LINC00662通过调控miR⁃106a⁃5p/CAV1轴影响肝癌细胞对索拉非尼药物的敏感性

目的:探究长链非编码RNA⁃LINC00662对诱导肝细胞癌(HCC)细胞索拉非尼耐药的机制。方法:以HCC细胞(HepG2、HCCLM3),索拉非尼耐药肝癌细胞HCC⁃SR(HepG2⁃SR、HCCLM3⁃SR)为研究对象,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT⁃qPCR)和Western blotting检测各组细胞中LINC00662、miR⁃106a⁃5p和小窝蛋白⁃1(CAV1)表达水平。将si⁃LINC00662、miR⁃106a⁃5p模拟物分别转染HCC⁃SR细胞,通过细胞活性试剂盒(CCK⁃8)检测细胞对索拉非尼药物敏感性。且进一步通过双荧光素酶报告实验、RT⁃qPCR、Western blotting确定LINC00662与miR⁃106a⁃5p、miR⁃106a⁃5p与CAV1之间的靶向关系。结果:HCC⁃SR细胞中LINC00662和CAV1相对表达显著升高,miR⁃106a⁃5p表达显著降低(P<0.01,P<0.001);干扰LINC00662表达或过表达miR⁃106a⁃5p,HCC⁃SR细胞对索拉非尼药物敏感性显著升高(P<0.05,P<0.01)。且LINC00662靶向负性调控miR⁃106a⁃5p表达,miR⁃106a⁃5p靶向负性调控CAV1表达(P<0.05)。结论:LINC00662可以作为miR⁃106a⁃5p的竞争性内源性RNA(ceRNA)促进CAV1的表达,介导HCC细胞索拉菲尼的耐药性,干扰LINC00662表达可抑制HCC细胞索拉非尼耐药,增加索拉非尼的敏感性。

彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值

目的 探讨彩色多普勒超声检查联合血清微小RNA(miRNA)-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的早期诊断价值以及与卵巢癌周围血管侵袭的相关性。方法 回顾性选取2019年5月至2021年12月沧州市中心医院收治的102例卵巢肿瘤患者为研究对象,所有患者均行彩色多普勒超声检查,采用实时定量聚合酶链反应测定血清中miR-122-5p和miR-106b的表达水平。以病理诊断结果作为金标准,将研究对象分为卵巢癌组(n=51)和良性卵巢肿瘤组(n=51);卵巢癌组又分为侵袭组(n=32)和非侵袭组(n=19)。比较卵巢癌组与良性卵巢肿瘤组的临床资料(年龄、体重指数、生育和绝经)、彩色多普勒超声图像特征(实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4、肿瘤最大直径>10 cm)、彩色多普勒超声血流参数[搏动指数(PI)和血流阻力指数(RI)]、血清miR-122-5p、miR-106b水平。应用多因素Logistic回归模型探究相关变量对卵巢癌的独立预测作用。应用受试者工作特征(ROC)曲线评估彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值。并比较侵袭组与非侵袭组彩色多普勒超声血流参数及血清miR-122-5p、miR-106b水平,采用Pearson相关性分析对彩色多普勒超声血流参数、miR-122-5p、miR-106b与卵巢癌周围血管侵袭的相关性进行分析。结果 卵巢癌组实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4以及肿瘤最大直径>10 cm所占比例分别为80.39%、76.47%、74.51%、78.43%,均高于良性卵巢肿瘤组(9.80%、11.76%、29.41%、45.10%),PI、RI、血清miR-122-5p表达水平分别为0.94±0.27、0.48±0.11、1.01±0.27,均低于良性卵巢肿瘤组(1.47±0.32、0.71±0.19、1.42±0.30),miR-106b表达水平为4.57±1.13,高于良性卵巢肿瘤组(2.86±0.65),差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归模型分析显示,PI、RI、miR-122-5p、miR-106b是卵巢癌的独立预测因子,OR值分别为1.080、1.116、1.689、1.301(P<0.05)。ROC曲线分析显示,PI、RI、miR-122-5p和miR-106b以及联合诊断卵巢癌的曲线下面积(AUC)分别为0.869、0.874、0.859、0.898、0.969,其联合诊断的价值高于单独应用。侵袭组PI、RI和血清miR-122-5p表达水平均低于非侵袭组,血清miR-106b表达水平高于非侵袭组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,彩色多普勒超声血流参数PI、RI及血清miR-122-5p水平与卵巢癌周围血管侵袭呈负相关(r=-0.743、-0.696、-0.822,P<0.05),血清miR-106b水平与卵巢癌周围血管侵袭呈正相关(r=0.863,P<0.05)。结论 彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平可以提高卵巢癌的早期诊断价值,并且可根据这些指标评估卵巢癌周围血管侵袭程度,值得应用推广。

