miR-302b-3p调控GALNT3及FGF23/PI3K/AKT通路在主动脉瓣膜钙化的作用机制分析

目的探讨miR-302b-3p调控GALNT3及FGF23/PI3K/AKT通路在主动脉瓣膜钙化的作用机制。方法进行人心脏瓣膜间质细胞培养与钙化诱导,设置对照组(Control)、钙化模型组(Model)、模型组+miR-302b-3p mimics NC组(miR-302b-3p mimics NC)、模型组+miR-302b-3p mimics组(miR-302b-3p mimics)、模型组+miR-302b-3p inhibitor NC组(miR-302b-3p inhibitor NC)、模型组+miR-302b-3p inhibitor组(miR-302b-3p inhibitor),共6组。通过细胞转染、茜素红染色、碱性磷酸酶(ALP)染色、MTT检测细胞活性、实时荧光定量PCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测实验,检测相关分子的表达水平与活性变化。结果与Control组比较,Model组中miR-302b-3p、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达水平升高(P均<0.05),细胞增殖活性以及导致ALP和钙结节的能力升高,N-乙酰氨基半乳糖转移酶3(GALNT3)和成纤维细胞生长因子23(FGF23)蛋白的表达水平降低(P均<0.05)。与Model组比较,miR-302b-3p mimics组miR-302b-3p和FGF23蛋白的表达水平升高(P均<0.05),OPN、OCN、RUNX2、GALNT3、p-PI3K和p-AKT蛋白的表达水平降低(P均<0.05),细胞增殖活性以及导致ALP和钙结节的能力降低。miR-302b-3p inhibitor组则呈现相反的变化。双荧光素酶报告基因检测实验结果显示,与miR-302b-3p mimics+wt组相比,miR-302b-3p mimics NC+wt组相对荧光素酶活性升高(P<0.05),miR-302b-3p mimics+mut组与miR-302b-3p mimics NC+mut组相比,相对荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-302b-3p可抑制细胞钙化及增殖,通过负向调控GALNT3的表达水平,调控FGF23/PI3K/AKT通路来影响主动脉瓣膜的钙化过程。

长链非编码RNA MSC-AS1通过调控miR-302c-3p/SSX2IP促进非小细胞肺癌细胞增殖

目的:检测长链非编码RNA肌蛋白反义RNA1(musculin antisense RNA 1,MSC-AS1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞中的表达,研究其对肿瘤细胞增殖的影响并探索其机制。方法:采用qRT-PCR技术检测NSCLC肿瘤组织、癌旁组织、肺癌细胞及正常肺上皮细胞中MSC-AS1的表达;分析患者的临床病理资料与MSC-AS1表达的相关性。利用Lipofectamine TM 2000对肺癌细胞进行转染;MTT及克隆形成实验测定细胞的增殖能力;同时利用qRT-PCR测定细胞中miR-302c-3p及SSX2IP的表达变化。生物信息学方法预测MSC-AS1及miR-302c-3p的下游靶基因;双荧光素酶报告实验验证基因间的靶向结合关系。结果:MSC-AS1在肺癌组织及肺癌细胞(A549、SPC-A1和SK-MES-1)中较癌旁组织及正常肺上皮细胞BEAS-2B中表达升高(P<0.05);MSC-AS1的表达水平与癌肿TNM分期、肿瘤大小及淋巴结转移密切相关(P<0.01),并提示患者的预后不良(P<0.01);敲低MSC-AS1能够抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.05)。MSC-AS1通过miR-302c-3p/SSX2IP轴调控NSCLC细胞的增殖。结论:LncRNA MSC-AS1能够促进NSCLC细胞的增殖并可能成为潜在的治疗靶点。

