miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

miR-141-3p靶向调控HMGB1对LPS诱导的A549细胞损伤的影响

目的探讨miR-141-3p通过靶向调控高迁移率族蛋白1(HMGB1)对脂多糖(LPS)诱导的A549细胞损伤的影响。方法以Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞作为研究对象,将miR-141-3p mimics、mimics NC、HMGB1基因过表达质粒(pcDNA3.1-HMGB1)和空载质粒(Vector)分别或共转染至A549细胞中,再采用10μg/ml LPS处理24 h。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测各组细胞增殖活性;比色法检测各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中白介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p与HMGB1之间的靶向调控关系。结果LPS干预后,A549细胞增殖活性及细胞中miR-141-3p表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α水平及上清液中LDH活性升高(P<0.05)。过表达miR-141-3p可增强LPS处理后的A549细胞增殖活性(P<0.05),降低细胞凋亡率及细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和上清液中LDH活性(P<0.05)。然而,HMGB1基因过表达可逆转miR-141-3p对LPS诱导A549细胞损伤的改善作用。双荧光素酶报告基因实验证实,HMGB1是miR-141-3p下游靶基因。结论miR-141-3p可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,降低炎症因子表达水平,改善A549细胞损伤,其作用机制可能与靶向调控HMGB1表达有关。

miR-141-5p影响黏膜黑色素瘤细胞生物学行为的机制研究

目的探讨miR-141-5p在黏膜黑色素瘤(MM)组织及细胞中的表达及其意义,分析其影响MM细胞生物学行为的机制。方法回顾性收集2015年1月至2020年12月温州医科大学附属第一医院手术切除的MM和色素痣组织标本。qRT-PCR法检测并比较MM和色素痣组织、MM细胞株A375和人角质形成细胞株HaCaT中miR-141-5p、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2 mRNA的相对表达量。采用Pearson相关分析miR-141-5p与ERK1/2 mRNA相对表达量的相关性。A375分别用miR-141-5p模拟物(模拟物组)、miR-141-5p模拟物对照(模拟物对照组)、miR-141-5p抑制物(抑制物组)和miR-141-5p抑制物对照(抑制物对照组)处理;采用qRT-PCR检测并比较4组细胞中miR-141-5p相对表达量;采用细胞计数(CCK)-8法、克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell侵袭实验观察并比较4组细胞存活率、增殖能力、细胞凋亡比例和细胞迁移、侵袭能力;采用Western blot法观察并比较4组细胞ERK1/2、磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白相对表达量。采用HE染色、免疫组化染色观察MM和色素痣组织形态并检测p-ERK1/2、ERK1/2表达水平,比较不同p-ERK1/2、ERK1/2表达情况MM患者临床病理特征差异。结果miR-141-5p和ERK1/2 mRNA在MM组织和A375中表达下调(均P<0.01);Pearson相关分析显示,miR-141-5p与ERK1/2 mRNA相对表达量呈正相关(P<0.05)。相比对照组,模拟物组细胞增殖和迁移、侵袭能力显著降低,细胞凋亡比例升高,抑制物组细胞增殖和迁移、侵袭能力升高,细胞凋亡比例降低(均P<0.05)。相比对照组,模拟物组细胞p-ERK1/2蛋白相对表达量显著升高,抑制物组显著降低(均P<0.05)。MM组织中ERK1/2与p-ERK1/2蛋白表达明显减少(均P<0.05)。p-ERK1/2阴性组和阳性组、ERK1/2阴性组和阳性组不同临床病理特征比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论miR-141-5p可能通过ERK1/2通路影响MM细胞生物学行为。

