血清miR-200a-3p与miR-30a-5p表达在心力衰竭诊断及预后评估中的价值

目的分析血清中微小核糖核酸200a-3p(miR-200a-3p)和微小核糖核酸30a-5p(miR-30a-5p)表达在心力衰竭(HF)诊断以及HF患者预后评估中的价值。方法前瞻性选取内蒙古医科大学附属医院2018年4月~2020年4月期间收治的HF患者131例为研究对象(HF组),同时期健康体检志愿者131例为对照组;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平;采用Spearman相关分析血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p水平与HF患者病情严重程度的相关性;采用ROC曲线分析血清miR-200a-3p和miR-30a-5p对HF的诊断价值;采用Logistic回归分析HF患者预后的影响因素;采用Kaplan-Meier生存分析血清miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平与HF患者预后的关系。结果与对照组相比,HF组血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);轻度HF、中度HF和重度HF患者血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平依次升高,差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平与HF患者病情严重程度呈正相关(r_(s)=0.442,r_(s)=0.564,均P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-200a-3p和miR-30a-5p联合诊断HF较miR-200a-3p和miR-30a-5p单一指标诊断效果更好(P<0.05);Logistic回归分析结果发现,NT-proBNP、LVEF、LVEDD、miR-200a-3p和miR-30a-5p是HF患者预后的影响因素(Waldχ^(2)=4.321~128.193,P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p高表达患者3年生存率低于miR-200a-3p和miR-30a-5p低表达患者(均P<0.05)。结论HF患者血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平显著升高,二者与HF的发生及患者预后相关。

miR-30a-5p靶向JAK1调控人胃腺癌AGS细胞自噬的机制研究

目的探究miR-30a-5p靶向JAK1调控人胃腺癌AGS细胞自噬的机制。方法体外培养人正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃腺癌细胞(AGS)。RT-qPCR检测miR-30a-5p表达水平,Starbase数据库预测miR-30a-5p的表达水平及其与JAK1的潜在结合位点,双荧光素酶报告实验验证miR-30a-5p对JAK1基因的靶向调控作用,免疫荧光检测自噬标志物LC3阳性细胞水平,WB检测JAK1和自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3 Ⅱ/Ⅰ和p62)的表达水平。结果与GES-1组相比,AGS组细胞中miR-30a-5p表达水平显著降低;过表达miR-30a-5p后,AGS细胞中自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3 Ⅱ/Ⅰ)表达水平以及自噬标志物LC3阳性细胞水平显著降低,p62蛋白的表达水平显著升高;miR-30a-5p与JAK1存在结合位点且靶向负调控JAK1;与miR-30a-5p过表达+oe-NC对照处理,miR-30a-5p过表达同时过表达JAK1处理后观察到AGS细胞中自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达水平明显增加,p62蛋白水平明显降低,进一步的免疫荧光也观察到miR-30a-5p过表达+过表达JAK1后LC3荧光强度明显增加。结论miR-30a-5p靶向负调控JAK1蛋白的表达,抑制人胃腺癌AGS细胞自噬。

血清miR-30a-3p联合H.pylori抗体检测对老年人群早期胃癌的诊断价值

目的探究血清微小RNA-30a-3p(miR-30a-3p)联合幽门螺杆菌(H.pylori)抗体检测对老年人群早期胃癌的诊断价值。方法选取2020年5月至2022年12月进行胃镜检查的87例老年人群胃部疾病患者作为研究对象,根据病理学检查结果将患者分为慢性萎缩性胃炎(CAG)组(n=39)、早期胃癌组(n=27)和进展期胃癌组(n=21);同期选取33例健康体检者作为正常对照组。采用荧光定量PCR法(qRT-PCR)和化学发光法分别检测血清miR-30a-3p表达水平和H.pylori抗体;比较4组血清miR-30a-3p水平及H.pylori抗体阳性率;比较H.pylori抗体阳性与阴性者血清miR-30a-3p水平;Logistic回归分析影响老年人群早期胃癌的相关因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-30a-3p、H.pylori抗体对老年人群早期胃癌的诊断价值。结果早期胃癌组和进展期胃癌组血清miR-30a-3p表达水平均显著低于CAG组、对照组,早期胃癌组、进展期胃癌组和CAG组H.pylori抗体阳性率均显著高于对照组(P<0.05);纳入的87例胃部疾病患者和33例健康体检者中,H.pylori抗体阳性者血清miR-30a-3p显著低于H.pylori抗体阴性者(P<0.05);行Logistic回归分析结果显示,血清miR-30a-3p、H.pylori抗体阳性为影响老年人群发生早期胃癌的相关因素(P<0.05);血清miR-30a-3p联合H.pylori抗体诊断老年人群早期胃癌的曲线下面积(AUC)为0.957,优于血清miR-30a-3p、H.pylori抗体各自单独诊断(Z二者联合-miR-30a-3P=2.680、Z二者联合-H.pylori抗体=4.577,P=0.007、P<0.001),联合诊断的灵敏度和特异度分别为85.19%、96.67%。结论血清miR-30a-3p在老年人群早期胃癌患者中呈低表达,H.pylori抗体阳性率较高,二者联合检测对老年人群早期胃癌具有较高的诊断价值。

