miR⁃138⁃5p靶向Nir1调控胶质瘤细胞的侵袭

目的 探讨miR-138-5p与PYK2 N端结构域相互作用受体1(PYK2 N-terminal domain-interacting receptor 1,Nir1)之间的关系并判断其是否通过与Nir1结合影响胶质瘤的侵袭。方法 比较不同胶质瘤细胞系中miR-138-5p表达水平及其对胶质瘤细胞U251和H4中Nir1蛋白的影响、转染后胶质瘤细胞侵袭能力,检测miR-138-5p能否与Nir1靶向结合。结果 低侵袭人胶质瘤H4细胞中miR-138-5p的水平显著高于高侵袭性的胶质瘤U251、LN229和U87细胞(P<0.05);在U251、H4细胞中,miR-138-5p过表达组Nir1蛋白表达量较其对照组(miR-negative control,miR-NC)降低;miR-138-5p抑制组中Nir1蛋白表达量较其对照组(inhibitor NC)升高。然而,miR-138-5p过表达组中Nir1的mRNA水平较其对照组无明显改变(P>0.05)。miR-138-5p过表达组穿过基底膜小孔的U251、H4细胞数明显少于其对照组(P<0.05)。miR-138-5p过表达显著降低Nir1-3’-UTR的荧光素酶活性。结论 胶质瘤细胞中miR-138-5p与Nir1结合,可通过降低Nir1的翻译、减少Nir1蛋白的表达抑制胶质瘤细胞的侵袭能力。

miR⁃138⁃5p在骨关节炎中作用机制的研究进展

miR⁃138⁃5p作为一种微小RNA,在骨关节炎发病中起重要调节作用,其可通过NF⁃κB、Wnt/β⁃catenin、PI3K/AKT等信号通路作用调节细胞的炎症、细胞凋亡与增殖、基质降解等生物学过程进而影响骨关节炎的发生和发展。笔者就miR⁃138⁃5p对骨关节炎作用机制的研究进展作一综述。

结直肠癌组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白的表达变化及其意义

目的观察结直肠癌(CRC)组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DNA损伤结合蛋白1和CUL4相关因子7(DCAF7)蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法CRC患者98例,均接受手术治疗,术中留取CRC组织和癌旁组织,采用Real-time PCR法检测CRC组织和癌旁组织中miR-138-5p、miR-876-5p,采用蛋白印迹法检测CRC组织和癌旁组织中DCAF7蛋白,分析miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者临床病理参数的关系。以CRC组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量的中位数为临界值,将CRC患者分为miR-138-5p高表达组和miR-138-5p低表达组、miR-876-5p高表达组和miR-876-5p低表达组、DCAF7蛋白高表达组和DCAF7蛋白低表达组,并分析miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者预后的关系。结果CRC组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量分别为1.36±0.29、1.41±0.36、0.59±0.19,癌旁组织中miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量分别为2.15±0.48、2.08±0.44、0.20±0.08,两者相比,P均<0.05。miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者是否合并淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关(P均<0.05)。miR-138-5p低表达组3年总体生存率为67.3%,miR-138-5p高表达组3年总体生存率为86.6%,两组相比,P<0.05。miR-876-5p低表达组3年总体生存率为66.7%,miR-876-5p高表达组3年总体生存率为85.1%,两组相比,P<0.05。DCAF7蛋白高表达组3年总体生存率为67.2%,DCAF7蛋白低表达组3年总体生存率为87.5%,两组相比,P<0.05。结论CRC组织中miR-138-5p低表达、miR-876-5p低表达、DCAF7蛋白高表达,miR-138-5p、miR-876-5p、DCAF7蛋白相对表达量与CRC患者是否合并淋巴结转移、TNM分期、浸润深度有关。与miR-138-5p高表达、miR-876-5p高表达、DCAF7蛋白低表达的CRC患者相比,miR-138-5p低表达、miR-876-5p低表达、DCAF7蛋白高表达的CRC患者术后3年总体生存率低。