血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平对早期肝细胞癌的诊断价值

目的探讨微小RNA(micro RNA,miRNA)-574-5p、miRNA-106b、高敏甲胎蛋白异质体(highly sensutive-alpha fetoprotein heterogeneity L3,hs-AFP-L3)水平检测对早期肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的诊断价值。方法选择吉林省肿瘤医院2020年3月至2022年3月收治的HCC患者186例(HCC组)、肝硬化患者120例(肝硬化组)、接受体检的健康人员120例(对照组)为研究对象。比较各组血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平,并比较HCC组不同病理特征患者血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平,绘制受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3对早期HCC的诊断价值。结果HCC组、肝硬化组和对照组患者血清miRNA-574-5p(1.09±0.33比0.84±0.27比0.61±0.18)、miRNA-106b(1.22±0.39比0.71±0.22比0.56±0.19)、hs-AFP-L3[(23.08±4.36)μg/L比(2.61±0.79)μg/L比(0.47±0.14)μg/L]水平差异有统计学意义,HCC组患者各项指标均显著高于肝硬化组和对照组,肝硬化组患者各项指标均显著高于对照组(P均<0.05)。HCC肿瘤个数为多发、肿瘤最大径≥5 cm、中晚期、有远处转移、有静脉瘤栓患者血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平分别高于单发[miRNA-574-5p:1.24±0.43比0.83±0.27;miRNA-106b:1.46±0.45比0.97±0.31;hs-AFP-L3:(25.73±5.21)μg/L比(19.15±4.25)μg/L]、肿瘤最大径<5 cm[miRNA-574-5p:1.29±0.46比0.82±0.24;miRNA-106b:1.51±0.44比0.95±0.29;hs-AFP-L3:(26.82±5.03)μg/L比(19.12±3.99)μg/L]、早期[miRNA-574-5p:1.31±0.44比0.90±0.28;miRNA-106b:1.49±0.51比0.99±0.32;(26.60±4.98)μg/L比(18.94±4.02)μg/L]、无远处转移[miRNA-574-5p:1.36±0.46比0.88±0.25;1.45±0.41比0.96±0.32;hs-AFP-L3:(26.79±5.44)μg/L比(19.04±3.83)μg/L]、无静脉瘤栓患者[miRNA-574-5p:1.39±0.43比0.92±0.31;miRNA-106b:1.43±0.39比1.0±0.34;hs-AFP-L3:(26.41±4.54)μg/L比(20.11±4.01)μg/L](P<0.05);肝功能Child-Pugh分级A级、B级、C级患者血清miRNA-574-5p(0.85±0.26比1.08±0.37比1.27±0.40)、miRNA-106b(0.92±0.29比1.15±0.35比1.41±0.38)、hs-AFP-L3[(18.69±3.72)μg/L比(23.17±4.88)μg/L比(26.45±5.32)μg/L]含量逐渐增加(P均<0.05)。miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3联合检测诊断早期HCC的曲线下面积为0.919(95%CI为0.873~0.980),敏感度和特异度分别为0.882、0.901。结论miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3联合检测对早期HCC的诊断具有较高的临床价值。

LncRNA GAS5-AS1靶向miR-106a-5p调控结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

背景长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)生长停滞特异性转录本5反义RNA(growth arrest specific transcript 5 antisense RNA,GAS5-AS1)被发现在多种癌症中扮演肿瘤抑制因子的作用.但是其在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)进展中的作用和机制尚不清楚.目的探讨LncRNA GAS5-AS1靶向miR-106a-5p在CRC进展中的作用.方法实时荧光定量聚合酶链反应分析LncRNA GAS5-AS1和miR-106a-5p在43对CRC组织和癌旁组织样本中的表达.分别转染pcDNA、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1、anti-miR-NC、anti-miR-106a-5p、si-NC、si-LncRNA GAS5-AS1、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-NC、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-106a-5p mimics至HCT8细胞.细胞计数试剂盒-8法检测细胞活力;Transwell小室法检测迁移和侵袭细胞数.通过双荧光素酶报告实验确定LncRNA GAS5-AS1和miR-106a-5p的靶向关系.结果与癌旁组织比较,CRC组织中LncRNA GAS5-AS1表达降低(P<0.05),miR-106a-5p表达升高(P<0.05).与转染pcDNA比较,转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1后HCT8细胞活力、迁移、侵袭、miR-106a-5p表达显著降低(P<0.05).与转染anti-miR-NC比较,转染anti-miR-106a-5p后HCT8细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05).与转染si-NC比较,转染si-LncRNA GAS5-AS1后miR-106a-5p表达水平显著升高(P<0.05).与转染miR-NC比较,转染miR-106a-5p能显著降低LncRNA GAS5-AS1-WT载体的荧光素酶活性,表明miR-106a-5p是LncRNA GAS5-AS1的直接靶点.与转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-NC比较,转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-106a-5p mimics后HCT8细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P<0.05).结论LncRNA GAS5-AS1通过靶向miR-106a-5p来抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭.