miR-302b-3p靶向SQSTM1调控乳腺癌MCF7细胞的自噬

目的探讨miR-302b-3p靶向SQSTM1调控乳腺癌MCF7细胞的自噬。方法运用TargetScan在线分析miR-302b-3p与SQSTM1的相关性;将SQSTM1的3′UTR构建进PMIR-RB-REPORT质粒,利用luciferase assay检测miR-302b-3p是否靶向调控SQSTM1;用RNA转染试剂转染miR-302b-3p mimics或miR-302b-3p inhibitor进乳腺癌MCF7细胞,通过Western blot检测SQSTM1的表达量和乳腺癌MCF7细胞自噬标志蛋白表达情况。单丹磺酰尸胺染色检测细胞自噬发生水平。结果 miR-302b-3p靶向SQSTM1的3′UTR的584-590的位置;过表达miR-302b-3p时,SQSTM1的表达量明显下降(P<0.05),细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1的表达量明显上升(P<0.05),MCF7自噬发生水平降低(P<0.05);敲低miR-302b-3p时,SQSTM1的表达量明显上升(P<0.05),细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1的表达量明显下降(P<0.05),MCF7自噬发生水平升高(P<0.05)。结论 miR-302b-3p靶向SQSTM1的3′UTR后降低SQSTM1的蛋白水平,最终抑制乳腺癌细胞MCF7的自噬。

miR-302a-3p在食管鳞癌中的表达及临床意义

为探讨miR-302a-3p在食管鳞癌组织和细胞中的表达及其对细胞生物学特征和食管鳞癌患者临床病理特征的影响,qRT-PCR检测食管鳞癌组织和对应癌旁组织,以及食管鳞癌细胞ECA109和正常食管上皮细胞HEEC中miR-302a-3p的表达;ECA109细胞处理后分为NC组、miR-NC组和miR-302a-3p mimic组,MTT检测各组细胞的活力,Transwell试验检测各组细胞的侵袭和迁移能力;TUNEL试验检测各组细胞的凋亡情况;卡方检验分析miR-302a-3p与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果表明:miR-302a-3p在食管鳞癌组织和食管鳞癌细胞ECA109中低表达;与miR-NC组相比,miR-302a-3p mimic组ECA109细胞增殖能力和迁移能力明显减弱(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。临床数据分析显示,miR-302a-3p表达与食管鳞癌的分化程度、临床分期、TNM分期和转归(P<0.01)相关。这一研究提示miR-302a-3p通过抑制食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭,在食管鳞癌的发展中起到肿瘤抑制作用,其低表达有望成为预测食管鳞癌患者不良预后的潜在生物标志物。

草苁蓉多糖下调miR-302a-3p表达对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨草苁蓉多糖(boschniakia rossica polysaccharides,BRPS)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法H/R诱导大鼠心肌细胞H9c2建立细胞损伤模型,不同剂量的BRPS处理H9c2细胞;酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性;流式细胞术检测凋亡率;qRT-PCR检测miR-302a-3p的表达量;anti-miR-NC、anti-miR-302a-3p分别转染至H9c2细胞后进行H/R处理,miR-NC、miR-302a-3p mimics分别转染至H9c2细胞后加入100 mg·L^(-1)BRPS处理24 h,进行H/R处理;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达;线软件预测和双荧光素酶报告实验检测miR-302a-3p和LRP8的靶向关系;Western blot检测低密度脂蛋白受体相关蛋白8(LRP8)的表达量。结果BRPS降低H/R诱导的H9c2细胞中MDA的水平、miR-302a-3p的表达量、细胞凋亡率、Bax表达(P<0.05),提高SOD、GSH-Px、Bcl-2(P<0.05);转染anti-miR-302a-3p后,MDA的水平、细胞凋亡率、Bax表达下调(P<0.05),SOD、GSH-Px、Bcl-2上调(P<0.05);转染miR-302a-3p mimics后,MDA的水平、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px和Bcl-2降低(P<0.05)。miR-302a-3p靶向调节LRP8,且BRPS通过下调miR-302a-3p上调LRP8基因的表达。结论BRPS通过调节miR-302a-3p/LRP8轴减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。

