转染miR-27a抑制物对人肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的:观察miR-27a抑制物对肺癌A549/DDP细胞株增殖、凋亡及迁移能力的变化,探讨miR-27a抑制物对A549/DDP细胞顺铂耐药的影响。方法:将A549/DDP细胞随机分为miR-27a inhibitor组、阴性对照组和正常细胞对照组。miR-27a inhibitor组经miR-27a抑制物抑制miR-27a表达,阴性对照组转染miR-NC,正常对照组不处理。RT-PCR验证转染效率。加入顺铂(DDP)干预后,采用MTT比色实验测定DDP对三组细胞的IC50,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移。结果:miR-27a inhibitor组miR-27a的表达被显著抑制(P<0.05)。DDP对转染miR-NC和空白对照细胞的IC50值明显高于转染miR-27a inhibitor的细胞(P<0.05)。转染miR-27a inhibitor的A549/DDP细胞联合DDP处理后细胞数目减少,体积减小,细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。Transwell法检测结果示miR-27a inhibitor组迁移力受到明显抑制(P<0.05)。结论:在A549/DDP细胞中,下调miR-27a的表达后,A549/DDP细胞对DDP的敏感性提高,凋亡程度增强,部分逆转了肺癌A549/DDP细胞的耐药性,为miR-27a与化疗联合治疗肺癌提供了可能的实验依据。

miR-132、miR-27b调控心力衰竭大鼠心肌重构、心功能的作用机制

目的探究微小RNA(miR)-132、miR-27b对缺血性心力衰竭大鼠心肌重构、心功能改变的影响及机制。方法选取SD大鼠50只,随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、腺病毒介导的miR-132过表达(miR-132 mimics)组、腺病毒介导的miR-27b过表达(miR-27b mimics)组及腺病毒介导的miR-132、miR-27b过表达(miR-132+miR-27b mimics)组;除去Sham组,其他各组均做缺血性心力衰竭模型,实验结束后,观察各组日常状态,检测其血压、心率和超声心动图相关指标[射血分数(EF)、收缩分数(FS)、舒张早期二尖瓣血流速与舒张晚期的血流速度比值(E/A)、心室舒张末期室间隔厚度(IVSd)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期直径(LVIDs)];苏木素-伊红(HE)染色观察心肌病理改变,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡指数(AI);实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测心肌组织内miR-132、miR-27b mRNA表达;Western印迹检测心肌重构相关蛋白[胶原蛋白(Collagen)Ⅰ、CollagenⅢ、基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-2、MMP-9]表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测心肌组织内炎症因子[白细胞介素(IL)-18、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α]水平。结果Sham组一切正常,Model组呼吸困难喘息、体质量减轻、毛发光泽减少、精神萎靡、活动减少现象;miR-132 mimics组上述症状得到缓解,miR-27b mimics组加重,miR-132过表达可以逆转miR-27b mimics组表现;与Sham组相比,Model组心肌组织内miR-132 mRNA表达明显下调,miR-27b mRNA表达明显上调,收缩压、舒张压、心率、EF、FS、E/A明显下调,LVEDV、LVIDs、IL-18、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、AI、CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-1、MMP-2、MMP-9表达均明显上调(均P<0.05);与Model组相比,miR-132 mimics组收缩压、舒张压、心率、EF、FS、E/A明显上调,LVEDV、LVIDs、IL-18、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、AI、CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-1、MMP-2、MMP-9表达均明显下调(均P<0.05);miR-27b mimics组收缩压、舒张压、心率、EF、FS、E/A水平明显下调,LVEDV、LVIDs、IL-18、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、AI、CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-1、MMP-2、MMP-9表达明显上调(P<0.05);miR-132过表达可以逆转miR-27b mimics组因子变化趋势,明显上调收缩压、舒张压、心率、EF、FS、E/A水平,明显下调LVEDV、LVIDs、IL-18、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、AI、CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-1、MMP-2、MMP-9表达(P<0.05)。结论miR-132为心力衰竭大鼠心肌重构发展抑制因子,miR-27b为促进因子,二者调控心肌重构发展、心功能变化与心肌细胞凋亡、炎症反应、心肌纤维化密切相关。