miR-149-3p靶向调节Akt1介导牙周膜干细胞成骨分化的作用机制研究

目的探讨miR-149-3p靶向调节蛋白激酶B(protein kinase B,Akt1)介导牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)成骨分化的作用及机制。方法选取2022-01月在作者医院口腔科就诊的18~25岁患者因正畸而拔除的前磨牙或第三磨牙,分离牙周膜组织,提取人PDLSCs。免疫组织化学染色法检测角蛋白(pan-cytokeratin)和波形蛋白(vimentin)鉴定人PDLSCs。将人PDLSCs分为对照组、空载组、miR-149-3p inhibitor组和miR-149-3p mimic组。对照组人PDLSCs不进行处理,空载组、miR-149-3p inhibitor组和miR-149-3p mimic组按Lipofectamine 3000说明书方法分别将空载质粒和miR-149-3p inhibitor、miR-149-3p mimic转染到人PDLSCs。实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞内miR-149-3p、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、Akt1 mRNA表达;Western blot检测细胞内ALP、Runx2、Akt1蛋白表达。采用Fluo-3 AM探针检测细胞内钙离子。结果免疫组织化学结果显示,人PDLSCs二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB)染色vimentin呈阳性,pan-cytokeratin呈阴性,提示PDLSCs提取成功。与对照组和空载组相比,miR-149-3p inhibitor组miR-149-3p表达显著降低,ALP、Runx2、Akt1 mRNA和蛋白表达、细胞内钙离子荧光强度均显著升高(P均<0.05);miR-149-3p mimic组miR-149-3p表达显著升高,ALP、Runx2、Akt1 mRNA和蛋白表达、细胞内钙离子荧光强度均显著降低(P均<0.05)。与miR-149-3p inhibitor组相比,miR-149-3p mimic组miR-149-3p表达显著升高,ALP、Runx2、Akt1 mRNA和蛋白表达、细胞内钙离子荧光强度均显著降低(P均<0.05)。对照组与空载组各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论过表达miR-149-3p可靶向抑制Akt1蛋白的表达,从而抑制成骨标志物ALP和Runx2表达,降低人PDLSCs内钙离子浓度,不利于人PDLSCs成骨分化。

miR-149-3p通过调控NIS促进甲状腺乳头状癌增殖和迁移

目的探讨miR-149通过调控钠/碘共同转运体(Sodium/Iodide Sympoter,NIS)调控甲状腺乳头状癌(Papillary Thyroid Carcinoma,PTC)细胞增殖和迁移能力。方法对选取的GSE113629转录组数据进行数据处理,筛选其中表达差异较为明显且在PTC组织中表达明显增高的MicroRNA(miRNA)作为研究分子。通过在线数据库预测目标miR-NA的下游靶基因,随后检测调控目标miRNA表达后靶基因变化情况并观察靶基因水平改变对甲状腺癌细胞生物学行为的影响。结果在GSE112629数据集中,研究发现miR-149-3p在PTC组织中高表达。通过对miR-149-3p预测靶基因进行维恩分析,我们发现NIS是miR-149-3p的重要靶基因。通过分析GEPIA和UALCAN数据库,我们发现NIS在PTC样本中明显低表达,同时发现PTC的淋巴结转移率越高、分期级别越高则NIS表达量越低,并且NIS表达量与患者无病生存期(Disease Free Survival,DFS)呈正相关。在多种PTC细胞系中miR-149-3p表达水平均高于正常甲状腺细胞系,抑制PTC细胞内miR-149-3p表达后细胞内NIS表达水平明显升高。当敲低miR-149-3p时,细胞的增殖活性和迁移能力受到明显抑制。结论PTC中miR-149-3p高表达,并且miR-149-3p能够通过抑制NIS表达明显增强PTC的增殖活性和迁移能力。