大黄附子汤加减方对慢性肾衰竭患者血清miR-30a、miR-182表达水平的影响

目的:观察大黄附子汤加减方对慢性肾衰竭(CRF)患者血清微小RNA-30a(miR-30a)、微小RNA-182(miR-182)表达水平的影响。方法:选取109例CRF患者,按随机数字表法分为对照组55例及观察组54例,观察组脱落2例,纳入52例,对照组脱落3例,纳入52例。对照组采取常规治疗,观察组在对照组基础上应用大黄附子汤加减方治疗。2组均治疗12周。比较2组临床疗效及不良反应发生情况,比较2组治疗前后肾功能指标值[血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、肾小球滤过率(eGFR)]、肾纤维化指标值[Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、层黏蛋白(LN)]、血清miR-30a、miR-182表达水平的变化,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-30a、miR-182表达水平对治疗效果的预测价值,采用Pearson检验分析miR-30a、miR-182表达水平与eGFR的相关性。结果:观察组临床疗效总有效率为86.54%,对照组临床疗效总有效率为67.31%,2组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组血清BUN、SCr水平均较治疗前下降(P<0.05),eGFR水平较治疗前升高(P<0.05);观察组血清BUN、SCr均低于对照组(P<0.05),eGFR水平高于对照组(P<0.05)。治疗后,2组血清PC-Ⅲ、LN水平均较治疗前下降(P<0.05),观察组血清PC-Ⅲ、LN水平均低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组miR-30a、miR-182表达水平均较治疗前降低(P<0.05),观察组miR-30a、miR-182表达水平均低于对照组(P<0.05)。观察组治疗总有效45例、无效7例。与有效者比较,无效者入院时血清miR-30a、miR-182表达水平均升高(P<0.05)。ROC曲线显示,血清miR-30a、miR-182联合预测治疗效果的AUC、灵敏度、特异度依次为0.808、85.71%、75.60%。Pearson检验显示,观察组miR-30a、miR-182表达水平与eGFR呈负相关(P<0.05)。用药过程中,2组未见严重不良反应。结论:大黄附子汤加减方治疗CRF的临床疗效较好,有助于促进肾功能恢复,延缓肾纤维化进展,下调血清miR-30a、miR-182表达水平,且miR-30a联合miR-182检测对于治疗效果有较高的预测价值。

慢性肾脏病患者治疗前后血清miR-30a-5p和miR-196a水平变化及价值

目的检测并分析慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者治疗前、连续治疗不同随访时间点血清miR-30a-5p和miR-196a-5p水平动态变化,探讨其作为CKD患者辅助诊断及疗效监测分子标志物的价值。方法收集江苏省中医院肾内科2015年4月至2016年2月就诊的20例CKD患者治疗前以及连续治疗并随访3~6个月的血清标本,记录患者血生化及尿液指标,同时收集23例体检健康者血清标本作为对照。采用实时荧光定量PCR检测各组血清miR-30a-5p和miR-196a-5p水平。采用非参数检验、Spearman秩相关分析血清miR-30a-5p和miR-196a-5p的水平变化及临床应用价值。结果与健康人对照相比,CKD患者治疗前血清miR-30a-5p[0.563(0.324,1.737)vs 0.270(0.127,0.435),U=100.5,P=0.004]和miR-196a-5p[0.423(0.154,1.270)vs 0.121(0.056,0.168),U=74,P=0.0003]水平显著升高。与CKD患者治疗前相比,CKD患者血清miR-30a-5p和miR-196a-5p水平从治疗后第3个月开始呈持续降低趋势,至第6个月,其miR-30a-5p[0.344(0.128,0.672)vs 0.563(0.324,1.737),P=0.020],miR-196a-5p[0.227(0.079,0.474)vs 0.423(0.154,1.270),P=0.030]水平与治疗前比较差异有统计学意义。Spearman相关性分析显示,血清miR-30a-5p和miR-196a-5p水平与估算的肾小球滤过率(eGFR)呈显著负相关(r=-0.223,P=0.013;r=-0.191,P=0.035)。结论CKD患者血清miR-30a-5p和miR-196a-5p水平检测有助于反映肾脏功能,具备成为CKD患者辅助诊断及疗效监测分子标志物的潜能。

