miR-133a通过靶向调控G6PD的表达对肝癌的抑制作用

目的:探究miR-133a是否可通过调节G6PD参与肝细胞癌(HCC)的发生与发展进程。方法:生物信息学分析预测miR-133a和G6PD的结合位点;RT-PCR或Western blot检测miR-133a和G6PD在HCC组织及癌旁组织中的表达;CCK-8、流式细胞术实验检测miR-133a/G6PD对HCC细胞生长、凋亡的影响;荧光报告基因实验及Western blot技术检测miR-133a对G6PD表达的影响。结果:在HCC组织中miR-133a低表达,而G6PD高表达(P<0.01);过表达miR-133a降低了G6PD的表达(P<0.01);过表达miR-133a明显抑制了Hep G2细胞增殖,并促进了细胞凋亡(P<0.05)。结论:miR-133a通过降低G6PD的表达抑制HCC的发生及发展。

黄芩总黄酮对支气管哮喘大鼠的治疗作用及miR-133a-3p/NOX4/NLRP3信号轴表达的影响

目的黄芩总黄酮对支气管哮喘大鼠的治疗作用及miR-133a-3p/NOX4/NLRP3信号轴表达的影响。方法清洁级SD大鼠100只分为正常对照组、模型组、地塞米松组(200 mg/kg)、黄芩总黄酮低剂量组(100 mg/kg)、黄芩总黄酮高剂量组(200 mg/kg),每组20只。除正常对照组外,模型组、地塞米松组、黄芩总黄酮低高剂量组通过卵清蛋白(OVA)建立支气管哮喘模型,并予以相应药物干预。实验结束后,检测肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数,以及肺/体比值、肺损伤评分、动脉血氧分压(PaO_(2))水平;反逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹法检测肺支气管组织微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)、NADPH氧化酶4(NOX4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)水平。结果与正常对照组比较,模型组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、黄芩总黄酮低剂量组和黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平降低,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与地塞米松组比较,黄芩总黄酮低剂量组、黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与黄芩总黄酮低剂量组比较,黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芩总黄酮对大鼠支气管哮喘具有明显治疗作用,其机制可能与黄芩总黄酮促进miR-133a-3p的表达进而抑制NOX4/NLRP3信号轴的激活相关。

miR-133a-5p调控细胞焦亡抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:研究miR-133a-5p靶向半胱天冬酶3(caspase-3)调控细胞焦亡对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法:以Hela细胞为研究对象并分为Control组(正常培养宫颈癌Hela细胞)、mimic-NC组(宫颈癌Hela细胞转染mimic-NC)和miR-133a-5p mimic组(宫颈癌Hela细胞转染miR-133a-5p mimic过表达);利用CCK-8检测细胞增殖,染色法检测细胞迁移和细胞侵袭,ELISA检测活性氧(ROS)水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测caspase-3、cleaved caspase-3、GSDME和GSDME-NT蛋白的表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应检测caspase-3和miR-133a-5p的mRNA表达水平。结果:对照组和mimic-NC组的细胞增殖、迁移和侵袭结果对比没有明显差异,而miR-133a-5p mimic组细胞增殖、迁移和侵袭结果相较于mimic-NC组明显被抑制(均P<0.05);流式细胞术检测结果发现miR-133a-5p mimic组细胞凋亡水平明显高于mimic-NC组(P<0.05);ELISA检测结果发现miR-133a-5p mimic组ROS水平明显高于mimic-NC组(P<0.05);Western Blot和PCR检测结果发现与mimic-NC组相比,过表达miR-133a-5p能够明显提升cleaved caspase-3和GSDME-NT的表达,降低caspase-3和GSDME的表达(P<0.05)。结论:miR-133a-5p对Hela细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用或与靶向调控caspase-3来调节Hela细胞焦亡相关,对caspase-3/GSDME通路的干预有望成为宫颈癌治疗的新方向。