子宫内膜癌组织miR-141-3p、miR-149-3p表达与增殖基因、临床病理特征和预后的关系

目的探讨子宫内膜癌组织中miR-141-3p、miR-149-3p表达及与增殖基因、临床病理特征和预后的关系。方法选取2017年2月至2019年2月该院诊治的98例子宫内膜癌患者作为研究对象。采用实时荧光定量PCR检测子宫内膜癌患者癌组织中miR-141-3p、miR-149-3p及增殖基因[增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)]mRNA相对表达水平。Pearson相关分析子宫内膜癌患者癌组织中miR-141-3p、miR-149-3p表达与PCNA、cyclin D1、CDK4 mRNA表达的相关性。不同临床病理特征的子宫内膜癌患者癌组织miR-141-3p、miR-149-3p表达进行比较。Kaplan-Meier曲线分析子宫内膜癌患者癌组织miR-141-3p、miR-149-3p表达对其预后的影响。单因素及多因素Cox回归分析影响子宫内膜癌患者预后的因素。结果子宫内膜癌患者癌组织中miR-141-3p、miR-149-3p、PCNA mRNA、cyclinD1 mRNA、CDK4 mRNA相对表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌患者癌组织中miR-141-3p、miR-149-3p表达与PCNA mRNA、cyclinD1 mRNA、CDK4 mRNA表达呈正相关(均P<0.05)。国际妇产科联盟(FIGO)分期Ⅲ期、有淋巴结转移的子宫内膜癌患者癌组织miR-141-3p、miR-149-3p相对表达水平分别高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移的子宫内膜癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-141-3p高表达组3年总体生存率显著低于miR-141-3p低表达组,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=7.043,P=0.008)。miR-149-3p高表达组患者3年总体生存率显著低于miR-149-3p低表达组,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=7.094,P=0.007)。FIGO分期Ⅲ期、有淋巴结转移、miR-141-3p升高、miR-149-3p升高是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论检测子宫内膜癌患者癌组织中miR-141-3p、miR-149-3p表达有助于评估其患者生存预后。

高危型HPV感染对宫颈阴道微生态、miR-149-3p、CYBRD1表达的影响

目的:探讨宫颈炎患者高危型HPV(HR-HPV)感染对宫颈阴道微生态、miR-149-3p、CYBRD1表达的影响。方法:选取2020年12月-2022年12月因宫颈炎就诊于本院的102例临床资料,根据是否感染HR-HPV分入高危HPV阴性组(n=65)与阳性组(n=37)。检测HPV阳性患者HPV感染亚型,比较两组阴道微生态改变及阴道微生态平衡状态;采用荧光定量PCR法检测宫颈脱落细胞miR-149-3p、CYBRD1水平;Spearman法分析宫颈阴道微生态与宫颈脱落细胞miR-149-3p、CYBRD1水平的相关性;采用多因素logistic逐步回归分析HR-HPV感染影响因素。结果:HR-HPV阳性组宫颈病变严重程度高于阴性组,阳性组中HPV16亚型检出率最高(51.0%),其次为HPV18(18.6%);阳性组阴道微生态失衡、解脲脲原体阳性率、乳酸杆菌异常率均高于阴性组,miR-149-3p(0.53±0.12)低于阴性组(1.67±0.23),CYBRD1相对表达量(1.29±0.27)高于阴性组(0.46±0.10)(均P<0.05);HR-HPV感染与宫颈脱落细胞miR-149-3p表达呈负相关、与CYBRD1表达、阴道微生态失衡、解脲脲原体阳性率及乳酸杆菌异常率呈正相关(均P<0.05)。HR-HPV阳性组不良孕产史占比高于阴性组(P<0.05)。多因素分析显示:解脲脲原体阳性率、乳酸杆菌异常率、不良孕产史、阴道微生态失衡、miR-149-3p降低、CYBRD1升高是HR-HPV感染影响因素(均P<0.05)。结论:HR-HPV感染者宫颈脱落细胞中miR-149-3p低表达、CYBRD1高表达,亚型检出以HPV16、HPV18为主,且HR-HPV感染会影响患者宫颈阴道微生态失衡,增加宫颈病变严重程度。