外周血miR-30a miR-24及Sestrin2表达与急性心肌梗死患者心肌损伤程度的相关性

目的:探讨外周血miR-30a、miR-24及Sestrin2的表达水平与急性心肌梗死患者心肌损伤程度之间的相关性,以评估其在心肌梗死中的潜在临床价值。方法:选取2020年1月至2023年1月于我院心内科住院均初次确诊为急性ST段抬高型心肌梗死的患者180例为研究组,根据年龄匹配正常人100例为对照组,比较两组的外周血miR-30a、miR-24及Sestrin2表达情况,对患者行冠脉造影检查,并根据其心肌损伤程度将研究组患者分为轻度组和重度组,并检测两组间患者的与CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平,探究其与外周血miR-30a、miR-24及Sestrin2表达间的相关性。结果:与对照组患者相比较,研究组患者的miR-30a相对表达量和Sestrin2水平升高,miR-24相对表达量降低(P<0.05)。与轻度组患者相比较,重度组患者的miR-30a相对表达量和Sestrin2水平升高,miR-24相对表达量降低(P<0.05)。与轻度组患者相比较,重度组患者的CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平均升高(P<0.05)。外周血miR-30a相对表达量及Sestrin2水平与CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平呈正相关,miR-24相对表达量与CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平呈负相关(P<0.05)。以患者心肌损伤程度为变量,分析外周血miR-30a、miR-24相对表达量及Sestrin2水平对其诊断价值,各指标AUC值分别为0.942、0.989、0.862。结论:在急性心肌梗死患者中,重度心肌损伤组的miR-30a和Sestrin2表达水平更高,miR-24表达水平更低,外周血miR-30a、miR-24及Sestrin2的表达与心肌损伤程度存在显著相关性,可作为评估急性心肌梗死患者心肌损伤程度的潜在生物标志物,为急性心肌梗死的危险分层提供依据,指导临床医师对急性心肌梗死患者的临床治疗决策。

circ_WBSCR17通过调节miR-30a-5p/JAK1轴减轻高糖诱导的人肾小球系膜细胞纤维化和炎症反应

目的探讨circ_WBSCR17通过调节miR-30a-5p/JAK1轴对高糖诱导的人肾小球系膜细胞纤维化和炎症的影响。方法将人肾小球系膜细胞HMCL分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖处理HMCL细胞)、HG组(30 mmol/L葡萄糖处理细胞)、si-NC组(30 mmol/L葡萄糖+转染si-NC)、si-circ_WBSCR17组(30 mmol/L葡萄糖+转染si-circ_WBSCR17)、si-circ_WBSCR17+inhibitor-NC组(30 mmol/L葡萄糖+si-circ_WBSCR17和inhibitor-NC共转染)、si-circ_WBSCR17+miR-30a-5p inhibitor组(30 mmol/L葡萄糖+si-circ_WBSCR17和miR-30a-5p inhibitor共转染);RT-qPCR检测细胞中circ_WBSCR17、miR-30a-5p的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-8表达水平;Western blot检测细胞中JAK1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bax、转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;荧光原位杂交(FISH)实验检测circ_WBSCR17的分布情况,双荧光素酶报告基因实验分别验证circ_WBSCR17和miR-30a-5p、JAK1的关系。结果与NG组比较,HG组HMCL细胞增殖能力降低,TNF-α、IL-6和IL-8水平、p-JAK1/JAK1、p-STAT1/STAT1、p-STAT3/STAT3、Bax、TGF-β1、FN、collagenIV、α-SMA蛋白表达升高(P<0.05);与HG组和si-NC组比较,si-circ_WBSCR17组HMCL细胞中miR-30a-5p表达、OD450值、PCNA表达升高,TNF-α、IL-6和IL-8水平、circ_WBSCR17、p-JAK1/JAK1、p-STAT1/STAT1、p-STAT3/STAT3、Bax、TGF-β1、FN、collagenIV、α-SMA表达降低(P<0.05);抑制miR-30a-5p减弱了敲低circ_WBSCR17对HMCL细胞增殖的促进作用,增强了细胞凋亡、细胞纤维化和炎症反应;FISH实验证实circ_WBSCR17主要分布在细胞质中;双荧光素酶报告基因实验证实circ_WBSCR17、JAK1与miR-30a-5p存在靶向调控关系。结论敲低circ_WBSCR17可通过调节miR-30a-5p/JAK1轴,进而减轻高糖诱导的人肾小球系膜细胞纤维化和炎症。