山羊miR-141靶基因预测及生物信息学分析

【目的】探究miR-141在动物机体糖脂代谢和骨代谢中的调控机制,为糖尿病合并骨质疏松症动物模型构建及相关基因表达调控机制研究提供依据。【方法】利用miRbase数据库获取不同物种miR-141成熟序列,通过BioEdit及WebLogo软件进行序列比对及保守性分析;利用PROMO及JASPAR在线软件对山羊miR-141启动子区转录因子结合位点进行预测;利用TargetScan和miRwalk数据平台对miR-141靶基因进行预测;利用DAVID和KOBAS在线软件对靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析;利用Networkanalyst数据库建立miRNA靶基因蛋白互作网络并绘制网络调控图;通过YM500V2在线数据库分析miR-141在山羊不同组织中的表达情况。【结果】miR-141成熟序列在不同物种间高度保守;山羊miR-141启动子区分布有转录因子C/EBPα、MyoD、YY1和Sp1等结合位点;选用不同数据库预测到Nfatc2、Egr2和Fasl等89个靶基因。GO功能富集分析发现,靶基因主要富集在RNA聚合酶Ⅱ启动子转录调控与转录DNA模板等生物过程、细胞核与细胞质等细胞组分、蛋白结合与DNA结合等分子功能。KEGG通路富集显示,靶基因主要富集在肌动蛋白细胞骨架的调节、细胞紧密连接、轴突引导、Hedgehog信号通路、cGMP-PKG信号通路与癌症中的microRNA等。miR-141靶基因蛋白互作分析显示,Nfatc2和Egr2基因由Fasl基因连接,构成与其他蛋白相对复杂的靶向关系,这些关键基因参与了与机体糖脂代谢及骨代谢相关的TGF-β、Hedgehog及Wnt/β-catenin等多条信号通路。miR-141在山羊多种组织中均有表达,其表达水平具有组织差异性。【结论】miR-141可通过靶向Nfatc2、Egr2和Fasl基因参与调节Hedgehog及Wnt/β-catenin等多条信号通路,并进一步调控山羊糖脂代谢、肌肉骨骼系统生理生化反应。

子宫内膜癌组织miR-141-3p、miR-149-3p表达与增殖基因、临床病理特征和预后的关系

目的探讨子宫内膜癌组织中miR-141-3p、miR-149-3p表达及与增殖基因、临床病理特征和预后的关系。方法选取2017年2月至2019年2月该院诊治的98例子宫内膜癌患者作为研究对象。采用实时荧光定量PCR检测子宫内膜癌患者癌组织中miR-141-3p、miR-149-3p及增殖基因[增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期素D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)]mRNA相对表达水平。Pearson相关分析子宫内膜癌患者癌组织中miR-141-3p、miR-149-3p表达与PCNA、cyclin D1、CDK4 mRNA表达的相关性。不同临床病理特征的子宫内膜癌患者癌组织miR-141-3p、miR-149-3p表达进行比较。Kaplan-Meier曲线分析子宫内膜癌患者癌组织miR-141-3p、miR-149-3p表达对其预后的影响。单因素及多因素Cox回归分析影响子宫内膜癌患者预后的因素。结果子宫内膜癌患者癌组织中miR-141-3p、miR-149-3p、PCNA mRNA、cyclinD1 mRNA、CDK4 mRNA相对表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌患者癌组织中miR-141-3p、miR-149-3p表达与PCNA mRNA、cyclinD1 mRNA、CDK4 mRNA表达呈正相关(均P<0.05)。国际妇产科联盟(FIGO)分期Ⅲ期、有淋巴结转移的子宫内膜癌患者癌组织miR-141-3p、miR-149-3p相对表达水平分别高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移的子宫内膜癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-141-3p高表达组3年总体生存率显著低于miR-141-3p低表达组,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=7.043,P=0.008)。miR-149-3p高表达组患者3年总体生存率显著低于miR-149-3p低表达组,差异有统计学意义(Log-rankχ^(2)=7.094,P=0.007)。FIGO分期Ⅲ期、有淋巴结转移、miR-141-3p升高、miR-149-3p升高是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论检测子宫内膜癌患者癌组织中miR-141-3p、miR-149-3p表达有助于评估其患者生存预后。