沉默lncRNA MCF2L-AS1通过miR-138-5p/AnxA2轴抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究lncRNA MCF2L-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响与机制。方法:qRT-PCR检测正常人乳腺上皮细胞系MCF-10A、乳腺癌细胞系(MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231)中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p水平;将si-NC、si-MCF2L-AS1、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor分别转染至MDA-MB-415细胞并命名为si-NC组、si-MCF2L-AS1组、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC组、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor组,未做任何处理的MDA-MB-415细胞记为NC组。qRT-PCR检测MDA-MB-415细胞中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p表达;MTT法检测MDA-MB-415细胞增殖情况;流式细胞术检测MDA-MB-415细胞凋亡率;Transwell检测MDA-MB-415细胞侵袭、迁移数量;Western blot检测MDA-MB-415细胞E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、AnxA2蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p、AnxA2的关系;小鼠异种移植实验检测肿瘤生长。结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231细胞中lncRNA MCF2L-AS1、AnxA2水平显著上调(P<0.05),miR-138-5p表达显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-MCF2L-AS1组MDA-MB-415细胞OD 560 nm值、迁移、侵袭细胞数量、lncRNA MCF2L-AS1表达、N-cadherin、Vimentin蛋白水平、小鼠肿瘤体积、肿瘤质量显著下降(P<0.05),MDA-MB-415细胞凋亡率、miR-138-5p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而抑制miR-138-5p表达减弱了沉默lncRNA MCF2L-AS1抑制MDA-MB-415细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长的效果;lncRNA MCF2L-AS1负向调控miR-138-5p/AnxA2轴。结论:沉默lncRNA MCF2L-AS1可能通过上调miR-138-5p来下调AnxA2的表达,进而抑制乳腺癌MDA-MB-415细胞增殖、迁移和侵袭。

老年急性脑梗死患者血清circTTC3和miR-138-5p水平变化及意义

目的探究老年急性脑梗死(ACI)患者血清环状RNA TTC3(circTTC3)和微小RNA-138-5p(miR-138-5p)水平变化及意义。方法选取2021年9月—2023年9月四川大学华西医院老年医学中心/干部医疗科诊治老年ACI患者128例(ACI组),根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)分为轻度亚组42例、中度亚组49例和重度亚组37例,同期医院门诊体检的健康人员120例作为健康对照组;采用实时荧光定量PCR法测定血清circTTC3和miR-138-5p表达水平,Pearson法分析老年ACI患者血清circTTC3和miR-138-5p的相关性,Spearman法分析老年ACI患者血清circTTC3和miR-138-5p表达水平与NIHSS评分相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清circTTC3和miR-138-5p表达水平对老年ACI患者神经缺损程度的诊断价值。结果与健康对照组比较,ACI组血清circTTC3表达水平升高,miR-138-5p降低(t/P=17.207/<0.001、16.239/<0.001)。血清circTTC3水平比较,轻度亚组<中度亚组<重度亚组,miR-138-5p表达水平比较,轻度亚组>中度亚组>重度亚组(F/P=26.579/<0.001、105.935/<0.001)。老年ACI患者血清circTTC3表达水平与NIHSS评分呈正相关(r=0.521,P<0.001),与大脑中动脉(MCA)、大脑前动脉(ACA)血流速度呈负相关(r=-0.425、-0.392,P均<0.001);miR-138-5p表达水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.785,P<0.001),与MCA、ACA血流速度呈正相关(r=0.571、0.635,P均<0.001)。circTTC3、miR-138-5p及二者联合诊断ACI神经缺损程度的AUC分别为0.817、0.810、0.878,二者联合诊断价值优于单独诊断(Z/P=2.106/0.035、2.406/0.016)。结论老年ACI患者血清circTTC3表达水平升高,miR-138-5p表达水平降低,二者与患者病情的严重程度密切相关,可能作为ACI病情诊断、治疗相关的作用靶点。

miR-138-5p靶向调控SOX4对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的:研究微小RNA-138-5p(miR-138-5p)通过调控SOX4抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡的机制。方法:分别利用miR-NC与miR-138-5p体外模拟物(mimics)转染骨肉瘤细胞系MG63,构建阴性对照与miR-138-5p上调表达模型;采用CCK8法检测细胞增殖活力;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力和迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡变化;通过双荧光素酶活检检测miR-138-5p与SOX4的相互作用关系;利用Real-time PCR(RT-PCR)法检测不同处理组中miR-138-5p与SOX4的mRNA水平表达变化;利用Western blot法检测不同处理组中SOX4及凋亡相关蛋白BAX与BCL2的表达变化。结果:利用miR-138-5p mimics转染MG63细胞后,细胞中miR-138-5p表达较对照组显著上调(t=8.661,P=0.001);miR-NC与miR-138-5p mimics分别转染细胞24 h、48 h以及72 h后,CCK8结果显示MG63细胞的增殖能力较对照组显著降低(24 h:t=4.145,P=0.0032;48 h:t=13.88,P<0.0001;72 h:t=14.78,P<0.0001);Transwell实验结果显示与miR-NC组相比,miR-138-5p mimics组细胞侵袭能力显著下降(t=6.573,P=0.0028),迁移水平大幅度降低(t=3.01,P=0.0395);流式细胞仪结果显示miR-138-5p mimics组MG63细胞的凋亡水平较miR-NC组显著升高(t=10.3,P=0.0005);RT-PCR和Western blot实验分别证实miR-138-5p转染后,骨肉瘤细胞中SOX4的mRNA和蛋白水平表达均受到明显抑制;而凋亡相关蛋白BAX表达升高,抗凋亡蛋白BCL2表达降低。结论:miR-138-5p通过靶向下调SOX4的表达参与抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,并诱导细胞凋亡。