异甘草素通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移的机制研究

目的 肺鳞癌(Lung squamous cell carcinoma,LUSC)是全世界范围内高频率发生的恶性肿瘤。最近的研究表明,异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)在肿瘤增殖和转移中发挥抗肿瘤活性。因此,研究旨在探讨ISL在抗LUSC转移中的作用机制。方法 利用梯度浓度ISL处理LUSC细胞,探究ISL在LUSC细胞增殖、迁移和侵袭中的抗癌特性。随后,利用生物信息学手段探寻了长链非编码RNA(Long non-coding RNAs, lncRNA)MIR22HG/miR-24-3p/Fas配体基因(Fas ligand Gene,FASLG)之间可能的互作关系。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测LUSC细胞中lncRNA MIR22HG、miR-24-3p、FASLG的表达,细胞计数盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、克隆形成、划痕愈合和Transwell实验分别检测细胞活力、增殖、迁移和侵袭。蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)检测上皮间充质转换(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)和转移相关蛋白的表达。RNA免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RIP)实验和双萤光素酶实验验证lncRNA MIR22HG与miR-24-3p、miR-24-3p与FASLG的结合关系。结果 ISL可以显著抑制LUSC细胞增殖、迁移和侵袭。生信分析及临床样本分析发现lncRNA MIR22HG在LUSC中低表达,ISL可以促进lncRNA MIR22HG的表达,抑制LUSC细胞的恶性行为。此外,lncRNA MIR22HG可以海绵吸附miR-24-3p进而调节FASLG的表达。miR-24-3p在LUSC中上调表达,FASLG在LUSC中下调表达。过表达FASLG可以逆转miR-24-3p过表达对LUSC增殖、转移以及EMT进程的促进作用。结论 这些结果表明,ISL通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移,表明ISL有潜力作为治疗LUSC的新型药物。

lncRNA MIR4435-2HG靶向miR-376a-3p调控胆管癌细胞生物学行为的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MIR4435-2HG(MIR4435-2HG)对胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对微小RNA-376a-3p(miR-376a-3p)的调控作用。方法 qRT-PCR法检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic与人胆管癌细胞RBE中MIR4435-2HG、miR-376a-3p的表达。将si-NC、si-MIR4435-2HG、miR-NC、miR-376a-3p mimics、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-NC、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-376a-3p分别转染至RBE细胞,作为si-NC组、si-MIR4435-2HG组、miR-NC组、miR-376a-3p组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组;采用MTT法、Transwell小室法及流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证MIR4435-2HG与miR-376a-3p的靶向关系。Western blot检测相关蛋白表达。结果 RBE细胞中MIR4435-2HG表达量升高(P<0.05),miR-376a-3p表达量降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MIR4435-2HG组MIR4435-2HG表达、细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率升高(P<0.05)。MIR4435-2HG可靶向调控miR-376a-3p;与si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组比较,si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论 敲低MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-376a-3p进而抑制RBE细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导其凋亡。

长链非编码RNAMIR22HG和微RNA-9-3p在骨关节炎病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MIR22HG和微RNA-9-3p(miR-9-3p)在骨关节炎(OA)病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性。方法 选取2020年10月至2021年10月在南充市中医医院确诊为OA的病人120例,作为OA组,60例体检健康人群作为对照组;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平;Pearson法分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的相关性以及二者与视觉模拟(VAS)评分、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)以及西安大略和麦马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC)评分的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p对OA的诊断价值。结果 OA组的血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著高于对照组(1.48±0.25比1.01±0.22),miR-9-3p的表达水平显著低于对照组(0.72±0.13比1.05±0.12)(P<0.05);相关性分析显示,lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平呈负相关关系(P<0.05);KLⅣ级血清lncRNA MIR22HG的表达水平、VAS评分、WOMAC评分显著高于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著高于KLⅡ级(P<0.05),KLⅣ级血清miR-9-3p的表达水平、HSS评分显著低于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著低于KLⅡ级(P<0.05);OA病人lncRNA MIR22HG的表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈正相关,与HSS评分呈负相关(P<0.05);miR-9-3p表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈负相关,与HSS评分呈正相关(P<0.05);二者联合诊断的AUC高于lncRNA MIR22HG、miR-9-3p单独诊断的AUC值(Z=2.22,P=0.012;Z=1.43,P=0.025)。结论OA病人血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著升高,miR-9-3p表达水平显著降低,二者与OA病情严重程度密切相关,且对OA具有一定的诊断价值。

LncRNA CRNDE调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法将人肺泡上皮细胞A549分为CK组、LPS组、LPS+si⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE组、LPS+si⁃CRNDE+inhibitor NC组、LPS+si⁃CRNDE+miR⁃338⁃3p inhibitor组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃KLF6组;qRT⁃PCR检测各组细胞CRNDE、miR⁃338⁃3p和KLF6表达水平;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA试剂盒检测TNF⁃α、IL⁃10和IL⁃1β水平;商品化试剂盒分析MDA、GSH⁃Px、SOD水平;Western blot检测细胞中KLF6、Cleaved⁃caspase⁃3、Bax、Bcl⁃2蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃338⁃3p与RNDE和KLF6的关系。结果与CK组相比,LPS组和LPS+si⁃NC组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著升高,miR⁃338⁃3p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著降低(P<0.05);与LPS+si⁃NC组相比,LPS+si⁃CRNDE组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著降低,miR⁃150⁃5p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著升高(P<0.05);干扰miR⁃338⁃3p表达或过表达KLF6均可降低下调CRNDE表达改善LPS诱导A549细胞损伤的作用(P<0.05)。结论下调CRNDE可调控miR⁃338⁃3p/KLF6轴减轻LPS诱导的A549细胞损伤。

