急性缺血性脑卒中患者血浆miR let-7b-3p水平及意义

目的探讨急性缺血性脑卒中患者血浆miR let-7b-3p水平及意义。方法选取2016年5月至2019年5月间平顶山市第二人民医院收治的355例急性缺血性脑卒中患者作为研究对象,根据预后情况分为预后不良组和预后良好组。采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测患者血浆miR let-7b-3p相对表达量,并分析其与预后的关系。结果355例急性缺血性脑卒中患者出院后3个月内预后不良发生率为45.07%。预后不良组血浆let-7b-3p相对表达量低于预后良好组(P<0.05);出血转化、发病-治疗时间(ONT)、同型半胱氨酸及miR let-7b-3p与急性缺血性脑卒中患者预后密切相关。出血转化、ONT、同型半胱氨酸、let-7b-3p等联合评估急性缺血性脑卒中患者预后的曲线下面积(AUC)高于miR let-7b-3p及出血转化、ONT、同型半胱氨酸的联合(P<0.05)。结论血浆let-7b-3p与急性缺血性脑卒中患者预后关系密切,检测miR let-7b-3p表达情况有助于预测患者预后。

酸枣仁提取物调控miR-7b-3p/5-羟色胺1A受体表达促进骨生长

背景:前期研究发现,酸枣仁提取物通过提高脑组织5-羟色胺1A受体(serotonin 1A receptor,5-HT1AR)表达,使之与5-羟色胺结合,延长小鼠慢波睡眠,促进生长激素的分泌,从而使骨生长。5-HT1AR作为一种蛋白质,其表达丰度受到miRNA的调控。作者推测酸枣仁提取物可能通过miRNA调控5-HT1AR的表达从而发挥药物作用。目的:观察酸枣仁提取物通过干预小鼠脑组织中miR-7b-3p/5-HT1AR通路对骨骼生长的影响。方法:①将昆明种小鼠分为正常对照组、用药组(灌胃酸枣仁提取物0.320 mg/g),阳性对照组(灌胃酸枣仁皂甙0.013 mg/g)和酸枣仁提取物+5-HT1AR抑制剂组(灌胃酸枣仁提取物最后3 d同时每天侧脑室注射5-HT1AR选择性抑制剂P-MPPF 8μg),25 d后观察酸枣仁提取物对小鼠骨生长、血清生长激素水平及脑组织5-HT1AR表达的影响;②基因芯片法筛选由酸枣仁提取物引起的骨生长小鼠与普通小鼠脑组织差异表达的miRNAs,并通过PCR验证和双荧光素酶报告基因实验证实筛选的miR-7b-3p与5-HT1AR的调控关系;③体外培养小鼠脑皮质细胞并鉴定,利用Western blot法观察酸枣仁提取物对脑皮质细胞中5-HT1AR表达的影响;④将昆明种小鼠分为正常对照组、用药组、miR-7b-3p inhibitor组、用药+miR-7b-3p mimics组、阳性对照组,观察各组小鼠脑组织5-HT1AR表达及5-羟色胺与5-HT1AR结合活性;⑤将SD大鼠分为正常对照组、用药组、miR-7b-3p inhibitor组、用药+miR-7b-3p mimics组、阳性对照组,观察各组大鼠慢波睡眠的变化。结果与结论:①酸枣仁提取物可以促进小鼠体长、胫骨增长,促进生长激素分泌,提高脑组织5-HT1AR含量;②基因芯片筛选出差异表达的miRNAs个数为16个,其中上调有13个,下调有3个;生物信息学预测下调miR-7b-3p可以调控5-HT1AR表达,且双荧光素酶报告基因实验证实二者有直接调控关系;③酸枣仁提取物和沉默脑皮质细胞中miR-7b-3p表达可以引起5-HT1AR高表达;沉默miR-7b-3p后小鼠脑组织5-HT1AR表达、5-羟色胺与5-HT1AR结合活性及生长激素分泌均升高;过表达miR-7b-3p后小鼠脑组织5-HT1AR表达、5-羟色胺与5-HT1AR结合活性及生长激素分泌均降低;大鼠慢波睡眠期也相应延长或缩短。结果表明,酸枣仁提取物能够降低脑组织的miR-7b-3p水平,同时增加5-HT1AR的表达量。这种机制有助于延长慢波睡眠周期,并且促进生长激素的生成,对骨骼生长有积极影响,为使用酸枣仁提取物作为促进骨骼生长的潜在手段提供了科学依据。

