miR-27a通过TLR4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎滑膜细胞生物学行为的影响

目的:探讨miR-27a通过Toll样受体(TLR)4/NF-κB信号通路对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞生物学行为的影响。方法:选择行膝关节置换术的30例RA患者(RA组)和同期因创伤急诊截肢的18例患者(对照组)的滑膜组织,采用qRT-PCR法检测miR-27a的表达。将RA成纤维样滑膜细胞MH7A分为4组:空白对照组,不进行任何处理;TNF-α组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理24 h;TNF-α+miR-NC组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-NC;TNF-α+miR-27a mimic组,加入终浓度为20μg/L的TNF-α处理后转染miR-27a mimic,采用qRT-PCR法检测组织或细胞中miR-27a的表达量,CCK-8法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,双荧光素酶报告实验验证TLR4 mRNA与miR-27a的靶向关系,Western blot法检测细胞中TLR4、NF-κB、磷酸化TLR4(p-TLR4)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白的表达情况。结果:对照组和RA组滑膜组织中miR-27a的表达量分别为(1.00±0.08)和(0.36±0.05),RA组低于对照组(P<0.001)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞中miR-27a表达量下降,TNF-α+miR-27a mimic组miR-27a表达量升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞中miR-27a表达量升高(P<0.05)。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力增强,细胞凋亡率降低;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimic组细胞增殖、克隆形成、侵袭和迁移能力减弱,细胞凋亡率升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实TLR4是miR-27a的靶基因。与空白对照组比较,TNF-α组和TNF-α+miR-NC组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB升高;与TNF-α组和TNF-α+miR-NC组比较,TNF-α+miR-27a mimics组p-TLR4/TLR4、p-NF-κB/NF-κB降低(P<0.05)。结论:miR-27a可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低RA成纤维样滑膜细胞的增殖、侵袭和迁移能力,促进其凋亡。

颈动脉超声高分辨MRI联合血清miR-27a预测颈动脉支架植入术后抗血小板治疗患者预后的价值

目的探讨颈动脉超声、高分辨MRI参数联合血清miR-27a预测颈动脉狭窄患者经颈动脉支架植入术后抗血小板治疗预后的价值。方法纳入2021-01—2022-12于大庆龙南医院接受颈动脉支架植入术及抗血小板治疗的110例颈动脉狭窄患者。术前采用彩色多普勒超声诊断仪对所有研究对象进行检查,测定并记录平均血流速度(MFV)、舒张末期最低血流速度(EDV)、最大血流速度(PSV)及颈动脉狭窄率,采用高分辨MRI检查并记录患者的斑块偏心指数和斑块强化程度,应用荧光定量PCR检测血清miR-27a水平。患者出院后随访1 a,观察预后情况,分为预后良好组和预后不良组。结果110例患者中预后良好者83例,预后不良者27例。预后良好组和预后不良组患者性别、年龄、身高、体质量、吸烟史、饮酒史情况比较均无统计学差异(P>0.05)。预后良好组患者的PSV、斑块强化程度和血清miR-27a水平与预后不良组相比显著降低(P<0.05)。颈动脉狭窄患者MFV和PSV与血清miR-27a水平呈显著正相关(P<0.05),颈动脉狭窄患者的MFV、EDV、PSV、斑块偏心指数、斑块强化程度和血清miR-27a水平均与颈动脉狭窄率呈显著正相关(P<0.05)。PSV、斑块强化程度和血清miR-27a水平预测颈动脉狭窄患者预后的AUC分别为0.764(95%CI:0.662~0.866)、0.649(95%CI:0.519~0.779)和0.832(95%CI:0.748~0.916)。PSV、斑块强化程度联合血清miR-27a预测颈动脉狭窄患者预后的AUC为0.895(95%CI:0.830~0.960)。结论颈动脉超声、高分辨MRI参数联合血清miR-27a对颈动脉狭窄术后患者的预后预测具有一定价值。