超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对糖尿病足下肢血管病变的诊断价值

目的:探究超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对糖尿病足(DF)下肢血管病变(LEVD)的诊断价值。方法:选取2021年3月至2023年6月在我院就诊的90例DF患者为研究对象,根据是否合并LEVD分为LEVD组42例和非LEVD组48例。采用实时荧光定量PCR检测DF患者血清miR-106a-5p、miR-20b-5p表达水平,并对所有患者进行下肢血管超声检查。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对DF患者合并LEVD的诊断价值;采用一致性Kappa检验分析超声单独及联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p与金标准的一致性。结果:超声检查结果与金标准诊断结果一致性较高,Kappa值为0.642(P<0.05)。LEVD组血清miR-106a-5p、miR-20b-5p水平显著高于非LEVD组(P<0.05)。血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者发生LEVD的曲线下面积(AUC)分别为0.803、0.757。血清miR-106a-5p、miR-20b-5p检查结果与金标准诊断结果一致性均为中度,Kappa值分别为0.503、0.492(P<0.05)。超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p水平检查结果与金标准诊断结果一致性极高,Kappa值为0.866(P<0.05)。超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者LEVD的准确度、阴性预测值显著高于三者单独诊断(P<0.05)。结论:超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者LEVD的价值较高,值得推广。

高危型急性肺血栓栓塞症患者血清miR-34a-3p和miR-106b-5p的表达及意义

目的探讨高危型急性肺血栓栓塞症(APTE)患者血清微小RNA(miR)-34a-3p和miR-106b-5p的表达和意义。方法选取该院2022年2月至2023年2月收治的85例高危型APTE患者作为研究组;选择同期在该院就诊的80例非高危型APTE患者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测所有研究对象血清miR-34a-3p和miR-106b-5p水平。采用Pearson相关分析高危型APTE患者血清中miR-34a-3p与miR-106b-5p水平的相关性。采用多因素Logistic回归分析高危型APTE发生的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-34a-3p与miR-106b-5p对高危型APTE的诊断价值。结果与对照组比较,研究组血清miR-34a-3p、miR-106b-5p水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。高危型APTE患者血清miR-34a-3p水平与miR-106b-5p水平呈正相关(r=0.764,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-34a-3p与miR-106b-5p水平升高是发生高危型APTE的保护因素(P<0.05)。血清miR-34a-3p、miR-106b-5p水平单独及二者联合检测诊断高危型APTE的曲线下面积(AUC)分别为0.810、0.772和0.828,二者联合检测诊断高危型APTE的AUC明显大于血清miR-106b-5p单独检测(Z=2.231,P=0.030),与miR-34a-3p单独检测诊断高危型APTE的AUC比较,差异无统计学意义(Z=1.156,P=0.248)。结论高危型APTE患者血清中miR-34a-3p、miR-106b-5p水平明显降低,二者可能对高危型APTE具有较高的临床诊断价值。

急性脑梗死患者血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平及其临床意义

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者血清微小核糖核酸-106a-5p(miR-106a-5p)、神经损伤诱导蛋白1(NINJ1)、冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)的水平及其临床意义。方法选择2022年1月至2023年6月该院神经内科收治的151例ACI患者作为ACI组,另选择同期65例体检健康者作为对照组,根据静脉溶栓后90 d预后情况将ACI患者分为预后不良组和预后良好组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-106a-5p水平,通过酶联免疫吸附试验检测NINJ1、CIRP水平。采用多因素Logistic回归分析影响ACI患者预后的因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平对ACI患者预后的预测价值。结果与对照组比较,ACI组血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访90 d,151例ACI患者预后不良发生率为35.10%。与预后良好组比较,预后不良组年龄明显增大,美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分及血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。年龄增加、NIHSS评分升高和血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平升高均为ACI患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平联合检测预测ACI患者预后不良的曲线下面积为0.937,大于血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平单独检测预测的0.777、0.773、0.778(P<0.05)。结论ACI患者血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平升高是预后不良的独立危险因素,血清miR-106a-5p、NINJ1、CIRP水平联合检测对ACI患者预后不良有较高的预测价值。