异甘草素通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移的机制研究

目的 肺鳞癌(Lung squamous cell carcinoma,LUSC)是全世界范围内高频率发生的恶性肿瘤。最近的研究表明,异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)在肿瘤增殖和转移中发挥抗肿瘤活性。因此,研究旨在探讨ISL在抗LUSC转移中的作用机制。方法 利用梯度浓度ISL处理LUSC细胞,探究ISL在LUSC细胞增殖、迁移和侵袭中的抗癌特性。随后,利用生物信息学手段探寻了长链非编码RNA(Long non-coding RNAs, lncRNA)MIR22HG/miR-24-3p/Fas配体基因(Fas ligand Gene,FASLG)之间可能的互作关系。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测LUSC细胞中lncRNA MIR22HG、miR-24-3p、FASLG的表达,细胞计数盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、克隆形成、划痕愈合和Transwell实验分别检测细胞活力、增殖、迁移和侵袭。蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)检测上皮间充质转换(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)和转移相关蛋白的表达。RNA免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RIP)实验和双萤光素酶实验验证lncRNA MIR22HG与miR-24-3p、miR-24-3p与FASLG的结合关系。结果 ISL可以显著抑制LUSC细胞增殖、迁移和侵袭。生信分析及临床样本分析发现lncRNA MIR22HG在LUSC中低表达,ISL可以促进lncRNA MIR22HG的表达,抑制LUSC细胞的恶性行为。此外,lncRNA MIR22HG可以海绵吸附miR-24-3p进而调节FASLG的表达。miR-24-3p在LUSC中上调表达,FASLG在LUSC中下调表达。过表达FASLG可以逆转miR-24-3p过表达对LUSC增殖、转移以及EMT进程的促进作用。结论 这些结果表明,ISL通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移,表明ISL有潜力作为治疗LUSC的新型药物。

lncRNA MIR4435-2HG靶向miR-376a-3p调控胆管癌细胞生物学行为的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MIR4435-2HG(MIR4435-2HG)对胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对微小RNA-376a-3p(miR-376a-3p)的调控作用。方法 qRT-PCR法检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic与人胆管癌细胞RBE中MIR4435-2HG、miR-376a-3p的表达。将si-NC、si-MIR4435-2HG、miR-NC、miR-376a-3p mimics、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-NC、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-376a-3p分别转染至RBE细胞,作为si-NC组、si-MIR4435-2HG组、miR-NC组、miR-376a-3p组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组;采用MTT法、Transwell小室法及流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证MIR4435-2HG与miR-376a-3p的靶向关系。Western blot检测相关蛋白表达。结果 RBE细胞中MIR4435-2HG表达量升高(P<0.05),miR-376a-3p表达量降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MIR4435-2HG组MIR4435-2HG表达、细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率升高(P<0.05)。MIR4435-2HG可靶向调控miR-376a-3p;与si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组比较,si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论 敲低MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-376a-3p进而抑制RBE细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导其凋亡。

长链非编码RNAMIR22HG和微RNA-9-3p在骨关节炎病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MIR22HG和微RNA-9-3p(miR-9-3p)在骨关节炎(OA)病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性。方法 选取2020年10月至2021年10月在南充市中医医院确诊为OA的病人120例,作为OA组,60例体检健康人群作为对照组;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平;Pearson法分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的相关性以及二者与视觉模拟(VAS)评分、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)以及西安大略和麦马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC)评分的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p对OA的诊断价值。结果 OA组的血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著高于对照组(1.48±0.25比1.01±0.22),miR-9-3p的表达水平显著低于对照组(0.72±0.13比1.05±0.12)(P<0.05);相关性分析显示,lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平呈负相关关系(P<0.05);KLⅣ级血清lncRNA MIR22HG的表达水平、VAS评分、WOMAC评分显著高于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著高于KLⅡ级(P<0.05),KLⅣ级血清miR-9-3p的表达水平、HSS评分显著低于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著低于KLⅡ级(P<0.05);OA病人lncRNA MIR22HG的表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈正相关,与HSS评分呈负相关(P<0.05);miR-9-3p表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈负相关,与HSS评分呈正相关(P<0.05);二者联合诊断的AUC高于lncRNA MIR22HG、miR-9-3p单独诊断的AUC值(Z=2.22,P=0.012;Z=1.43,P=0.025)。结论OA病人血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著升高,miR-9-3p表达水平显著降低,二者与OA病情严重程度密切相关,且对OA具有一定的诊断价值。