lncRNA XIST靶向miR-302a-3p对IL-1β诱导软骨细胞损伤的调控机制

目的 探讨lncRNA X染色体失活特异转录因子(XIST)靶向miR-302a-3p对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞损伤的调控机制。方法 SW1353细胞分为Control组、IL-1β组、IL-1β+si-NC组、IL-1β+si-XIST组、IL-1β+si-PDK1组、IL-1β+si-XIST+miR-NC inhibitor组、IL-1β+si-XIST+miR-302a-3p inhibitor组。检测XIST、miR-302a-3p以及3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)mRNA表达;噻唑蓝(MTT)实验测定细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;qRT-PCR检测炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10)水平;双荧光素酶报告基因检测实验证实miR-302a-3p与XIST或PDK1的靶向关系;免疫印迹法检测凋亡蛋白(Bcl-2、Bax)及PDK1蛋白表达。结果 与IL-1β组相比,IL-1β+si-XIST组XIST表达下调,细胞活力升高,凋亡率降低,Bax表达及TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降,Bcl-2表达及IL-4、IL-10水平升高(P<0.05)。XIST直接靶向下调miR-302a-3p表达,miR-302a-3p下调可恢复si-XIST介导的促增殖、抗凋亡和炎症反应作用(P<0.05)。PDK1是miR-302a-3p的靶基因,沉默PDK1可抑制细胞的炎症反应(P<0.05)。结论 敲低XIST可提高IL-1β诱导软骨细胞的细胞活力,减轻OA样软骨细胞损伤,其作用机制与靶向上调miR-302a-3p进而抑制PDK1表达有关。

miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-302b-3p抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的相关机制。方法:选取体外培养的食管癌EC-109细胞和正常食管上皮HET-1A细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EC-109细胞和HET-1A细胞中miR-302b-3p表达水平。对EC-109细胞进行瞬时转染,分为空白对照组(未转染)、miR-NC组(转染miR-302b-3p mimics阴性对照)、miR-302b-3p组(转染miR-302b-3p mimics)、anti-miR-NC组(转染miR-302b-3p inhibitor阴性对照)和anti-miR-302b-3p组(转染miR-302b-3p inhibitor)。MTT法检测各组EC-109细胞活性,流式细胞术检测各组不同周期EC-109细胞百分比和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组EC-109细胞中CyclinD1、CDK2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法检测各组EC-109细胞的荧光素酶活性和细胞中上皮细胞转化序列2(ECT2)蛋白的表达水平。结果:与HET-1A细胞比较,EC-109细胞中miR-302b-3p表达水平明显降低(P<0.05)。与空白对照组比较,miR-302b-3p组EC-109细胞活性、S期细胞百分比和EC-109细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而G 0/G 1期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与anti-miR-NC组比较,anti-miR-302b-3p组细胞活性、S期细胞百分比和细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),而G 0/G 1期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。与miR-NC+ECT2-WT组比较,miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性降低(P<0.05);与anti-miR-NC+ECT2-WT组比较,anti-miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性明显升高(P<0.05)。结论:miR-302b-3p可抑制EC-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与靶向调控ECT2蛋白表达有关。

上皮性卵巢癌患者血清miR-302b-3p、lncRNA SNHG16水平变化及其临床意义

目的探讨上皮性卵巢癌患者血清miR-302b-3p、lncRNA SNHG16水平变化及其临床意义。方法选择上皮性卵巢癌患者83例(恶性组)、良性卵巢肿瘤患者34例(良性组)、体检健康的女性志愿者29例(对照组),采集外周静脉血,离心留取血清,采用RT-qPCR法检测血清miR-302b-3p、lncRNA SNHG16。分析上皮性卵巢癌患者血清miR-302b-3p、lncRNA SNHG16水平与临床病理特征的关系以及二者之间的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-302b-3p、lncRNA SNHG16水平对上皮性卵巢癌的诊断价值。结果恶性组血清miR-302b-3p水平低于良性组和对照组,而血清lncRNA SNHG16水平高于良性组和对照组(P均<0.05)。上皮性卵巢癌患者血清miR-302b-3p、lncRNA SNHG16水平与FIGO分期、组织分化程度、淋巴结转移、远处转移有关(P均<0.05),而与年龄、病理类型及血清CA125水平无关(P均>0.05)。上皮性卵巢癌患者血清miR-302b-3p水平与血清lncRNA SNHG16水平呈负相关关系(r=-0.678,P<0.05)。血清miR-302b-3p、lncRNA SNHG16水平诊断上皮性卵巢癌的曲线下面积(AUC)分别为0.664、0.742,二者联合诊断上皮性卵巢癌的AUC为0.898。血清miR-302b-3p、lncRNA SNHG16水平联合诊断上皮性卵巢癌的AUC高于血清miR-302b-3p、lncRNA SNHG16水平单独(Z分别为4.245、3.447,P均<0.05)。结论上皮性卵巢癌患者血清miR-302b-3p水平下调、血清lncRNA SNHG16水平上调,二者呈负相关关系并与肿瘤FIGO分期、组织分化程度、淋巴结转移、远处转移密切相关;血清miR-302b-3p、lncRNA SNHG16水平对上皮性卵巢癌均具有一定诊断价值,二者联合时诊断价值更高。

miR-302 b-3 p靶向AKT1调节皮肤成纤维细胞衰老的作用机制

目的 探讨miR-302b-3p靶向丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT)1调节皮肤成纤维细胞衰老的作用及其分子机制.方法 建立复制性细胞衰老模型后,采用real-time PCR法检测细胞miR-302b-3p的表达情况;采用生物信息学软件分析miR-302b-3p的靶基因;分别将miR-302b-3p模拟物(mimic)及抑制剂(inhibitor)转染皮肤成纤维细胞后,β-半乳糖苷酶染色分析细胞衰老情况,qRT-PCR法检测AKT1 mRNA表达水平,Western印迹法检测AKT1蛋白表达情况.结果 与对照组比较,复制性衰老皮肤成纤维细胞中miR-302b-3p显著升高.转染miR-302b-3p mimic后,细胞衰老阳性染色细胞数目显著增加(P<0.01).AKT1为miR-302b-3p的预测靶基因.当细胞上调miR-302b-3p表达时,靶基因AKT1 mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05).反之,当细胞下调miR-302b-3p表达时,靶基因AKT1 mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.05).结论 miR-302b-3p可能通过靶向抑制AKT1表达调节皮肤成纤维细胞的衰老.

结肠癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达与临床分期的相关性及对手术治疗预后的指导价值探究

背景越来越多的长非编码RNA与微小RNA被发现在肿瘤的发生和发展中表达量变化显著,能够影响抑癌基因或者癌基因的表达,在癌细胞的增殖、转移中发挥了重要的作用.目的探究结肠癌组织长链非编码RNA母系印记基因3(LncRNA MEG3)、微小RNA(miR)-302b-3p表达与临床分期的相关性及对手术治疗预后的指导价值.方法选取2017-01/2022-03金华市中医医院97例结肠癌患者,观察比较不同组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达,分析LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达与临床病理特征的相关性;比较不同LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达患者复发情况,分析结肠癌术后复发影响因素,并分析LncRNA MEG3、miR-302b-3p交互作用对结肠癌复发的影响,评价LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达对结肠癌术后复发的预测价值.结果结肠癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达均低于癌旁组织(P<0.05);结肠癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达与性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05),与分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05);结肠癌组织中LncRNA MEG3、miR-302b-3p高表达组1年内复发率低于LncRNA MEG3、miR-302b-3p低表达组(P<0.05);分化程度、临床分期、淋巴结转移均为结肠癌复发危险因素,癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达均为结肠癌复发保护因素(P<0.05);交互作用分析显示,LncRNA MEG3、miR-302b-3p同时暴露的协同效应是LncRNA MEG3或miR-302b-3p单纯暴露产生效应的15.888倍,且二者同时暴露时,结肠癌复发风险中有56.98%归因于二者协同作用;LncRNA MEG3、miR-302b-3p预测结肠癌患者预后的曲线下面积(area under the curve,AUC)(95%CI)分别为0.720(0.620-0.807)、0.767(0.670-0.847),二者联合预测AUC(95%CI)为0.892(0.813-0.946),明显高于LncRNA MEG3、miR-302b-3p单独预测,最佳敏感度及特异度分别为92.31%、83.33%.结论结肠癌患者癌组织LncRNA MEG3、miR-302b-3p表达下调,与临床分期有关,临床检测其表达可用于明确肿瘤恶性程度、预测手术治疗预后,为临床后续治疗方案调整提供参考依据.

黄芩苷通过调节miR⁃223⁃3p/NLRP3通路对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用

目的研究黄芩苷调节miR⁃223⁃3p/NOD样受体蛋白3(NLRP3)通路对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠的保护作用。方法构建脓毒症ALI大鼠模型,实验分为假手术组、模型组、地塞米松组、低剂量黄芩苷组、中剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组。酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠血清TNF⁃α(肿瘤坏死因子⁃α)、IL⁃1β(白细胞介素1β)、IL⁃10水平;苏木素⁃伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化;测定大鼠肺组织含水量及肺泡液体清除率(AFC);实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)测定各组大鼠肺组织miR⁃223⁃3p水平;蛋白印迹法测定各组大鼠肺组织NLRP3水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清IL⁃1β、TNF⁃α水平和WW/DW比值、肺组织NLRP3水平升高(P<0.05),血清IL⁃10水平和AFC值、肺组织miR⁃223⁃3p水平降低(P<0.05);同时模型组大鼠肺泡完整性破坏,肺泡萎陷,肺间质明显水肿,大量炎症细胞浸润,肺组织病理得分升高(P<0.05)。经黄芩苷治疗后,随着给药剂量增高,血清IL⁃1β、TNF⁃α水平和WW/DW比值、肺组织NLRP3水平降低(P<0.05),血清IL⁃10水平和AFC值、肺组织miR⁃223⁃3p水平升高(P<0.05),呈剂量依赖性;同时大鼠肺泡结构恢复,肺间质水肿缓解,炎症细胞浸润减少,肺组织病理评分降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论黄芩苷可通过下调促炎因子IL⁃1β、TNF⁃α水平,上调抑炎因子IL⁃10水平以缓解脓毒症ALI大鼠肺损伤,可能与miR⁃223⁃3p/NLRP3通路有关。

miR-203a-3P通过靶向PRMT5抑制胃癌细胞增殖

目的:探讨miR-203a-3p在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响。方法:收集胃癌组织标本44例,采用Real-time PCR方法检测胃癌组织标本中miR-203a-3p的表达,并分析其表达水平与临床病理参数的关系;生物信息学预测miR-203a-3p的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验进行验证;免疫组化检测胃癌组织标本中PRMT5的表达情况,分析其表达水平与miR-203a-3p表达的相关性;利用脂质体介导的瞬时转染方法过表达miR-203a-3p或同时过表达miR-203a-3p和PRMT5,并通过CCK-8实验检测胃癌细胞的增殖情况。结果:胃癌组织中miR-203a-3p的表达水平与正常组织对照相比显著降低(P<0.01),并且miR-203a-3p的表达水平与肿瘤细胞的分化程度显著相关;荧光素酶报告基因实验证实miR-203a-3p可以直接结合在PRMT5 3'-UTR上,即PRMT5是miR-203a-3p的直接靶基因;在胃癌组织标本中,PRMT5表达水平显著高于正常组织对照(P<0.01),并且其表达水平与miR-203a-3p表达呈显著负相关(r=-0.4124,P<0.01);过表达miR-203a-3p后,胃癌BGC823细胞的增殖能力显著低于miR-NC对照组(P<0.01),并且,"挽救"实验表明在过表达miR-203a-3p的细胞中同时过表达PRMT5后会部分恢复miR-203a-3p对细胞增殖的抑制(P<0.01)。结论:miR-203a-3p可通过下调靶基因PRMT5的表达,进而抑制胃癌细胞增殖。因此,miR-203a-3p可作为胃癌疾病临床治疗的潜在靶点。

miR23b-3p和miRl25b-5p通过Etsl下调载脂蛋白（a）水平

目的探讨miR23b-3p和miRl25b-5p对HepG2细胞中载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达的影响及其作用机制。方法以HepG2细胞为研究对象，EtslsiRNA通过Lipo2000转染HepG2细胞，Westernblot检测细胞内Etsl及Apo（a）蛋白水平；通过Lipo2000分别将miR23b一3pmimic和miRl25b-5pmimic转染HepG2细胞，