姜黄素调控PTEN/miR⁃182⁃5p轴抑制乳腺癌发生发展的机制研究

目的探究姜黄素调控人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)PTEN/miR⁃182⁃5p轴抑制乳腺癌发生发展的机制。方法取人乳腺癌细胞株MCF⁃7进行体外培养并获得对数生长期细胞,加入不同浓度姜黄素,比较不同浓度姜黄素对乳腺癌细胞的抑制效率;按照实验需求,将体外培养的MCF⁃7细胞分为正常对照组、A组(姜黄素处理)、B组(姜黄素+转染miR⁃182⁃5p模拟物)、C组(姜黄素+转染PTEN抑制剂BpV+miR⁃182⁃5p抑制物),通过RT⁃PCR检测各组细胞PTEN、miR⁃182⁃5p表达水平;Western blot检测与细胞增殖、凋亡、转移侵袭相关的KI67、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、基质金属蛋白酶⁃2(MMP⁃2)以及MMP⁃9蛋白表达水平。结果姜黄素处理24 h、48 h均对乳腺癌细胞MCF⁃7的增殖具有抑制作用,且随姜黄素浓度升高抑制率呈上升趋势:80μmol/L抑制率>60μmol/L抑制率>40μmol/L抑制率>20μmol/L抑制率(F=276.512、255.478,P<0.05)。与正常对照组比较,A、B、C三组PTEN表达水平均升高(F=11.536,P<0.05),miR⁃182⁃5p表达水平均降低(F=10.896,P<0.05);与正常对照组比较,A、B、C组KI67、MMP⁃2、MMP⁃9蛋白表达均下降(F=10.569、10.412、8.210,P<0.05),Caspase 3表达上升(F=11.911,P<0.05)。结论姜黄素可通过调控PTEN/miR⁃182⁃5p轴,促进凋亡因子Caspase 3表达,抑制细胞增殖、转移及侵袭相关蛋白表达,发挥对乳腺癌发生发展过程的抑制。

miR-106a-5p过表达对ACLT诱导的骨关节炎大鼠软骨退变和细胞外基质降解的修复及血清炎症因子的影响

目的:本文旨在探究miR-106a-5p过表达对ACLT诱导的骨关节炎大鼠软骨退变和细胞外基质降解的修复及血清炎症因子的影响。方法:将大鼠按随机数字表法分为4组:Control组、ACLT组、ACLT+Scramble组和ACLT+miR-106a agomir组进行后续实验。HE染色检测病理组织损伤程度;RT-PCR检测miR-106a-5p表达;半自动图像数字化分析仪检测Tb.N、Tb.Sp、BV/TV;阿利新蓝染色检测软骨损伤;Western blot检测Aggrecan、SOX-9、typeⅡcollagen、Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平;ELISA检测外周血和骨组织中IL-6、TNF-α水平。结果:与Control组相比,ALCT组呈现明显病理损伤,miR-106a-5p表达降低(P<0.05),Tb.N、BV/TV降低(P<0.05),Tb.Sp升高(P<0.05),软骨损伤加重,Aggrecan、SOX-9、ColⅡ蛋白水平降低(P<0.05),cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9、Bax/Bcl-2升高(P<0.05),外周血和骨组织中IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05);与ACLT+Scramble组相比,ACLT+miR-106a agomir组病理损伤程度明显改善,miR-106a-5p表达升高(P<0.05),Tb.N、BV/TV明显升高(P<0.05),Tb.Sp明显降低(P<0.05),软骨损伤减轻,Aggrecan、SOX-9、ColⅡ蛋白水平升高(P<0.05),cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9、Bax/Bcl-2降低(P<0.05),外周血和骨组织中IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)。结论:miR-106a-5p过表达对ACLT诱导的骨关节炎模型大鼠病理损伤具有保护作用。

华蟾素通过miR-106a-5p/STAT3信号通路调控肺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的研究华蟾素对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以0.15μg/ml华蟾素处理肺癌A549细胞,qRT-PCR和Western blot检测miR-106a-5p和STAT3表达量,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡。转染miR-106a-5p模拟剂(mimic)和STAT3 siRNA至A549细胞中,检测细胞增殖和凋亡。靶基因预测软件预测miR-106a-5p和STAT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-106a-5p抑制剂(inhibitor)和pc DNA-STAT3至A549细胞中,并用0.15μg/ml华蟾素处理,检测细胞增殖和凋亡。结果华蟾素处理的A549细胞中,miR-106a-5p上调表达,STAT3下调表达,细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高。过表达miR-106a-5p和抑制STAT3的表达,均可提高A549细胞增殖抑制率和凋亡率。双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p和STAT3的靶向结合关系。抑制miR-106a-5p或过表达STAT3,可逆转华蟾素对A549细胞的增殖的抑制和凋亡的促进作用。结论华蟾素可抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控miR-106a-5p/STAT3信号通路有关,上述结论可为华蟾素治疗肺癌的分子机制提供新依据。

子宫内膜异位症患者内膜中miR-20b-5p、miR-106a-5p的表达及机制探讨

目的检测miR-20b-5p、miR-106a-5p、PTEN mRNA、CCNE1 mRNA在正常子宫内膜(N)、子宫内膜异位症(endometriosis,EM)患者在位内膜(eutopic endometrial,Eu)、子宫内膜异位症患者异位内膜(ectopic endometrial,Ec)组织中的表达,并探讨miR-20b-5p、miR-106a-5p对子宫内膜异位症细胞增殖与凋亡的影响。方法选择2017年5月-2018年5月在本院妇产科行腹腔镜手术及术后病理检查确诊的EM患者30例,年龄(32.4±6.2)岁,对照组选择同期行腹腔镜子宫肌瘤剔除术的患者30例,年龄(36.35±5.89)岁。采用qRT-PCR法检测Eu(n=30)、Ec(n=37)以及N(n=30)组织中miR-20b-5p、miR-106a-5p、PTEN mRNA、CCNE1 mRNA的表达,并用Pearson相关检验分析miR-20b-5p、miR-106a-5p与PTEN mRNA、CCNE1 mRNA的相关性。结果 Ec与Eu相比,miR-20b-5p、miR-106a-5p表达下降(P <0.001),PTEN mRNA的表达上升(P <0.001),CCNE1 mRNA的表达下降(P=0.005);Eu与N相比,miR-20b-5p表达上升(P=0.038),PTEN表达下降(P=0.049),miR-106a-5p及CCNE1的表达未见明显差异(P> 0.05);miR-20b-5p与PTEN mRNA在Eu及Ec中的表达呈负相关(r=-0.63,P <0.001;r=-0.42,P=0.01);mi R-106a-5p与PTEN mRNA的表达在Eu(r=-0.14,P=0.465)及Ec(r=-0.25,P=0.142)中不存在相关性。结论 miR-20b-5p可能通过PTEN上调细胞增殖,促进EM的发病。

lncRNA-H19通过靶向miR-106a-5p在骨关节炎软骨基质降解和钙化中的调控作用

目的:探讨长链非编码RNA H19通过靶向microRNA(miR)-106a-5p对骨关节炎(OA)软骨基质降解和钙化的调控作用。方法:收集临床骨关节炎软骨组织和健康软骨组织,采用实时荧光定量PCR检测软骨组织中lncRNA-H19、miR-106a-5p mRNA表达水平;将人软骨细胞系(HC-A)分为H19干扰组(si-H19)、阴性转染组(si-Control)、miR-106a-5p mimic组(miR-106a-5p)、mimic阴性对照组(miR-106a-5p-NC)、miR-106a-5p抑制剂组(inhibitor)、阴性抑制剂对照组(inhibitor-NC)组、inhibitor+si-H19和inhibitor-NC+si-H19组,检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)和骨涎蛋白(BSP)mRNA表达水平;Western blot检测软骨细胞基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-13和II型α1胶原纤维(COL2A1)的水平;CCK-8检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:OA软骨组织中lncRNA-H19 mRNA表达上调(P<0.05),miR-106a-5p mRNA表达下调(P<0.05);沉默lncRNA-H19可明显抑制软骨细胞凋亡,促进软骨细胞增殖(P<0.05),并下调MMP-1和MMP-13的表达水平(P<0.05),上调COL2A1的表达(P<0.05)。沉默lncRNA-H19可抑制软骨细胞ALP、OCN、BSP mRNA水平和ALP活性(P<0.05)。沉默miR-106a-5p逆转了沉默lncRNA-H19对软骨细胞基质降解和钙化标志物的抑制作用(P<0.05)。结论:lncRNA-H19可通过抑制miR-106a-5p表达,促进细胞外软骨基质的降解和钙化,从而参与OA的进展。

miR-106a-5p靶向ERK2逆转胃癌细胞MGC-803对顺铂化疗的耐药性

目的探究miR-106a-5p与细胞外调节蛋白激酶(ERK2)的靶向作用关系对胃癌细胞MGC-803顺铂耐药性的影响。方法通过RT-PCR检测miR-106a-5p与ERK2在胃癌细胞MGC-803和耐药细胞株MGC-803/顺铂(DDP)中的表达差异;荧光素酶报告实验确定miR-106a-5p与ERK2的靶向关系;将miR-106a-5p mimic与过表达载体pcDNA3.1-ERK(pc-ERK)分别转染至耐药细胞株MGC-803/DDP中,并分为control组、mimic组、ERK2组和mimic+ERK2共转染组,MTT和EDU检测细胞增殖活力,Hochest33342检测细胞凋亡水平,Transwell检测细胞侵袭能力,通过Western blot检测各组细胞中E-钙黏附蛋白(E-cad)、N-钙黏附蛋白(Ncad)的表达水平。结果胃癌细胞MGC-803中miR-106a-5p的表达量高于耐药细胞株(P<0.05),而ERK2的表达量低于耐药细胞株(P<0.05)。其次,荧光素酶报告实验表明miR-106a-5p靶向抑制ERK2的表达。转染miR-106a-5p mimic和pc-ERK之后,与对照组相比,ERK2组细胞的活力、细胞增殖数量和细胞侵袭数量均升高(P<0.05),凋亡数量减少(P<0.05);mimic组中细胞的活力、细胞增殖数量和细胞侵袭数量较对照组均下降(P<0.05),凋亡数量增多(P<0.05);而与ERK2组相比,mimic+ERK2组细胞的活力、细胞增殖数量和细胞侵袭数量下降(P<0.05),凋亡数量增多(P<0.05)。最后,与对照组相比,miR-106a-5p mimic组中E-cad表达量升高(P<0.05),而N-cad表达量下降(P<0.05);而ERK2组中E-cad表达量下降(P<0.05),而N-cad表达量升高(P<0.05);与ERK2组相比,mimic+ERK2组中E-cad表达量上升(P<0.05),而N-cad表达量下降(P<0.05)。结论miR-106a-5p可通过靶向下调ERK2的表达,降低胃癌细胞对顺铂的耐药性,有望联合临床上顺铂化疗方案并提高顺铂化疗疗效。

miR-106a-5p通过调控TLR4表达对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-106a-5p通过调控TLR4对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外培养RA滑膜成纤维细胞MH7A,将细胞分为8组:miR-NC组(转染miR-NC)、miR-106a-5p组(转染miR-106a-5p)、si-NC组(转染siNC)、si-TLR4组(转染si-TLR4)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-106a-5p组(转染anti-miR-106a-5p)、miR-106a-5p+pcDNA组(共转染miR-106a-5p和pcDNA)以及miR-106a-5p+TLR4组(共转染miR-106a-5p和TLR4)。采用qRT-PCR检测RA患者滑膜中miR-106a-5p和TLR4 m RNA的表达;MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blotting检测TLR4、PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶实验验证miR-106a-5p和TLR4关系。结果:与对照组相比,RA滑膜组织中miR-106a-5p表达明显降低(P<0.05),TLR4 mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-106a-5p组的miR-106a-5p表达、细胞凋亡率和Bax蛋白表达明显增加(P<0.05);48 h及72 h的细胞OD值、PCNA和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-TLR4组的TLR4 mRNA及蛋白表达、48 h及72 h的细胞OD值、PCNA和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05);细胞凋亡率和Bax蛋白表达明显增加(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-106a-5p组的TLR4-WT荧光素酶活性明显降低(P<0.05),而TLR4-MUT荧光素酶素酶活性无明显变化。与anti-miR-NC组相比,anti-miR-106a-5p组中miR-106a-5p表达明显降低(P<0.05),TLR4蛋白表达明显增加(P<0.05)。与miR-106a-5p+pcDNA组相比,miR-106a-5p+TLR4组的TLR4 mRNA及蛋白表达、48 h及72 h的细胞OD值、PCNA和Bcl-2蛋白表达明显增加(P<0.05);细胞凋亡率和Bax蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:miR-106a-5p通过下调TLR4抑制滑膜成纤维细胞MH7A的增殖,并诱导其细胞凋亡。