非小细胞肺癌患者血清LncRNA FAM138B、miR-105-5p表达与病理特征的关系

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清长链非编码RNA序列相似性家族138成员B(LncRNA FAM138B)、微小RNA-105-5p(miR-105-5p)表达与病理特征的预后的关系。方法选取2018年1月至2019年12月收治的110例NSCLC患者为NSCLC组,另选取同期60例体检健康者为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清LncRNA FAM138B、miR-105-5p表达。分析血清LncRNA FAM138B、miR-105-5p表达与NSCLC患者病理特征的关系。StarBase数据库预测LncRNA FAM138B与miR-105-5p的关系。采用Pearson相关性分析NSCLC患者血清LncRNA FAM138B与miR-105-5p表达的相关性,多因素Cox回归分析NSCLC患者预后影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA FAM138B、miR-105-5p表达对NSCLC患者预后的预测价值。结果与对照组比较,NSCLC组血清LncRNA FAM138B表达降低,miR-105-5p表达升高(P<0.05)。经StarBase数据库预测,LncRNA FAM138B与miR-105-5p存在互补序列。Pearson相关性分析显示,NSCLC患者血清LncRNA FAM138B与miR-105-5p表达呈负相关(r=-0.770,P<0.001)。不同分化程度、TNM分期、淋巴结转移NSCLC患者LncRNA FAM138B、miR-105-5p表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。110例NSCLC患者3年总生存率为56.36%(62/110)。K-M生存曲线分析显示,LncRNA FAM138B高表达组总生存率高于低表达组,miR-105-5p高表达组总生存率高于低表达组(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,低分化、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移和miR-105-5p≥1.494为NSCLC患者死亡的独立危险因素,LncRNA FAM138B≥0.871为独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清LncRNA FAM138B、miR-105-5p表达单独与联合预测NSCLC患者预后的曲线下面积分别为0.783、0.779、0.905,二项联合预测的曲线下面积最大(P<0.05)。结论NSCLC患者血清LncRNA FAM138B低表达,miR-105-5p高表达,与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后有关,可能成为NSCLC患者预后的辅助预测指标。

非小细胞肺癌患者血清miR-873和miR-138-5p表达水平及其与免疫微环境及预后的相关性分析

目的探讨血清微小核糖核酸(micro RNA,miRNAs)-873和微小核糖核酸-138-5p表达与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者肿瘤免疫微环境(tumor immune microenvironment,TIME)以及预后的关系。方法选择2019年2月~2021年2月重庆医科大学附属巴南医院收治的108例NSCLC患者(NSCLC组)和65例门诊体检的健康志愿者(对照组)。实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-873和miR-138-5p表达,多重免疫荧光染色法检测TIME指标,出院后定期随访。Pearson分析血清miR-873和miR-138-5p表达与TIME指标的相关性,Kaplan-Meier和COX比例风险回归分析miR-873,miR-138-5p与NSCLC患者预后的关系。结果与对照组比较,NSCLC组血清miR-873(1.02±0.23 vs 3.15±0.82)和miR-138-5p(1.21±0.26 vs 3.54±0.92)表达降低,差异具有统计学意义(t=-25.426,-24.769,均P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、低中度分化患者血清miR-873和miR-138-5p表达低于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、高度分化患者(t=9.615,10.253;6.889,3.361,均P<0.05)。血清miR-873,miR-138-5p表达与PD-1,PD-L1,CD4和CD8 H值呈负相关(r=-0.418~-0.673,均P<0.05)。低表达miR-873和miR-138-5p的NSCLC患者OS生存率低于高表达miR-873和miR-138-5p的NSCLC患者(Log-Rankχ^(2)=4.724,5.607,P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期是NSCLC患者不良预后的危险因素(P<0.05),miR-873,miR-138-5p是保护因素(P<0.05)。结论NSCLC患者血清miR-873和miR-138-5p表达下调,且与TIME以及低生存率有关。