癫痫患者脑电图异常与血液miR-130b-3p和miR-7及FGL2表达特征的关系

目的探讨癫痫患者脑电图异常与血液miR-130b-3p、miR-7及纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)表达特征的关系。方法选取接受治疗的癫痫患者124例作为观察组(癫痫发作轻度患者36例、中度患者51例及重度患者37例,脑电图轻度异常患者65例、中度异常35例及重度异常24例),同时选取体检健康者120例作为对照组;比较观察组和对照组、不同程度癫痫发作患者、不同程度脑电图异常的癫痫患者血液miR-130b-3p、miR-7及FGL2表达差异,分析癫痫患者血液miR-130b-3p、miR-7及FGL2与疾病程度和脑电图异常的相关性。结果观察组miR-130b-3p、FGL2高于对照组(P<0.05),miR-7低于对照组(P<0.05);癫痫发作重度患者miR-130b-3p、FGL2高于轻度和中度患者(P<0.05),miR-7低于轻度和中度患者(P<0.05);全面性癫痫发作患者miR-130b-3p、FGL2高于部分性发作患者(P<0.05);脑电图重度异常癫痫患者miR-130b-3p、FGL2高于脑电图轻度和中度异常患者(P<0.05),miR-7低于轻度和中度异常患者(P<0.05);脑电图中度异常癫痫患者miR-130b-3p、FGL2高于脑电图轻度异常患者(P<0.05),miR-7低于轻度异常患者(P<0.05);癫痫患者miR-130b-3p及FGL2与疾病严重程度、脑电图异常程度呈正相关(P<0.05),miR-7与疾病严重程度、脑电图异常程度呈负相关(P<0.05)。结论癫痫患者血液miR-130b-3p及FGL2表达上调,而miR-7下调,3项指标均与与癫痫患者疾病严重程度、脑电图异常程度存在相关关系。

circPVT1通过miR-24-3p/let-7a-5p/FSCN1轴促进鼻咽癌细胞侵袭迁移

目的鼻咽癌是一种来源于鼻咽上皮的恶性肿瘤,其临床特征之一是易发生淋巴转移,但是目前鼻咽癌转移的分子机制尚未阐明。circPVT1是由PVT1基因2号外显子反向拼接形成的环状RNA(circRNA),在多种肿瘤中表达上调,本文探讨了circPVT1在鼻咽癌侵袭迁移中的作用和分子机制。方法通过RT-qPCR检测circPVT1及其下游miRNA和FSCN1在鼻咽癌细胞的表达情况,Transwell和划痕愈合实验检测circPVT1对鼻咽癌细胞侵袭迁移的影响,RNA pull-down实验检测circPVT1结合的miRNA,双荧光素酶报告实验检测miR-24-3p和let-7a-5p靶向抑制FSCN1 mRNA表达。结果在鼻咽癌细胞中过表达circPVT1可以促进鼻咽癌细胞侵袭迁移,而敲低circPVT1则可以抑制鼻咽癌细胞的侵袭迁移。进一步研究发现,circPVT1可以通过竞争性吸附miR-24-3p和let-7a-5p,上调FSCN1的表达,从而促进鼻咽癌细胞的侵袭迁移。结论circPVT1通过miR-24-3p/let-7a-5p/FSCN1轴促进鼻咽癌细胞侵袭迁移,证实circPVT1是鼻咽癌发生发展过程中一个重要驱动因子。