miRNA-106b-5p表达水平与急性ST段抬高型心肌梗死患者心室重构的关系

目的分析急性ST段抬高型心肌梗死(ST segment elevation myocardial infarction,STEMI)患者外周血微小核糖核酸-106b-5p(microRNA-106b-5p,miR-106b-5p)水平与梗死后出现心室重构(ventricular remodeling,VR)和发生主要心脏不良事件(major adverse cardiac events,MACE)的相关性。方法选取2018年1月~2020年2月我院就诊的STEMI患者90例作为STEMI组,同期临床及冠脉造影证实为稳定型冠心病(stable coronary heart disease,SCAD)90例作为对照组。使用荧光实时定量法(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测两组入院时外周血miR-106b-5p水平,根据STEMI组术后及出院6个月的心脏彩超结果,判断STEMI组VR的情况。以STEMI最佳诊断阈值为分界,分析STEMI组不同miR-106b-5p水平与VR的关系。采用Kaplan-Meier生存曲线分析STEMI组不同miR-106b-5p水平患者出院后12个月的MACE发生情况。结果低表达组较高表达组CK.CK-MB和CTnI显著增大(P<0.01),CK、CK-MB和CTnI与miRNA-0.6-5P呈负相关关系(均P<0.05)。高表达组(miR-106b-5p≥0.41,58例)出院后6个月出现VR 1例(2%),显著低于低表达组(miR-106b-5p<0.41,32例)5例(16%),(P<0.05);高表达组随访12月2例(3%)发生MACE(心肌梗死1例和卒中1例),显著低于低表达组5例(16%)(心肌梗死3例和卒中2例)(Log-rankχ^2=4.725,P<0.05)。出院后6个月外周血miRNA-106-5p水平与左室舒张末内径(LVEDd)呈负相关(r=-0.437,P<0.05),与左室射血分数(LVEF)呈正相关(r=0.414,P<0.05)。结论外周血miR-106b-5p水平与心梗后VR及MACE存在相关性。

miRNA-106-3p、miRNA-654-5p与结直肠癌肝转移患者术后复发的关系研究

目的研究微小RNA-106-3p(miRNA-106-3p)、微小RNA-654-5p(miRNA-654-5p)与结直肠癌(CRC)肝转移患者术后复发的关系。方法选取泰州市人民医院2014年12月至2017年12月收治的110例CRC肝转移患者,均行手术治疗。采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测两组患者miRNA-106-3p、miRNA-654-5p的表达水平。随访3年,5例失访,余105例根据复发情况分为复发组(30例)、未复发组(75例),比较两组手术前后的miRNA-106-3p、miRNA-654-5p表达水平。应用单因素分析及Logistic回归分析可能影响CRC肝转移术后复发的因素。结果手术前,两组miRNA-106-3p、miRNA-654-5p表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。手术后,两组miRNA-106-3p、miRNA-654-5p表达均上调,且复发组高于未复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果显示,复发组与未复发组肝转移病灶分布、肝转移瘤范围、术后miRNA-106-3p及miRNA-654-5p表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。两组性别、年龄、吸烟饮酒史、原发肿瘤位置及分化程度、脉管瘤栓、TNM分期、手术方式等差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析显示,肝转移病灶双叶分布、肝转移瘤位于全肝、术后miRNA-106-3p、miRNA-654-5p高表达是影响CRC肝转移术后复发的危险因素。结论术后miRNA-106-3p、miRNA-654-5p表达上调可辅助诊断CRC肝转移患者术后是否出现复发现象,具有较高的临床价值。

基于miR-106b-5p调控CCND1基因研究幽门螺杆菌促进食管癌细胞增殖的功能机制

目的研究幽门螺杆菌(Hp)感染通过miR-106b-5p/细胞周期蛋白D1(CCND1)途径促进食管癌细胞增殖的作用机制。方法收集手术切除的食管癌组织46份,检测Hp感染情况及miR-106b-5p、CCND1的表达水平。培养食管癌TE-1细胞株,分别给予不处理、Hp感染、转染阴性对照(NC)序列、转染miR-106b-5p模拟物、转染NC序列同时加入Hp菌液、转染miR-106b-5p模拟物同时加入Hp菌液处理,分别作为对照组、Hp组、miR-NC组、miR-106b-5p组、miR-NC+Hp组、miR-106b-5p+Hp组,检测细胞增殖情况、细胞周期及miR-106b-5p、CCND1的表达水平。结果Hp阳性的食管癌组织中miR-106b-5p的表达水平低于Hp阴性的食管癌组织,CCND1的表达水平高于Hp阴性的食管癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。食管癌组织中miR-106b-5p与CCND1的表达水平呈负相关(r=-0.414,P=0.004);Hp组TE-1细胞的A_(490)水平、细胞周期S期及G2/M期比例、CCND1的表达水平高于对照组,G0/G1期比例及miR-106b-5p的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-106b-5p组TE-1细胞中野生型CCND1报告基因的荧光值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-106b-5p+Hp组TE-1细胞的A_(490)水平、细胞周期S期及G2/M期比例、CCND1的表达水平低于miR-NC+Hp组,G0/G1期比例及miR-106b-5p的表达水平高于miR-NC+Hp组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Hp感染食管癌细胞促进细胞增殖、加速细胞周期,这一作用与调控miR-106b-5p/CCND1途径有关。

