尿外泌体miR-29c对器官和非器官局限性膀胱尿路上皮癌临床结局的预测价值

目的 探讨尿外泌体微小RNA(miR)-29c对器官和非器官局限性膀胱尿路上皮癌(BUC)临床结局的预测价值。方法 2017年1月~2022年3月,从我院泌尿外科选取152例BUC病人作为验证集。另外,从我院体检中心选择了126例非癌对照。采用实时荧光定量PCR法检测尿外泌体miR-29c表达水平。结果 验证集BUC病人尿外泌体miR-29c水平低于非癌对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而尿外泌体miR-17-5p水平和miR-590-5p水平比较无明显差异(P>0.05)。尿外泌体miR-29c水平诊断BUC的ROC曲线下面积为0.969(95%CI:0.953~0.986),相应的敏感性和特异性分别为92.1%和90.2%。亚型分析中,非器官局限性BUC病人尿外泌体miR-29c水平较器官局限性BUC病人进一步降低(P=0.009)。预后分析中,尿外泌体miR-29c高表达组病人总生存期、无病生存期和疾病特异性生存期均更长(P<0.05)。结论 尿外泌体miR-29c低水平是BUC病人不利的预后因子,有希望作为器官和非器官局限性BUC不良临床结局的预测标志物。

多发性骨髓瘤组织中miR-29c、miR-195表达水平变化及其与临床病理特征及预后的关系

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)组织中miR-29c、miR-195表达水平变化及其与临床病理特征及预后的关系。方法 选取75例MM患者作为病例组,另选取同期就诊的75例骨髓象检查为正常的非血液系统疾病患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测骨髓组织中miR-29c、miR-195表达水平,根据检测平均值将miR-29c、miR-195分为高水平组和低水平组,分析miR-29c、miR-195表达水平与临床病理特征及预后的相关性。结果 病例组骨髓组织miR-29c、miR-195表达水平低于对照组(P<0.05)。miR-29c低水平组中ISS分期Ⅲ期及血清白蛋白水平<35 g/L的患者占比高于高水平组(P<0.05);miR-195低水平组中ISS分期Ⅲ期及血清白蛋白水平<35 g/L的患者占比高于高水平组(P<0.05);miR-29c低水平组的生存期低于高水平组(P<0.05),miR-195低水平组的生存期低于高水平组(P<0.05)。miR-29c、miR-195表达水平与ISS分期呈负相关(P<0.05),与血清白蛋白、生存期呈正相关(P<0.05)。结论miR-29c、miR-195均在MM患者骨髓组织中低表达,且低表达miR-29c、miR-195患者的生存期较短。miR-29c、miR-195表达水平与ISS分期呈正相关,与血清白蛋白、生存期呈负相关。

miR-29c-3p调控ERLIN2抑制肺腺癌发展的作用

目的:探讨miR-29c-3p在肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)发生发展中的作用。方法:利用公共数据库分析miR-29c-3p和ERLIN2在肺腺癌中的表达及其与临床病理参数的相关性。采用qRT-PCR检测miR-29c-3p在LUAD细胞系和正常支气管上皮细胞系中的表达,CCK8、细胞克隆形成、Transwell和伤口愈合实验评估miR-29c-3p在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用,利用生物信息学工具预测miR-29c-3p下游靶基因,并通过双荧光素酶报告基因分析验证靶向关系。结果:miR-29c-3p在肺腺癌组织和细胞中低表达。miR-29c-3p低表达患者的预后较差,miR-29c-3p是肺腺癌患者的独立预后因素,并与淋巴结转移状态和临床分期密切相关。细胞实验表明,抑制miR-29c-3p可促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭。生物信息学分析表明,ERLIN2是miR-29c-3p的靶基因,二者表达呈负相关。通过双荧光素酶报告基因测定验证了上述靶向关系。在UALCAN数据库中,ERLIN2在肺腺癌组织中高表达,并与患者年龄、性别、吸烟、肿瘤分期、淋巴结转移和TP53突变状态密切相关,ERLIN2高表达患者总生存率低于低表达患者。结论:miR-29c-3p通过靶向ERLIN2抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,是肺腺癌患者的独立预后因素。

尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c在早期糖尿病肾病诊断中的价值

目的探讨尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c在早期糖尿病肾病(DN)诊断中的价值。方法选取2021年1月—2022年12月金华市人民医院2型糖尿病(T2DM)患者260例,根据其就诊时的微量尿蛋白排泄率(UAER)分为单纯T2DM组(135例)、早期DN组(82例)、临床期DN组(43例)。另选取同期金华市人民医院健康体检者50名作为正常对照组。收集所有研究对象的一般资料,并检测尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c和尿液肌酐(UCr)、尿液尿素氮(UUN)、尿液转化生长因子-β1(TGF-β1,以UCr校正)、糖化血红蛋白(HbA_(1c))、血清尿酸(UA)。采用Pearson相关分析评价各项指标之间的相关性。采用多元逐步回归分析评价尿液TGF-β1的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c诊断早期DN的效能。结果正常对照组、单纯T2DM组、早期DN组和临床期DN组尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-200c相对表达量依次升高(P<0.001),miR-29c相对表达量依次降低(P<0.001)。单纯T2DM组、早期DN组和临床期DN组UUN、UCr、校正TGF-β1和HbA_(1c)、UA水平均高于正常对照组(P<0.05)。单纯T2DM组、早期DN组和临床期DN组UUN、UCr、UA、校正TGF-β1水平和UAER依次升高(P<0.001)。尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-200c与UCr、校正TGF-β1均呈显著正相关(P<0.01),miR-29c与UCr、校正TGF-β1均呈显著负相关(P<0.001),与UUN、UA均无相关性(P>0.05)。HbA_(1c)、UCr和尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c是尿液校正TGF-β1水平的独立影响因素(P<0.01)。尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c单项检测和联合检测诊断早期DN的曲线下面积(AUC)分别为0.823、0.855、0.799、0.557、0.923。结论尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c联合检测对早期DN有较好的诊断价值。

miR-29c-5p通过上调LRP6调控铁死亡减轻脑梗死缺血再灌注损伤

目的:探究miR-29c-5p在脑缺血-再灌注损伤中调控铁死亡的机制。方法:在这项研究中,雄性SD大鼠接受大脑中动脉闭塞(MCAO)手术,随后恢复血液流动。采用神经功能评分和TTC染色来评估脑组织损伤和梗死体积。采用qPCR方法检测miR-29c-5p的相对表达水平。通过Western Blot检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)的表达水平。采用相应的检测试剂盒检测GSH、Fe和丙二醛(MDA)的含量,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-29c-5p的靶基因。结果:随着大鼠缺血再灌注时间的增加,miR-29c-5p的相对表达水平升高,铁死亡加重。此外,agomiR-29c-5p干预也加重了脑组织损伤和铁死亡,而antagomiR-29c-5p干预则使这些影响得到逆转。此外,agomiR-29c-5p和Fer-1联合干预可减轻脑组织损伤和铁死亡。双荧光素酶报告基因实验结果表明,LRP6是miR-29c-5p的靶基因。结论:在本研究中,miR-29c-5p通过负调控LRP6促进铁死亡进而加重大鼠脑缺血-再灌注损伤。

miRNA-29c在大鼠脑缺血再灌注神经损伤中的保护作用与机制

目的探讨miRNA-29c在大鼠脑缺血再灌注神经损伤中的保护作用与机制研究。方法 48只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,miR-29c NC组,miR-29c inhibitor组,除假手术组外,其余三组均采用拴线法建立大鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注损伤模型,并于术后24 h评价大鼠神经行为变化,检测大鼠脑梗死体积,缺血侧脑组织细胞凋亡情况,脑组织中miR-29c表达量,超氧化物岐化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3),Caspase 8及Caspase 9活性,及Bcl-2,Bax,Bak1,cleaved caspase 3,cleaved caspase 8与cleaved caspase 9蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组,miR-29c NC组中miR-29c表达量显著提高,大鼠神经行为评分提高,脑梗死体积增加,细胞凋亡率提高,SOD活性降低,MDA含量,Caspase 3,Caspase 8及Caspase 9活性上升,Bcl-2表达量下调,Bax,Bak1,cleaved caspase 3,cleaved caspase 8及cleaved caspase 9表达量上调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组及miR-29c NC组比较,miR-29c inhibitor组miR-29c表达量显著降低,大鼠神经行为评分降低,脑梗死体积百分比减少,细胞凋亡率降低,SOD活性上升,MDA含量,Caspase 3,Caspase 8及Caspase 9活性降低,Bcl-2表达量上调,Bax,Bak1,cleaved caspase 3,cleaved caspase 8及cleaved caspase9表达量下调,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-29c对大鼠脑缺血再灌注神经损伤具有保护作用,与提高抗氧化能力及调控细胞凋亡相关蛋白表达有关。