血清miR-149-3p和CXCR3水平与aSAH后迟发性脑缺血的相关性分析

目的探讨血清微小RNA-149-3p(miR-149-3p)、CXC趋化因子受体3(CXCR3)与动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)后迟发性脑缺血(DCI)的相关性。方法2020年6月~2022年6月前瞻性收集aSAH共175例,采用qRT-PCR法检测血清miR-149-3p,采用酶联免疫吸附法检测血清CXCR3水平。结果175例中,58例发生DCI,发生率为33.1%;117例未发生DCI。与未发生DCI病人比较,DCI病人血清miR-149-3p水平显著降低(P<0.05),CXCR3水平显著升高(P<0.05)。aSAH病人血清miR-149-3p水平与CXCR3水平呈明显负相关(r=-0.462,P<0.001);多因素logsitic回归分析显示,miR-149-3p水平降低、CXCR3水平增高是aSAH后发生DCI的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-149-3p水平≤0.94预测aSAH后发生DCI的曲线下面积(AUC)为0.828,敏感度为82.76%,特异度为72.65%;血清CXCR3水平≥12.81 ng/L预测aSAH后发生DCI的AUC为0.812,敏感度为79.31%,特异度为83.76%;血清miR-149-3p≤0.94联合血清CXCR3联合≥12.81 ng/L预测aSAH后发生DCI的AUC为0.906,敏感度为91.38%,特异度为83.76%。两者联合预测效果更好(P<0.05)。结论aSAH后发生DCI病人血清miR-149-3p水平降低、CXCR3水平升高,是aSAH后发生DCI独立危险因素,可能作为预测aSAH后发生DCI的指标。

慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者血清miR-221-3p和miR-149-3p表达水平及其与预后的相关性分析

目的分析慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者血清微小核糖核酸(micro RNA,miR)-221-3p和miR-149-3p水平变化及其与预后的相关性。方法选取2019年4月~2021年10月在江油市人民医院治疗的180例慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者作为研究对象,根据一年后随访结果分为生存组(n=120)和死亡组(n=60)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测患者血清中miR-221-3p和miR-149-3p的相对表达水平,并对生存组、死亡组患者血清miR-221-3p和miR-149-3p水平进行比较。Spearman法分析miR-221-3p,miR-149-3p与急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)的相关性。对影响慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者预后的因素进行Logistic回归分析;受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-221-3p和miR-149-3p的表达对慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者预后的预测价值。结果生存组血清miR-221-3p,miR-149-3p表达水平和APACHEⅡ评分分别为1.02±0.18,1.01±0.21和12.80±4.45分;死亡组慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者血清miR-221-3p,miR-149-3p表达水平和APACHEⅡ评分分别为1.54±0.36,0.66±0.16和27.45±6.05分;与生存组相比,死亡组患者血清miR-221-3p表达水平、APACHEⅡ评分均明显升高(t=12.938,18.395,P<0.01),miR-149-3p表达水平显著降低(t=11.360,P<0.01),差异均有统计学意义;慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者血清miR-221-3p水平与APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.509,P<0.05),miR-149-3p水平与APACHEⅡ评分呈负相关(r=-0.470,P<0.05);Logistic回归分析发现吸烟(OR=3.216,95%CI:1.112~9.304)、高APACHEⅡ评分(OR=1.355,95%CI:1.054~1.741)、高血清miR-221-3p水平(OR=4.264,95%CI:1.772~10.260)是影响慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者预后的危险因素(P<0.05),高血清miR-149-3p水平(OR=0.198,95%CI:0.078~0.503)是影响患者预后的保护因素(P<0.01);经ROC曲线分析,血清miR-221-3p,miR-149-3p及二者联合预测慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.889,0.860和0.959,二者联合检测优于其各自单独预测(Z=2.174,3.225,P=0.015,<0.01)。结论慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者血清miR-221-3p水平升高,miR-149-3p水平降低,与患者预后有关,能够预测慢性阻塞性肺疾病并发Ⅱ型呼吸衰竭患者的预后。