lncRNA LUCAT1通过调控miR-141-3p/SOX11轴促进肾透明细胞癌细胞的生长和转移的机制研究

目的:探讨lncRNA LUCAT1通过调控miR-141-3p/SOX11轴对肾透明细胞癌细胞(kidney renal clear cell carcinoma,KIRC)的生长和转移的影响。方法:利用生信分析LUCAT1在KIRC中的表达,并预测下游的miRNA/mRNA调控轴;qRT-PCR用于检测LUCAT1、miR-141-3p和SOX11的表达,Western blot用于检测SOX11的表达;细胞生物学功能实验观察KIRC细胞的增殖、迁移和侵袭状况;双荧光素酶实验验证LUCAT1和miR-141-3p以及miR-141-3p和SOX11靶向结合关系;RIP实验验证LUCAT1和miR-141-3p的结合关系;裸鼠实验观察LUCAT1对肿瘤体内生长的影响。结果:通过生信分析和细胞实验发现LUCAT1和SOX11在KIRC中高表达,miR-141-3p在KIRC中低表达;MTT、伤口愈合和细胞侵袭实验结果显示LUCAT1促进KIRC细胞的增殖、迁移和侵袭。随后在双荧光素酶实验中显示LUCAT1可以作为miR-141-3p的分子海绵,同时我们还证实miR-141-3p能回复LUCAT1对KIRC细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。进一步研究发现SOX11是miR-141-3p的直接靶标,并且SOX11能回复miR-141-3p对KIRC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。最后我们还通过体内实验确定了LUCAT1能促进KIRC肿瘤的体内生长。结论:LUCAT1在KIRC中上调,并可以通过吸附miR-141-3p调控SOX11促进KIRC的生长和转移。这表明LUCAT1有望成为KIRC的生物标志物和潜在分子治疗靶点。

LncRNA MYLK-AS1调节miR-141-3p/STMN1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肌球蛋白轻链激酶反义RNA1(myosin light chain kinase antisense RNA1,MYLK-AS1)调节miR-141-3p/微管不稳定蛋白1(stathmin 1,STMN1)轴对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:将HGC27细胞分为NC组、si-NC组、si-MYLK-AS1组、si-MYLK-AS1+inhibitor NC组、si-MYLK-AS1+miR-141-3p inhibitor组。双萤光素酶报告基因实验检测LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p、STMN1的关系;qRT-PCR检测HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、miR-141-3p表达;CCK-8法检测HGC27细胞增殖情况;流式细胞术检测HGC27细胞凋亡;使用Transwell实验评估了HGC27细胞的侵袭和迁移能力,并统计了穿透基质膜的细胞数量;同时采用Western blot技术检测了HGC27细胞中STMN1、E-cadherin、Vimentin及N-cadherin这几种蛋白表达量的变化。结果:HGC27细胞中LncRNA MYLK-AS1、STMN1水平高于GES-1细胞(P<0.05),miR-141-3p水平低于GES-1细胞(P<0.05)。si-MYLK-AS1组HGC27细胞A_(450 nm)值、迁移、侵袭细胞数量、LncRNA MYLK-AS1表达量、STMN1、N-cadherin、Vimentin蛋白水平低于NC组、si-NC组(P<0.05),HGC27细胞凋亡率、miR-141-3p表达量、E-cadherin蛋白水平高于NC组、si-NC组(P<0.05);而miR-141-3p低表达减弱了沉默LncRNA MYLK-AS1抑制HGC27细胞发展的作用;LncRNA MYLK-AS1靶向调节miR-141-3p/STMN1轴。结论:LncRNA MYLK-AS1可能通过上调microRNA-141-3p的表达水平,间接导致STMN1基因表达受到抑制,这一过程可能对胃癌细胞的增殖、凋亡及侵袭特性产生明显影响。