miRNA-138-5p靶向调控胱天蛋白酶3减缓吸烟所致睾丸支持细胞TM4细胞凋亡

近年来研究表明,长期大量吸烟可致睾丸出现不可逆性损伤进而出现精子发生受阻,凋亡信号通路在其中发挥着关键作用,其分子调控机制仍有待深入研究。本研究旨在探讨miRNA-138-5p在香烟烟雾所致小鼠睾丸支持细胞TM4细胞(正常小鼠睾丸Sertoli细胞)损伤中的靶向调控机制。MTT法、乳酸脱氢酶法和TUNEL法结果显示,CSE干预后的TM4细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞毒性显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05);RT-PCR和Western印迹结果证明,10%CSE干预TM4细胞后,凋亡前体基因p53、促凋亡基因Bak和胱天蛋白酶3(caspase-3)的mRNA和蛋白质表达水平显著上调(P<0.05);在TM4细胞中转染miRNA-138-5p过表达质粒后同样进行CSE干预,结果显示,支持细胞存活率较转染前显著升高(P<0.05),凋亡阳性细胞数较转染前显著降低(P<0.05),凋亡前体p53基因、促凋亡基因Bak和Caspase-3的mRNA和蛋白质表达较转染前显著下调(P<0.05);沉默miRNA-138-5p后,Bak、胱天蛋白酶3的mRNA和蛋白质表达水平显著增加(P<0.05);在线数据库分析显示,miRNA-138-5p与胱天蛋白酶3具有较高的匹配预测值,双荧光素酶报告基因结果显示,Bak未结合至miRNA-138-5p,而胱天蛋白酶3可以靶向结合至miRNA-138-5p。以上结果提示,miRNA-138-5p可靶向调控胱天蛋白酶3,减缓吸烟所致睾丸支持细胞凋亡,具有支持细胞的保护作用。

miR-138-5p靶向调控RAB22A表达抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-138-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移与侵袭的影响以及其作用机制。方法:U251细胞分为miR-NC组(对照组)、miR-mimics组、miR-inhibitor组以及miR-mimics+RAB22A-pcDNA3.1组。qRT-PCR检测miR-138-5p在胶质瘤细胞中的表达量;CCK8实验检测U251细胞的增殖能力;Transwell实验检测U251细胞的迁移和侵袭能力;Targetscan数据库预测miR-138-5p的下游靶基因;运用双荧光素酶报告基因实验验证细胞周期蛋白RAB22A是miR-138-5p的靶基因;RNA结合蛋白免疫沉淀实验进一步验证miR-138-5p与RAB22A之间的相互作用;运用蛋白免疫印迹实验检测组织和细胞中RAB22A的蛋白表达水平。结果:与正常人星形胶质细胞相比较,miR-138-5p在胶质瘤细胞中表达量降低(P<0.05);CCK8和Transwell实验结果表明,在U251细胞中,过表达miR-138-5p能显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05);运用Targetscan数据库预测miR-138-5p下游靶基因为RAB22A,miR-138-5p作用于RAB22A的3'UTR区域,双荧光素酶报告基因实验与蛋白免疫沉淀实验结果证实miR-138-5p与RAB22A之间的相互作用;RAB22A在胶质瘤细胞中明显高表达(P<0.05),在U251细胞中过表达miR-138-5p明显抑制RAB22A的表达(P<0.05)。结论:miR-138-5p在胶质瘤细胞中表达降低,miR-138-5p通过下调RAB22A表达而抑制细胞增殖、迁移和侵袭。

