内科收治住院的AIS患者58例。入院后收集患者的人口学、既往史、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分等资料,对血清MMP-9、miR-21-5p进行检测。6个月后对患者进行随访,使用蒙特利尔认知评定量表(MoCA)评估认知功能,并将其分为两组:卒中后认知障碍组(PSCI)和卒中后非认知障碍组(N-PSCI)。探讨急性期miR-21-5p、MMP-9的关系,以及MMP-9在卒中后认知障碍中的作用。结果血清miR-21-5p与MMP-9存在相关性(r=-0.426,P=0.001),线性回归分析结果:β=-0.15,P=0.001。PSCI患者miR-21-5p低于N-PSCI组患者(P<0.05);PSCI发病率62.1%(36/58)。两组患者年龄、受教育年限比较差异有统计学意义(P<0.05)。采用受试者工作特征(ROC)曲线绘制图形,通过计算约登指数,寻找MMP-9最佳预测点。结果曲线下面积(AUC)为0.728,95%CI为0.591~0.866,最佳分界点为140.70,敏感度为0.594,特异性为0.850(P=0.006)。结论AIS患者miR-21-5p抑制血清MMP-9的表达。急性期MMP-9水平升高与PSCI相关,对PSCI有一定的预测价值。

LEASO患者血清miR-21、miR-126水平与HMGB1/TLR4信号通路活性和术后复发的关系

目的 探讨股腘型下肢动脉硬化闭塞症(LEASO)患者血清微小核糖核酸(miR)-21、miR-126水平与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路活性和术后复发的关系。方法 选取行介入手术的股腘型LEASO患者120例,根据术后是否复发将股腘型LEASO患者分为复发组和未复发组。RF-qPCR剂检测血清miR-21、miR-126表达和外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达。采用Pearson相关性分析法分析股腘型LEASO患者血清miR-21、miR-126与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达的相关性。多因素Logistic回归分析股腘型LEASO患者介入术后复发的影响因素。结果 120例股腘型LEASO患者随访2年,术后复发率为34.17%。与未复发组比较,复发组血清miR-21和外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达升高,血清miR-126表达降低(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,股腘型LEASO患者血清miR-21与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达呈正相关(r分别为0.660、0.649,P均<0.05),miR-126与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达呈负相关(r分别为-0.632、-0.641,P均<0.05),外周血单个核细胞HMGB1mRNA与TLR4 mRNA表达呈正相关(r=0.742,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,高血压、糖尿病和miR-21、HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA升高为股腘型LEASO患者介入术后复发的独立危险因素,miR-126升高为独立保护因素(P均<0.05)。结论 股腘型LEASO患者血清miR-21高表达和miR-126低表达与HMGB1/TLR4信号通路激活有关,是股腘型LEASO患者术后复发的独立影响因素。

miR-21-3p通过下调CCT4抑制食管鳞癌细胞的迁移及侵袭

目的:探讨miR-21-3p对食管鳞癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:通过数据库检索miR-21-3p的下游靶基因,GEPIA2数据库预测CCT4在食管鳞癌中的表达和对食管鳞癌患者预后的影响,培养食管鳞癌细胞TE-1、KYSE150,将miR-21-3p inhibitor、SiCCT4、Plenti-CMV-CCT4-GFP/Puro转染至TE-1和KYSE150细胞中,分为miR-21-3p inhibitor组和inhibitor NC组、SiCCT4组和SiNC组、Plenti-CMV-CCT4组和inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组,采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-21-3p和CCT4 mRNA的表达水平,Transwell迁移侵袭实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力,Western blot检测转染后各组细胞CCT4蛋白的表达水平。结果:数据库预测结果显示CCT4在食管鳞癌中过表达,与食管鳞癌患者总体生存期相关,与miR-21-3p呈正相关。qRT-PCR显示miR-21-3p和CCT4在食管癌细胞相较于正常上皮细胞表达显著升高,且在抑制miR-21-3p后CCT4表达水平显著降低(P<0.05)。Transwell实验显示,inhibitor组迁移率及侵袭率显著低于inhibitor NC组(P<0.05);SiCCT4组迁移率及侵袭率显著低于SiNC组(P<0.05);inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组迁移率及侵袭率显著高于inhibitor组(P<0.05);Western blot检测CCT4蛋白发现,inhibitor组蛋白低于inhibitor NC组(P<0.05),inhibitor+Plenti-CMV-CCT4组蛋白显著高于inhibitor组(P<0.05)。结论:miR-21-3p和CCT4在食管癌中呈现过表达,miR-21-3p通过下调CCT4表达抑制食管癌细胞迁移和侵袭能力。