let-7b-3p靶向调控ANKRD49抑制鼻咽癌细胞侵袭和迁移

目的:探究let-7b-3p调控锚蛋白重复结构域49(ANKRD49)表达影响鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞侵袭和迁移能力的潜在机制。方法:利用GEO、TCGA数据库分析鼻咽癌及头颈部肿瘤组织中let-7b表达水平及其与临床病理参数的关系。免疫组化技术检测ANKRD49在NPC及鼻咽炎症组织中的表达水平。RT-PCR检测let-7b-3p在鼻咽癌细胞系中的表达。Transwell侵袭实验与划痕实验分别检测let-7b-3p在鼻咽癌细胞侵袭与迁移能力中的作用。采用双荧光素酶基因报告实验进行let-7b-3p与ANKRD49靶向关系验证。RT-PCR、Western Blot及回复实验验证let-7b-3p对ANKRD49的调控作用。结果:基于鼻咽癌miRNA芯片分析,相比正常鼻咽组织,let-7b-3p在鼻咽癌组织中表达下调,并且let-7b-3p表达水平与肿瘤浸润深度及淋巴结分期有关(P<0.05)。免疫组化示ANKRD49在鼻咽癌组织中高表达。侵袭、迁移实验结果示,let-7b-3p mimic组及inhibitor组分别抑制和促进鼻咽癌细胞的侵袭能力及迁移能力(P均<0.05)。通过双荧光素酶报告基因实验显示let-7b-3p mimic可抑制ANKRD49-wt荧光素酶活性(0.35±0.08 vs 0.61±0.05,P<0.01),而不影响ANKRD49-mut荧光素酶活性(0.64±0.13 vs 0.57±0.13,P>0.05)。RT-PCR及Western Blot结果表明,let-7b-3p inhibitor组的ANKRD49 mRNA和蛋白表达水平均高于正常组与let-7b-3p mimic组。回复实验发现,干扰ANKRD49影响let-7b-3p inhibitor组和let-7b-3p mimic组对鼻咽癌细胞侵袭及迁移的促进和抑制作用。结论:let-7b-3p靶向调控ANKRD49的表达抑制鼻咽癌细胞侵袭及迁移,let-7b-3p/ANKRD49轴可能是鼻咽癌潜在的治疗靶点。

LncRNA MVIH通过调节let-7b-5p促进胃癌细胞顺铂耐药

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)MVIH与胃癌细胞顺铂耐药的关系及其调控机制。方法:构建胃癌顺铂耐药细胞,CCK8法检测细胞增殖能力和顺铂半数抑制浓度(IC50),并计算耐药系数;实时定量PCR(qRT-PCR)分析耐药细胞中lncRNA MVIH和let-7b-5p的表达情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bax和Caspase3的表达;通过lncLocator数据库和lncRNASNP2数据库分析lncRNA MVIH在细胞中的分布情况和可能调控的miRNA,双萤光素酶报告基因实验进行验证;生物信息学分析let-7b-5p在胃癌和癌旁组织的表达情况以及对胃癌预后的影响。结果:胃癌顺铂耐药细胞MGC803R中lncRNA MVIH的表达高于其亲本细胞MGC803(P<0.05);在MGC803R中转染siMVIH显著增加了顺铂诱导的细胞凋亡,凋亡相关蛋白Bax和Caspase3显著上调,同时抑制了其增殖(P<0.05);lncRNA MVIH富集在细胞质中,可以靶向调控let-7b-5p,且let-7b-5p在胃癌中低表达,并与胃癌预后呈正相关(P<0.05);在MGC803中同时转染siMVIH和let-7b-5p抑制剂,逆转了lncRNA MVIH对细胞顺铂敏感性的调控。结论:LncRNA MVIH通过调节let-7b-5p促进胃癌细胞顺铂耐药。