急性胰腺炎患者血清miR-455-3p,miR-141-3p水平表达与病情严重程度的关系研究

目的 探讨急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)患者血清miR-455-3p,miR-141-3p水平表达与病情严重程度的关系。方法 选取2021年11月~2023年11月于都江堰市人民医院就诊的AP患者133例(AP组)作为研究对象;根据病情程度将AP患者分为重症组(n=43)和轻症组(n=90)。同期选取于该院体检健康者135例作为对照组。实时荧光定量PCR(RT-q RCR)法检测血清miR-455-3p和miR-141-3p水平。Spearman相关性分析血清miR-455-3p,miR-141-3p水平与急性生理与慢性健康评分Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ,APACHE Ⅱ)、Ranson评分的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-455-3p,miR-141-3p水平对重症AP的诊断价值;多因素Logistics回归分析影响重症AP的发生因素。结果 AP组血清miR-455-3p(0.61±0.13)低于对照组(1.12±0.21),miR-141-3p水平(1.37±0.11)高于对照组(1.04±0.15),差异具有统计学意义(t=23.863,20.513,均P<0.05)。重症组患者血清miR-455-3p水平(0.53±0.10)低于轻症组(0.64±0.12),miR-141-3p水平(1.51±0.14)高于轻症组(1.30±0.15),差异具有统计学意义(t=6.056,7.713,均P<0.05)。重症组患者血清淀粉酶(serum amylase,AMS)、脂肪酶(lipase,LPS)水平及APACHEⅡ,Ranson评分高于轻症组,差异具有统计学意义(t=2.227,2.290,18.267,11.259,均P <0.05)。Spearman相关性分析结果表明,AP患者血清miR-455-3p与APACHEⅡ,Ranson评分呈负相关(r=-0.702,-0.783,均P <0.05),miR-141-3p与APACHEⅡ,Ranson评分呈正相关(r=0.787,0.734,均P <0.05)。ROC曲线结果表明血清miR-455-3p,miR-141-3p水平单独及联合诊断重症AP的AUC分别为0.848,0.822和0.919,且二者联合诊断优于单独诊断(Z=3.081,2.524,均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示miR-455-3p是影响重症AP的保护因素,miR-141-3p是影响重症AP的危险因素(P<0.05)。结论 AP患者血清miR-455-3p下降和miR-141-3p升高与病情严重程度密切相关。

miR-141-3p、IL-18与老年脑出血患者病情严重程度及预后的相关性

目的 探讨miR-141-3p、白细胞介素-18(IL-18)与老年脑出血患者病情严重程度及预后的相关性。方法 分析2021年1月至2022年12月于青岛市城阳区人民医院接受治疗的老年脑出血患者116例临床资料,根据病情严重程度将其分为轻度组(n=51)、中度组(n=38)和重度组(n=27);随访6个月,依据预后情况分为预后良好组(n=79)与预后不良组(n=37)。并选取同期体检健康志愿者30名作为对照组。比较对照组与轻、中、重度组的miR-141-3p、IL-18水平,分析患者miR-141-3p、IL-18水平与疾病严重程度相关性。对患者因素单、多因素分析,并绘制ROC曲线分析患者miR-141-3p、IL-18水平对其预后的预测价值。结果 miR-141-3p水平比较:对照组>轻度组>中度组>重度组,IL-18水平比较:重度组>中度组>轻度组>对照组(F=116.151、77.832,P均<0.05);Spearman分析法分析结果显示,患者疾病严重程度与miR-141-3p呈显著的负相关(r=-0.668,P<0.05),与IL-18水平呈显著的正相关(r=0.583,P<0.05);预后不良组与预后良好组比较,年龄、是否合并高血压、糖尿病、冠心病、疾病严重程度、是否破入脑室、出血量及miR-141-3p、IL-18水平差异具有统计学意义(t/χ^(2)=2.106、5.945、5.988、4.353、19.669、6.707、4.130、7.659、7.405,P<0.05);多因素分析结果显示,合并高血压、疾病越严重、miR-141-3p水平降低、IL-18水平升高为老年脑出血患者预后不良独立危险因素(P<0.05);ROC曲线结果显示,miR-141-3p、IL-18及两项联合评估的AUC分别为0.900、0.825及0.960(P<0.05)。结论 miR-141-3p、IL-18与老年脑出血患者病情严重程度及预后密切相关,且miR-141-3p、IL-18与联合检测对老年脑出血患者预后具有良好的评估效能。