miR‑15a‑5p对子痫前期胎盘滋养细胞自噬的影响

目的探讨miR‑15a‑5p对子痫前期胎盘滋养细胞自噬的影响。方法收集2020年12月至2022年12月的正常妊娠胎盘组织和子痫前期胎盘组织各20例。采用荧光定量PCR检测胎盘组织和滋养细胞中miR‑15a‑5p的表达,并对其表达水平与患者血压做相关性分析;将HTR8‑S/Vneo细胞分正常组(control)和缺氧组(hypoxia),观察缺氧对miR‑15a‑5p表达的影响。另设mimic‑NC组、mimic‑NC+hypoxia组、miR‑15a‑5p mimic组、miR‑15a‑5p mimic+hypoxia、inhibitor‑NC组、inhibitor‑NC+hypoxia、miR‑15a‑5p inhibitor组、miR‑15a‑5p inhibitor+hypoxia组,观察miR‑15a‑5p对缺氧诱导的滋养细胞自噬相关蛋白LC3B和p62蛋白的影响。用Western blot检测各组中自噬相关蛋白LC3B和p62蛋白的表达水平;TargetScan网站预测miR‑15a‑5p的靶基因,检测其在胎盘组织和滋养细胞中的表达水平。结果与对照组相比,miR‑15a‑5p在子痫前期胎盘组织和缺氧滋养细胞中的表达均增高,且与患者血压呈正相关;缺氧条件下过表达miR‑15a‑5p,LC3BⅡ/Ⅰ表达增高,P62蛋白相对表达量降低;干扰miR‑15a‑5p后,LC3BⅡ/Ⅰ表达量降低,p62蛋白表达量升高;荧光定量PCR及Western blot检测结果发现YAP1在子痫前期胎盘组织和缺氧滋养细胞中的表达水平明显降低。结论miR‑15a‑5p在子痫前期胎盘滋养细胞中的高表达,其可能通过与YAP1结合从而促进PE自噬的发生。

内质网应激头颈部鳞状细胞癌细胞通过外泌体miR⁃26a⁃5p调控PTEN/AKT通路促进巨噬细胞PD⁃L1表达

目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的头颈部鳞状细胞癌(head and neck squa⁃mous cell carcinoma,HNSCC)细胞分泌的外泌体miRNA表达变化对巨噬细胞的影响机制。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。通过蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)和实时荧光定量PCR实验(RT⁃qPCR)检测HNSCC肿瘤组织及癌旁组织ERS相关蛋白,包括蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R⁃like endoplas⁃mic reticulum kinase,PERK)和葡萄糖调节蛋白78(glucose⁃regulated protein 78,GRP78)的表达水平;以500 U/mL干扰素⁃γ(interferon⁃γ,IFN⁃γ)处理人喉鳞癌细胞系HN4细胞48 h,诱发HN4细胞产生内质网应激反应,收集HN4细胞分泌的外泌体,通过生物信息学分析鉴定外泌体的miRNA种类,预测miRNA的靶基因,将巨噬细胞转染miRNA、与收集的外泌体共培养、并敲低巨噬细胞PTEN表达,以WB和RT⁃qPCR检测外泌体miRNA调控的下游信号通路蛋白酪氨酸磷酸酶(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)及程序性死亡受体⁃1配体(programmed death receptor ligand 1,PD⁃L1)表达变化。结果HNSCC肿瘤组织相比癌旁组织ERS相关蛋白表达水平升高(P<0.05);RNA测序及实验验证表明ERS的HN4细胞分泌的外泌体miR⁃26a⁃5p表达上调(P<0.05);PTEN是miR⁃26a⁃5p的靶基因,miR⁃26a⁃5p升高巨噬细胞PD⁃L1表达水平,并下调PTEN表达(P<0.05);巨噬细胞与ERS外泌体共培养,miR⁃26a⁃5p和PD⁃L1表达上升,PTEN表达下降,p⁃AKT表达升高(P<0.05);敲低巨噬细胞PTEN表达,PD⁃L1表达上升(P<0.01)。结论ERS的HNSCC细胞通过外泌体miR⁃26a⁃5p调控PTEN/AKT通路及PD⁃L1的表达。

miRNA-138-5p、miRNA-34b在肺癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系

目的 探讨miRNA-138-5p、miRNA-34b在肺癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法 选取151例肺癌患者,均进行手术切除治疗,取术后肺癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miRNA-138-5p、miRNA-34b水平。比较不同临床特征、不同预后肺癌患者肺癌组织中miRNA-138-5p、miRNA-34b水平,肺癌患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归分析。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估miRNA-138-5p、miRNA-34b单独及联合检测对肺癌患者预后的预测价值。结果 肺癌组织中miRNA-138-5p、miRNA-34b水平均明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。肿瘤直径≥2 cm、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移、分化程度为低分化的肺癌患者肺癌组织中miRNA-138-5p、miRNA-34b水平分别明显低于肿瘤直径﹤2 cm、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、分化程度为中高分化的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。至随访结束,151例肺癌患者中,预后良好119例,预后不良32例。预后不良肺癌患者肺癌组织中miRNA-138-5p、miRNA-34b水平均明显低于预后良好患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径≥2 cm、TNM分期为Ⅲ期、有淋巴结转移、分化程度为低分化、miRNA-138-5p水平降低、miRNA-34b水平降低均是肺癌患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线显示,miRNA-138-5p、miRNA-34b联合检测预测肺癌患者预后的AUC为0.951(95%CI:0.918~0.984),高于二者单独检测的0.603、0.572。结论 miRNA-138-5p、miRNA-34b在肺癌组织中异常低表达,且与患者临床特征、预后密切相关,有望成为评估肺癌恶性程度及预后的重要分子标志物。