血液中低表达的微小RNA let-7b-5p对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探索微小RNA let-7b-5p用于早期诊断非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)患者的可行性。方法从Gene Expression Omnibus(GEO)数据库获取GSE152702、GSE171517、GSE27486以及GSE40738原始数据集,共包含145例NSCLC患者(NSCLC组)和83位健康人(对照组)的血液样本数据。NSCLC组数据涵盖肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)和肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)。采用Wilcoxon秩和检验和标准化均数差(standardized mean difference,SMD)比较NSCLC组和对照组的let-7b-5p表达水平。通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线的曲线下面积(area under the curve,AUC)以及诊断性meta分析的敏感度和特异度评估let-7b-5p诊断NSCLC(LUAD和LUSC)的效能。结果GSE152702、GSE27486以及GSE40738数据集显示,let-7b-5p在LUAD患者的血液中低表达(均P<0.05),GSE152702数据集还显示LUSC患者的血液中let-7b-5p表达低于对照组(P<0.05)。综合LUAD和LUSC组的SMD结果进一步明确NSCLC组血液中let-7b-5p表达较对照组下调(SMD=-0.50,95%CI:-0.75~-0.26)。ROC曲线和诊断性meta分析显示,血液中let-7b-5p的表达水平可区分NSCLC样本和正常样本(AUC=0.79,敏感度=0.71,特异度=0.76)。ROC曲线分析显示,let-7b-5p在NSCLC中的10个潜在靶基因[碱性亮氨酸拉链和W2结构域2(basic leucine zipper and W2 domains2,BZW2)、细胞分裂周期蛋白25A(cell division cycle 25A,CDC25A)、细胞分裂周期相关基因8(cell division cycle associated8,CDCA8)、Ⅲ型胶原α-1链(collagen typeⅢalpha 1 chain,COL3A1)、外纺锤体极样蛋白1(extra spindle pole bodies like 1,ESPL1)、高迁移率族AT-hook蛋白1(high mobility group AT-hook 1,HMGA1)、胰岛素样生长因子2结合蛋白3(insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 3,IGF2BP3)、NME/NM23核苷二磷酸激酶4(NME/NM23 nucleoside diphosphate kinase 4,NME4)、葡萄糖磷酸变位酶2样蛋白1(phosphoglucomutase 2 like 1,PGM2L1)以及核糖核苷酸还原酶调节亚基M2(ribonucleotide reductase regulatory subunit M2,RRM2)]可区分LUAD与正常肺样本(AUC=0.765~0.980)以及区分LUSC与正常肺样本(AUC=0.749~0.997)。结论检测血液中的let-7b-5p表达水平可能可作为诊断NSCLC(包括LUAD和LUSC)患者的有效手段。

miR-302b-3p靶向SQSTM1调控乳腺癌MCF7细胞的自噬

目的探讨miR-302b-3p靶向SQSTM1调控乳腺癌MCF7细胞的自噬。方法运用TargetScan在线分析miR-302b-3p与SQSTM1的相关性;将SQSTM1的3′UTR构建进PMIR-RB-REPORT质粒,利用luciferase assay检测miR-302b-3p是否靶向调控SQSTM1;用RNA转染试剂转染miR-302b-3p mimics或miR-302b-3p inhibitor进乳腺癌MCF7细胞,通过Western blot检测SQSTM1的表达量和乳腺癌MCF7细胞自噬标志蛋白表达情况。单丹磺酰尸胺染色检测细胞自噬发生水平。结果 miR-302b-3p靶向SQSTM1的3′UTR的584-590的位置;过表达miR-302b-3p时,SQSTM1的表达量明显下降(P<0.05),细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1的表达量明显上升(P<0.05),MCF7自噬发生水平降低(P<0.05);敲低miR-302b-3p时,SQSTM1的表达量明显上升(P<0.05),细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1的表达量明显下降(P<0.05),MCF7自噬发生水平升高(P<0.05)。结论 miR-302b-3p靶向SQSTM1的3′UTR后降低SQSTM1的蛋白水平,最终抑制乳腺癌细胞MCF7的自噬。

宫颈鳞癌患者血浆miRNA let-7a-3p表达及其临床意义

子宫颈鳞癌在妇科恶性肿瘤最常见,病死率也高,每年全球新发病例超45万之多,是严重威胁女性健康的恶性疾病之一,近年研究发现宫颈癌发病逐渐趋于年轻化[1],其也是我国重点防治癌症之一。宫颈癌的发生是一个多因素、多阶段的发展过程,因此尽早诊断,及时采取相应治疗措施,是降低宫颈癌死亡率以及改善患者生活质量的关键。人乳头状瘤病毒(HPV)感染,尤其是高危型HPV的感染是导致宫颈癌发生的主要危险因素。

MiR-27b-3p通过下调lncRNA ST7-AS1水平调控非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡和侵袭