血清miR-30a、miR-221在老年急性心肌梗死患者中表达及意义

目的 探讨血清微小RNA(miR)-30a、miR-221在老年急性心肌梗死患者中表达特点及意义。方法 选取老年急性心肌梗死患者86例为急性心肌梗死组,健康志愿者50例为对照组。采集空腹肘静脉血5 ml,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血清miR-30a、miR-221表达水平;进行全球急性冠脉事件登记(GRACE)评分,分为低危组(总积分≤108分)、中危组(总积分109~140分)、高危组(总积分>140分);进行心脏彩超检查,记录心室重构相关超声指标;出院后进行1年随访,将全因死亡、再次血运重建、恶性心律失常纳入不良预后进行分析。结果 急性心肌梗死组血清miR-30a、miR-221表达水平明显高于对照组(P<0.01)。冠脉病变三支组血清miR-30a、miR-221表达水平明显高于双支病变和单支病变组,双支病变组血清miR-30a、miR-221表达水平明显高于单支病变组(P<0.05)。随着老年急性心肌梗死患者GRACE危险评分的增加,血清miR-30a、miR-221表达水平逐渐升高。左心房内径(LAD)、左心室后壁厚度(LVPWD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室质量指数(LVMI)、左心室重构指数(LVRI)在各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);随着老年急性心肌梗死患者GRACE危险评分的增加,LAD、LVPWD、LVEDD、LVMI逐渐升高,LVRI逐渐降低。老年急性心肌梗死血清miRNA-30a表达水平与LAD、LVPWD、LVEDD、LVMI呈显著正相关,与LVRI呈显著负相关(P<0.01);血清miR-221表达水平与LAD、LVPWD、LVEDD、LVMI呈显著正相关(P<0.01),与LVRI呈显著负相关(P<0.01)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清miR-30a、miR-221对老年急性心肌梗死患者预后均具有较高的预测价值(P<0.05),其中联合检测的预测价值最高[曲线下面积(AUC)=0.924]。结论 老年急性心肌梗死患者血清miR-30a、miR-221高表达,且与冠脉病变支数、GRACE评分、心室重构密切相关,联合检测可用于患者预后评估。

血浆miR-30a、miR-29c联合FIB-4、APRI评分对慢性乙型肝炎肝纤维化及早期肝硬化的预测价值

目的探讨血浆miR-30a、miR-29c联合FIB-4、APRI评分对慢性乙型肝炎患者不同程度肝纤维化及早期肝硬化的预测价值。方法收集2019年12月1日至2021年12月31日河北省人民医院收治的慢性乙型肝炎患者,根据瞬时弹性成像(transient elastorgraphy,TE)结果选取轻中度(F_(0)~F_(2))、重度肝纤维化(F_(3))及早期肝硬化(F_(4))各40例,健康志愿者40名作为对照组。收集一般临床资料,检测血浆miR-30a、miR-29c在各组中的表达量,计算FIB-4、APRI评分。经Logistic多因素回归分析建立联合模型。用ROC曲线分析其对早期肝硬化的预测价值。结果血浆miR-30a、miR-29c表达和FIB-4、APRI评分对慢性乙型肝炎患者不同程度肝纤维化及早期肝硬化有一定的预测价值。将四者纳入Logistic多因素回归分析,提示miR-29c表达和FIB-4、APRI评分是预测早期肝硬化发生的独立影响因素,建立早期肝硬化的联合预测模型Y=2.717×FIB-4+2.043×APRI-0.86×miR-29c,该模型在预测早期肝硬化患者的AUC为0.950。结论血浆miR-30a、miR-29c和FIB-4、APRI评分对慢性乙型肝炎不同程度肝纤维化及早期肝硬化有一定的预测作用。miR-29c表达、FIB-4、APRI评分联合模型能更好地预测早期肝硬化。