上调长链非编码RNA DANCR通过miR-149-3p/转录因子叉头框M1信号轴促进宫颈癌的进展

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA) DANCR在宫颈癌进展中的功能。方法 检测宫颈癌组织和细胞中DANCR、microRNA-149-3p(miR-149-3p)和转录因子叉头框M1(FOXM1)的表达。分别下调DANCR、miR-149-3p和Forkhead-box M1(FOXM1)的表达,采用CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测细胞上皮间质转化(EMT)能力,细胞迁移检测细胞迁移能力。采用双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA DANCR与miR-149-3p、miR-149-3p和FOXM1之间的结合。分析上调LncRNA DANCR通过miR-149-3p对宫颈癌发展的影响。结果 LncRNA DANCR和FOXM1在宫颈癌组织和细胞中表达上调,miR-149-3p表达降低。与siRNA NC相比,LncRNA DANCR siRNA和FOXM1 siRNA组抑制了细胞增殖、迁移与EMT,而miR-149-3p inhibitor组与inhibitor NC组相比,SiHa细胞增殖与迁移能力升高。LncRNA DANCR靶向并负调控miR-149-3p,间接上调了FOXM1的表达。上调LncRNA DANCR通过miR-149-3p促进细胞增殖、迁移与EMT。结论 上调LncRNA DANCR通过miR-149-3p/FOXM1轴促进SiHa细胞的增殖、迁移与EMT。

miR-149-3p调控JNK/p38 MAPK信号通路对髓核细胞凋亡、自噬和炎性反应的影响

目的探讨miR-149-3p通过调控JNK/p38 MAPK信号通路对髓核细胞凋亡、自噬和炎症反应的影响。方法体外分离大鼠髓核细胞,用IL-1β浓度为10 ng/ml建立模型组,细胞分为Con组(空白对照)、IL-1β组(IL-1β处理)、IL-1β+miR-NC组(IL-1β处理,转染miR-NC)、IL-1β+miR-149-3p组(IL-1β处理,转染miR-149-3p)、IL-1β+miR-149-3p+Anisomycin组(IL-1β和通路激活剂Anisomycin处理,转染miR-149-3p)。采用qRT-PCR检测miR-149-3p相对表达水平;MTT、流式细胞术实验检测细胞增殖和凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2、Beclin 1、LC3II/LC3I、JNK/p38 MAPK信号通路相关蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-8表达水平。结果IL-1β组内miR-149-3p相对表达量、细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显低于Con组,凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3II/LC3I蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8表达水平、p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达明显高于Con组(P<0.05)。IL-1β+miR-149-3p组内miR-149-3p相对表达量、细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显高于IL-1β+miR-NC组(P<0.05),凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3II/LC3I蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8表达水平、p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达明显低于IL-1β+miR-NC组。IL-1β+miR-149-3p+Anisomycin组的p-JNK、p-p38 MAPK蛋白表达、凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3II/LC3I蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8表达水平明显高于IL-1β+miR-149-3p组,细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显低于IL-1β+miR-149-3p组(P<0.05)。结论上调miR-149-3p能促进IL-1β诱导的髓核细胞增殖,抑制细胞凋亡、自噬和炎性反应,其作用机制可能与激活JNK/p38 MAPK信号通路有关。

miR-149-3p在先天性心脏病胎鼠心脏组织中的表达及其对P19细胞分化的影响

目的 探讨miR-149-3p在先天性心脏病(CHD)胎鼠心脏组织中的表达及其对小鼠畸胎瘤P19细胞分化的影响。方法 建立CHD室间隔缺损胎鼠模型,于妊娠第19天,HE染色观察心脏组织病理学变化,实时荧光定量PCR(qPCR)检测心脏组织中miR-149-3p和热休克蛋白蛋白家族B成员6(HSPB6)mRNA表达水平。二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,并收集分化第0、5、10天的细胞,qPCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽(ANP)的mRNA表达水平以及HSPB6 mRNA和miR-149-3p表达水平。miR-149-3p过表达慢病毒和空载慢病毒感染P19细胞,DMSO诱导分化第10天,免疫荧光染色检测细胞中cTnI蛋白表达情况,qPCR检测心肌分化相关标志物mRNA表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-3p与HSPB6之间的靶向关系。结果 与正常组比较,CHD组胎鼠出现心脏室间隔缺损,心脏组织中miR-149-3p高表达,而HSPB6低表达(P<0.01)。P19细胞在向心肌细胞分化的过程中,GATA4、cTnT、ANP和HSPB6mRNA水平均逐渐上升,而miR-149-3p表达水平逐渐下降(P<0.05)。诱导分化第10天,miR-149-3p过表达可明显降低心肌细胞分化率,并下调GATA4、cTnT、ANP mRNA表达水平(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-149-3p可以靶向调控HSPB6表达。结论 miR-149-3p可能通过靶向下调HSPB6抑制P19细胞向心肌细胞分化。

HOXA11-AS/miR-149-3p通路在肺鳞状细胞癌中的作用及机制研究

目的探究长链非编码RNA HOXA11-AS在肺鳞状细胞癌发生过程中的确切机制。方法采用定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测HOXA11-AS、miR-149-3p和SPT16表达变化。并通过MTT法检测细胞活力。双荧光素酶报告基因检测miR-149-3p与HOXA11-AS或SPT16的互作关系。结果在肺鳞状细胞癌组织和细胞中HOXA11-AS和SPT16的表达升高,而miR-149-3p的表达降低。miR-149-3p是HOXA11-AS的作用靶点,而SPT16是miR-149-3p的作用靶点。HOXA11-AS的敲低抑制了肺鳞状细胞癌细胞的增殖能力,而使用miR-149-3p抑制剂可拮抗HOXA11-AS敲低对肺鳞状细胞癌细胞增殖的抑制作用。此外,上调SPT16可减弱si-HOXA11-AS介导的肺鳞状细胞癌细胞的抗增殖作用。结论HOXA11-AS的敲低可通过调控miR-149-3p/SPT16轴在肺鳞状细胞癌中发挥抑癌作用。

LncRNA MIR22HG调节miR-132-3p/TLR2轴对急性心肌梗死小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响

目的:探讨长链非编码RNA miR-22宿主基因(lncRNA MIR22HG)调节miR-132-3p/Toll样受体2(TLR2)轴对急性心肌梗死(AMI)小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响。方法:取C57BL/6J小鼠随机分为sham组、AMI组、AMI+sh-NC组、AMI+shMIR22HG组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组,每组10只,除去sham组外,其它组都进行冠状动脉左前降支结扎,sham组只开胸不结扎冠状动脉,其中AMI+sh-NC组、AMI+sh-MIR22HG组、AMI+shMIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组小鼠分别相对应的对尾静脉注射sh-NC、sh-MIR22HG、sh-MIR22HG+antagomir-NC、sh-MIR22HG+antagomir-132-3p。超声心动图评估小鼠心室重构和心脏功能;HE染色和Masson染色观察心肌组织病理学变化及纤维化;RT-qPCR检测心肌组织MIR22HG、miR-132-3p表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;Western blotting检测心肌组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleved caspase-3)/半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、collagenⅢ和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证MIR22HG和miR-132-3p、miR-132-3p和TLR2的关系。结果:与sham组比较,AMI组小鼠心功能显著降低,心肌组织损伤、心肌纤维化加重,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著升高,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与AMI+sh-NC组比较,AMI+sh-MIR22HG组小鼠心功能改善,心肌组织损伤、心肌纤维化减轻,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著降低,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达上升(P<0.05);下调miR-132-3p减弱了敲减MIR22HG对心肌组织的保护作用;双荧光素酶报告基因实验结果显示,MIR22HG靶向调控miR-132-3p表达,miR-132-3p靶向负调控TLR2表达。结论:抑制MIR22HG表达可通过调节miR-132-3p/TLR2轴抑制AMI小鼠心肌细胞凋亡,改善小鼠心室重构。

CircSMC3调节miR-582-5p/MCL1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:探讨环状非编码RNA(CircRNA)SMC3通过调节微小RNA(miR)-582-5p/髓细胞白血病基因1(MCL1)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:qRT-PCR检测4种GC细胞系及正常胃上皮细胞系GES-1中SMC3、miR-582-5p、MCL1mRNA的表达水平。将SGC-7901细胞分为对照组、si-NC组、si-SMC3组、mimics NC组、miR-582-5p组、si-SMC3+inhibitor NC组、si-SMC3+miR-582-5p inhibitor组、miR-582-5p+pcDNA3.1组、miR-582-5p+MCL1组。检测各细胞凋亡、增殖、迁移及相关蛋白表达的情况;验证miR-582-5p与SMC3、MCL1的靶向关系。结果:4种GC细胞系中SMC3、MCL1 mRNA表达均增加,miR-582-5p表达下降(P<0.05)。干扰SMC3、过表达miR-582-5p可以抑制SGC-7901细胞增殖、迁移及相关蛋白、表达(P<0.05);抑制miR-582-5p表达可逆转干扰SMC3对细胞的作用(P<0.05);上调MCL1可逆转过表达miR-582-5p细胞的作用(P<0.05)。结论:干扰SMC3可能通过调节miR-582-5p/MCL1轴,抑制SGC-7901细胞增殖、迁移,促进凋亡。