目的探究微小RNA-27b-3p(miR-27b-3p)通过调控长链非编码RNA ST7-AS1(lncRNA ST7-AS1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法通过qRT-PCR分析miR-27b和lncRNA ST7-AS1在人正常肺上皮BEAS-2B细胞和人NSCLC细胞系(A549、H358、H1299及NCL-H2073)中的表达情况。通过生物信息学和双荧光素酶报告基因检测分析miR-27b-3p与lncRNA ST7-AS1的靶向关系。将A549细胞分为5组:Control组、NC组、miR-27b-3p组、miR-27b-3p+VC组及miR-27b-3p+lncRNA ST7-AS1组。QRT-PCR检测miR-27b-3p和lncRNA ST7-AS1表达;MTT法检测细胞增殖活力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Transwell检测细胞侵袭能力。结果MiR-27b-3p在人NSCLC细胞系中表达低于人正常肺上皮细胞BEAS-2B,且在A549细胞中的表达最低(P<0.05);lncRNA ST7-AS1在人NSCLC细胞系表达水平高于BEAS-2B细胞,且在A549细胞中的表达最高(P<0.05)。生物信息学分析显示,lncRNA ST7-AS1和miR-27b-3p存在靶向结合位点;双荧光素酶报告基因检测结果显示,lncRNA ST7-AS1与miR-27b-3p存在靶向调控关系。qRT-PCR结果显示,与NC组比较,miR-27b-3p组A549细胞中miR-27b-3p水平升高,lncRNA ST7-AS1水平降低(P<0.05);与miR-27b-3p+VC组比较,miR-27b-3p+lncRNA ST7-AS1组A549细胞中miR-27b-3p水平降低,lncRNA ST7-AS1水平升高(P<0.05)。MTT、Annexin V-FITC/PI双染及Transwell结果显示,与NC组比较,miR-27b-3p组A549细胞增殖活力降低,凋亡率增高,侵袭细胞数量减少(P<0.05);与miR-27b-3p+VC组比较,miR-27b-3p+lncRNA ST7-AS1组A549细胞增殖活力增高,凋亡率降低,侵袭细胞数量增多(P<0.05)。结论miR-27b-3p通过下调lncRNA ST7-AS1水平抑制NSCLC细胞增殖和侵袭,并诱导细胞凋亡,抑制NSCLC的恶性进展。

微小RNA Let-7g-3p在直肠癌中的表达水平及临床意义

目的评估微小RNA Let-7g-3p在直肠癌中的表达水平及临床意义。方法回顾性收取新疆医科大学第七附属医院34例直肠癌患者的肿瘤及邻近非癌组织样本,通过RT-qPCR检测组织中Let-7g-3p的表达水平。再从癌症基因图谱(TCGA)数据库中检索直肠癌患者的注册数据,收集人口统计信息,例如年龄、性别和癌症特征。用Kaplan-Meier法分析总生存率,用Cox比例风险回归模型分析独立预后。结果Let-7g-3p在直肠癌组织中表达降低,且与患者的临床病理学特征相关联。此外,低Let-7g-3p表达与不良预后和直肠癌的侵袭性进展有关。单因素分析结果显示,Let-7g-3p表达水平是直肠癌患者总生存率的重要预后标志物:Let-7g-3p(HR=1.782;95%CI:1.173~2.707;P=0.007);TNM分期(HR=0.305;95%CI:0.200~0.465;P<0.001);转移(HR=0.093;95%CI:0.048~0.180;P<0.001)。多变量分析表明,低表达Let-7g-3p是直肠癌中重要的独立预后标志物:Let-7g-3p(HR=0.518;95%CI:0.339~0.792;P=0.012);TNM分期(HR=2.199;95%CI:1.323~3.656;P=0.002),转移(HR=2.886;95%CI:1.739~4.790;P<0.001)。结论下调Let-7g-3p表达与直肠癌的进展有关,可能作为直肠癌的独立预后标志物。