miR-21-5p对川崎病内皮细胞焦亡的作用及其机制研究

目的探究miR-21-5p对川崎病(KD)内皮细胞焦亡的作用及其机制。方法采用随机数字表法将16只C57BL/6小鼠分为KD组和PBS组,每组8只。利用干酪乳杆菌细胞壁提取物(LCWE)腹腔注射小鼠,构建KD模型。利用LCWE处理小鼠冠状动脉内皮细胞(MCAECs),构建KD体外细胞模型。在使用LCWE处理的基础上,根据转染miR-21-5p抑制剂(miR-21-5p inhibitor)或inhibitor阴性对照物(inhibitor-NC)、miR-21-5p模拟物(miR-21-5p mimics)或mimics阴性对照物(miR-NC)、用或不用含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)抑制剂MCC950,将MCAECs分组为:(1)LCWE组和对照组;(2)LCWE+inhibitor-NC组和LCWE+miR-21-5p inhibitor组;(3)LCWE组、LCWE+MCC950组、LCWE+MCC950+miR-NC组和LCWE+MCC950+miR-21-5p mimics组。采用HE染色观察小鼠冠状动脉组织病理学变化;采用qRT-PCR法检测miR-21-5p表达变化;采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)、caspase-1前体(pro-caspase-1)、消皮素D蛋白(GSDMD)p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达;采用细胞计数盒法检测细胞活力;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH活性。结果与PBS组相比,KD组小鼠冠状动脉组织病变明显,冠状动脉组织中NLRP3介导的细胞焦亡、miR-21-5p表达水平均升高(均P<0.01)。与对照组相比,LCWE组MCAECs细胞活力明显降低并且miR-21-5p表达水平明显升高(均P<0.01)。与LCWE+inhibitor-NC组相比,LCWE+miR-21-5p inhibitor组细胞miR-21-5p表达水平、NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达以及LDH活性均明显降低(均P<0.01),而细胞活力明显升高(P<0.05)。与LCWE组相比,LCWE+MCC950组NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达以及LDH活性均明显降低(均P<0.01),且细胞活力明显升高(P<0.01),而进一步转染miR-21-5p mimics明显逆转了以上变化(均P<0.01)。结论在KD中,miR-21-5p通过激活NLRP3炎症小体调节血管内皮细胞焦亡,从而加剧血管内皮细胞损伤。提示抑制miR-21-5p可以部分改善KD期间的血管内皮细胞损伤,miR-21-5p可以作为治疗KD的潜在干预靶点。