miR-141-3p靶向MYT1L促进结肠癌细胞的恶性进展

目的:探究微小RNA-141-3p(miR-141-3p)通过靶向作用髓磷脂转录因子1(MYT1L)蛋白对结肠癌细胞迁移、增殖、凋亡的影响。方法:在结肠癌HCT8细胞中转染miR-141-3p模拟物(miR-141-3p mimic),qRT-PCR检测miR-141-3p的mRNA表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测侵袭和迁移,Western blot检测MYT1L的蛋白表达水平。生物信息学软件预测MYT1L可能是miR-141-3p的靶基因后用荧光素酶报告基因鉴定。结果:miR-141-3p在结肠癌组织细胞中显著上调且对患者预后有显著影响,在转染了miR-141-3p的HCT8细胞中,细胞的增殖、迁移能力均显著提高,而细胞凋亡显著下降。双荧光素酶报告基因的结果显示miR-141-3p与MYT1L基因可以靶向结合。共转染MYT1L过表达载体和miR-141-3p mimic的细胞中,相对于只转染了MYT1L过表达载体的细胞来说,细胞表型恶化程度显著升高。结论:miR-141-3p通过靶向调控MYT1L的表达促进结肠癌细胞表型的恶化。

miR-141-3p通过调控KEAP1/Nrf2轴抑制糖尿病创面的氧化应激损伤

目的:探讨miR-141-3p对氧化应激状态下角质形成细胞的保护作用及其分子机制。方法:体外过氧化氢(H_(2)O_(2))预处理角质细胞,选择miR-141-3p mimics/inhibitor以及siKEAP1技术研究miR-141-3p对于KEAP1/Nrf2信号通路的影响。采用CCK-8法检测细胞活力,qRT-PCR检测mRNA水平,Western-blot法检测蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因系统检测miR-141-3p靶基因,DCFH-DA探针检测胞内ROS水平,酶联免疫吸附试验法检测抗氧化酶活性,EDU法检测细胞增殖功能,细胞划痕实验检测细胞迁移功能。结果:过表达miR-141-3p增强了H_(2)O_(2)处理下角质形成细胞的增殖和迁移能力,降低了胞内ROS水平,并提高了SOD和GSH-px活性;miR-141可靶向负调控KEAP1,上调Nrf2和HO-1表达,发挥抗氧化应激作用;siKEAP1抑制了miR-141-3p促增殖、促迁移和抗氧化的作用。结论:miR-141能够通过KEAP1/Nrf2信号通路有效减轻H2O2诱导的角质形成细胞氧化应激损伤,并促进其增殖和迁移,从而发挥促进糖尿病创面愈合的作用。

糖尿病视网膜病变患者血清circFTO和miR-141-3p表达情况及其与病变分期的关系

目的:探讨血清circFTO、miR-141-3p水平变化与糖尿病视网膜病变患者不同疾病分期的关系。方法:选取2019-10/2022-11本院收治的198例2型糖尿病患者为研究对象,根据不同分期将患者分为非糖尿病视网膜病变(NDR)组70例、非增殖期糖尿病视网膜病变(NPDR)组66例、增殖期糖尿病视网膜病变(PDR)组62例;同期选取67例本院体检正常的志愿者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清circFTO和miR-141-3p水平;采用Pearson相关性分析检验糖尿病视网膜病变患者血清circFTO、miR-141-3p与各指标间的相关性;采用多因素Logistic回归分析探讨糖尿病视网膜病变的影响因素。结果:PDR组circFTO、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)高于对照组、NDR组、NPDR组,miR-141-3p、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)低于对照组、NDR组、NPDR组(P<0.05)。NDR组、NPDR组、PDR组空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)高于对照组(均P<0.05)。PDR组病程高于NDR组和NPDR组(P<0.05)。糖尿病视网膜病变患者血清circFTO与SBP、DBP、FPG、HbA1c呈正相关,miR-141-3p与SBP、DBP、FPG、HbA1c呈负相关(均P<0.05)。circFTO是影响糖尿病视网膜病变的危险因素,miR-141-3p是影响糖尿病视网膜病变的保护因素(P<0.05)。结论:糖尿病视网膜病变患者血清circFTO显著升高,miR-141-3p显著降低,二者均与疾病分期密切相关,有望成为评估疾病进展的重要指标。