甲亢患者血清miR-133a水平变化与甲状腺激素及脂质代谢的关联性研究

目的探讨甲亢患者血清miR-133a水平变化与甲状腺激素及脂质代谢的关联性。方法招募2020年10月至2022年8月中国人民解放军联勤保障部队第九八三医院收治的新发显性甲亢患者100例(甲亢组),其中28例患者接受标准甲巯咪唑治疗;另选择同期健康体检者100名作为对照组。收集研究对象的性别、年龄、甲状腺激素、肝功能及其他生化指标等临床资料。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测血清miR-133a水平,分析其与甲状腺激素及脂质代谢水平的相关性。结果与对照组相比,甲亢组游离甲状腺素(FT_(4))、游离三碘甲状腺原氨酸(FT_(3))、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)、舒张压、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)水平较高,体质量指数(BMI)、腰围、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、促甲状腺激素(TSH)水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。甲亢组血清miR-133a水平显著低于对照组(Z=9.796,P<0.001)。甲亢组血清miR-133a水平与ALT、FT_(3)、FT_(4)水平呈负相关(P<0.05),与TC、LDL-C和TSH水平呈正相关(P<0.05)。在接受甲巯咪唑治疗后,甲亢患者FT_(3)和FT_(4)水平显著降低(P<0.05),TC、LDL-C、TSH及血清miR-133a水平显著升高(P<0.05)。治疗前后血清miR-133a水平变化值与FT_(3)(r s=-0.728,P<0.001)、FT_(4)(r s=-0.377,P=0.048)水平变化值呈负相关,但与TC、TG、LDL-C和TSH水平变化值相关性不显著(P>0.05)。结论甲亢患者血清miR-133a水平下调,这可能与甲状腺激素升高导致的脂质代谢紊乱有关。

银杏叶提取物通过miR-133a调节TGFβ1诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖的作用及机制

目的研究银杏叶提取物(GBE)对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖的作用及机制,探索miR-133a在心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法使用TGFβ1诱导乳鼠心肌成纤维细胞增殖,并加入GBE与细胞模型共培养;使用CCK8、流式细胞术分别检测细胞增殖活性和细胞周期;Mimic和siRNA构建miR-133a过表达及抑制表达的模型,并使用RT-PCR检测各组细胞中miR-133a、TGFβ1及TGFβ受体表达。结果TGFβ1可促进心肌成纤维细胞活性、提高心肌成纤维细胞由G0/G1期进入S期的比例,而GBE则可明显改善TGFβ1造成的相关影响;TGFβ1诱导的心肌成纤维细胞模型中,GBE处理或过表达miR-133a均可明显改善TGFβ1诱导的心肌成纤维细胞增殖及TGFβ受体的mRNA水平表达,而在细胞模型中抑制miR-133a表达,则会部分抵消GBE对于细胞增殖的调节作用。结论GBE可明显改善TGFβ1诱导的心肌成纤维细胞增殖,这或与其上调miR-133a并抑制TGFβ受体表达有关。

急性心肌梗死患者血清miR-133a、miR-499-5p表达与PCI术后冠状动脉无复流的关系

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者血清微小核糖核酸(miR)-133a、miR-499-5p表达及其与AMI患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后冠状动脉无复流的关系。方法选取2019年2月至2021年10月该院收治的290例接受PCI治疗的AMI患者作为研究对象。依据PCI术后3个月患者冠状动脉血流情况分为无复流组[心肌梗死溶栓治疗(TIMI)分级1~2级]、复流正常组(TIMI 3级)。分析术前血清miR-133a、miR-499-5p表达与AMI患者PCI术后无复流的关系。结果随访3个月后,290例AMI患者PCI术后TIMI分级1~2级66例,3级224例;冠状动脉无复流发生率为22.76%(66/290)。无复流组发病至PCI时间长于复流正常组,术前白细胞计数(WBC)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、miR-133a、miR-499-5p表达水平高于复流正常组,差异均有统计学意义(P<0.05).Logistic回归分析结果显示,发病至PCI时间长,以及术前WBC、CK-MB、cTnI、miR-133a、miR-499-5p高是AMI患者PCI术后血流TIMI分级低的危险因素(OR>1,P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,术前血清miR-133a、miR-499-5p及二者联合预测AMI患者PCI术后冠状动脉无复流的曲线下面积(AUC)为0.727、0.697、0.773,具有一定的预测价值;决策曲线分析结果显示,在高风险阈值0.00~1.00范围内血清miR-133a、miR-499-5p联合预测AMI患者PCI术后冠状动脉无复流的净收益率>0,有临床意义。结论AMI患者PCI术前血清miR-133a、miR-499-5p水平与术后冠状动脉无复流有关。

翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)miR-133a-5p的时空表达特征及饥饿对其节律性表达的影响