miR-129-1-3p在浆液性卵巢癌中的表达及临床意义

目的:检测miR-129-1-3p在浆液性卵巢癌组织与正常输卵管伞端组织中的表达,并分析miR-129-1-3p与卵巢浆液性上皮性癌临床病理特征之间的关系。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)定量分析100例浆液性卵巢上皮性癌组织、50例正常输卵管伞端组织中miR-129-1-3p的表达,并将检测结果与临床和病理特征资料进行统计学分析。结果:浆液性卵巢癌组织中的miR-129-1-3p表达量显著低于正常输卵管伞端组织(P<0.01)。miR-129-1-3p的表达与FIGO分期、患者年龄、病理分化程度、淋巴结转移、血清CA125值无统计学差异(P>0.05)。结论:miR-129-1-3p可能作为抑癌因子参与了卵巢上皮性癌的发生发展,对卵巢上皮性癌具有潜在的辅助诊断意义,为寻找卵巢上皮性癌的生物靶向治疗提供理论依据。

LncRNA FZD10-AS1通过调控miR-337-3p/GPD1分子轴抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移

目的探讨长链非编码RNA(long⁃chain non⁃coding RNA,lncRNA)FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p上调甘油-3-磷酸脱氢酶1(glycerol⁃3⁃phosphate dehydrogenase 1,GPD1)基因的表达抑制骨肉瘤增殖和迁移的分子机制。方法收集青岛大学附属青岛妇女儿童医院儿童骨科2016年9月至2018年12月47例行骨肉瘤根治术切除的癌组织及相应癌旁组织,qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织及癌旁组织、骨肉瘤细胞株和正常成骨细胞中的表达量。选择FZD10⁃AS1表达量最低的细胞株为研究对象,Lipofectamine 2000转染试剂分别转染表达FZD10⁃AS1的质粒(观察组)和阴性对照质粒(对照组)至骨肉瘤细胞,CCK⁃8法和细胞划痕实验检测分别FZD10⁃AS1过表达对细胞增殖和迁移能力的影响。生物信息学预测FZD10⁃AS1的作用机制。qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1过表达对下游基因表达的影响,Western Blot检测有关蛋白的表达量。结果骨肉瘤组织中FZD10⁃AS1的表达明显少于癌旁组织(P<0.01)。骨肉瘤细胞株中FZD10⁃AS1的表达明显少于正常成骨细胞(P<0.01),在U⁃2OS细胞中表达量最少(P<0.01)。过表达FZD10⁃AS1明显抑制U⁃2OS细胞的增殖能力和迁移能力(P<0.05)。生物信息学显示,FZD10⁃AS1可互补结合miR⁃337⁃3p,miR⁃337⁃3p可进一步互补结合GPD1 mRNA。过表达FZD10⁃AS1后U⁃2OS细胞中miR⁃337⁃3p表达量明显下降(P<0.01),GPD1 mRNA和蛋白的表达量增加(P<0.01)。结论FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织和细胞株中表达明显降低,FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p促进GPD1基因的表达,从而抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移能力,FZD10⁃AS1可能成为骨肉瘤治疗及诊断的靶点。

血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p水平与婴幼儿增殖期面部血管瘤普萘洛尔停药后复发的关系

目的探讨血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p水平与婴幼儿增殖期面部血管瘤普萘洛尔停药后复发的关系。方法增殖期面部血管瘤患儿93例,均接受普萘洛尔治疗,随访治疗后血管瘤复发情况,并将患儿分为复发组(23例)和无复发组(70例)。治疗前、后采集静脉血,qRT⁃PCR检测血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达,分析血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达与增殖期面部血管瘤婴幼儿普萘洛尔停药后复发的关系。结果无复发组治疗后血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达较治疗前增高(P<0.05),复发组治疗后血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)。复发组治疗后血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达低于无复发组(P<0.05)。治疗后瘤体分级Ⅲ~Ⅳ级患儿血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达高于Ⅰ~Ⅱ级患儿(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示miR⁃199a⁃5p低表达、miR⁃378a⁃3p低表达、治疗后瘤体分级Ⅰ~Ⅱ级是增殖期面部血管瘤婴幼儿普萘洛尔停药后复发的危险因素(P<0.05)。结论血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p低表达与增殖期面部血管瘤婴幼儿普萘洛尔停药后血管瘤复发有关。