疼痛调控相关miRNAs的筛选及脊髓miR-29c对神经病理性痛大鼠痛阈的影响

目的通过microRNAs(miRNAs)芯片技术筛选疼痛调控相关的miRNAs,观察microRNA-29c(miR-29c)对神经病理性痛大鼠痛阈的影响。方法实验一:雌性SD大鼠,随机分为神经病理性痛组(SNI组)及妊娠神经病理性痛组(PSNI组),测定机械缩足阈值(MWT),观察分娩对疼痛的影响。在SNI组及PSNI组大鼠分娩后MWT差异显著时,取脊髓腰膨大组织,筛选差异表达的miRNAs。实验二:选取目的miRNAs,包被过表达或沉默慢病毒,脊髓内注射干预后观察SNI组大鼠MWT变化。结果与SNI组大鼠比较,PSNI组大鼠分娩后第3天MWT明显升高,脊髓c-Fos蛋白含量明显降低(P<0.05);miRNAs芯片分析共发现71条差异表达的miRNAs,在PSNI大鼠显著上调37条,显著下调34条;选取并包被miR-124a过表达、miR-29c沉默慢病毒注射,miR-29c表达沉默可明显提高SNI组大鼠MWT。结论miR-29c是通过基因芯片筛选获得的miRNA,下调SNI大鼠脊髓miR-29c表达,能够显著改善病理性痛状态。

急性淋巴细胞白血病患儿血清miR-17、miR-29c的表达及临床意义

研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿血清中miR-17、miR-29c表达水平及其与患儿生存率的关系。方法:选择 2010年9月~2013年2月在笔者医院初诊为ALL并住院治疗的43例患儿作为病例组,同时期体检健康儿童40例作为对照组。采用RT-PCR检测两组儿童血清中miR-17、miR-29c相对表达量,分析病例组血清miR-17、miR-29c表达水平与患儿初诊白细胞(WBC)计数、免疫分型等临床指标及患儿5年无事件生存率、总生存率的关系。结果:病例组儿童血清中miR-17相对表达量显著高于对照组( P <0.05),miR-29c相对表达量显著低于对照组( P <0.05);病例组血清中miR-17表达水平与患儿初诊WBC计数、免疫分型有关( P <0.05),miR-29c表达水平与患儿初诊WBC计数、免疫分型及泼尼松诱导敏感度有关( P <0.05);病例组患儿5年无事件生存率51.16%,总生存率72.09%;生存组患儿血清miR-17相对表达量显著低于死亡组患儿( P <0.05),miR-29c相对表达量显著高于死亡组患儿( P <0.05);miR-17高表达组患儿5年无事件生存率、总生存率均显著低于miR-17低表达组患儿;miR-29c高表达组患儿5年无事件生存率、总生存率均显著高于miR-29c低表达组患儿。结论:ALL患儿血清中miR-17表达上调,miR-29c表达下调,与患儿预后不良有关。

血清miR-33a、miR-29c、miR-126联合检测对脑动脉粥样硬化的诊断价值

目的探讨血清miR-33a、miR-29c、miR-126联合检测对脑动脉粥样硬化的诊断价值。方法选择2018年1月至2020年1月该院收治的脑动脉粥样硬化患者120例为研究组,同期体检健康者120例为对照组。根据不同脑动脉硬化严重程度将患者分为单动脉组(23例)、双动脉组(53例)、多动脉组(44例)。采用实时荧光定量PCR检测研究组与对照组及不同脑动脉粥样硬化严重程度患者血清miR-33a、miR-29c、miR-126的相对表达水平。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清miR-33a、miR-29c、miR-126对脑动脉粥样硬化的诊断价值。结果研究组血清miR-33a、miR-29c、miR-126的相对表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-33a、miR-29c、miR-126在不同脑动脉粥样硬化严重程度患者中的相对表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-33a、miR-29c、miR-126单项检测对脑动脉粥样硬化诊断的灵敏度分别为95.00%、93.00%、92.00%,特异度分别为95.00%、92.00%、91.00%。血清miR-33a、miR-29c、miR-126联合检测对脑动脉粥样硬化诊断的灵敏度为96.67%,特异度为90.00%,准确度为93.33%。结论血清miR-33a、miR-29c、miR-126可作为联合诊断脑动脉粥样硬化的潜在标志物。

血浆miR-192、miR-29c水平对2型糖尿病肾病诊断的临床意义

目的探讨血浆微小RNA 192(miR 192)与微小RNA 29c(miR 29c)联合检测对2型糖尿病肾病的诊断价值。方法选取2017年12月至2018年12月本院收治的166例2型糖尿病患者为研究对象,分为糖尿病无肾损害组(DM组)与糖尿病肾病组(DN组),同时以同时期本院健康体检健康人群60例为正常对照组(NC组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT PCR)检测各组血浆miR 192、miR 29c的表达水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平;采用Pearson法分析DN患者血浆miR 192、miR 29c与NGAL的相关性;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆miR 192、miR 29c表达对DN的诊断价值;分析血浆miR 192、miR 29c联合诊断DN的诊断效能。结果与NC组比较,DM组与DN组患者尿NGAL水平、miR 29c的表达水平显著升高(P<0.05),DN组显著高于DM组(P<0.05);与NC组相比,DM组与DN组患者血浆miR 192的表达水平均显著降低(P<0.05),DN组显著低于DM组(P<0.05);miR 192与尿NGAL呈负相关(r=-0.338,P=0.002),miR 29c与尿NGAL呈正相关(r=0.516,P<0.001);miR 192诊断DN的灵敏度52.50%,特异度75.58%;miR 29c诊断DN的灵敏度50.00%,特异度86.05%;联合诊断灵敏度97.50%,特异度95.34%,准确度为96.39%;联合检测时灵敏度与准确度均高于单项检测(P<0.05)。结论血浆miR 192、miR 29c表达异常与2型糖尿病肾病发生发展密切相关,二者联合检测可提高2型糖尿病肾病诊断效能。

TRPV1在小儿支气管哮喘中的表达以及与B7-H3和miR-29c相关性分析

目的 探究瞬时受体电位通道香草醛亚型-1(TRPV1)在小儿支气管哮喘中的表达以及与B7-H3和miR-29c相关性分析。方法 选取2019年4月—2020年4月收治的小儿支气管哮喘患儿172例作为研究对象,另选取同时段接受常规检查的健康儿童172例为健康志愿者。监测儿童肺功能水平变化,采用酶联免疫吸附法检测IgE、IFN-γ、EOS水平。分析TRPV1与B7-H3、miR-29c在小儿支气管哮喘中表达及相关性。结果 与健康志愿者相比,支气管哮喘儿童肺功能水平明显较低,具有统计学差异(P<0.05);与健康志愿者相比,支气管哮喘患儿TRPV1、B7-H3、miR-29c水平较高,具有统计学差异(P<0.05);与健康志愿者相比,支气管哮喘儿童血清IgE、EOS水平较高,INF-γ水平较低,具有统计学差异(P<0.05);与急性期患儿相比,缓解期患儿TRPV1、B7-H3、miR-29c表达均较低,具有统计学差异(P<0.05)。TRPV1、B7-H3呈正相关(r=0.254,P=0.001);TRPV1、miR-29c呈正相关(r=0.286,P=0.001);B7-H3、miR-29c呈正相关(r=0.214,P=0.004)。结论 TRPV1、B7-H3、miR-29c水平对小儿支气管哮喘患者的诊断及预后具有重要意义,且TRPV1与B7-H3、miR-29c在小儿支气管哮喘中具有一定相关性。