血清miR-30a-5p通过靶向FOXD1对膝骨关节炎发展的影响

目的:探讨膝骨关节炎(KOA)患者血清miR-30a-5p水平变化及其临床意义。方法:收集2019年1月至2022年1月西安交通大学医学院附属红会医院创伤骨科收治的253例KOA活动期患者(KOA组)和209例非KOA志愿者(对照组)的临床资料进行前瞻性分析。其中20例KOA患者接受全膝关节置换,25例对照组采用选择性膝关节镜探查清理术获取滑膜组织。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测血清和滑液miR-30a-5p水平;采用western blotting法检测滑膜组织叉头框D1(FOXD1)蛋白表达。通过Spearman相关分析评估miR-30a-5p与Kellgren-Lawrence(K-L)分级、西安大略大学和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)、膝关节疼痛数字等级评定量表(NRS)评分以及炎症指标的相关性。结果:KOA组血清miR-30a-5p水平显著高于对照组[2.32(1.92~3.20)vs.1.08(0.82~1.48),Z=-12.663,P<0.001];受试者工作特征曲线(ROC)分析的灵敏度和特异性分别为83.80%和78.0%;KOA患者血清miR-30a-5p水平与WOMAC评分、膝关节疼痛NRS评分以及白细胞计数(WBC)、红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)均呈正相关关系(P<0.05)。78例首次诊断KOA患者治疗4周后血清miR-30a-5p水平较基线值显著降低(P<0.001)。另外20例KOA患者滑膜组织中FOXD1蛋白表达较对照组下调(P<0.001),且血清miR-30a-5p水平与滑膜组织中FOXD1蛋白表达呈负相关关系(P<0.001),与滑液中miR-30a-5p水平呈正相关关系(P<0.001)。结论:血清miR-30a-5p水平的升高可能通过抑制FOXD1促进KOA的进展,血清miR-30a-5p可能成为KOA诊断和评估的潜在指标。

miR-30a靶向ATG5轴调控自噬信号在支气管哮喘中的作用

目的 探究miR-30a靶向ATG5轴调控自噬信号在支气管哮喘中的作用。方法 采用10%卵清蛋白(OVA)预致敏,4%OVA雾化致SD大鼠发生哮喘。miR-30a agomir气管注射治疗支气管哮喘大鼠,以NC agomir给药作为阴性对照。模型组和对照组给予相同剂量的0.9%氯化钠液,连续一周。处死大鼠后,ELISA检测肺泡灌洗液中炎症细胞因子及促纤维化相关因子含量;HE染色与Masson染色评估肺组织气道损伤与胶原纤维沉积,检测气道形态学指标评估气道重塑;PCR法检测miR-30a与ATG5表达;透射电镜观察肺泡上皮细胞自噬小体数量;WB检测LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1及ATG5的表达。结果 miR-30a agomir治疗减少了支气管上皮细胞脱落、间质内炎性细胞浸润、胶原纤维沉积与气道狭窄。与模型+NC agomir组对比,经miR-30a agomir治疗后,miR-30a表达增加(P<0.01),ATG5表达降低(P<0.05)。miR-30a agomir治疗能降低肺泡灌洗液中IL-4、IL-13、TGF-β1、VEGF及PDGF的含量(P均<0.05)。miR-30a agomir治疗后肺组织中自噬小体数量减少。LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1和ATG5蛋白表达水平降低(P均<0.05)。结论 miR-30a靶向抑制ATG5的表达抑制肺组织自噬,从而缓解支气管哮喘。

肺泡灌洗液中miR-30a-5p、CCL16表达与肺结核患者结核杆菌耐药性的关系

目的 探讨耐药肺结核患者支气管肺泡灌洗液中微小RNA-30a-5p(microRNA-30a-5p, miR-30a-5p)和C-C基序趋化因子配体16(C-C motif chemokine ligand 16, CCL16)表达水平变化,为结核病防治提供理论基础。方法 选取2018年2月1日-2021年6月30日在我院治疗的活动性肺结核患者182例作为研究对象(观察组),并根据是否对结核杆菌耐药情况将其分为耐药组和非耐药组,选择同期90例非肺结核的健康人(因胸痛经纤维支气管镜检查排除肺结核)作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测支气管肺泡灌洗液中miR-30a-5p表达水平,采用ELISA法检测CCL16水平,采用流式细胞分析法检测外周血T细胞亚群分布,采用Pearson分析法分析耐药肺结核患者支气管肺泡灌洗液中miR-30a-5p与CCL16表达水平相关性,采用Logistic逐步回归分析法分析肺结核患者结核杆菌耐药性的影响因素。结果 非耐药组与耐药组CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞水平及CD4/CD8比值均显著低于对照组,CD8^(+)T细胞水平显著高于对照组(P均<0.05);耐药组CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞水平及CD4/CD8比值均显著低于非耐药组,CD8^(+)T细胞水平显著高于非耐药组(P均<0.05)。非耐药组与耐药组支气管肺泡灌洗液中miR-30a-5p表达水平均显著低于对照组,CCL16水平均显著高于对照组(P均<0.05);耐药组肺泡灌洗液中miR-30a-5p表达水平显著低于非耐药组,CCL16水平显著高于非耐药组(P均<0.05)。有吸烟史、广泛耐药的肺结核患者肺泡灌洗液中miR-30a-5p表达水平显著低于无吸烟史、耐多药的肺结核患者,CCL16水平显著高于无吸烟史、耐多药的肺结核患者(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,耐药肺结核患者肺泡灌洗液中miR-30a-5p与CCL16表达水平呈显著负相关(r=-0.556,P <0.001);Logistics多因素回归分析显示,有吸烟史、肺部空洞、miR-30a-5p <0.72、CCL16≥5.34 pg/ml为影响肺结核患者耐药性的危险因素(P均<0.05)。结论 耐药肺结核患者支气管肺泡灌洗液中miR-30a-5p表达水平降低,CCL16水平升高,检测miR-30a-5p、CCL16水平可反映机体感染结核杆菌后机体发生的免疫应答情况,为耐药肺结核的治疗提供参考。