Let-7i-5p、CALML3和SCC-Ag联合检测在肺腺癌与肺鳞癌鉴别诊断中的潜在价值

目的探讨Let-7i-5p、钙调蛋白样蛋白3(CALML3)和鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)联合检测在肺腺癌与肺鳞癌鉴别诊断中的潜在价值。方法选取2019年1月—2022年1月收治的肺癌120例,根据病理检查结果将其分为肺腺癌组(68例)和肺鳞癌组(52例)2组。比较2组Let-7i-5p、CALML3和SCC-Ag表达水平,分析其与临床病理特征相关性,探讨其对肺腺癌与肺鳞癌鉴别诊断价值,评价鉴别诊断结果与病理诊断结果一致性,并比较2组Let-7i-5p、CALML3和SCC-Ag不同水平者生存情况。结果肺腺癌组Let-7i-5p表达高于肺鳞癌组,CALML3及SCC-Ag低于肺鳞癌组(P<0.01)。2组临床分期高、分化程度低和有淋巴结转移者Let-7i-5p、CALML3及SCC-Ag水平升高(P<0.01)。Let-7i-5p、CALML3和SCC-Ag联合鉴别诊断肺腺癌与肺鳞癌的曲线下面积明显大于单独诊断,且联合鉴别诊断与病理检查结果的一致性较高(P<0.05,P<0.01)。肺腺癌组和肺鳞癌组Let-7i-5p、CALML3和SCC-Ag高水平患者生存率低于低水平患者(P<0.05)。结论肺腺癌和肺鳞癌患者Let-7i-5p、CALML3和SCC-Ag表达存在差异;Let-7i-5p、CALML3、SCC-Ag与肺腺癌和肺鳞癌患者临床病理特征和预后密切相关,且联合检测鉴别诊断肺腺癌和肺鳞癌有一定临床价值。

MiR-let-7g-3p靶向HMGB2调控膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭和和凋亡

目的探讨MiR-let-7g-3p靶向HMGB2对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法通过qRT-PCR检测膀胱癌组织和癌旁组织以及正常尿路上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞(T24、5637和EJ)中let-7g-3p的表达水平;通过转染过表达或敲低T24细胞let-7g-3p表达,检测细胞增殖、迁移和侵袭、和凋亡等变化;对过表达let-7g-3p的细胞进行转录组测序,结合生物信息学分析,通过双荧光素酶报告实验、qRT-PCR和Western-blot分析let-7g-3p靶向负性调控HMGB2基因;qRT-PCR检测正常尿路上细胞和膀胱癌细胞(T24、5637和EJ)中HMGB2的表达水平,并且在敲低HMGB2的细胞株中,敲低let-7g-3p,检测细胞生物学行为改变。结果qRT-qPCR证实let-7g-3p在膀胱癌组织和细胞表达明显下调(P<0.01);过表达let-7g-3p可抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡(P<0.01);相反,敲减let-7g-3p表达可促进细胞增殖、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡(P<0.01)。生物信息学和转录组测序结果显示,HMGB2是let-7g-3p作用于膀胱癌细胞的关键分子;双荧光素酶报告实验、qRT-PCR和Western blot显示,HMGB2受let-7g-3p的负性调控;HMGB2膀胱癌细胞中表达水平均明显上调(P<0.01),敲低HMGB2可部分逆转敲低let-7g-3p对膀胱癌细胞生长的促进作用。结论MiRNA-let-7g-3p通过靶向负性调控HMGB2基因抑制膀胱癌细胞的生物行为。

hsa-let-7b-5p靶向ΔNp63抑制HaCaT细胞的增殖、迁移和侵袭

目的研究在人表皮细胞中hsa-let-7b-5p的作用和其对ΔNp63表达变化的影响,探讨hsa-let-7b-5p如何影响人表皮细胞的生物功能。方法人角质形成细胞株(HaCaT)分别转染hsa-let-7b-5p mimic NC、hsa-let-7b-5p mimic、hsa-let-7b-5p inhibitor和hsa-let-7b-5p inhibitor NC,通过CCK8检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和细胞侵袭,利用miRcode网站和RNAhybrid网站预测p63和hsa-let-7b-5p结合,利用实时荧光定量PCR检测hsa-let-7b-5p及p63表达情况。结果hsa-let-7b-5p的高表达对HaCaT细胞的增殖、迁移和侵袭均有抑制作用,hsa-let-7b-5p表达的抑制则促进了HaCaT细胞的增殖、迁移和侵袭。通过网站预测发现hsa-let-7b-5p可与对皮肤表皮细胞有重要作用的p63结合;实时定量PCR分析发现hsa-let-7b-5p影响p63的表达。结论hsa-let-7b-5p可能通过靶向p63 mRNA水平而在人表皮细胞中发挥作用。