miR-149-3p 通过靶向FOXP3 抑制宫颈癌HeLa细胞的恶性生物学行为

目的:探索miR-149-3p对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及其机制。方法:HeLa细胞随机分为5组:未转染(HeLa)组、mimic-scramble组、miR-149 mimic组、FOXP3过表达(pc-FOXP3)组、共转染(mimic+pc-FOXP3)组,Mimicscramble为miR-149 mimic的阴性对照随机序列。荧光素酶实验验证miR-149-3p与FOXP3的靶向结合关系。实时定量PCR(q RT-PCR)检测HeLa细胞中miR-149-3p表达及FOXP3的m RNA水平,Western blotting检测FOXP3的蛋白水平。CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭,划痕实验分析细胞迁移。结果:荧光素酶实验显示miR-149-3p可靶向结合FOXP3。与未转染组相比miR-149 mimic组miR-149-3p表达升高、FOXP3 m RNA水平下降(P<0.01),而且miR-149mimic组FOXP3蛋白水平低于未转染组(P<0.01)、pc-FOXP3组FOXP3蛋白水平高于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3组相比mimic+pc-FOXP3组FOXP3蛋白水平降低(P<0.01)。miR-149 mimic组细HeLa胞增殖倍数低于未转染组(P<0.01),pc-FOXP3组细胞增殖倍数高于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3组相比mimic+pc-FOXP3组细胞增殖倍数下降(P<0.01);miR-149 mimic组HeLa细胞凋亡率高于未转染组(P<0.01),pc-FOXP3组细胞凋亡率低于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3组相比mimic+pc-FOXP3组细胞凋亡率上升(P<0.01);miR-149 mimic组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率低于未转染组(P<0.01),pc-FOXP3组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率高于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3组相比mimic+pc-FOXP3组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率下降(P<0.01)。结论:miR-149-3p通过靶向FOXP3抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和迁移,同时促进细胞凋亡。

LncRNA PVT1通过竞争miR-149-5p上调CHI3L1并影响变应性鼻炎进展的研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)PVT1对变应性鼻炎(AR)进展的影响及其相关作用机制。方法24只BALB/c小鼠,其中6只作为对照组,余18只采用卵白蛋白和氢氧化铝建立AR模型并采用随机数字表法均分为模型组、AR+NC组(尾静脉注射空载体慢病毒)、AR+shPVT1组(尾静脉注射LncRNA PVT1干扰载体慢病毒),每组6只。采用行为学评分评估各组小鼠过敏症状;HE染色观察各组小鼠鼻黏膜组织病理学改变;实时荧光定量PCR检测各组小鼠鼻黏膜组织中LncRNA PVT1、miR-149-5p和几丁质酶-3样蛋白1(CHI3L1)mRNA的表达;Western blot检测CHI3L1蛋白表达;ELISA分析各组小鼠血清IgE、白细胞介素(IL)-5、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。构建LncRNA PVT1和CHI3L1的野生型(WT)和突变型(MT)荧光素酶报告质粒,单独或同时与miR-149-5p mimic共转染293T细胞,采用双荧光素酶实验分析并计算各组细胞荧光素酶相对活性。结果与模型组相比,AR+shPVT1组小鼠行为学评分降低;血清中IgE、IL-5和TNF-α水平降低;鼻黏膜组织中LncRNA PVT1 mRNA表达水平降低,miR-149-5p mRNA表达水平升高,CHI3L1 mRNA及蛋白水平均降低,鼻黏膜组织炎症反应减轻。双荧光素酶实验证实LncRNA PVT1通过竞争性结合miR-149-5p,上调miR-149-5p靶基因CHI3L1的表达。结论在AR模型小鼠中异常高表达的LncRNA PVT1通过发挥竞争性内源RNA作用抑制miR-149-5p表达而上调CHI3L1的表达,引发小鼠鼻黏膜组织的炎性症状并促进过敏反应。