EGCG-exosomes通过miR-30a/Beclin-1轴抑制自噬减轻心肌缺血/再灌注损伤

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)预处理心肌细胞分泌的外泌体(exosomes)对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的作用及分子机制。方法:体外培养H9c2心肌细胞,给予或不给予EGCG预处理,建立缺氧/复氧模型。提取、纯化外泌体,采用在体基因干扰或基因敲除技术,构建antagomiR-30a和Beclin-1^(+/-)小鼠,建立I/R模型,缺血30 min心肌注射外泌体,研究EGCG预处理心肌细胞分泌的exosomes(EGCG-exosomes)对I/R的作用。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-30a与Beclin-1的相互作用,TTC染色法检测心肌梗死面积,苏木精—伊红(HE)染色观察心肌细胞形态变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清心肌肌钙蛋I(cTnI)含量;透射电子显微镜观察自噬小体数量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、蛋白印迹法(western blotting法)检测miR-30a与自噬相关基因和蛋白的表达。结果:与I/R组相比,exosomes组自噬体数量减少,心肌损伤减轻。与exosomes组相比,EGCG-exosomes组心肌梗死面积缩小,cTnI含量降低,自噬体数量减少,Beclin-1和LC3-Ⅱ基因及蛋白表达下调,cathepsin D蛋白表达下调,p62基因及蛋白表达上调;沉默miR-30a促进心肌I/R自噬发生,给予EGCGexosomes则逆转上述作用;此外,敲低Beclin-1与EGCG-exosomes有协同抑制自噬作用(均P<0.05)。结论:EGCG-exosomes通过miR-30a/Beclin-1轴抑制自噬,减轻心肌I/R损伤。

肝细胞癌患者超声造影特征与其血浆miR-30a水平的相关性研究

目的探讨肝细胞癌(HCC)超声造影特征及其与患者血浆miR-30a水平的关系。方法选择2019年1月至2021年8月在新疆医科大学第二附属医院接受手术治疗的100例HCC患者(HCC组),其中男性74例,女性26例;年龄32~78岁,平均年龄58.24岁;肿瘤数量,1个67例,≥2个23例;直径3.1 cm(标准差0.23 cm)。同期纳入50例健康人群(对照组),其中男性35例,女性15例;年龄30~71岁,平均年龄56.24岁。对HCC及癌旁组织行超声造影检查。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测两组血浆miR-30a水平。分析超声造影参数(始增时间、达峰时间、峰值加速时间、始增速度及增强速率)与miR-30a水平的关系。结果HCC的始增时间、达峰时间、峰值加速时间均低于癌旁组织[(9.93±2.01)s vs(19.84±1.23)s、(22.73±3.82)s vs(37.02±4.18)s、(12.43±1.44)s vs(23.65±3.17)s。均P<0.05],始增速度和增强速率均高于癌旁组织[(9.21±0.84)dB vs(6.14±0.61)dB、(2.33±0.11)dB/s vs(1.27±0.15)dB/s。均P<0.05]。HCC患者血浆miR-30a水平(0.12±0.03)低于对照组(0.28±0.04)(P=0.000)。miR-30a低表达组患者始增时间、达峰时间、峰值加速时间均低于miR-30a高表达组[(7.84±0.83)s vs(11.83±1.02)s、(17.37±3.11)s vs(24.08±2.16)s、(9.04±0.13)s vs(14.03±1.02)s。均P<0.05],始增速度和增强速率均高于miR-30a高表达组[(10.84±1.03)dB vs(7.22±0.36)dB、(2.98±0.09)dB/s vs(1.87±0.11)dB/s。均P<0.05]。结论超声造影检查可有效显示HCC影像学特征,其影像学特征与患者血浆miR-30a水平存在一定相关性。