NEAT1、miR-27a-3p在阿尔茨海默病患者血清和脑脊液中的表达关系

目的:探究长链非编码RNA核富含丰富的转录本1(long chain non-coding RNA nuclear-enriched abundant transcript 1, LncRNA NEAT1)、miR-27a-3p在阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)患者血清和脑脊液中的表达关系及意义。方法:选择2019年10月至2021年9月天津市第五中心医院神经内科收治的AD患者66例作为病例组,根据临床痴呆评定量表(clinical dementia rating, CDR)评分分为轻度组(≤1分,n=41)与中重度组(>1分,n=25);另取同期门诊其他就诊患者血清和脑脊液标本66例志愿者作为对照组。收集所有受试者的一般资料并评估认知程度,采用实时荧光定量PCR检测血清和脑脊液miR-27a-3p、NEAT1表达水平,酶联免疫吸附试验检测脑脊液β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1,BACE1)、β淀粉样蛋白(amyloid β,Aβ)40和Aβ42水平,采用Spearman法分析血清miR-27a-3p、NEAT1水平与简易精神状态检测量表的相关性,采用Pearson法分析血清miR-27a-3p、NEAT1水平与Aβ沉积平均标准摄取值比率(standardized uptake value ratio, SUVR)及脑脊液miR-27a-3p、NEAT1、BACE1、Aβ42、Aβ40水平的相关性。结果:MMSE评分[21 (17,25),9(7,11)vs. 27 (21,34)]、MoCA评分[17 (12,21),10 (7,13)vs. 27 (21,31)]、血清miR-27a-3p水平(0.55±0.13,0.46±0.06 vs. 0.97±0.22)、脑脊液miR-27a-3p(0.48±0.10,0.35±0.10 vs. 1.03±0.31)、Aβ42水平[(303.55±36.77) ng/L,(231.45±34.14) ng/L vs.(499.99±53.63) ng/L]及Aβ42/Aβ40比值(0.030±0.008, 0.022±0.007 vs. 0.048±0.010)轻度组、中重度组AD患者均低于对照组(P均<0.05),且中重度组AD患者较轻度组低(P均<0.05);血清NEAT1水平(2.31±0.64,3.13±0.76 vs. 1.05±0.20)、SUVR(1.50±0.29,1.76±0.52 vs. 0.74±0.15)及脑脊液NEAT1(3.51±1.24,4.30±1.65 vs. 1.01±0.23)、BACE1水平[(55.78±5.98)μg/L,(72.32±16.08)μg/L vs.(21.39±3.73)μg/L]轻度组、中重度组AD患者均高于对照组(P均<0.05),且中重度组AD患者较轻度组高(P均<0.05)。AD患者血清NEAT1水平与SUVR及脑脊液NEAT1、BACE1呈正相关(r=0.350,0.606,0.341,P<0.05),与MMSE评分、MoCA评分呈负相关(r=-0.473,-0.482,P均<0.05);血清miR-27a-3p水平与脑脊液miR-27a-3p水平、MMSE评分、MoCA评分呈正相关(r=0.695,0.424,0.412,P<0.05),与SUVR及脑脊液BACE1水平呈负相关(r=-0.521、-0.447,P均<0.05)。结论:NEAT1、miR-27a-3p在AD患者血清及脑脊液中表达趋势具有一致性,NEAT1水平均升高,miR-27a-3p水平均降低,二者水平呈负相关,与AD患者脑中Aβ沉积程度有关,并参与AD的病情进展。

bta-miR-27a-5p的生物信息学分析及其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

为了探究bta-miR-27a-5p的生物学特性及其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,试验利用miRBase数据库对不同物种间miR-27a-5p的保守性进行分析,并构建了miR-27a-5p的系统进化树;利用TargetScan和miRWalk在线网站预测bta-miR-27a-5p的靶基因,并对靶基因进行GO功能注释和KEGG信号通路分析;利用实时荧光定量PCR方法检测在不同月龄夏南牛不同器官中bta-miR-27a-5p基因的相对表达量;最后通过实时荧光定量PCR方法、Western-blot检测、三酰甘油浓度测定和油红O染色探究过表达bta-miR-27a-5p后对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果表明:不同物种miR-27a-5p的成熟序列保守性较高;牛miR-27a-5p基因与山羊的亲缘关系最近,与非洲爪蟾的亲缘关系最远;bta-miR-27a-5p靶基因主要在细胞过程、生物过程、细胞、细胞部分、结合等GO条目上富集,并富集在胰岛素抵抗、细胞衰老、脂肪细胞因子等信号通路中;bta-miR-27a-5p基因可在夏南牛的多个器官中表达,且12月龄夏南牛脂肪组织中的相对表达量均显著低于0月龄和24月龄(P<0.05);过表达bta-miR-27a-5p基因可显著或极显著抑制C/EBPα、PPARγ和FABP4基因和蛋白质表达(P<0.05或P<0.01),并显著或极显著降低3T3-L1前脂肪细胞内脂滴和三酰甘油浓度(P<0.05或P<0.01)。说明bta-miR-27a-5p在不同物种间高度保守,在不同月龄夏南牛脂肪组织中显著差异表达,并且能抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,bta-miR-27a-5p基因可能是调控牛脂肪生成的候选miRNA。