阿尔茨海默病中miR-29c对APP表达调控的初步研究

目的探讨microRNA29c(miR-29c)在阿尔茨海默病中的作用。方法采用了microarray芯片检测3月龄、6月龄APPswe/PSΔE9双转基因阿尔茨海默病小鼠大脑中microRNA表达情况并利用实时定量PCR验证结果可靠性,通过microRNA靶基因数据库预测选出与阿尔茨海默病相关的靶基因,构建miR-29c表达载体,将其转染SH-SY5Y及HEK-293T细胞,在高表达miR-29c的SH-SY5Y及HEK-293T细胞系中验证miR-29c对靶基因的调控作用。将靶基因APP mRNA的野生及突变3’UTR序列克隆到双荧光素酶报告基因载体,用双荧光素酶报告检测系统检测miR-29c与靶基因的结合位点。结果根据microRNA芯片结果筛选出在3、6月龄APPSWE/PS1ΔE9双转基因小鼠大脑表达均有差异的miR-29c,通过实时定量PCR证实miR-29c在3月、6月、9月龄小鼠中表达明显升高。通过microRNA靶基因数据库预测miR-29c可以调控阿尔茨海默病的靶基因APP,利用Western blot检测到高表达miR-29c的SH-SY5Y细胞及HEK-293T细胞中APP蛋白表达减少。将miR-29c表达载体与带有野生及突变APPmRNA的3’UTR的双荧光素酶报告载体共转染HEK-293T细胞,通过双荧光素酶检测系统检测未找到miR-29c与APP mRNA 3’UTR的结合位点。结论 miR-29c对APP表达的具有负向调控作用,但其调控位点可能不位于其3’UTR区域。

卵巢癌组织中miR-29c、miR-133b和miR-1的水平分析及临床意义

目的探讨卵巢癌组织中miR-29c、miR-133b和miR-1的表达水平,分析3者与卵巢癌临床病理特征的关系。方法收集本院确诊的65例卵巢癌患者经手术切除的上皮性卵巢癌组织标本(卵巢癌组),采用实时定量RT-PCR(qRTPCR)法检测miR-29c、miR-133b及miR-1水平,收集对应卵巢癌患者的临床病理参数(年龄、临床分期、分化程度、组织类型及淋巴结转移),同时选取32例正常卵巢上皮组织(正常组)和39例良性卵巢上皮囊肿组织(良性组)作对照,以正常组的各指标均数为界值,将卵巢癌组miR-29c、miR-133b及miR-1水平分为高水平组(>正常组)和低水平组(≤正常组),比较miR-29c、miR-133b及miR-1不同表达水平与卵巢癌临床病理参数的关系,同时分析卵巢癌组织中3者水平的关系。结果卵巢癌组miR-29c水平高于正常组和良性组,而miR-133b和miR-1水平均低于正常组和良性组,差异有统计学意义(P<0.05);卵巢癌组miR-29c、miR-133b及miR-1水平均与分化程度有关,miR-29c水平与临床分期及淋巴结转移有关,而miR-133b亦与淋巴结转移有关,差异均有统计学意义(P<0.05);卵巢癌miR-29c水平与miR-133b和miR-1均呈负相关(r=-0.541、-0.361),miR-133b与miR-1呈正相关(r=0.447),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢癌患者组织中miR-29c呈高表达,miR-133b及miR-1呈低表达,与临床病理学特征有关,且在卵巢癌诊断中有一定的价值,可用于辅助卵巢癌的诊断和病情评估。

miRNA-29c抑制前列腺癌细胞系LNCaP的增殖和侵袭

目的观察miRNA-29c(miR-29c)对前列腺癌细胞系LNCaP增殖和侵袭能力的影响,探讨其潜在的应用价值。方法采用qRT-PCR观察雄激素依赖性(LNCaP)与雄激素非依赖性(LNCaP-AI)前列腺癌细胞中miR-29c的表达差异;采用miR-29c抑制物(anti-miR-29c)下调LNCaP细胞中miR-29c的表达量,绘制LNCaP细胞生长曲线,利用流式细胞仪测定细胞周期;Transwell侵袭实验分析miR-29c抑制前后LNCaP细胞的体外侵袭能力。结果 qRT-PCR显示LNCaP-AI细胞中miR-29c水平明显低于LNCaP细胞(P<0.05);下调LNCaP细胞中miR-29c的表达量,可明显促进LNCaP细胞体外增殖及侵袭能力(P<0.05)。结论 miR-29c的正常表达有利于抑制LNCaP细胞的体外增殖和侵袭,有望成为前列腺癌生物治疗的潜在靶点。

MiR-29c模拟物对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:观察miR-29c在具有不同转移能力的F4和F5M2细胞系中的表达差异;研究miR-29c模拟物对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:利用qRT-PCR技术检测F4与F5M2间miR-29c的表达差异;将骨肉瘤细胞F5M2分为3组,运用细胞转染技术分别对两组转染miR-29c模拟物、模拟物阴性对照,第3组不作处理,随后用qRT-PCR技术检测3组间miR-29c的表达差异。Transwell法检测3组不同处理的F5M2细胞的侵袭和迁移能力是否存在差异。结果:MiR-29c在F4和F5M2细胞系中表达差异显著,miR-29c在高转移性的F5M2细胞中表达水平显著下降。与阴性对照组和空白组相比,转染miR-29c模拟物的F5M2细胞侵袭和迁移能力均明显减弱,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:MiR-29c在高转移性骨肉瘤细胞中低表达,且miR-29c模拟物具有抑制骨肉瘤细胞侵袭和转移的作用。MiR-29c有可能作为骨肉瘤转移基因治疗的一个新靶点。

miR-29c过表达载体的构建及其对95D肺癌细胞增殖的影响

目的构建miR-29c真核表达载体并转染95D肺癌细胞,观察miR-29c过表达对95D细胞增殖能力的影响。方法克隆miR-29c片段插入质粒pcDNA3.1,构建miR-29c表达质粒pcDNA3.1-miR-29c;通过脂质体瞬时转染人肺癌细胞株95D,荧光PCR检测细胞miR-29c表达水平,MTT法检测过表达miR-29c对细胞增殖能力的影响。结果重组质粒pcDNA3.1-miR-29c经酶切及测序证明构建成功,荧光PCR证实转染后95D细胞miR-29c表达水平显著升高,是对照组的36倍。MTT检测结果表明,过表达miR-29c的95D细胞增殖受到显著抑制,至72 h抑制率最高,达38.63%。结论成功构建miR-29c真核表达质粒pcDNA3.1-miR-29c,初步观察显示过表达miR-29c显著抑制95D肺癌细胞增殖效应。为进一步深入研究miR-29c对肺癌的作用打下良好基础。

miR-29c在卡波西肉瘤SLK细胞增殖和侵袭过程中的作用研究

目的探讨miR-29c在卡西波内瘤(KS)细胞中的表达情况以及miR-29c在KS细胞侵袭和迁移过程中的作用及其机制。方法 qPCR检测KS细胞中miR-29c的表达情况;使用miR-29c-mimic过表达miR-29c,qPCR检测miR-29c-mimic过表达效果;Transwell侵袭实验检测miR-29c的过表达对KS细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-29c的过表达对KS细胞迁移能力的影响;CM-H2DCFDA荧光染色细胞检测KS细胞内活性氧水平。结果 miR-29c在KS SLK细胞中表达水平较低,miR-29c-mimic可以有效增加miR-29c的表达;过表达miR-29c抑制KS SLK细胞的侵袭迁移能力;过表达miR-29c后可以降低KS SLK细胞内活性氧水平。结论 miR-29c在KS细胞中表达下调,同时过表达miR-29c可以抑制KS细胞侵袭和迁移能力。

miR-29c通过调控SIRT1表达介导动脉粥样硬化氧化应激与炎症反应

目的研究miR-29c能否通过调控沉默信息调节因子2相关酶类1(SIRT1)的表达影响动脉粥样硬化(AS)进程中氧化应激及炎症反应。方法采用ApoE-/-基因敲除小鼠(ApoE-/-),经适应性饲养,于6周龄时以高脂饲料喂养,构建AS模型(AS组);以C57BL/6J小鼠为正常对照组,给予普通饲料喂养。12周后取主动脉,检测miR-29c表达以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA水平、活性氧(ROS)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶水平。培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分别转染miR-29c mimic和antagomir,以氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)(50μg/ml)进行刺激,检测各组TNF-α表达、ROS、NADPH氧化酶水平。此外,实时PCR和Western blot检测oxLDL诱导的内皮细胞损伤模型中SIRT1 mRNA及蛋白表达水平变化,并进一步检测正常细胞转染miR-29c mimic与antagomir后SIRT1 mRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,AS组miR-29c表达及TNF-αmRNA、ROS、NADPH氧化酶水平均明显升高(P<0.05)。oxLDL刺激后,与对照组相比,转染miR-29c antagomir细胞中TNF-α、ROS、NADPH氧化酶水平均明显降低(P<0.05);与之相反,转染miR-29c mimic细胞中TNF-α、ROS、NADPH氧化酶水平明显升高(P<0.05)。此外,oxLDL刺激HUVEC后,细胞的SIRT1 mRNA与蛋白表达水平均有所降低(P<0.05)。然而,正常细胞转染miR-29c mimic和antagomir后结果显示在SIRT1 mRNA水平上差异无统计学意义(P>0.05),而SIRT1蛋白表达水平有差异,且差异有统计学意义(P<0.05),提示miR-29c对SIRT1的调控可能处于翻译后水平。结论miR-29c可下调SIRT1表达进而增强AS进程中氧化应激及炎症反应。

miR-29c对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的影响及其机制的初步研究

目的研究miR-29c对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法空白对照组、miR-29c过表达阴性对照组、miR-29c过表达组、miR-29c抑制表达阴性对照组、miR-29c抑制表达组预先转染HUVECs,再用TNF-α(10 ng/mL)诱导HUVECs 48 h,然后分别采用MTT法和Hoechst 33342荧光染色法检测miR-29c对TNF-α诱导HUVECs增殖活力及凋亡的影响;再采用Western blot技术检测miR-29c对Akt、eNOS磷酸化水平及eNOS蛋白表达的影响。结果miR-29c可显著降低TNF-α诱导的HUVECs的增殖活力(P<0.05);Heochst 33342荧光染色结果显示,miR-29c可促进TNF-α诱导的HUVECs凋亡(P<0.05);miR-29c可显著下调Akt、eNOS的磷酸化(P<0.05),但其对eNOS蛋白的表达无影响。结论miR-29c可降低TNF-α诱导的HUVECs增殖,并促进其凋亡,其机制可能与下调Akt、eNOS的磷酸化相关。

靶向TUG1的mir-29c-3p通过调节CAPN7的表达影响膀胱癌细胞的迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNATUG1影响膀胱癌细胞迁移和侵袭的机制。方法逆转录实时定量PCR检测膀胱癌组织和细胞中TUG1和mir-29c-3p的表达水平。在膀胱癌细胞系T24细胞中利用RNA干扰技术下调TUG1的表达后Transwell检测细胞的迁移和侵袭能力的变化,并检测CAPN7的表达水平。在膀胱癌细胞系T24细胞中利用mir-29c-3p类似物过表达mir-29c-3p后在转录及转录后水平检测CAPN7的表达变化。功能回复试验验证CAPN7及TUG1对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响。结果TUG1和mir-29c-3p在膀胱癌细胞和组织中分别表达升高(P=0.01)及减低(P<0.01),同时它们的表达呈现负相关关系(P=0.0109,r^2=0.4295)。TUG1表达下调后可以抑制膀胱癌细胞T24的迁移和侵袭能力(P<0.01)。mir-29c-3p过表达后可以下调CAPN7的表达水平,CAPN7的表达水平与TUG1在膀胱癌中呈正相关关系(P=0.0139,r2=0.4081),荧光素酶报告试验验证了mir-29c-3p可同时靶向调节TUG1及CAPN7,功能回复试验验证了TUG1可以正向调节CAPN7的表达及其对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响(P<0.01)。结论靶向TUG1的mir-29c-3p可通过调节CAPN7的表达影响膀胱癌细胞的迁移和侵袭。