LncRNA CASC7与miR-27b-3p在肺结核外周血单核细胞中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA CASC7(LncRNA CASC7)与微小RNA-27b-3p(miR-27b-3p)在肺结核外周血单核细胞中的表达及意义。方法结核菌H37Rv、H37Ra分别感染单核细胞,采用qRT-PCR法检测CASC7、miR-27b-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测CASC7与miR-27b-3p的靶向关系;选取2018年3月至2019年10月本院收治的肺结核患者120例为研究组,根据活动性肺结核诊断标准将肺结核患者分为非活动性肺结核组60例、活动性肺结核组60例,同时选取同期健康体检者60例为对照组;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测CASC7、miR-27b-3p的表达量;ROC分析CASC7与miR-27b-3p对肺结核的诊断价值。结果与感染前比较,H37Rv、H37Ra感染后单核细胞中CASC7的表达水平显著降低(P<0.05),miR-27b-3p的表达水平显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实CASC7可靶向结合miR-27b-3p;与对照组比较,研究组患者外周血单核细胞中CASC7的表达水平显著降低(P<0.05),且活动性肺结核组显著低于非活动性肺结核组(P<0.05),miR-27b-3p的表达水平显著升高(P<0.05),且活动性肺结核组显著高于非活动性肺结核组(P<0.05);ROC分析显示CASC7的敏感度为57.50%,特异度为91.67%,AUC面积为0.781;miR-27b-3p的敏感度为57.50%,特异度为81.67%,AUC面积为0.665;联合检测的敏感度为96.67%,特异度为60.00%,AUC面积为0.802。结论肺结核外周血单核细胞与结核菌感染单核细胞中CASC7表达下调,miR-27b-3p表达上调,对肺结核辅助诊断及靶向治疗均具有一定参考价值。

LncRNA MAGI2-AS3调控miR-374b-5p/HOXB7信号通路对脓毒症相关脑损伤的影响

目的探讨MAGI2-AS3/miR-374b-5p/HOXB7轴在脓毒症相关脑损伤(SE)发病中的作用。方法通过盲肠结扎穿孔(CLP)手术在成年C57BL/6 J雄性小鼠中诱导脓毒症。随机选择CLP小鼠用针对MAGI2-AS3的短干扰RNA(siRNA)或miR-374b-5p模拟物及相关对照转染。在术后8~12 d通过Morris水迷宫试验检测小鼠的空间学习能力和记忆能力。然后检测CLP小鼠的海马神经元凋亡指标。体外建立LPS诱导海马神经元损伤模型,分别用si-MAGI2-AS3或miR-374b-5p模拟物转染神经元,以确定海马神经元的增殖抑制和凋亡。使用双荧光素酶报告基因测定评估MAGI2-AS3、miR-374b-5p、HOXB7之间的相互作用。结果CLP小鼠在CLP手术后第3、7和14天显示MAGI2-AS3水平逐渐增加和miR-374b-5p水平逐渐降低,并伴有认知功能受损。MAGI2-AS3沉默和miR-374b-5p升高提高了CLP小鼠的空间学习能力和记忆能力,抑制了神经元凋亡。MAGI2-AS3沉默和miR-374b-5p升高增加了LPS处理的海马神经元的活力并减少了凋亡。MAGI2-AS3特异性结合miR-374b-5p,而miR-374b-5p靶向HOXB7。结论MAGI2-AS3沉默可能通过上调miR-374b-5p和下调HOXB7来抑制CLP小鼠海马神经元的凋亡。

宫颈癌细胞中ΔNp63α的MicroRNA表达谱及其对hsa-let-7b-3p的调控机制

目的在宫颈鳞癌细胞中筛选出ΔNp63α显著调控的mi RNAs,并探讨其对宫颈癌细胞功能的影响。方法通过mi RNA芯片技术筛选出ΔNp63α过表达的Si Ha细胞株(Si Ha/p63)中差异明显的mi RNAs,并进行q RT-PCR验证;通过q RT-PCR在沉默ΔNp63α的ME-180细胞株(ME-180/Shp63)中检测差异表达的mi RNAs,并选择差异较显著的hsa-let-7b-3p作为研究对象;向Si Ha细胞中转染hsa-let-7b-3p刺激剂,通过生长曲线、Western blot以及流式细胞仪检测hsa-let-7b-3p对Si Ha细胞增殖及凋亡的影响。结果 (1)在ΔNp63α过表达的Si Ha细胞株中,筛选出10个变化较显著的mi RNAs;(2)在ΔNp63α沉默的ME-180细胞中,筛选出5个与上述变化趋势一致的mi RNAs;(3)hsa-let-7b-3p过表达抑制Si Ha细胞的增殖;(4)hsa-let-7b-3p过表达促进Si Ha细胞的凋亡。结论宫颈癌细胞株中,mi RNA hsalet-7b-3p的表达与ΔNp63α的表达呈正相关,且可以有效抑制细胞增殖,其作用机制可能与诱导细胞周期阻滞和促进细胞凋亡相关。

IPI-504通过LINC00312/let-7b-5p/EBF1轴抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移

目的探讨IPI-504诱导的LINC00312对胰腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的抑制作用,并阐明其作用机制。方法通过生物信息学分析预测let-7b-5p与LINC00312、EBF1 mRNA的潜在结合位点,应用双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系。将PANC-1细胞分为对照组、IPI-504组、IPI-504+敲减对照组、IPI-504+敲减LINC00312组、IPI-504+NC mimics组、IPI-504+let-7b-5p mimics组和IPI-504+敲减EBF1组,实时荧光定量PCR检测细胞LINC00312和let-7b-5p的表达,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell检测细胞迁移能力,Western blotting检测细胞EBF1蛋白表达。结果let-7b-5p与LINC00312、EBF1 mRNA结合,敲减LINC00312、转染let-7b-5p模拟物和敲减EBF1均降低经IPI-504处理的PANC-1细胞中EBF1蛋白表达,促进细胞增殖和迁移。结论IPI-504上调胰腺癌细胞LINC00312表达,LINC00312通过海绵化let-7b-5p上调EBF1表达,从而抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移。

miR-376b-3p对HepG2细胞Ⅱ相代谢酶UGT2B7的调控

目的:探讨miR-376b-3p对HepG2细胞Ⅱ相代谢酶UGT2B7的调控作用。方法:构建含有UGT2B7序列的重组质粒并进行双荧光素酶基因活性检测;利用荧光定量PCR技术检测miR-376b-3p对UGT2B7 mRNA表达的影响;使用蛋白印迹法检测miR-376b-3p对UGT2B7蛋白表达的影响。结果:与miR-376b-3p阴性对照组相比,在HEK293T细胞中共转染miR-376b-3p与UGT2B7 3′-UTR野生型质粒组荧光素酶活性降低13%,差异具有统计学意义(P<0.05),共转染miR-376b-3p与UGT2B7 3′-UTR突变体质粒组的荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05);与阴性对照组相比,在HepG2细胞中转染miR-376b-3p模拟物组的UGT2B7 m RNA水平下降44%,转染miR-376b-3p抑制剂组升高41%,差异均具有统计学意义(P<0.05);与阴性对照组相比,在HepG2细胞中转染miR-376b-3p模拟物组的UGT2B7蛋白表达下降34%,转染miR-376b-3p抑制剂组升高67%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-376b-3p与UGT2B7 3′-UTR直接结合,通过降解UGT2B7 m RNA、抑制UGT2B7蛋白翻译而进行转录后调控。

结直肠癌组织中miR-92b-3p、FBXW7的表达变化及临床意义

目的观察微小RNA(miRNA)-92b-3p和F框/WD40域蛋白(FBXW7)在结直肠癌组织中的表达情况,并探讨其临床意义。方法回顾性分析153例结直肠癌患者的病理和临床资料,采用实时荧光定量PCR技术检测结直肠癌组织及其癌旁正常组织中的miR-92b-3p、FBXW7,分析miR-92b-3p、FBXW7表达与结直肠癌临床病理参数的关系,采用Pearson相关分析结直肠癌组织中miR-92b-3p和FBXW7表达的相关性。结果与癌旁正常组织相比,结直肠癌组织中miR-92b-3p的相对表达量高,FBXW7的相对表达量低(P均<0.01)。结直肠癌组织中miR-92b-3p和FBXW7的表达均与临床分期、淋巴结转移及分化程度有关(P均<0.05)。结直肠癌组织中miR-92b-3p和FBXW7的表达呈负相关(r=-0.751,P=0.000)。结论结直肠癌组织中miR-92b-3p表达升高,FBXW7表达降低,二者均与临床分期、淋巴结转移以及分化程度有关。