LncRNA SNHG12调控miR-138-5p/HIF-1α轴改善缺氧/复氧人血管内皮细胞损伤的研究

目的:研究长链非编码RNA(LncRNA)小核仁RNA宿主基因12(SNHG12)调控miR-138-5p/低氧诱导因子-1α(HIF-1α)轴改善缺氧/复氧(H/R)人血管内皮细胞损伤的作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),随机分为对照组、H/R模型组、H/R+LncRNA SNHG12过表达组、H/R+miR-138-5p mimics组、H/R+共转染组、H/R+共转染阴性对照组,各转染组分别进行转染处理,除对照组外,其余各组给予5 h缺氧,再进行复氧1 h处理,诱导细胞模型,然后通过CCK-8实验检测各组细胞活力情况;通过流式细胞实验检测各组细胞凋亡情况,比较各组细胞凋亡率;通过试剂盒测量各组细胞活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)及炎症因子IL-6、IL-17、IL-18水平;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验测定各组细胞miR-138-5p及HIF-1αmRNA表达;通过免疫印迹实验检测各组细胞凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及HIF-1α蛋白表达。结果:与对照组相比,H/R模型组细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞HIF-1αmRNA和蛋白水平、细胞caspase-9、Bax及HIF-1α蛋白水平升高(P<0.05),细胞活力、miR-138-5p水平降低(P<0.05)。与H/R模型组、H/R+共转染组相比,H/R+LncRNA SNHG12过表达组细胞活力、细胞HIF-1αmRNA及蛋白水平升高(P<0.05),细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞caspase-9与Bax蛋白水平、miR-138-5p水平降低(P<0.05);H/R+miR-138-5p mimics组细胞活力、细胞HIF-1αmRNA及蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率、细胞ROS、LDH、IL-6、IL-17及IL-18水平、细胞cas⁃pase-9与Bax蛋白水平升高(P<0.05)。与H/R模型组相比,H/R+共转染阴性对照组、H/R+共转染组细胞各指标水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LncRNA SNHG12可通过下调miR-138-5p表达,上调HIF-1α表达,抑制H/R诱导的HUVECs炎症与氧化应激,减轻细胞损伤及凋亡。

原花青素B2通过miR⁃499⁃5p促进骨骼肌慢肌纤维基因的表达

旨在探究原花青素B2(Proanthocyanidins B2,PB2)是否通过miR⁃499⁃5p调控骨骼肌慢肌纤维基因的表达.在小鼠C2C12细胞和猪骨骼肌卫星细胞诱导分化形成肌管后,分别向肌管中添加0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL和10μg/mL的PB2,探究不同浓度PB2对慢肌纤维基因表达的影响.在机制研究试验中,分别向C2C12肌管和猪肌管中添加10μg/mL的PB2,同时转染200 nM的miR⁃499⁃5p inhibitor抑制miR⁃499⁃5p的表达.结果表明,不同添加剂量的PB2均可促进C2C12肌管MyHC I基因的表达(P<0.05);添加5μg/mL和10μg/mL的PB2显著增加猪肌管MyHC I基因的表达(P<0.05);添加5μg/mL和10μg/mL的PB2上调C2C12肌管和猪肌管miR⁃499⁃5p的表达水平(P<0.05).机制研究发现,抑制miR⁃499⁃5p解除了PB2对miR⁃499⁃5p、MyHC I mRNA和慢型MyHC蛋白表达的促进作用.以上研究表明,PB2可以通过miR⁃499⁃5p促进骨骼肌慢肌纤维基因的表达.