miR-27a靶向调控SFRP1对结直肠癌生物学行为的影响

目的探讨miR-27a在结直肠癌中的表达,并分析其靶向调控分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对人结直肠癌细胞HCT116生物学行为的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达情况;Western blot检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中SFRP1蛋白表达水平;运用TargetScan预测软件及双荧光素酶报告基因实验检测miR-27a对SFRP1的靶向调控作用;将miR27a模拟物(miR-27a mimic)、miR-27a抑制物(miR-27a inhibitor)及阴性对照(NC)转染至HCT116细胞中;采用qRT-PCR测定各组细胞中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达水平;运用四唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验评估各组细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测各组细胞中SFRP1、Wnt/β-catenin信号通路中的关键因子Wnt4和β-catenin的蛋白表达水平。结果与癌旁正常组织相比,miR-27a在结直肠癌组织中高表达,而SFRP1在结直肠癌组织中低表达(P<0.05);TargetScan预测软件和双荧光素酶报告基因实验表明miR-27a靶向调控SFRP1;与NC组相比,miR-27a mimic组miR-27a表达水平升高,细胞增殖、侵袭和迁移能力增强,SFRP1蛋白表达降低,Wnt4和β-catenin蛋白表达增加(P<0.05);与miR-27a mimic组相比,miR-27a inhibitor组细胞内miR-27a表达下降,细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,SFRP1蛋白表达增加,Wnt4和β-catenin蛋白表达降低(P<0.05)。结论miR-27a能够靶向调控SFRP1,通过上调SFRP1,阻断下游的Wnt/β-catenin信号通路,抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移等生物学过程,从而发挥抑癌作用。为临床治疗提供了新方向。

miR-23a/27a/24基因簇g.65307469G>A突变对大白猪产仔数和启动子活性的影响

[目的]本文旨在研究大白猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点多态性与产仔数性状的关系及潜在机制,为母猪繁殖性状的分子育种提供新的潜在遗传标记。[方法]利用混池测序技术筛选猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点,直接测序法对大白猪群体(n=345)miR-23a/27a/24基因簇突变位点进行基因分型,计算遗传多样性;用线性模型对突变位点多态性与产仔数性状进行关联性分析;构建不同等位基因类型启动子载体,转染猪卵巢颗粒细胞,通过检测荧光素酶活性分析突变对启动子活性的影响;用生物信息学方法预测不同等位基因类型启动子潜在结合的差异转录因子,用荧光素酶活性分析差异转录因子对不同等位基因类型启动子活性的影响。[结果]在猪miR-23a/27a/24基因簇启动子-648 nt(Chr.2,65307469 nt)处发现1个新的G/A突变,命名为g.65307469G>A。在大白猪群体中发现3种基因型(GG、GA和AA),其中GG为优势基因型(89.57%),G等位基因为优势等位基因(94.64%)。关联性分析发现,GA基因型母猪的总产仔数(TNB)比GG基因型母猪每胎高0.56头(P<0.05)。荧光素酶活性分析结果显示G等位基因类型启动子活性显著高于A等位基因类型(P<0.05)。在不同等位基因类型启动子间发现1个潜在结合的差异转录因子死亡相关蛋白1(THAP1),成功构建猪THAP1基因过表达载体,共转试验结果显示转录因子THAP1对不同等位基因类型启动子活性均无显著影响(P>0.05)。[结论]miR-23a、miR-27a和miR-24是大白猪产仔数性状的候选基因,g.65307469G>A突变抑制miR-23a/27a/24基因簇的启动子活性,但与转录因子THAP1无关。