为了解翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)miR-133a-5p的时空表达规律以及短期饥饿对其昼夜节律性表达的影响,本研究利用实时荧光定量PCR检测了miR-133a-5p在翘嘴鳜不同组织、不同胚胎发育阶段的表达谱,以及短期饥饿后miR-133a-5p昼夜节律的表达特征。结果显示,miR-133a-5p在红肌中表达最高,在白肌和心肌组织中表达较高,在其他组织中的表达较低;miR-133a-5p在胚胎发育的2细胞期就有较高表达,随着胚胎的发育其表达量逐渐降低,从囊胚晚期开始直至出膜期,其表达均维持在一个较低的水平,且各阶段的表达无显著性差异;miR-133a-5p在正常投喂的翘嘴鳜白肌中的表达没有明显的昼夜节律性,而在饥饿5 d后其表达呈现昼高夜低的节律性。本研究结果表明,miR-133a-5p在翘嘴鳜肌源性组织中高表达,推测其在肌肉组织中有重要作用;miR-133a-5p呈母源性高表达,推测其调控的靶基因可能抑制胚胎早期的发育;miR-133a-5p在饥饿5 d后呈节律性表达,提示其可能通过调节生物节律参与饥饿胁迫下的适应性调控。

异丙酚通过miR-133a-3p/FTL轴调控GADD45A/JNK通路影响胃癌细胞增殖、迁移及凋亡

目的:探讨异丙酚是否通过miR-133a-3p/FTL轴调控GADD45A/JNK通路影响胃癌细胞的增殖、迁移及凋亡。方法:将胃癌MKN-28细胞系分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、异丙酚组、miR-NC组、miR-133a-3p mimics组、anti-miR-NC组、anti-miR-133a-3p组、si-NC组、si-FTL组、异丙酚+anti-miR-NC+si-NC组、PBS+anti-miR-NC+si-NC组、异丙酚+anti-miR-133a-3p+si-NC组、异丙酚+anti-miR-133a-3p+si-FTL组。应用RT-qPCR检测miR-133a-3p和铁蛋白轻链(FTL)mRNA的表达水平;应用MTT法与克隆形成实验测细胞增殖;应用流式细胞术、蛋白质印迹法分别检测细胞凋亡及蛋白表达水平;应用双荧光素酶报告实验检测miR-133a-3p与FTL的靶向关系;应用划痕实验与Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭。结果:与PBS组比较,异丙酚组细胞活性、划痕愈合率、细胞克隆形成数、迁移、侵袭细胞数均减少(P<0.05);细胞凋亡率、p53、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、miR-133a-3p、GADD45A及p-JNK蛋白表达水平均升高(P<0.05),FTL表达水平降低(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,miR-133a-3p靶向调控FTL。敲低FTL或过表达miR-133a-3p后,细胞凋亡率升高,细胞活性、划痕愈合率、细胞克隆形成数、迁移和侵袭细胞数降低;细胞中GADD45A、p-JNK、p53、Bax表达水平升高(P<0.05)。敲低FTL逆转了使用异丙酚及抑制miR-133a-3p表达对GADD45A/JNK信号通路以及MKN-28细胞恶性生物学行为的影响。结论:异丙酚可能通过miR-133a-3p/FTL轴调控GADD45A/JNK通路继而抑制胃癌细胞增殖、迁移,并促进细胞凋亡。

LncRNA MEG3调控miR-133a-3p/TGF-β1/Smads轴促进骨髓间充质干细胞成骨分化的作用机制

目的 探究LncRNA MEG3调控miR-133a-3p/TGF-β_(1)/Smads信号轴对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cell, hBMSC)成骨分化中的影响。方法 通过构建慢病毒载体及慢病毒包装,将含有目的基因的慢病毒感染细胞。将hBMSC分为Control组、NC组、MEG3、sh-MEG3、MEG3+miR-133a-3p sponge及MEG3+miR-133a-3p组,成骨诱导后,采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色和茜素红染色检测ALP活性及钙盐沉积,qRT-PCR检测各组细胞中MEG3、miR-133a-3p、TGF-β_(1)、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN mRNA表达水平,Western blot检测TGF-β_(1)、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN蛋白表达量。结果 与NC组比较,MEG3组的ALP活性及茜素红钙盐沉积明显减弱,MEG3 mRNA上调,miR-133a-3p mRNA表达显著升高,TGF-β_(1)、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN mRNA和蛋白表达水平显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);sh-MEG3组的ALP活性及茜素红钙盐沉积明显增强,MEG3 mRNA下调,miR-133a-3p mRNA表达显著降低,TGF-β_(1)、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。与MEG3组比较,MEG3+miR-133a-3p sponge组ALP活性及茜素红钙盐沉积明显增强,TGF-β_(1)、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN mRNA和蛋白表达水平显著升高(P均<0.05);MEG3+miR-133a-3p组ALP活性及茜素红钙盐沉积明显减弱,TGF-β_(1)、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN mRNA和蛋白表达水平显著降低(P均<0.05)。结论 LncRNA MEG3可能通过调控miR-133a-3p/TGF-β_(1)/Smads信号轴促进hBMSC成骨分化。