LncRNA MIR503HG靶向miR-32-5p调控 ITGA6表达对非小细胞肺癌增殖与迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIR503HG、微小RNA(miRNAs)-32-5p、整合素α(ITGA)6在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其对NSCLC细胞增殖和迁移的影响。方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中提取273例NSCLC患者癌组织及其对应癌旁组织的LncRNA、miRNA及转录组mRNA的芯片数据,R软件中MAX STAT函数包统计分析LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6在NSCLC中的表达。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测80例NSCLC患者癌组织标本和NSCLC细胞系中LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6 mRNA表达。双荧光素酶实验证明LncRNA MIR503HG、miR-32-5p、ITGA6的关系。依次以LncRNA MIR503HG-mimic-NC、LncRNA MIR503HG-mimic、miR-32-5p-agomir-NC、miR-32-5p-agomir、LncRNA MIR503HG-mimic+miR-32-5p-agomir、LncRNA MIR503HG-mimic+miR-32-5p-agomir+pcDNA3.1-ITGA6、miR-32-5p-agomir+pcDNA3.1-ITGA6转染H1299细胞,另设定正常(Normal)组细胞。EDU染色实验与Transwell小室实验检测各组细胞体外增殖与转移活性;裸鼠体内皮下种植肿瘤模型检测细胞体内生长与转移能力。Western印迹检测ITGA6、E-钙黏蛋白(cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达。结果 在线分析结果显示,与癌旁组织和BEAS-2B细胞相比,LncRNA MIR503HG、ITGA6 mRNA在NSCLC组织和NSCLC细胞表达升高,miR-32-5p mRNA下降,差异具有统计意义(均P<0.05)。双荧光素酶实验证实LncRNA MIR503HG靶向miR-32-5p表达,miR-32-5p靶向ITGA6表达。过表达LncRNA MIR503HG可增强H1299细胞的体外增殖与转移及体内生长与转移能力,ITGA6和Vimentin表达升高,E-cadherin表达降低,miR-32-5p-agomir可部分逆转这一作用,而pcDNA3.1-ITGA6可部分修复这一逆转作用,差异均具有统计意义(P<0.05)。结论 下调LncRNA MIR503HG表达能降低H1299细胞增殖与转移能力,发挥抑癌效应,其机制可能与靶向miR-32-5p调控ITGA6表达水平有关,为NSCLC的治疗提供靶点。

miR-138-5p通过调控自噬影响乳腺癌细胞他莫昔芬耐药性的体外研究

目的探讨miR-138-5p对乳腺癌细胞他莫昔芬(TAM)耐药性的影响及其机制。方法体外培养乳腺癌细胞MCF-7和TAM耐药细胞株MCF-7/TAM,设置正常对照组(MCF-7细胞)、耐药对照组(MCF-7/TAM细胞)、LV-NC组(MCF-7/TAM细胞+慢病毒空载体)和LV-miR-138-5p mimics组(MCF-7/TAM细胞+miR-138-5p mimics慢病毒)。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞miR-138-5p表达水平;通过MTT法检测各组细胞增殖抑制率;通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率;通过MDC染色法检测各组细胞自噬小体数量;通过Western blot法检测各组细胞LC3Ⅱ、Beclin-1、Bcl-2蛋白表达水平。结果与正常对照组相比较,耐药对照组、LV-NC组细胞miR-138-5p、增殖抑制率、凋亡率、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1表达水平及自噬小体数显著升高(P<0.05)。过表达miR-138-5p后,细胞增殖抑制率、凋亡率、蛋白Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05),蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1表达水平及自噬小体数显著降低(P<0.05)。结论上调miR-138-5p可能通过抑制自噬,降低乳腺癌细胞他莫昔芬耐药性。

艾司氯胺酮通过上调miR-138-5p表达抑制LPS诱导的星形胶质细胞凋亡和炎症反应的分子机制研究

目的探讨艾司氯胺酮对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞凋亡和炎症反应的影响及分子机制。方法星形胶质细胞HA1800分为对照(NC)组,0.5、1.0、2.0μg/mL LPS组,低、中、高剂量组,miR-138-5p组,miR-con组,高剂量+anti-miR-138-5p组、高剂量+anti-miR-con组;流式细胞术检测HA1800细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;反转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测微小RNA(miR)-138-5p表达水平。结果浓度越高的LPS诱导的星形胶质细胞HA1800凋亡率、Cleaved-caspase-3表达水平、TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高(P<0.05)。剂量越高的艾司氯胺酮处理后,LPS诱导的HA1800细胞的凋亡率、Cleaved-caspase-3表达水平、TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低,miR-138-5p表达水平升高(P<0.05)。过表达miR-138-5p后,LPS诱导的HA1800细胞的凋亡率、Cleaved-caspase-3表达水平、TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低(P<0.05)。抑制miR-138-5p表达可以逆转艾司氯胺酮对LPS诱导的HA1800细胞凋亡和炎症反应的影响。结论艾司氯胺酮通过上调miR-138-5p表达抑制LPS诱导的星形胶质细胞凋亡和炎症反应。