异源表达偏关苜蓿miR397-5p增强烟草干旱胁迫耐受能力

偏关苜蓿是山西地方优良种质,具有抗逆性强、适应性强、耐瘠薄的特点,挖掘偏关苜蓿抗旱相关基因,并将其应用于紫花苜蓿遗传改良,对于优异新种质创制具有重要意义。利用miRNA测序从偏关苜蓿中筛选出miR397-5p为潜在的干旱胁迫响应基因,通过转基因烟草验证了偏关苜蓿miR397-5p对干旱胁迫的响应,并找到其潜在的下游调控因子。结果表明:干旱胁迫处理后,过表达miR397-5p烟草的可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸等渗透调节物质含量增加,过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)的活性提高,丙二醛(MDA)含量降低。干旱胁迫下,miR397-5p下调其靶基因LAC4的表达;在过表达miR397-5p烟草中,PAL、4CL、CCR、CAD、HCT、F5H、PAO等大部分木质素生物合成途径关键酶基因相对表达量下调,仅C4H、CCoAOMT、COMT等基因相对表达量上调,同时,过表达miR397-5p烟草木质素含量降低,大部分基因相对表达量和木质素含量具有一致的变化趋势。由此推断偏关苜蓿可能通过miR397-5p-LAC4调控木质素积累响应干旱胁迫,但具体内在机制有待进一步研究。研究结果可为紫花苜蓿遗传改良提供基因资源,对于优异新种质的创制具有潜在价值。

miR⁃21⁃5p靶向BNC2调控食管癌的恶性生物行为的研究

目的:探讨miR-21-5p靶向肌成纤维细胞的身份转录因子(BNC2)调控食管癌(esophageal cancer,ESCA)细胞增殖、迁移、侵袭机制。方法:应用实时定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测食管癌组织中miR-21-5P和BNC2的相对表达量并用统计学分析其是否存在表达差异。用miR-21-5p mimics和miR-21-5P inhibitor和阴性对照(NC包括mimcs NC、inhibitor NC)分别转染ECA109、KYSE30两个食管癌细胞系后,进行细胞功能试验CCK8,Transwell等实验方法观察当miR-21-5p过表达或敲低时细胞的增殖、迁移和侵袭能力是否受到影响。通过生物信息学方法预测分析miR-21-5P的靶基因并通过双荧光素酶实验、qRT-PCR和Western blot实验验证miR-21-5p与靶向基因的负向调控关系。结果:qRT-PCR结果显示,相对于癌旁组织,BNC2在食管癌组织中的表达量显著性降低,而miR-21-5P则显著性升高,CCK8、Transwell实验结果显示,当miR-21-5P过表达时,细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强,反之细胞功能受到抑制。也就是说,miR-21-5P在食管恶性肿瘤中起着促癌基因的功能作用。通过生物信息学方法预测miR-21-5P的靶基因为BNC2,双荧光素酶实验结果表明miR-21-5P与野生型BNC2′-UTR靶向结合,qRT-PCR和WB实验结果表示在食管癌细胞中,当miR-21-5P过表达时,BNC2的表达量降低,当miR-21-5P被敲低时,BNC2的表达量升高。这些结果显示miR-21-5P与BNC2存在靶向关系。结论:在食管癌中,miR-21-5p直接靶向BNC2,其调节作用可能从而导致癌症的增殖迁移和侵袭作用。

miR⁃138⁃5p靶向Nir1调控胶质瘤细胞的侵袭

目的 探讨miR-138-5p与PYK2 N端结构域相互作用受体1(PYK2 N-terminal domain-interacting receptor 1,Nir1)之间的关系并判断其是否通过与Nir1结合影响胶质瘤的侵袭。方法 比较不同胶质瘤细胞系中miR-138-5p表达水平及其对胶质瘤细胞U251和H4中Nir1蛋白的影响、转染后胶质瘤细胞侵袭能力,检测miR-138-5p能否与Nir1靶向结合。结果 低侵袭人胶质瘤H4细胞中miR-138-5p的水平显著高于高侵袭性的胶质瘤U251、LN229和U87细胞(P<0.05);在U251、H4细胞中,miR-138-5p过表达组Nir1蛋白表达量较其对照组(miR-negative control,miR-NC)降低;miR-138-5p抑制组中Nir1蛋白表达量较其对照组(inhibitor NC)升高。然而,miR-138-5p过表达组中Nir1的mRNA水平较其对照组无明显改变(P>0.05)。miR-138-5p过表达组穿过基底膜小孔的U251、H4细胞数明显少于其对照组(P<0.05)。miR-138-5p过表达显著降低Nir1-3’-UTR的荧光素酶活性。结论 胶质瘤细胞中miR-138-5p与Nir1结合,可通过降低Nir1的翻译、减少Nir1蛋白的表达抑制胶质瘤细胞的侵袭能力。