过表达Hsa-miR-133a-2对宫颈癌细胞增殖与侵袭的影响

目的 探究hsa-mir-133a-2对宫颈癌细胞表型的影响及其在宫颈癌细胞增殖与侵袭中的潜在分子机制。方法 通过癌症基因组图谱-宫颈鳞癌和腺癌(The Cancer Genome Atlas-Cervical squamous cell carcinoma and endocervical adenocarcinoma, TCGA-CESC)验证宫颈癌组织和癌旁组织中hsa-mir-133a-2的表达情况;对TCGA-CESC中提取的307例高表达和低表达hsa-mir-133a-2的宫颈癌患者的临床信息进行K-M生存分析以评估其预后价值;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术对正常宫颈细胞和宫颈癌细胞中hsa-mir-133a-2的表达进一步检测;采用细胞计数试剂盒-8(CKK8)和transwell法检测hsa-mir-133a-2对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。结果 与宫颈癌癌旁组织细胞和正常宫颈细胞相比,hsa-mir-133a-2在宫颈癌细胞中表达水平均显著下调(P<0.05);K-M生存分析结果表明,高表达hsa-mir-133a-2的宫颈癌患者具有相对较长的总生存期(P<0.05);hsa-mir-133a-2模拟处理导致宫颈癌细胞的活力和侵袭能力降低,而hsa-mir-133a-2抑制剂处理的宫颈癌细胞的活力和侵袭能力均显著提高。结论 hsa-mir-133a-2可以抑制宫颈癌细胞的增殖与侵袭,为宫颈癌的临床治疗提供新的策略。

超声造影联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平对肝细胞癌的诊断价值

目的探究超声造影(CEUS)联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平对肝细胞癌(HCC)的诊断价值。方法选取45例HCC患者及45例慢性乙型肝炎患者作为研究对象。采集患者血液标本,分离血清,采用荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测患者血清miR-122-5p、miR-133a-3p表达量。同时为患者进行CEUS,评估其诊断价值。另外绘制受试者工作曲线(ROC)、进行COX多因素分析评估CEUS联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平对肝细胞癌的诊断价值。结果HCC组始消时间、持续时间、达峰时间及始增时间均低于对照组(P<0.05);绘制CEUS各项指标诊断HCC的ROC曲线显示,单独检测时始增时间的敏感度最高,始消时间、持续时间的特异度最高,联合检测的AUC为0.978,特异度及敏感度均处于较高水平。HCC组血清miR-122-5p、miR-133a-3p表达水平均明显低于对照组;绘制血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平诊断HCC的ROC曲线,单独检测时,miR-133a-3p的敏感度最高,miR-122-5p的特异度最高,两者联合检测具有较高的敏感度及特异度。CEUS联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平诊断HCC的ROC曲线显示,AUC为0.999,截断值为0.712,敏感度、特异度分别为97.78%,99.99%,约登指数为0.9778,95%CI为0.958~1.000。行多因素COX分析显示,始消时间、达峰时间、始增时间、血清miR-122-5p、miR-133a-3p均为影响HCC诊断的因素(P<0.05)。结论CEUS联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平对肝细胞癌具有较高的诊断价值。

lncRNA LINC02381通过miR-133a-3p/MGMT轴对脑胶质瘤细胞替莫唑胺抵抗的影响

目的:探讨lncRNA LINC02381通过miR-133a-3p/MGMT轴对脑胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)耐药性的影响。方法:体外培养人脑胶质瘤细胞株U251、耐TMZ细胞U251/TR,将U251/TR细胞分为U251/TR组、si-NC组、si-LINC02381组、mimics NC组、miR-133a-3p mimics组、miR-133a-3p mimics+pcDNA3.1组、miR-133a-3p mimics+pcDNA3.1 LINC02381组、miR-133a-3p mimics+pcDNA3.1 MGMT组。CCK-8法检测U251、U251/TR细胞对TMZ的耐药性;qRT-PCR检测LINC02381、miR-133a-3p、MGMT水平;流式细胞仪检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证LINC02381与miR-133a-3p、miR-133a-3p与MGMT的靶向关系;Western blot法检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3、MGMT蛋白表达。结果:与U251细胞相比,U251/TR细胞中IC 50、LINC02381和MGMT mRNA、MGMT蛋白表达升高(P<0.05),miR-133a-3p表达降低(P<0.05);与U251/TR组、mimics NC组相比,miR-133a-3p mimics组Bcl-2表达降低(P<0.05),miR-133a-3p表达、细胞凋亡率、Bax和Cleaved-caspase 3表达升高(P<0.05);与U251/TR组、si-NC组相比,si-LINC02381组LINC02381、Bcl-2表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax和Cleaved-caspase 3表达升高(P<0.05);miR-133a-3p与LINC02381、MGMT均存在靶向关系;LINC02381、MGMT过表达均可逆转miR-133a-3p过表达对U251/TR细胞TMZ耐药性的影响。结论:lncRNA LINC02381沉默可能通过使miR-133a-3p表达升高,进而抑制MGMT表达,降低U251/TR细胞对TMZ的耐药性。

BMSCs外泌体来源miR-133a对大鼠脊髓损伤修复的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体来源miR-133a对大鼠脊髓损伤(SCI)修复的影响。方法原代分离和培养BMSCs,测定BMSCs细胞表面标记物(CD90,CD45)表达;提取BMSCs外泌体,观察外泌体形态及外泌体标记分子(Alix、CD63)表达;建立SCI大鼠模型,随机将大鼠分为假手术组、SCI组、外泌体组、外泌体-抑制剂对照(NC)组、外泌体-miR-133a抑制剂组,28 d后,对各组大鼠进行BBB评分评估脊髓损伤程度;分离大鼠骨髓组织,检测该组织病理学变化、细胞凋亡状况;同时检测相关蛋白[胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核抗原(NeuN)、炎性小体3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase)-1]及miR-133a表达水平。双荧光素酶实验验证miR-133a、NLRP3靶向关系。结果BMSCs细胞中CD90、CD45表达率分别为98.07%、0.09%。外泌体呈球形,Alix、CD63呈阳性表达。与假手术组比较,SCI组BBB评分、NeuN、miR-133a表达显著降低,细胞凋亡率、GFAP、NLRP3、caspase-1表达显著增加(P<0.05);与SCI组比较,外泌体组BBB评分、NeuN、miR-133a表达显著增加,细胞凋亡率、GFAP、NLRP3、caspase-1表达显著降低(P<0.05);抑制miR-133a表达逆转了外泌体对SCI大鼠的修复作用(P<0.05)。结论BMSCs外泌体来源miR-133a,可对SCI大鼠起到修复作用。

miR-133a-3p在胃癌组织和血浆中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

目的:检测mi R-133a-3p在胃癌组织及患者血浆中的表达水平及其对胃癌细胞增殖的影响,并探讨其与患者预后的关系。方法:收集河北医科大学第四医院普外科2012年5月至2013年5月胃癌手术切除的组织标本及术前外周静脉血标本52例,每例组织标本采集肿瘤组织(非坏死部分)和配对的癌旁组织。采用实时荧光定量RT-PCR(RT-q PCR)法检测mi R-133a-3p在胃癌组织、癌旁组织、血浆及健康体检者血浆(35例)的表达情况,分析mi R-133a-3p的表达水平与胃癌患者中位DFS及临床病理特征的关系。CCK-8法检测过表达或沉默mi R-133a-3p对胃癌SGC7901细胞增殖的影响。结果:mi R-133a-3p在胃癌组织中的表达明显降低(P<0.01),其表达水平与肿瘤TNM分期、肿瘤侵润深度(T)、淋巴结转移(N)及脉管瘤栓相关(P<0.01);在胃癌患者血浆中的表达明显升高(P<0.01),其表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移(N)及脉管瘤栓相关(P<0.05);与患者血清中CA199的表达水平正相关(P<0.01)。胃癌组织中mi R-133a-3p高表达组患者中位DFS明显高于低表达组(20.8 vs 14.8个月,P<0.05)。血浆中mi R-133a-3p的高表达组患者中位DFS明显低于低表达组(14.4 vs 20.3个月,P<0.05)。过表达mi R-133a-3p可明显抑制SGC7901细胞的增殖能力,同样沉默其表达可明显促进SGC701细胞的增殖能力(均P<0.05)。结论:mi R-133a-3p可明显抑制胃癌细胞SGC7901的增殖能力,在胃癌组织和血浆中存在明显异常表达,其表达与患者预后明显相关,可作为胃癌早诊早治及患者临床预后判定的潜在标志物。

茯苓酸通过上调miR-133a影响子宫肌瘤细胞增殖凋亡及表皮生长因子的水平

目的:探讨茯苓酸(PA)对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡及表皮生长因子(EGF)水平的影响。方法:选取58例子宫肌瘤患者的子宫肌瘤组织进行细胞原代培养。将子宫肌瘤细胞分为NC组、PA 10μg/ml组、PA 20μg/ml组、PA 40μg/ml组、PA 80μg/ml组。采用甲基噻唑基四唑(MTT)检测各组细胞存活率,筛选PA适宜浓度进行后续实验。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测PA对EGF水平的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PA对表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达的影响;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PA对细胞中微小RNA-133a(miR-133a)表达水平的影响。miR-133a mimics及阴性对照miR-NC转染至子宫肌瘤细胞,观察miR-133a过表达对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡及EGF、EGFR表达水平的影响。Western blot检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(C-caspase-3)蛋白表达。结果:与NC组比较,PA 10μg/ml组、PA 20μg/ml组、PA 40μg/ml组、PA 80μg/ml组细胞存活率均显著降低(P<0.05),选用PA 40μg/ml作为后续研究。与NC组比较,PA组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),C-caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),EGFR蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而EGF水平显著降低(P<0.05);与NC组比较,PA组细胞中miR-133a的表达水平显著升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-133a组细胞存活率显著降低(P<0.05),CyclinD1、EGFR蛋白表达水平显著降低(P<0.05),EGF水平显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率显著升高(P<0.05),C-caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。抑制miR-133a的表达可逆转PA对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡及EGF的影响。结论:PA可通过上调miR-133a的表达抑制子宫肌瘤细胞增殖并促进细胞凋亡,同时降低EGF、EGFR表达水平。

鸡miR-133a靶向调控BIRC5基因的表达

【目的】研究miR-133a在鸡不同组织中的表达情况,对baculoviral IAP repeat containing 5(BIRC5)进行靶基因的试验验证,探讨鸡miR-133a对BIRC5的靶向调控作用。【方法】采用生物信息学方法对miR-133a靶基因进行预测,并用双荧光素酶报告系统及点突变试验对BIRC5进行靶基因验证,同时运用实时荧光定量PCR检测miR-133a在鸡不同组织中的表达量。【结果】在鸡3′UTR数据库的11 891个基因中预测到287个miR-133a的靶基因;miR-133a在鸡的组织表达谱中显示其在肌肉中的表达量较高,尤其是在骨骼肌中表达量最高;报告基因试验显示BIRC5是miR-133a的靶基因,点突变试验证实了miR-133a在BIRC5上结合的靶位点。【结论】miR-133a是与鸡骨骼肌发育高度相关的miRNA,且鸡BIRC5基因是miR-133a的靶基因。

急性心肌梗死患者循环血浆中miR-133a、miR-133b表达的研究

目的分析miR-133a、miR-133b在急性心肌梗死(AMI)患者血浆中的表达,并探讨miR-133a、miR-133b在诊断AMI中的应用价值。方法选取2017年1月至2017年12月于西安交通大学第一附属医院胸痛中心就诊的AMI患者为观察组(n=89),同期就诊于西安交通大学第一附属医院体检中心的既往无心脏病史,心电图正常的对照人群37例为正常对照组(n=37)。收集所有受试者的临床资料并提取血浆标本,实时定量PCR法检测循环血浆中miR-133a及miR-133b的表达水平。应用受试者工作特征曲线ROC评估对AMI的辅助诊断价值。结果AMI患者血浆中miR-133a及miR-133b的含量较正常对照组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);受试者工作特征曲线(ROC)分析表明:miR-133a的ROC曲线下面积AUC值为0.845(P<0.01),敏感度为84.5%,特异性为69.0%,漏诊率为15.5%,误诊率31.0%;miR-133b的ROC曲线下面积AUC值为0.702(P<0.01),敏感度为70.2%,特异性为51.7%,漏诊率为29.8%,误诊率为48.3%。结论循环miR-133a及miR-133b在诊断AMI方面具有较好的特异性和敏感性,可作为AMI诊断的生物学标志物。

miR-133a和miR-208a对急性冠脉综合征患者PCI术后心肌损伤的诊断价值

目的:分析miR-133a和miR-208a对急性冠脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后心肌损伤的诊断价值。方法:将2017年6月至2019年1月在邯郸市第一医院行PCI术治疗的83例ACS患者,并根据PCI术后心肌损伤情况分为心肌损伤组41例和非心肌损伤组42例。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测患者血清miR-133a和miR-208a表达水平,采用化学发光免疫分析法检测血清肌钙蛋白I(cTnI)水平,Pearson相关法分析患者血清miR-133a和miR-208a表达水平与cTnI水平的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-133a和miR-208a对患者PCI术后心肌损伤的诊断价值。结果:心肌损伤组血清中cTnI水平和miR-133a、miR-208a相对表达量均明显高于非心肌损伤组(P<0.05);患者血清中miR-133a、miR-208a相对表达量分别与cTnI水平呈正相关关系(r=0.741、0.770,P<0.001);miR-133a、miR-208a诊断ACS患者PCI术后心肌损伤的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.809(95%CI0.825~0.961)、0.853(95%CI0.890~0.990),其诊断临界值分别为0.95、0.31,敏感性分别为93.60%、95.12%,特异性分别为73.80%、83.33%。结论:miR-133a、miR-208a对ACS患者PCI术后心肌损伤具有较好的诊断敏感性和特异性,是ACS患者PCI术后心肌损伤的有效生物标志物。

Hsa-miR-133a对人乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨Hsa-miR-133a(miR-133a)对人乳腺癌细胞侵袭、迁移和增殖的影响,并初步分析miR-133a影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能机制。方法用脂质体介导的转染方法将miR-133a阻遏物(miR-133a inhibitors)转染人乳腺癌细胞株MCF-7,以inhibitor negative control(inhibitor NC)作为阴性对照。通过MTS试剂盒和Transwell侵袭实验检测细胞增殖能力和侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕试验检测细胞迁移能力;再利用生物信息学方法预测miR-133a的靶基因,并对其靶基因进行基因功能分析。结果 (1)miR-133a inhibitors组与inhibitor NC组间细胞增殖活性差异无显著性(P>0.05);(2)划痕后miR-133a inhibitors组细胞迁移能力比inhibitor NC组明显增强(P<0.05);(3)Transwell侵袭及迁移实验显示转染miR-133a inhibitors后,MCF-7细胞的侵袭及迁移能力均明显增强(P<0.01,P<0.05);④生物信息学方法预测miR-133a的靶基因中,部分发挥了促进细胞侵袭、迁移的生物学功能。结论 (1)MiR-133a对人乳腺癌细胞的侵袭及迁移能力可能存在负性调控作用,可能成为乳腺癌治疗的潜在候选靶点;(2)MiR-133a可能通过多种靶基因发挥其对肿瘤的调控作用。

心肌特异性miR-133a与cTnT早期诊断急性心肌梗死的价值

目的 比较血循环中心肌特异性miR-133a与肌钙蛋白T（cTnT）在急性心肌梗死（AMI）早期诊断中的价值.方法 收集67例AMI患者和32名非AMI对照者的血浆标本,通过定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）测定血浆中miR-133a水平,同时通过电化学发光法检测血浆cTnT的变化.结果 AMI患者血浆中miR-133a水平较非AMI对照者明显升高（P〈0.01）,而当这些AMI患者康复出院时miR-133a水平已回落到基线.MiR-133a水平的波动与研究对象的自身特征无相关性（P＆gt;0.05）.受试者工作特征曲线（ROC）分析表明,miR-133a在早期诊断AMI方面具有显著的心肌特异性和敏感性,但并不优于cTnT.结论 血浆miR-133a可作为AMI早期诊断的标志物,但在诊断价值上并不优于cTnT.