慢性间歇低氧和复氧对大鼠胰岛素抵抗及骨骼肌miR-27a-3p/PPARγ/IRS1/PI3K/AKT表达的影响

目的探讨慢性间歇低氧(CIH)和复氧对大鼠胰岛素抵抗(IR)及骨骼肌miR-27a-3p/PPARγ/IRS1/PI3K/AKT表达的影响。方法从基因表达数据库(GEO)中下载CIH条件下miRNA数据集,运用DESeq2筛选差异表达最显著的miRNA作为研究对象,使用miRNA walk网站对差异miRNA的靶基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,并Cytoscape软件构建miRNA-mRNA-pathway调控网络。将48只雄性SD大鼠随机分为对照(CON)组和CIH组,24只/组,CON组常氧环境饲养12周,CIH组先予CIH环境饲养8周,再恢复常氧饲养4周。两组均在基线、8周、12周时留取血样和骨骼肌组织,检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平,HE染色观察骨骼肌病理改变并计算肌纤维横截面积,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blotting法检测骨骼肌miR-27a-3p、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、胰岛素受体1(IRS1)、p-IRS1、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸激酶B(AKT)、p-AKT表达,比较组间差异。结果生信分析发现,GEO数据库未筛选出CIH状态下肌肉组织相关的miRNA数据集,仅得到肾脏组织差异表达miRNA的GSE202480数据集,从CON组和CIH组样本中筛选出165个差异表达的miRNA,选最显著miR-27a-3p作为研究对象。GO和KEGG分析显示,差异miRNA的靶基因主要参与肌肉调节和胰岛素信号传导。miRNA-mRNA-pathway调控网络显示miR-27a-3p是PPAR信号通路和PI3K/AKT信号通路的关键调控因子。动物实验发现,基线时,两组各项观察指标均无统计学意义(P>0.05);8周时,与CON组相比,CIH组FBG、FINS、HOMA-IR、PPARγ显著升高(P<0.05或P<0.01),肌纤维排列疏松,肌纤维横截面积、miR-27a-3p、p-IRS1/IRS1、PI3K、p-AKT/AKT显著降低(P<0.05或P<0.01),GLUT4表达呈升高趋势但无统计学意义(P>0.05);12周时,两组各项观察指标均无统计学意义(P>0.05)。结论CIH可导致大鼠IR增加和骨骼肌病理改变,而复氧可以逆转;CIH可致骨骼肌miR-27a-3p表达下调,PPARγ表达上调,IRS1/PI3K/AKT胰岛素信号转导受到抑制,而复氧干预可以逆转;miR-27a-3p可能通过调控PPARγ/IRS1/PI3K/AKT信号通路参与了CIH所致的IR。

miR-27a-3p激活MAPK信号通路促进人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖

背景:目前多项研究证实了丝裂原活化蛋白激酶信号通路参与了细胞的增殖过程,且miRNA参与增生性瘢痕的发生发展,因此深入探讨了miR-27a-3p和丝裂原活化蛋白激酶信号通路在病理性瘢痕形成中的作用。目的:探究miR-27a-3p通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法:收集皮肤标本并分别分离出原代成纤维细胞,倒置显微镜观察原代细胞,免疫荧光予以验证;采用qRT-PCR检测miR-27a-3p在组织中的相对表达水平;利用数据库预测miR-27a-3p的靶基因,再将预测的靶基因进行基因本体功能富集分析及京都基因与基因组百科全书生物通路富集分析;设置分组为:空白对照组、阴性对照组、miR-27a-3p过表达组、miR-27a-3p抑制组、miR-27a-3p过表达+p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂组、miR-27a-3p过表达+细胞外信号调节蛋白激酶抑制剂组、miR-27a-3p过表达+c-Jun氨基末端激酶抑制剂组,Western blot检测细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38激酶总量及其磷酸化水平,采用CCK-8法和EdU检测细胞增殖情况。结果与结论:①与正常皮肤成纤维细胞相比,增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性更强(P<0.05),增殖速度也更快(P<0.001);②与正常皮肤相比,miR-27a-3p在增生性瘢痕中呈高表达(P<0.001);③与阴性对照组相比,过表达miR-27a-3p能促进细胞的增殖活性(P<0.001)和增殖水平(P<0.001);④与阴性对照组相比,敲低miR-27a-3p能抑制细胞的增殖活性(P<0.05)和增殖水平(P<0.001);⑤与阴性对照组相比,过表达miR-27a-3p促进细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化水平(P<0.05);与阴性对照组相比,敲减miR-27a-3p能抑制细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化水平(P<0.05);⑥与miR-27a-3p过表达组相比,细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的特异性抑制剂可逆转miR-27a-3p对成纤维细胞的增殖活性(P<0.01)和增殖水平(P<0.001);⑦提示miR-27a-3p通过激活丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。

丹参酮ⅡA通过调控miR-27a抑制肝星状细胞活化的机制研究

目的探讨丹参酮ⅡA(TⅡA)通过调控微小RNA-27a(miR-27a)抑制人肝星状细胞(LX2细胞)活化的机制。方法使用10μg/L转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导LX2细胞活化;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-27a的表达;瞬时转染miR-27a的模拟物和抑制剂增强或抑制miR-27a的表达,细胞计数(CCK-8)法检测细胞增殖情况,Western blot法检测胶原蛋白Iα2(COL1A2)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(P-GSK3β)、分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)的表达;用不同浓度的TⅡA干预LX2细胞,CCK-8法检测细胞增殖情况,RT-qPCR检测miR-27a的表达,Western blot法检测COL1A2、α-SMA、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、P-GSK3β、SFRP1和细胞周期蛋白D1(CCND1)的表达。结果miR-27a在TGF-β1干预的LX2细胞中表达增加(P<0.05)。LX2细胞中miR-27a被敲低48 h和72 h后,细胞增殖显著被抑制(P<0.05),抑制miR-27a表达减少了LX2细胞中COL1A2、α-SMA和P-GSK3β蛋白的表达,却增加了SFRP1蛋白的表达(P<0.05),过表达miR-27a则呈现相反的结果(P<0.05)。TⅡA能抑制LX2细胞的增殖,其显著降低了miR-27a的表达,且下调了COL1A2、α-SMA、P-GSK3β、CCND1蛋白的表达并上调了SFRP1蛋白的表达(P<0.05)。结论miR-27a在活化的LX2细胞中表达升高,并能促进LX2细胞的增殖和活化。TⅡA通过下调miR-27a抑制Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路激活,进而抑制LX2细胞活化。