血清miR-21、miR-30b对乳腺癌患者术后曲妥珠单抗靶向治疗心脏毒性的预测价值

目的探讨血清miR-21、miR-30b对乳腺癌患者术后曲妥珠单抗靶向治疗心脏毒性的预测价值。方法选取乳腺癌曲妥珠单抗靶向治疗患者138例为观察组,根据是否发生化疗相关心脏毒性事件分为非心脏毒性组和心脏毒性组2个亚组;另外选取同期体检健康女性150例为健康组。比较各组血清miR-21、miR-30b水平和临床资料。采用ROC评估血清miR-21、miR-30b对发生心脏毒性的预测价值,采用多因素Logistic回归分析发生心脏毒性的影响因素。结果观察组血清miR-21高于健康组,而miR-30b低于健康组;心脏毒性组血清miR-21和高血压占比高于非心脏毒性组,而miR-30b和左室射血分数(LVEF)低于非心脏毒性组(P<0.05)。LVEF、miR-21、miR-30b是乳腺癌术后化疗心脏毒性的影响因素(P<0.05)。血清miR-21、miR-30b联合预测乳腺癌术后化疗心脏毒性的诊断效能高于miR-21、miR-30b单独预测(P<0.05)。结论血清miR-21、miR-30b是乳腺癌术后化疗心脏毒性的影响因素,两者联合预测乳腺癌术后化疗心脏毒性的效能更高。

子宫腺肌病组织中的雌激素、雌激素受体、miR-21:致病作用和调控作用

目的探讨miR-21、雌激素(E2)及其受体(ER)在子宫腺肌病发病中的具体机制。方法采用qRT-PCR检测miR-21在子宫腺肌病组织中水平,以宫颈病变为对照组。体外原代培养子宫腺肌病细胞,qRT-PCR检测E2激活组、ICI82780(ER抑制剂)+E2激活组、E2剥夺组、E2剥夺+ER抑制组及对照组各组miR-21水平。miR-21mimic、miR-21inhibitor转染子宫腺肌病细胞,分别过表达和干扰miR-21,从正反两方面验证miR-21对子宫腺肌病细胞增殖、凋亡、迁移及细胞自噬等超微结构的影响。结果miR-21在子宫腺肌病病灶组织中的表达水平明显高于正常子宫肌层中表达水平(P<0.05),与其余各组的差异无统计学意义(P>0.05);E2激活状态下,E2激活组miR-21表达水平较ER抑制+E2激活组及对照组升高(P<0.05);E2剥夺状态下,E2剥夺+ER抑制组miR-21表达水平较E2剥夺组及对照组降低(P<0.05);干扰miR-21可以抑制子宫腺肌病细胞增殖和迁移,使线粒体内质网不同程度扩张、溶酶体增多、自噬小体出现,促进细胞的凋亡;而过表达miR-21则发挥相反的作用。结论MiR-21在子宫腺肌病细胞中通过改变细胞超微结构而发挥促增殖、迁移及抗凋亡的作用,可能与疾病的早期形成有关;ER除与E2结合调控miR-21外还可通过其他途径调控miR-21,这可能是子宫腺肌病的发病机制之一,其中ER对miR-21的调控作用大于E2。

miR-21、NT-proBNP、CTGF在心房颤动患者中的表达及对预后的预测价值分析

目的分析miR-21、氨基末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)、结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)在心房颤动(Atrial fibrillation,AF)患者中的表达及对预后的预测价值。方法纳入2020年1月~2022年1月100例治疗的AF患者为研究对象,作为房颤组,另选取50例健康人作为对照组。对比2组研究对象miR-21、NT-proBNP、CTGF水平,比较miR-21、NT-proBNP、CTGF在房颤未复发与复发患者中的表达情况;绘制ROC曲线评价3者联合检测对AF患者复发情况的预测价值。结果2组研究对象基线资料对比,高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、Cr、hs-CRP、D-二聚体对比,差异具有统计学意义(P<0.05)。房颤组miR-21、NT-proBNP、CTGF水平显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。持续性房颤患者miR-21、NT-proBNP、CTGF水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。1年内复发患者miR-21、NT-proBNP、CTGF水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示:3者联合检测预测AF患者1年复发的灵敏度(94.2%)、特异度(91.8%)、AUC(93.4%)均高于单一指标检测。结论miR-21、NT-proBNP、CTGF在AF患者中表达明显增加,与AF持续时间呈正相关;miR-21、NT-proBNP、CTGF在AF复发组患者中表达水平明显升高,且三者联合对AF患者术后复发有预测价值。