LncRNA MIR205HG靶向miR-299-3p调控肺癌细胞增殖、凋亡的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA MIR205HG(LncRNA MIR205HG)与微小RNA-299-3p(miR-299-3p)的相互关系及其影响肺癌细胞增殖、凋亡的分子机制。方法 检测肺癌组织和细胞中MIR205HG、miR-299-3p的表达。H1299细胞分为si-MIR205HG组、si-NC组、miR-299-3p组、miR-NC组、si-MIR205HG+anti-miR-299-3p组、si-MIR205HG+anti-miR-NC组。MIR205HG与miR-299-3p的相互作用;检测增殖、凋亡及蛋白表达。结果 肺癌组织和细胞系中MIR205HG表达水平升高(P<0.05),miR-299-3p表达水平降低(P<0.05)。MIR205HG能与miR-299-3p特异性结合,可调控miR-299-3p的表达。干扰MIR205HG表达或miR-299-3p过表达后可降低肺癌细胞增殖能力,促进细胞凋亡,且CyclinD1、p21表达降低,Bcl-2、Bax表达增高(P<0.05)。抑制miR-299-3p可逆转干扰MIR205HG表达对肺癌细胞增殖及凋亡的作用。结论 干扰MIR205HG表达可抑制肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,其作用机制与负向调控miR-299-3p有关。

miR-149-3p靶向FOXM1抑制人胃癌细胞SGC-7901生长和迁移

目的:探究miR-149-3p靶向FOXM1抑制人胃癌细胞SGC-7901生长和迁移的机制。方法:体外培养人胃癌细胞SGC-7901,并分为:Ctrl组、miR-NC组、miR-149-3p mimic组、pLV-FOXM1组和pLV-FOXM1+miR-149-3p mimic组;使用RT-PCR分别检测正常组织、原位肿瘤组织和转移后肿瘤组织中miR-149-3p和FOXM1 mRNA的表达水平并分析miR-149-3p与FOXM1的线性关系;使用miR-NC、miR-149-3p mimic转染细胞后检测miR-149-3p和FOXM1 mRNA表达水平;双荧光素酶检测miR-149-3p与FOXM1的靶向关系;CCK-8检测细胞增殖情况,体外侵袭实验检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移情况;蛋白质印迹检测N-cadherin、E-cadherin、MMP-2、MMP-9、FOXM1、PCNA、p21的表达水平。结果:相比原位肿瘤组织和转移后肿瘤组织,正常组织中FOXM1 mRNA表达较低、miR-149-3p表达较高。荧光素酶报告实验表明miR-149-3p序列上有FOXM1的结合位点。相比空白对照组(Ctrl),miR-149-3p mimic组细胞增长受到显著抑制,FOXM1、P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05);单位面积细胞侵袭数目、细胞迁移能力、PCNA、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。相比Ctrl组,pLV-FOXM1组细胞生长受到促进,FOXM1、P21、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P<0.05);单位面积细胞侵袭数目、细胞迁移能力、PCNA、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。相比pLV-FOXM1组,miR-149-3p+pLV-FOXM1组细胞增长受到显著抑制,FOXM1、P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05);单位面积细胞侵袭数目、细胞迁移能力、PCNA、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:miR-149-3p可以靶向FOXM1抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长侵袭和迁移,其机制与调控细胞生长侵袭和迁移的蛋白有关。

miR-149-3p通过靶向S100A4抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-149-3p通过靶向S100A4抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭行为及其作用机制。方法:qP CR检测miR-149-3p的过表达情况; CCK-8细胞增殖实验检测miR-149-3p对膀胱癌细胞的增殖能力的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测miR-149-3p对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因检测miR-149-3p与S100A4的相互作用; Transwell侵袭实验检测S100A4的异位表达逆转miR-149-3p的抗肿瘤作用。结果:miR-149-3p过表达显著抑制培养的膀胱癌细胞48小时的生长能力;过表达miR-149-3p后在膀胱癌细胞中具有抗迁移和侵袭作用; miR-149-3p能与S100A4的3'UTR特异性结合,调控S100A4的表达活性; S100A4的过表达可以逆转由miR-149-3p引起的细胞迁移和侵袭能力的抑制。结论:miR-149-3p在膀胱癌的发生发展过程中起重要作用,可以通过靶向调节S100A4的表达影响膀胱癌细胞的增殖和迁移。