miR-30a-5p调控ECM-受体作用信号通路相关蛋白抑制肺腺癌细胞的侵袭和迁移

目的探讨miR-30a-5p和细胞外基质(ECM)-受体作用信号通路相关蛋白在肺腺癌细胞进展中发挥的调控作用。方法将miR-30a-5p模拟物及其阴性对照分别转染到肺腺癌Calu-3细胞内,设为miR-30a-5p模拟物组、模拟物对照组。通过基因集富集分析(GSEA)软件对miR-30a-5p进行通路富集分析。将miR-30a-5p抑制剂及其阴性对照转染到细胞内,设为miR-30a-5p抑制剂组、抑制剂对照组,在miR-30a-5p抑制剂组的细胞中加入ECM-受体相互作用通路蛋白抑制剂,设为miR-30a-5p抑制剂+ECM-受体相互作用抑制剂组。采用qRT-PCR法检测不同处理组细胞中miR-30a-5p mRNA表达水平,采用Western blot法检测肺腺癌细胞系中ECM-受体作用信号通路相关蛋白磷酸化水平,采用噻唑蓝(MTT)实验、细胞划痕愈合实验和Transwell实验分别检测各处理组细胞的增殖、迁移与侵袭能力。结果与人正常支气管上皮细胞BEAS-2B比较,肺腺癌细胞系SPC-A1、Calu-3、HCC827、PC14中miR-30a-5p表达水平下调(均P<0.05)。与模拟物对照组相比,miR-30a-5p模拟物抑制了细胞的增殖、迁移与侵袭(均P<0.05)。在Calu-3细胞中,miR-30a-5p显著富集在ECM-受体作用信号通路上。与抑制剂对照组相比,miR-30a-5p抑制剂组中ECM-受体作用信号通路相关蛋白磷酸化水平上调(均P<0.05),而miR-30a-5p抑制剂+ECM-受体相互作用抑制剂组相关蛋白磷酸化水平得到恢复。与抑制剂对照组相比,miR-30a-5p抑制剂组Calu-3细胞的增殖、迁移与侵袭上调(均P<0.05),miR-30a-5p抑制剂+ECM-受体相互作用抑制剂组Calu-3细胞的增殖、迁移与侵袭能力得到恢复。结论miR-30a-5p可能在肺腺癌细胞的发生、发展中发挥重要的作用,部分作用是通过调控ECM-受体作用信号通路相关蛋白实现的,miR-30a-5p可能是治疗肺腺癌的新靶点。

血清miR-30a、蛋白激酶B表达对胃肠道间质瘤术后复发风险评估价值的研究

目的:探讨血清miR-30a、蛋白激酶B(AKT)表达对胃肠道间质瘤术后复发的价值。方法:收集2015年1月至2019年1月本院收治的胃肠道间质瘤患者110例,根据随访12个月将患者分为复发组(30例)和未复发组(80例)。实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测患者术后3 d血清中miR-30a的水平,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清AKT水平。Logistic回归分析胃肠道间质瘤术后复发的影响因素,采用受试者工作曲线(ROC)分析血清miR-30a、AKT及二者联合对胃肠道间质瘤术后复发的诊断价值。结果:与未复发组相比,复发组肿瘤直径≥5 cm、病理性核分裂像>5/50 HPF、浸润深度(黏膜层、浆膜层)、改良NIH分级中高危者比例较高(P<0.05),血清miR-30a相对表达水平较低(P<0.05),AKT水平较高(P<0.05)。Logistic回归分析显示,低水平miR-30a、高水平AKT是胃肠道间质瘤术后复发的危险因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清中miR-30a、AKT水平诊断胃肠道间质瘤术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.874、0.781,二者联合诊断胃肠道间质瘤术后复发的AUC为0.934,灵敏度为83.30%,特异度为91.20%。结论:胃肠道间质瘤术后复发患者血清miR-30a水平明显下降,AKT水平明显上升,miR-30a联合AKT对预测胃肠道间质瘤术后复发有较好的价值。

circRNA-6874/miR-30a/STIM2通路干预心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制研究

目的:探讨环状RNA(circRNA)-6874/miR-30a/基质相互作用分子2(STIM2)通路在缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤中的作用及机制。方法:采用RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)和双荧光素酶报告基因实验检测circRNA-6874和miR-30a的结合情况、miR-30a是否靶向调控STIM2。心肌细胞转染或共转染后进行H/R处理,荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测circRNA-6874、miR-30a和STIM2的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活力,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测STIM2蛋白水平、生化分析仪检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放、荧光分光光度计检测活性氧(ROS)的生成和荧光酶标仪检测Caspase-3活性。结果:circRNA-6874靶向结合miR-30a。H/R诱导心肌细胞表达circRNA-6874,其与miR-30a结合后抑制miR-30a的表达,进而促进下游靶基因STIM2的表达(P<0.05)。H/R处理明显抑制心肌细胞的存活力,促进LDH释放、ROS生成、凋亡增加和Caspase-3活性上调(P<0.05);分别转染circRNA-6874 siRNA、miR-30a mimics或STIM2 siRNA后,H/R的上述作用明显减弱(P>0.05);分别共转染circRNA-6874 siRNA和miR-30a inhibitors、miR-30a mimics和STIM2过表达载体后,H/R对心肌细胞的影响作用仍然明显(P<0.05)。结论:circRNA-6874/miR-30a/STIM2通路通过促进氧化应激和凋亡促进H/R诱导的心肌细胞损伤。

肠胃清方对人结肠癌HCT116/L-OHP裸鼠皮下移植瘤miR-30a/Beclin1通路的影响

目的本课题旨在分子生物学技术和中医基础理论指导下,从miRNAs与自噬相关联的角度,讨论miR-30a与自噬基因Beclin1在结肠癌化疗耐药中的相关性,并探讨肠胃清对miR-30a介导自噬的调控作用及逆转结肠癌耐药的分子机制.方法建立人结肠癌耐奥沙利铂(L-OHP)细胞株HCT116/L-OHP裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为空白组、L-OHP组、肠胃清方组、肠胃清方低剂量+L-OHP组、肠胃清方高剂量+L-OHP组.治疗结束后采用RT-PCR、免疫组织化学、Tunnel等研究肠胃清对瘤体组织中miR-30a、Beclin1、LC3的表达及细胞凋亡的影响.结果奥沙利铂组可见Beclin1、LC3的上调,miR-30a的下调,细胞凋亡的减少.而肠胃清联用奥沙利铂组可见Beclin1、LC3的下调,miR-30a的上调,细胞凋亡的增加(P<0.05或P<0.01).结论奥沙利铂诱导保护性自噬导致细胞凋亡减少可能是其耐药的机制.肠胃清可通过调控miR-30a/Beclin1通路而抑制自噬逆转结肠癌耐药.

小儿原发性肾病综合征患者血清和尿液miR-30a-5p水平增加及临床意义

目的 检测分析原发性肾病综合征（NS）患儿血清全基因组微小核糖核酸（miRNA）表达谱,验证其中表达上调的miR-30a-5p,探讨其作为NS分子诊断指标的可能性.方法 收集南京军区南京总医院2010～2011年期间33例住院NS患儿未经治疗前血清和尿液样本,同时以30例年龄、性别匹配的健康儿童作对照.用高通量的TaqMan低密度芯片技术分别检测NS患儿和健康儿童的混合血清全基因组miRNA的表达量,再用TaqMan实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法对在患儿血清中表达上调的miR-30a-5p进行验证,同时测定miR-30a-5p在尿液中的含量.结果 低密度芯片结果显示,30种miRNA在患儿血清中的表达量是健康儿童的2倍以上,其中miR-30a-5p为正常对照的104倍.qRT-PCR检测证实,miR-30a-5p在患儿血清中的含量4.34±0.08,显著高于对照组1.00±0.02（Z=5.916,P〈0.000 1）,在患儿尿液中的水平也明显升高（3.44±0.05 vs 1.00±0.04）（Z=3.312,P=0.001）.用于诊断NS的血清miR-30a-5p ROC曲线下面积（AUCROC）为0.960（95% CI,0.915～1.000）,敏感度和特异度均为98.3%.相关性分析显示,血清或尿液中的miR-30a-5p含量与患儿年龄、性别、肾功能及血脂水平均无明显关联（P〉0.05）.结论 NS患儿血清miRNA表达谱与健康儿童有明显差异,miR-30a-5p在患儿血清及尿液中水平显著升高,与NS密切相关,是NS潜在的分子诊断指标.

炎性骨组织中miR-23a和miR-30a的表达改变及其生物学作用的研究

目的:观察研究体外炎性微环境下的牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)、成骨细胞(MC3T3-E1)和体内大鼠牙周炎牙龈组织、骨组织中miR-23a和miR-30a的表达变化,证实miR-23a和miR-30a在牙周炎性骨缺失中发挥重要调控作用,探讨其生物学作用。方法:1μg/mL LPS刺激PDLCs、MC3T3-E1细胞模拟炎性微环境,24 h后收集细胞。采用正畸结扎丝结扎各SD大鼠右侧上颌第一磨牙颈部,左侧未结扎作为自身对照,21 d后取其牙龈、牙槽骨组织。采用荧光定量PCR分别检测处于炎性微环境下的细胞、大鼠牙周炎牙龈组织、牙周骨组织中miR-23a和miR-30a的表达。结果:炎性环境下PDLCs、MC3T3-E1细胞中miR-23a和miR-30a的表达水平均较对照组明显增高(P<0.05)。大鼠牙周炎牙龈组织、牙槽骨组织中miR-23a和miR-30a的表达水平明显高于正常对照侧(P<0.05)。结论:miR-23a和miR-30a参与调控炎性环境下骨代谢和成骨细胞活性。