miR-27a、miR-101联合c-erb-B2检测在胃癌术后复发中的预测价值

目的探究miR-27a、miR-101联合c-erb-B2检测在胃癌术后复发中的预测价值。方法选取2021年12月至2022年12月芜湖市第二人民医院收治的152例原发性胃癌患者为研究对象,均进行手术治疗。选取152例胃癌患者的胃癌组织和距肿瘤边缘4 cm的癌旁组织,比较胃癌组织和癌旁组织miR-27a、miR-101和c-erb-B2表达;术后随访1年,根据术后复发情况分为复发组(n=27)和未复发组(n=125),比较两组不同临床特征和miR-27a、miR-101、c-erb-B2表达;分析胃癌术后复发的危险因素;采用ROC曲线评估miR-27a、miR-101、c-erb-B2表达单一及联合对胃癌患者术后复发的预测价值。结果胃癌组织miR-27a表达水平高于癌旁组织,miR-101表达水平低于癌旁组织,c-erb-B2阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);复发组和未复发组性别、年龄、肿瘤原发部位、分化程度比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组肿瘤直径、TNM分期、浆膜浸润、淋巴结转移、c-erb-B2、miR-101和miR-27a表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);二元Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径≥5 cm、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移、有浆膜浸润、c-erb-B2表达阳性、miR-101低水平表达、miR-27a高水平表达均是影响胃癌患者复发的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线显示,miR-27a、miR-101、c-erb-B2联合检测预测胃癌患者复发的AUC为0.906,高于三者单独检测的0.729、0.803、0.834。结论miR-27a水平升高、miR-101水平下降以及c-erb-B2表达阳性均是胃癌术后复发的危险因素,三者联合检测在预测胃癌术后复发中具有良好的应用价值,可为临床诊治提供参考依据。

miR-27a和miR-128在种植体周围炎患者龈沟液中的水平及其与骨吸收的关系

目的探讨微小RNA(miR)-27a和miR-128在种植体周围炎患者龈沟液中的水平及其与骨吸收的关系。方法将2018年1月至2021年12月于上海长征医院口腔科完成牙种植修复术的患者136例纳入研究,根据种植牙状况分为健康种植体患者66例(健康组)和种植体周围炎患者70例(炎症组)。另外,选取同期进行牙龈健康检查的志愿者70例作为对照组。收集所有纳入研究者探诊深度(PD)、龈沟出血指数(SBI)、龈沟液量、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-4水平的数据。采用口腔锥形束CT(CBCT)进行骨吸收测定。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测龈沟液中miR-27a和miR-128水平。采用Pearson相关法分析种植体周围炎患者龈沟液中miR-27a和miR-128水平及二者与炎症因子、骨吸收量的相关性。结果与对照组相比,炎症组和健康组龈沟液中PD、SBI、龈沟液量、骨吸收量,TNF-α、IL-6、miR-128水平升高,IL-4、miR-27a水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与健康组相比,炎症组龈沟液中PD、SBI、龈沟液量、骨吸收量、TNF-α、IL-6、miR-128水平升高,IL-4、miR-27a水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,种植体周围炎患者龈沟液中miR-27a和miR-128水平呈负相关(r=-0.365,P=0.002)。种植体周围炎患者龈沟液中miR-27a水平与PD、SBI、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平呈负相关(P<0.05),与IL-4水平呈正相关(P<0.05);miR-128水平与PD、SBI、骨吸收量、TNF-α、IL-6水平呈正相关(P<0.05),与IL-4水平呈负相关(P<0.05)。结论miR-128在种植体周围炎患者龈沟液中呈高水平,miR-27a呈低水平,二者与骨吸收相关。

miR-27a-3p靶向Rnd3对氧糖剥夺/复氧诱导的神经细胞凋亡的影响

目的探讨miR-27a-3p调控Rho家族GTP酶3(Rnd3)在氧糖剥夺/复氧(OGD/R)神经细胞凋亡中的作用及机制。方法体外培养大鼠PC12神经细胞,氧糖剥夺2 h后分别复氧3、6、9和12 h,检测各时刻细胞活力、miR-27a-3p和Rnd3 mRNA的表达筛选最适复氧时间点。采用慢病毒分别转染miR-27a-3p Mimic、miR-27a-3p Inhibitor及二者的阴性对照、转染shRnd3及其阴性对照、或共转染shRnd3和miR-27a-3p Inhibitor入细胞后,CCK-8法检测细胞的活力;流式细胞术检测细胞的凋亡率;RT-qPCR检测miR-27a-3p和Rnd3 mRNA的表达;Western blot检测凋亡相关蛋白和Rnd3蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a-3p和Rnd3的靶向关系。结果上调miR-27a-3p提高了细胞活力,降低了细胞的总凋亡率、抑制了促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3(C-caspase-3)、Bax和促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,差异有统计学意义(P<0.05);下调miR-27a-3p则出现相反的结果。双荧光素酶报告基因实验显示Rnd3是miR-27a-3p的靶基因。下调Rnd3提高了细胞活力,降低了细胞的总凋亡率、抑制了促凋亡蛋白C-caspase-3、Bax和促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。然而,miR-27a-3p Inhibitor逆转了shRnd3的保护作用。结论miR-27a-3p通过靶向抑制Rnd3抑制细胞凋亡减轻PC12神经细胞的OGD/R损伤。

miR-27a通过Wnt/β-catenin通路对骨质疏松小鼠颅骨缺损的修复效果及机制研究

目的:探讨miR-27a对骨质疏松小鼠颅骨缺损的修复效果以及对Wnt/β-catenin通路的调节作用。方法:40只小鼠建立骨质疏松颅骨缺损模型,随机分为模型组、miR-27a NC组、miR-27a mimic组和miR-27a inhibitor组,另外10只骨质疏松小鼠作为对照组。对照组和模型组小鼠尾静脉注射10μL生理盐水,其余组小鼠分别尾静脉注射10μL miR-27a阴性对照质粒、miR-27a过表达慢病毒质粒和miR-27a沉默慢病毒质粒,1次/周,连续4周。micro-CT检测颅骨愈合情况,ELISA检测血清中碱性磷酸酶(ALP)、钙和磷水平,qRT-PCR法和蛋白印迹法检测骨钙素(OCN)和骨桥蛋白(OPN)基因和蛋白表达量,蛋白印迹法检测细胞核和细胞质中β-catenin蛋白表达情况。结果:与对照组比较,模型组小鼠ALP活性、钙和磷水平,OCN和OPN mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05);与miR-27a NC组比较,miR-27a mimic组小鼠BV/TV、骨小梁数量以及骨小梁厚度,ALP活性、钙和磷水平,OCN和OPN基因和蛋白水平均升高,miR-27a inhibitor组小鼠BV/TV、骨小梁数量以及骨小梁厚度,ALP活性、钙和磷水平,OCN和OPN基因和蛋白水平均降低(P<0.05);与对照组比较,模型组细胞质中β-catenin蛋白表达高于细胞核(P<0.05);与miR-27a NC组比较,miR-27a mimic组细胞质中β-catenin蛋白表达低于细胞核,而miR-27a inhibitor组细胞质中β-catenin蛋白表达高于细胞核(P<0.05)。结论:miR-27a可诱导骨质疏松小鼠颅骨缺损内新骨形成,其可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路发挥作用。

LRTN4RL1-AS通过miR-27a-3p靶向PPARγ调节奶牛乳腺细胞乳脂合成

旨在探究lncRNA-LRTN4RL1-AS/miR-27a-3p/PPARγ轴在奶牛乳脂合成中的作用及其调控机制。本研究以奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)为试验对象,对处理组与对照组进行3个生物学重复,通过实时荧光定量(real time quantitative PCR,RT-qPCR)、WB(Western blot)、油红O染色和甘油三酯检测、双荧光素酶报告等技术检测lncRNA-LRTN4RL1-AS对BMECs中甘油三酯积累及脂质合成相关基因表达量的影响,验证LRTN4RL1-AS-miR-27a-3p-PPARγ存在内源竞争RNA(competing endogenous RNAs,ceRNA)的靶向关系。结果表明,LRTN4RL1-AS主要在细胞质中表达,干扰LRTN4RL1-AS后显著抑制了BMECs的脂滴形成和甘油三酯积累(P<0.05),显著下调脂质合成相关基因CEBPα(P<0.01)、CEBPβ(P<0.01)和PPARγ(P<0.05)表达,且显著上调脂质分解基因HSL表达(P<0.05);双荧光素酶报告试验发现,转染mimics-miR-27a-3p,LRTN4RL1-AS突变型组荧光素酶活性显著高于LRTN4RL1-AS野生型组(P<0.01),证实LRTN4RL1-AS与miR-27a-3p之间存在靶向结合关系;共转染试验发现,inhibitor-miR-27a-3p逆转了干扰LRTN4RL1-AS对乳脂合成的抑制作用(P<0.05),同时降低了si-LRTN4RL1-AS对PPARγ基因的表达抑制。结果显示,LRTN4RL1-AS通过竞争性结合miR-27a-3p调控PPARγ表达来调节BMECs乳脂合成。

猪miR-23a-27a-24簇启动子预测及活性分析

目的 本研究旨在对猪miR-23a-27a-24簇(miR-23a-27a-24 cluster)的潜在启动子区域进行预测和分析,为进一步探索miR-23a-27a-24基因对猪转录调控机制的研究奠定基础。方法 利于生物信息学分析猪miR-23a-27a-24簇的启动子区域、CpG岛及其潜在的转录因子;利用截短突变和PCR技术克隆得到5个逐级缺失的miR-23a-27a-24基因启动子片段,构建双荧光素酶报告载体,通过检测各载体的双荧光素酶活性获得miR-23a-27a-24基因的核心启动子区域。结果 pGL3-cMiR启动子在猪miR-23a-27a-24簇上游341bp至994bp区荧光素酶活性最强,为pGL3-basic空载体活性的5.02倍(P<0.05),视为miR-23a-27a-24簇核心启动区。生物信息学分析表明:猪miR-23a-27a-24簇启动子区不含CpG岛,其核心启动子区可能存在SP1、VDR、MAZ、YY1、E2F1和ELF1六种潜在的转录因子结合位点。结论 本研究构建并确定了猪miR-23a-27a-24簇核心启动子区域,可为今后开展猪miR-23a-27a-24簇的转录调控机制奠定基础。

血清miR-27a-3p与miR-141-3p在老年高血压性脑出血患者中的表达及其与预后的关系

目的探究血清miR-27a-3p与miR-141-3p在老年高血压性脑出血患者中的表达及其与预后的关系。方法选取山东省立第三医院2020年4月~2021年9月收治的124例老年高血压性脑出血患者作为观察组,按照格拉斯哥昏迷(GCS)评分将患者分为轻度组(GCS 13~14分,55例)、中度组(GCS 9~12分,46例)及重度组(GCS 3~8分,23例),根据出院后3个月的格拉斯哥预后(GOS)评分将观察组分为预后良好组(GOS>4分,65例)和预后不良组(GOS≤4分,59例)。另选取同期在本院接受体检的55例健康志愿者作为对照组。对比观察组与对照组的miR-27a-3p、miR-141-3p、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素1β(IL-1β)水平。采用Pearson相关系数分析miR-27a-3p、miR-141-3p与TNF-α、VEGF、IL-1β之间的相关性;采用logistic多因素回归分析影响老年高血压性脑出血患者预后的不良因素。结果观察组miR-27a-3p、miR-141-3p水平低于对照组,TNF-α、VEGF及IL-1β水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重度组miR-27a-3p、miR-141-3p水平低于轻度组和中度组(P<0.05),TNF-α、VEGF及IL-1β水平高于轻度组和中度组(P<0.05);中度组miR-27a-3p、miR-141-3p水平低于轻度组,TNF-α、VEGF及IL-1β高于轻度组(P<0.05);观察组miR-27a-3p与miR-141-3p呈正相关(P<0.05),miR-27a-3p与TNF-α、VEGF及IL-1β呈负相关(P<0.05),miR-141-3p与TNF-α、VEGF及IL-1β呈负相关(P<0.05);logistic回归分析显示,小脑及脑干出血是影响老年高血压性脑出血患者预后的独立危险因素(P<0.05),miR-27a-3p>0.165、miR-141-3p>1.035是老年高血压性脑出血患者预后的保护性因素(P<0.05)。结论血清miR-27a-3p与miR-141-3p在老年高血压性脑出血患者中的水平较低,对患者病情判断以及预后评估具有重要的临床意义。

miR-27a低表达对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖的影响

目的 研究miR-27a低表达对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖的影响。方法 构建miR-27a低表达HEC-1-A细胞株。细胞实验分为空白对照组(HEC-1-A不做任何处理)、NC-miR组(转染miR-27a空载体)及miR-27a inhibitor组(转染miR-27a抑制剂)。qRT-PCR法检测各组细胞miR-27a表达情况;MTT比色法和平板克隆技术检测各组细胞增殖能力。结果 成功构建miR-27a低表达HEC-1-A细胞株。miR-27a inhibitor组miR-27a水平及细胞增殖能力均低于NC-miR组及空白对照组(P<0.05)。结论 miR-27a低表达抑制子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖能力。