妊娠期糖尿病患者血清miR-138-5P、IGF-1表达水平及其与妊娠结局的相关性研究

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、微小RNA-138-5P(miR-138-5P)在妊娠期糖尿病(GDM)患者血清中的表达水平及其与妊娠结局的相关性。方法选取2020年1月至2022年6月陕西中医药大学附属医院收治的90例GDM产妇为研究对象(GDM组),根据患者妊娠结局分为不良妊娠结局组35例和正常妊娠结局组55例,另选取同期在本院产检的健康妊娠女性60例作为对照组。比较两组产妇的血清miR-138-5P、IGF-1、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)表达水平;采用Pearson相关性分析GDM组产妇血清miR-138-5P、IGF-1与胰岛素抵抗(HOMA-IR)的关系,利用受试者工作特征曲线(ROC)评价miR-138-5P、IGF-1水平对不良妊娠结局的预测价值;采用多因素Logistic回归分析影响不良妊娠结局发生的因素。结果GDM组患者的血清miR-138-5P水平为0.56±0.11,明显低于对照组的1.03±0.19,血清IGF-1及HOMA-IR水平分别为(138.53±18.26)ng/mL、3.86±0.44,明显高于对照组的(120.55±17.20)ng/mL、2.06±0.35,差异均具有统计学意义(P<0.05);GDM组患者的血清miR-138-5P表达水平与HOMA-IR呈负相关(r=-0.459,P<0.05),IGF-1表达水平与HOMA-IR呈正相关(r=0.513,P<0.05);不良妊娠结局组患者血清miR-138-5P水平为0.38±0.05,明显低于正常妊娠结局组的0.68±0.15,血清IGF-1水平为(19.11±4.98)ng/mL,明显高于正常妊娠结局组的(34.42±5.44)ng/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);不良妊娠结局GDM患者HOMA-IR、FBG、HbA1c水平分别为4.63±0.49、(5.83±0.82)mmol/L、(6.61±0.42)%,明显高于正常妊娠结局组3.35±0.41、(5.42±0.71)mmol/L、(6.16±0.52)%,差异均具有统计学意义(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清miR-138-5P、IGF-1水平预测GDM患者不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)分别为0.890、0.906,对应的敏感度分别为90.00%、81.67%,特异度分别为85.42%、90.62%,两者联合预测的AUC为0.936,敏感度为96.67%,特异度为81.25%;经多因素Logistic回归分析结果显示,HOMA-IR、FBG、HbA1c、IGF-1均是影响不良妊娠结局发生的独立危险因素,miR-138-5P是影响不良妊娠结局发生的保护因素(P<0.05)。结论GDM患者血清中miR-138-5P表达下降,IGF-1表达上升,两者均为影响GDM患者不良妊娠结局发生的因素,联合检测对不良妊娠结局有一定预测价值。

miR-138-5p调控CDC5L表达对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨微RNA(microRNA,miR)-138-5p对胶质瘤细胞增殖、侵袭的调控机制。方法体外培养人胶质瘤U251细胞,采用随机数字表法将其分为对照组(n=6)、miR-NC组(n=6)、miR-138-5p组(n=6)、miR-138-5p+pc-NC组(n=6)、miR-138-5p+pc-细胞分裂周期5样(cell division cycle 5-like,CDC5L)组(n=6)。采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测细胞中miR-138-5p、CDC5L mRNA水平,检测细胞增殖活力、细胞周期和细胞凋亡以及细胞侵袭能力,检测细胞中CDC5L和侵袭相关蛋白表达。结果miR-138-5p的过表达可下调CDC5L mRNA和蛋白水平,降低胶质瘤细胞增殖活力和侵袭能力,并诱导G2/M期细胞周期停滞,促进细胞凋亡,降低N-钙粘蛋白、波形蛋白水平,升高E-钙粘蛋白水平,差异均有统计学意义(P<0.05);上调CDC5L表达可明显逆转过表达miR-138-5p对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响(P<0.05);与miR-NC和CDC5L-WT质粒共转染比较,miR-138-5p mimic和CDC5L-WT质粒共转染的细胞中荧光素酶活性降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达miR-138-5p可能通过靶向下调CDC5L,抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭。