急性缺血性脑卒中患者血浆miR let-7b-3p水平及意义

目的探讨急性缺血性脑卒中患者血浆miR let-7b-3p水平及意义。方法选取2016年5月至2019年5月间平顶山市第二人民医院收治的355例急性缺血性脑卒中患者作为研究对象,根据预后情况分为预后不良组和预后良好组。采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测患者血浆miR let-7b-3p相对表达量,并分析其与预后的关系。结果355例急性缺血性脑卒中患者出院后3个月内预后不良发生率为45.07%。预后不良组血浆let-7b-3p相对表达量低于预后良好组(P<0.05);出血转化、发病-治疗时间(ONT)、同型半胱氨酸及miR let-7b-3p与急性缺血性脑卒中患者预后密切相关。出血转化、ONT、同型半胱氨酸、let-7b-3p等联合评估急性缺血性脑卒中患者预后的曲线下面积(AUC)高于miR let-7b-3p及出血转化、ONT、同型半胱氨酸的联合(P<0.05)。结论血浆let-7b-3p与急性缺血性脑卒中患者预后关系密切,检测miR let-7b-3p表达情况有助于预测患者预后。

miRlet-7b抑制乳腺癌MCF-7细胞迁移及其机制

目的:观察miR let-7b对乳腺癌MCF-7细胞迁移能力的影响并探讨其作用机制。方法:合成miR let-7b并转染乳腺癌MCF-7细胞,以miR-control作参照。通过划痕实验观察转染前后细胞迁移能力的变化,运用PCR和蛋白质印迹法检测转染miR let-7b前后MCF-7细胞内IL-6表达水平的变化。最后通过信息生物学软件及双荧光酶素报告基因方法验证miR let-7b与IL-6结合。结果:与对照组比较,转染miR let-7b的MCF-7细胞迁移能力明显降低,而anti-miR let-7b明显促进细胞迁移。转染miR let-7b的乳腺癌MCF-7细胞中IL-6的表达水平较对照组明显降低,而转染anti-miR let-7b的细胞内IL-6的表达水平明显提高。信息生物学软件和双荧光酶素报告基因证实miR let-7b与IL-6结合。结论:miR let-7b在转录水平抑制乳腺癌MCF-7细胞IL-6的表达从而抑制MCF-7细胞的迁移。

miR-let-7b通过调控相关细胞周期蛋白影响皮肤黑色素瘤的增殖和凋亡

目的:探讨mi R-let-7b通过调控相关细胞周期蛋白影响皮肤黑色素瘤的增殖和凋亡。方法:q PCR法检测mi R-let-7b在黑色素瘤组织和细胞株中的表达情况;双荧光素酶报告基因检测mi R-let-7b与CCND1之间的相互作用;MTT增殖实验检测抑制mi R-let-7b后黑色素瘤细胞的增殖能力的变化情况;流式细胞术检测抑制mi R-let-7b后黑色素瘤细胞的凋亡行为的变化情况。结果:与癌旁正常皮肤组织相比,黑色素瘤组织中mi R-let-7b的表达水平相对上调,与其他黑色素瘤细胞株相比,A375细胞中mi R-let-7b表达最高;双荧光素酶实验证实mi R-let-7b能与CCND1的3’UTR特异性结合,可以调控CCND1的表达与活性;抑制mi R-let-7b的表达后可以抑制黑色素瘤细胞的增殖能力;同时可以促进黑色素瘤细胞的凋亡行为。结论:mi R-let-7b可以调控CCND1的表达从而影响黑色素瘤细胞的增殖和凋亡。

miRNA let-7b修饰的骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后脊髓NF-200、GFAP表达的影响

目的:通过观察miRNA let-7b修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脊髓损伤大鼠的运动功能恢复的作用,探讨miRNA let-7b在损伤脊髓修复中的作用和机制。方法:60只成年SD大鼠分为对照组、BMSCs组、miRNA组,每组20只。采用改良Allen's法制备脊髓损伤模型。造模后1周,BMSCs组行BMSCs移植,miRNA组移植miRNA let-7b慢病毒载体感染的BMSCs,对照组注射生理盐水。移植后第3天至8周,按BBB标准量表对大鼠后肢运动功能进行评分,用免疫组化方法检测脊髓中神经丝蛋白-200(NF-200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:实验时间内,各组大鼠BBB评分和脊髓NF-200表达持续升高;不同时间点BBB评分和脊髓NF-200表达以miRNA组最高,BMSCs组次之,对照组最低(P<0.05)。移植后各组脊髓GFAP表达均呈持续性增高,各时间点GFAP阳性表达面积以对照组最大,BMSCs次之,miRNA组最小(P<0.05)。结论:miRNA let-7b可能通过促进BMSCs分化为神经元样细胞、抑制脊髓损伤后反应性胶质细胞的增生及胶质瘢痕形成等机制促进损伤后的神经功能恢复。

mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药的关系

目的探讨mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药关系。方法以人非小细胞肺癌细胞系A549及其耐药株A549/DDP为研究对象,采用RT-PCR法检测mir-17-5p、mir-92a及let-7b在细胞中的表达水平,采用cck8检测其细胞存活情况,采用细胞克隆平台方法,检测转染前后细胞的增殖情况,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡情况。结果(1)A549/DDP细胞mir-17-5p的表达水平是A549细胞的2.11±0.25倍(P<0.05);A549/DDP细胞mir-92a的表达水平是A549细胞的7.40±1.05倍(P<0.05);而A549/DDP细胞let-7b的表达水平是A549细胞的(26.54±2.90)%(P<0.05);(2)A549转染mir-17-5pmimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor后对顺铂的敏感性下降(P<0.05);A549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后对顺铂的敏感性增加(P<0.05);(3)A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor后,细胞形成克隆集落数量数量多于对照组(P<0.05);而A549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后,细胞形成克隆集落数量数量少于对照组(P<0.05);(4)A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor后,细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05);而a549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后,细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。结论 Mir-17-5p、mir-92a表达水平升高,let-7b表达水平下降,可以促进肺癌细胞增殖,抑制其凋亡以及使肺癌细胞对顺铂敏感性下降。

MiR-let-7b、IMP3、HMGA2在宫颈鳞癌中的表达及临床意义

目的:探究宫颈鳞癌组织中miR-let-7b、IMP3及HMGA2的表达情况,并探讨其相关性以及临床意义。方法:选取2016年1月至2020年7月徐州市中心医院的207例宫颈组织标本为研究对象,其中包括正常宫颈(normal cervix,NC)30例、低度鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)32例、高度鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)39例、宫颈鳞癌(squamous cancer cervix,SCC)106例。采用real-timeRT-PCR法检测宫颈组织中miR-let-7b的表达水平,免疫组织化学法检测宫颈组织中IMP3、HMGA2的表达,分析miR-let-7b、IMP3、HMGA2在宫颈组织中表达的相关性以及三者与SCC患者临床病理学特征的关系。结果:MiR-let-7b在NC、LSIL、HSIL、SCC中的相对表达量呈逐渐下降的趋势(P<0.01)。IMP3在NC、LSIL、HSIL、SCC中的阳性表达率分别为3.3%、46.9%、79.5%、89.6%;HMGA2在NC、LSIL、HSIL、SCC中的阳性表达率分别为13.33%、53.13%、87.18%、88.68%。SCC、HSIL、LSIL与NC及SCC、HSIL与LSIL的IMP3及HMGA2相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);SCC与HSIL比较,二者的表达组间差异无统计学意义(P=0.05)。SCC患者宫颈组织中miR-let-7b、IMP3、HMGA2表达在不同年龄组的差异无统计学意义(分别P=0.691,P=0.957,P=0.132),而三者在不同分化程度、淋巴结转移状态、FIGO分期、浸润深度的表达差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:SCC组织中miR-let-7b低表达,IMP3、HMGA2高表达,miR-let-7b与IMP3、HMGA2表达呈负相关,IMP3与HMGA2表达呈正相关。三者表达与SCC患者的FIGO分期、分化程度、淋巴结转移状态、浸润深度有关,联合检测miR-let-7b和IMP3、HMGA2表达可能对宫颈鳞癌的早期诊断、疾病分期、判断预后提供一定帮助。

鸡miRNA let-7b前体区单核苷酸多态性与生长肉用性状关联分析

为了探讨miRNA let-7b前体区SNP多态位点rs71292045、rs71292453与鸡生长肉用性状的关联性,以杏花鸡和隐性白洛克鸡杂交所得到的F2代肉鸡生长性状和肉用性状资料为研究素材,进行相关性分析。结果显示:1)SNP多态位点rs71292045不同基因型与鸡的胸肌率、腿胸比呈显著相关;2)SNP多态位点rs71292453不同基因型与鸡的胸肉重、腿肉重、腿肌率、胸肌率、腿胸比呈显著相关;3)SNP多态位点rs71292045对胸肌率的优势基因型是GA,腿胸比的优势基因型是AA;对位点71292453而言,胸肉重的优势基因型是TC,腿肉重的优势基因型是CC,腿肌率的优势基因型是CC,胸肌率的优势基因型是TC,腿胸比的优势基因型是TT。本研究结果可为肉鸡经济性状的选育和提高提供一定的参考。

miR-let-7b-5p对急性胰腺炎AR42J细胞凋亡及自噬的作用研究

目的探讨miR-let-7b-5p对急性胰腺炎AR42J细胞凋亡和自噬的影响。方法以未处理的AR42J细胞作为正常对照组,1×10^(-8) mol/L浓度的雨蛙素诱导大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)24h建立体外急性胰腺炎模型,慢病毒携带miR-let-7b-5p的模拟物(miRNA mimic)、抑制物(miRNA inhibitio)和空病毒转染急性胰腺炎模型细胞作为miR-let-7b-5p过表达组、低表达组和阴性对照组,RT-qPCR验证转染效果,检测凋亡基因Caspase-3 mRNA和自噬基因LC3ⅡmRNA的表达量;Western Blot检测Caspase-3及LC3Ⅱ的蛋白表达。结果与正常对照组相比,阴性对照组的miRlet-7b-5p表达量显著降低(P<0.01),凋亡基因Caspase-3mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.01),自噬基因LC3ⅡmRNA及蛋白表达增加(P<0.05)。与阴性对照组相比,过表达组miR-let-7b-5p表达量显著增加(P<0.01),凋亡基因Caspase-3mRNA及蛋白表达均减少(P<0.05),LC3ⅡmRNA及蛋白表达均增加(P<0.05);低表达组miR-let-7b-5p表达量显著降低(P<0.01),凋亡基因Caspase-3mRNA及蛋白表达均增加(P<0.05)、自噬基因LC3ⅡmRNA及蛋白表达均增加(P<0.05)。结论miR-let-7b-5p可调控急性胰腺炎AR42J细胞的凋亡基因Caspase-3和自噬基因LC3Ⅱ的表达,从而影响胰腺细胞的凋亡和自噬。

miRNA let-7a靶向抑制ACVR1B表达

目的:探讨miRNA let-7a对ACVR1B表达的影响。方法:生物信息学分析表明activin receptor type 1B(ACVR1B)是一个let-7a的潜在靶基因。构建ACVR1B 3’UTR野生型(ACVR1B 3’UTR-WT)和ACVR1B3’UTR突变型(ACVR1B 3’UTR-MUT)双荧光素酶报告载体,分别与let-7a模拟物(let-7a mimic)或let-7a阴性对照(let-7a NC)共同转染HEK293T细胞,通过双荧光素酶报告系统检测各组细胞的荧光素酶活性。分别转染let-7a mimic、let-7a inhibitor和let-7a NC至HEK293T细胞,采用qRT-PCR和Western blot分别检测ACVR1B的m RNA和蛋白表达水平。结果:ACVR1B 3’UTR含有let-7a潜在的高度保守的结合靶点(77~83位点)。在HEK293T细胞中共转染ACVR1B 3’UTR-WT报告载体的let-7a mimic组比let-7a NC组荧光素酶活性组明显降低(P<0.05);而共转染ACVR1B 3’UTR-MUT报告载体的let-7a mimic与let-7a NC组其荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。在HEK293T细胞中let-7a mimic转染组中ACVR1B的mRNA和蛋白水平均低于let-7a NC组和let-7a inhibitor组(P<0.05)。结论:ACVR1B是let-7a潜在调控的靶基因,miRNA let-7a可以直接抑制HEK293T细胞中ACVR1B基因的表达。

miR-let-7b对卵泡颗粒细胞发育的作用

目的:目前为止,尚不清楚micro-RNA(miR)-let-7b是否通过MAP3K1调节卵泡颗粒细胞(FGCs)凋亡,本研究拟运用PCR和Western blotting方法对此进行实验验证.方法:应用CCK-8测定细胞存活率.设计合成miR-let-7b和MAP3K1 mRNA特异性引物,利用qRT-PCR和Western Blotting分析FGCs中miR-let-7b和MAP3K1 mRNA基因与蛋白的表达水平.结果:随着miR-let-7b模拟物剂量(40、60、80、100、120μM)的增加,FGC的增殖活性逐渐降低,MIM-4组的增殖活性明显低于CG和MIM-1组(P<0.05).miR-let-7b表达水平随着模拟物剂量的增加而逐渐降低,MIM-3和MIM-4组的miR-let-7b水平低于MIM-1(P<0.05或P<0.01).MIM-3和MIM-4组MAP3K1 mRNA和蛋白水平显著低于CG,而且MIM-4组MAP3K1 mRNA和蛋白水平低于MIM-1组(P<0.05).结论:miR-let-7b可明显降低FGC增殖活性.下调FGC中miR-let-7b mRNA表达水平,miR-let-7b处理可剂量依赖性地降低MAP3K1 mRNA和蛋白质表达水平.

miR-98和let-7bb抑制乳腺癌细胞的增殖影响

目的检测miR-98和let-7b在乳腺癌细胞中的表达水平,并研究其对乳腺癌细胞增殖的影响。方法收集乳腺癌患者和健康人对照的临床组织标本,RT-PCR检测其中miR-98和let-7b的表达水平。培养SKBR3细胞系,分别加入miR-98和let-7b的mimic或inhibitor,MTT法检测细胞增殖水平的变化。结果乳腺癌患者中miR-98和let-7b表达水平显著低于健康人的组织标本。加入miR-98和let-7b的mimic后,SKBR3细胞增殖受到抑制,而加入miR-98和let-7b的inhibitor后,乳腺癌细胞的增殖受到促进。结论miR-98和let-7b在乳腺癌中下调,并抑制乳腺癌细胞的增殖。

Lin28B/let-7d环路调控成纤维细胞功能参与肺纤维化发生

目的研究Lin28B/let-7d环路诱导肺成纤维细胞增殖、分化的作用及分子机制,为临床肺纤维化的治疗提供新的策略。方法气管注射博来霉素(bleomycin,BLM)造成小鼠肺纤维化模型;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)纤维性变;qRT-PCR检测组织及细胞中Lin28B、collagen 1α1、collagen 3α1变化;Western blot检测Lin28B蛋白表达;MTT、Edu染色和免疫荧光实验分别检测细胞活力、增殖及成纤维细胞向肌成纤维细胞的转变。结果 Lin28B在肺纤维化小鼠和细胞中表达明显升高。Lin28B可诱导MRC-5细胞胶原合成增加,而过表达let-7d则减轻Lin28B的这一作用。进一步研究发现,Lin28B可诱导成纤维细胞增殖,并促进成纤维细胞向肌成纤维细胞转变,这一作用是通过抑制let-7d来实现的。结论 Lin-28B通过抑制let-7d进而促进成纤维细胞增殖、分化,最终增加成纤维细胞胶原合成,诱发肺纤维化的发生,Lin28B可能作为肺纤维化的治疗新靶点。

MiRNA Let-7和Lin28在散发性听神经瘤中的表达及意义

目的研究微小RNA Let-7与Lin28在散发性听神经瘤中的表达及二者之间的关系,探讨其对肿瘤进展可能的影响。方法收集18例经过术后病理证实的散发性听神经瘤组织作为实验组,7例正常胃迷走神经为对照组。采用RT-PCR、免疫组织化学染色方法,检测Let-7d和Lin28A/B mRNA的表达,以及Lin28蛋白的表达。结果 RT-PCR检测显示,Let-7dmRNA表达量在听神经瘤组织显著高于对照神经组织(P<0.001),Lin28A/B mRNA表达量在听神经瘤组织显著低于对照组织(PLin 28A=0.004,PLin28B=0.001)。在听神经瘤组织中,Let-7d与Lin28A/B mRNA的表达存在负相关关系(r=-0.671,P=0.002;r=-0.662,P=0.003)。免疫组织化学检测显示在听神经瘤与正常神经组织中均未发现Lin28蛋白阳性染色。结论在听神经瘤的生长及恶性转化抑制机制中,以微小RNA为主导的Let-7d/Lin28双向负反馈调节可能起重要作用。

热适应/热射病大鼠血清中microRNA let-7b的变化及意义

目的探究热适应/热射病大鼠模型血清中microRNA let-7b表达的变化及其与HSP70,IL-6,TNF-αTGF-β和IL-12的相关性,分析其临床意义。方法在第二军医大学实验动物中心选取肛温、体重、用龄基本一致的雄鼠60只随机均分为对照组、热适应组、热射病组,于仿真热气候动物舱中建立热适应/热射病大鼠模型后采集心尖血并分离血清。以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清中microRNA let-7b,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中HSP70,IL-6,TNF-α,TGF-β和IL-12的蛋白水平。三组间计量资料的比较采用Kruskal-Wallis H检验,以Spearman秩相关系数表示热射病组两变量之间的相关性。结果 miRNA let-7b在对照组、热适应组、热射病组的M分别为0.99,1.04和1.93,Q分别为0.30,0.25和0.44,差异具有统计学意义(x^2=38.95,P<0.001),组间两两比较结果显示let-7b在对照组与热适应组表达差异无统计学意义(P>0.05),在对照组与热射病组、热适应组与热射病组表达差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析显示热射病组let-7b/与HSP70,TNF-α和IL-6呈正相关,差异具有统计学意义(r_s=0.579,0.498和0.609,P<0.05)。结论 miRlet-7b可能参与了热射病病理过程,为临床监测高温湿环境下患者的状态提供了潜在的评价指标。

microRNA let-7b在急性淋巴细胞白血病的表达分析与表观遗传学研究

目的:探讨microRNA let-7b在成人急性淋巴细胞白血病(ALL)的表达及其作用机制,为寻求新的靶向治疗方法提供依据。方法:用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)对ALL患者和非恶性血液病患者骨髓单个核细胞(对照组)中microRNA let-7b启动子区CpG岛的甲基化状态进行分析;应用实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)检测其microRNA let-7b的表达水平;5-氮杂-2'-脱氧胞嘧啶核苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-d C,DAC)对成人ALL细胞株MOLT-4进行处理;用MSP对药物处理后细胞内microRNA let-7b启动子区CpG岛的甲基化状态进行分析;应用q PCR检测药物处理后细胞内microRNA let-7b的表达水平,探讨microRNA let-7b表达的调控机制。结果:ALL患者microRNA let-7b启动子区CpG岛的甲基化率明显高于非恶性血液病患者,其microRNA let-7b的相对表达量明显降低;5-aza-d C能够显著地抑制MOLT-4细胞株的生长,使细胞周期停滞于G1期,抑制细胞RNA和蛋白质的生物合成,促进细胞发生凋亡,与此同时,能上调microRNA let-7b的表达。结论:在ALL患者中microRNA let-7b的表达受基因组启动子区CpG岛甲基化修饰的调控,microRNA let-7b可能作为抑癌基因,其低表达可能参与ALL的发生、发展,提示microRNA let-7b可能成为治疗ALL的新靶向。

let-7b通过靶向调控SALL4影响肝母细胞瘤细胞增殖能力的机制研究

目的初步研究let-7b和SALL4在肝母细胞瘤(hepatoblastoma,HB)细胞恶性行为中的作用及二者间的相互作用机制。方法采用qRT-PCR检测let-7b在正常肝细胞(HL-7702)与HB细胞系、HB组织及癌旁组织中的表达水平,采用免疫组化法检测SALL4在HB组织及癌旁组织中的表达水平,并分析HB组织中let-7b与SALL4表达水平的相关性。通过MTT、细胞周期和凋亡等实验方法上调或抑制HB细胞中let-7b的表达水平,观察let-7b对HB细胞生物学功能的影响;通过生物信息学预测软件、双荧光素酶报告系统、qRT-PCR和western blot等实验,从体外水平验证let-7b与SALL4的靶向关系。采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同let-7b与SALL4表达水平的肝母细胞瘤患者总体生存率的差异。结果与癌旁组织相比,let-7b在HB组织中表达量显著降低,而SALL4表达量显著升高;let-7b在肝母细胞瘤组织中的表达水平与PRETEXT分期存在相关性(P=0.002),且HB组织标本中let-7b与SALL4的表达水平存在负相关性(r=-0.716,P<0.001)。let-7b低表达组HB患者的总体生存率显著低于let-7b高表达组(P=0.017)。SALL4阳性组HB患者的总体生存率显著低于SALL4阴性和弱阳性组(P=0.034)。MTT、细胞周期和凋亡实验结果显示,let-7b可抑制肝癌Hep G2细胞增殖,促进细胞的凋亡。而抑制内源性的let-7b可促进Hep G2细胞增殖,抑制细胞的凋亡。生物信息学软件预测及构建双荧光报告载体荧光检测等实验结果显示,let-7b与SALL4存在一定的靶向关系。结论let-7b和SALL4可作为肝母细胞瘤不良预后的潜在标记物;let-7b作为抑癌基因可以靶向调控SALL4的表达,抑制HB细胞的增殖。

miR-20b对小鼠RAW264.7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h，ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h，Real-TimePCR检测miR．20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染RAW264．7细胞，用TNF-α（100ng／mL）刺激24h，ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠RAW264．7细胞分泌VEGF，50-100ng／mLTNF-α．是最适合的刺激浓度；50ng／mLTNF-α刺激RAW264．7细胞6h，VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的（1．60±0．85）倍，而miR-20b的相对表达量降至对照组（0．55±0．33）倍。PicTar算法表明，小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后，TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制（P〈0．01），但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响（P〉0．05）。结论小鼠RAW264．7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。

Let-7b慢病毒载体构建及对大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞的影响

目的探讨Let-7b过表达和Let-7b抑制慢病毒载体在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化中的作用。方法构建Let-7b过表达和Let-7b抑制慢病毒载体并感染大鼠MSCs,筛选最适感染复数(MOI);实验分未感染组、感染组1(感染LV-rno-Let-7b-up)、感染组2(感染LV-rno-Let-7b-inhibition)、阴性对照组(感染空病毒);采用法舒地尔诱导感染后大鼠MSCs分化为神经元细胞。倒置荧光显微镜下观察MSCs感染后荧光表达情况;采用免疫细胞化学染色检测神经元烯醇化酶(NSE)、神经微管结合蛋白(MAP-2)的表达变化;PT-PCR检测MAP-2mRNA的表达变化;MTT法检测细胞存活率。结果倒置显微镜下观察大鼠LV-rno-Let-7b-up和LV-rno-Let-7b-inhibition慢病毒载体感染成功,MOI值为10,感染3d时大鼠LV-rno-Let-7b-up慢病毒感染率最高,细胞存活率较高,感染率可达(92.1±4.3)%;MOI为20,感染5d时大鼠LV-rno-Let-7b-inhibition慢病毒感染率最高,细胞存活率较高,感染率可达(90.3±4.2)%。法舒地尔可以诱导MSCs向神经细胞分化,感染组1诱导MSCs为神经细胞显著高于阴性对照组和感染组2,NSE、MAP-2表达率明显高于阴性对照组和感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结论 LV-rno-Let-7b-up可更高效感染大鼠MSCs,感染LV-rno-Let-7b-up后大鼠MSCs经法舒地尔诱导向神经细胞分化比率增加。

胃癌患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达及其临床意义

目的 检测胃癌患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达,并探讨其临床意义。方法 选取180例初诊胃癌患者(癌症组)和153名健康志愿者对照组。取外周血检测血清miR-20a-5p、miR let-7a表达;比较癌症组不同临床病理特征患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达;癌症组随访1年,分析死亡的影响因素,评估血清miR-20a-5p、miR let-7a表达对癌症组1年内死亡的预测价值。结果 癌症组血清miR-20a-5p表达高于对照组(P<0.05),且癌症组Ⅲ~Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移患者血清miR-20a-5p表达均高于Ⅰ~Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者(P<0.05);癌症组血清miR let-7a表达低于对照组(P<0.05),且癌症组Ⅲ~Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移患者血清miR let-7a表达均低于Ⅰ~Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者(P<0.05);癌症组1年内死亡率为17.78%,Ⅲ~Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移、血清miR-20a-5p表达、未遵医嘱治疗均是影响癌症组1年内死亡的危险因素(RR=4.076,4.100,4.845,4.968,5.924,4.768,P<0.05),血清miR let-7a表达是其保护因素(RR=0.587,P<0.05);血清miR-20a-5p、miR let-7a表达联合预测癌症组1年内死亡的灵敏度、AUC均高于单独预测(P<0.01)。结论 胃癌患者血清miR-20a-5p表达高,miR let-7a表达低,与临床分期、分化程度、淋巴结转移、远处转移均有关,上述因素均可影响患者的生存率,且血清miR-20a-5p、miR let-7a表达联合可预测胃癌1年内死亡风险。

Lin28B介导肝癌细胞中HBx相关Let-7沉默

目的:Let-7在多种肿瘤包括肝癌中低表达,扮演抑癌基因角色。我们的前期研究提示HBx(人乙肝病毒X蛋白)在肝癌细胞中显著下调Let-7表达,但内在机制有待进一步揭示。Lin28B能负调控Let-7的转录后加工成熟,这促使我们验证其是否介导了肝癌细胞中HBx相关的Let-7低表达。方法:qRT-PCR检测c-Myc和Lin28B特异siRNA转染HepG2-HBx细胞(HBx稳定转染的HepG2细胞)前后Let-7的表达变化,同时在肝癌细胞和或组织中验证HBx和Lin28B的表达相关性。最后,利用细胞周期及增殖实验检测Lin28B对HepG2细胞的生物学影响。结果:Lin28B高表达于HBx稳定/瞬时转染的HepG2肝癌细胞及HBV阳性的肝癌和肝硬化组织。Lin28B介导了HBx在HepG2肝癌细胞中对Let-7的抑制。Lin28B特异siRNAs可阻滞细胞周期进展进而抑制HepG2细胞生长。结论:HBx在肝癌细胞中通过诱导Lin28B表达而抑制Let-7。Lin28B可能成为治疗HBV相关肝癌的新靶点。