化瘀理肺方对肺纤维化大鼠肺组织miR-27a与α-SMA表达的影响

目的:探究化瘀理肺方对博莱霉素诱导大鼠肺纤维的抑制作用与对miR-27a、α-SMA表达的影响。方法:将Wistar大鼠随机分成正常组、模型组和化瘀理肺方治疗组各10只。采用注射博莱霉素构建肺纤维化大鼠模型。化瘀理肺方治疗组在造模7 d后给与化瘀理肺方灌胃治疗7 d。于造模后第14天分组处死大鼠。取右肺进行HE染色,Masson染色和免疫组化观察α-SMA的表达。通过qRT-PCR检测miR-27a的表达,同时采用双荧光素酶报告基因技术检测miR-27a与ACTA2(α-SMA蛋白编码基因)的结合位点。结果:与模型组比较,化瘀理肺方治疗组大鼠肺组织的病理形态学变化明显减轻,肺泡炎及纤维化明显降低,肺组织中胶原沉积明显减少,α-SMA蛋白表达明显降低。同时,化瘀理肺方治疗组肺组织miR-27a表达显著上升,双荧光素酶报告基因证实miR-27a与ACTA2基因存在结合位点。结论:化瘀理肺方可以抑制博莱霉素诱导大鼠肺纤维化,其机制可能与促进miR-27a表达有关。

血清miR-222、miR-874-3p和miR-27a联合诊断多囊卵巢综合征的应用价值

目的 探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清miR-222、miR-874-3p和miR-27a水平,并评估其在PCOS中的潜在诊断价值。方法 选取PCOS患者98例为PCOS组,因单纯输卵管不孕或男性因素不孕的妇女98例为对照组。根据体质指数(BMI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和游离雄性激素指数(FAI),将PCOS组分为正常体质量组、超重组和肥胖组;非胰岛素抵抗组和胰岛素抵抗组;高雄激素组和低雄激素组。qRT-PCR检测各组miR-222、miR-874-3p和miR-27a水平,ROC曲线分析miR-222、miR-874-3p和miR-27a在PCOS中的诊断价值。结果 PCOS组BMI、HOMA-IR和FAI及血清miR-222、miR-874-3p、miR-27a均高于对照组(P<0.05)。超重组和肥胖组miR-27a高于正常体质量组,胰岛素抵抗组miR-222和miR-27a高于非胰岛素抵抗组,高雄激素组miR-874-3p高于低雄激素组(P<0.05)。miR-222、miR-874-3p和miR-27a联合诊断PCOS诊断效能最高。结论 PCOS患者血清miR-27a、miR-222和miR-874-3p表达上调,可能与胰岛素抵抗、脂代谢和高雄激素血症有关,三者联合检测有助于PCOS的诊断。

MiR-27a靶向调节PPARγ/SIRT1/NF-κB信号通路对溃疡性结肠炎幼年小鼠肠道损伤的影响

目的探究miR-27a靶向调节PPARγ/SIRT1/NF-κB信号通路对溃疡性结肠炎(UC)幼年小鼠肠道损伤的影响。方法2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导构建UC模型,miR-27a antagomir用于在小鼠中抑制miR-27a表达。组织学和髓过氧化物酶(MPO)活性评估结肠组织损伤情况;TUNEL检测结肠组织中细胞凋亡情况;ELISA检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)含量;qRT-PCR和Western blot检测结肠组织中miR-27a和PPARγ、SIRT1、乙酰化NF-κB p65表达水平;双荧光素酶检测miR-27a和PPARγ靶向关系。结果在TNBS诱导的UC小鼠模型中,结肠炎评分及MPO活性增高(P<0.05);细胞凋亡率增高;TNF-α、IL-1β、ICAM-1和MCP-1含量增多(P<0.05);miR-27a表达水平和乙酰化NF-κB p65蛋白水平增高(P<0.05);PPARγ和SIRT1蛋白水平降低(P<0.05)。抑制miR-27a可以减轻TNBS诱导的结肠损伤(P<0.05);降低细胞凋亡率(P<0.05);抑制炎性因子的产生(P<0.05);促进PPARγ和SIRT1表达(P<0.05);抑制乙酰化NF-κB p65蛋白表达(P<0.05)。PPARγ是miR-27a的直接靶标(P<0.05)。结论抑制miR-27a可通过靶向调节PPARγ/SIRT1/NF-κB信号通路对UC幼年小鼠肠道损伤发挥保护作用。