miR-141-3p通过促进波形蛋白表达增强CNE-2人鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的探讨微小RNA 141-3p(miR-141-3p)能否通过调节波形蛋白(vimentin)促进CNE-2人鼻咽癌(NPC)细胞的迁移。方法实时定量PCR检测NPC组织和癌旁组织miR-141-3p表达,免疫组织化学染色法和Western blot法检测vimentin的表达水平。采用实时定量PCR和Western blot法分别筛选5-8F、CNE-2、HNE1人NPC细胞中miR-141-3p相对表达量最高的细胞株,实时定量PCR和Western blot法共同验证miR-141-3p与vimentin表达关系;采用小干涉RNA(si-miR-141-3p)下调CNE-2细胞miR-141-3p、噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率、Transwell^(TM)小室法检测细胞侵袭和迁移、Western blot法检测vimentin表达量。结果与癌旁组织相比,NPC组织中miR-141-3p和vimentin表达量均显著增加,与NP69细胞相比,miR-141-3p和vimentin在CNE-2细胞中表达均显著增加;下调CNE-2细胞中miR-141-3p后,细胞侵袭和迁移能力均下降,细胞增殖能力显著降低,vimentin蛋白表达量显著降低。结论miR-141-3p能够通过促进vimentin表达增强CNE-2细胞的增殖和迁移。

骨质疏松症外周血miR-141评价骨折风险的价值

目的 分析骨质疏松症(osteoporosis,OP)患者外周血微小核糖核酸-141(micromolecule ribonucleic acid-141,miR-141)表达,并分析其对骨折风险的预测价值。方法 选取175例在河南省中医院治疗的OP患者记为研究组,同时招募156例同年龄段的健康志愿者记为对照组,均测定外周血miR-141表达,并对研究组随访1年。结果 研究组男性、女性外周血miR-141表达均高于对照组(P <0.05);研究组骨折发生率30.29%,高于对照组的7.05%(P <0.05),研究组女性、男性骨折发生率分别高于对照组(P <0.05);miR-141表达预测OP男性、女性患者骨折风险的曲线下面积(AUC)分别为0.968(95%CI:0.895~0.996)、0.726(95%CI:0.631~0.808)。结论 OP患者的外周血miR-141表达升高,且对骨折风险预测效能高。

miR-141靶向ZEB2对神经胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨miR-141靶向E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)对神经胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:体外培养人神经胶质瘤细胞系U87,对其转染并分为空白对照组(NG组)、阴性转染组(mimics-NC组)、过表达miR-141组(miR-141-mimics组)、共转染组(miR-141-mimics+pc-ZEB2组)。用实时荧光定量PCR法检测miR-141、ZEB2 mRNA水平;检测各组U87细胞增殖能力、迁移、侵袭能力;免疫印迹法检测增殖相关蛋白(PCNA)、侵袭及迁移相关蛋白(E-cadherin、N-Cadherin、Vimentin)表达情况;应用TargetScan数据库预测miR-141与ZEB2的靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验加以验证。结果:U87细胞成功转染mimics-NC、miR-141-mimics及pc-ZEB2;与NG组、mimics-NC组比较,miR-141-mimics组U87细胞增殖抑制率、E-Cadherin蛋白表达升高(P<0.05),克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、ZEB2 mRNA及其蛋白、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白表达降低或减少(P<0.05);与miR-141-mimics组比较,miR-141-mimics+pc-ZEB2组U87细胞增殖抑制率、E-Cadherin蛋白表达降低(P<0.05),克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、ZEB2 mRNA及其蛋白、PCNA、N-Cadherin、Vimentin蛋白表达升高或增多(P<0.05)。结论:过表达miR-141可能靶向下调ZEB2抑制神经胶质瘤U87细胞增殖、侵袭及迁移。

miR-141-3p、PD-L1及巨噬细胞在子宫内膜异位症中的表达及相关性研究

目的 探讨miR-141-3p、PD-L1及M1、M2型巨噬细胞在子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)中的表达及其临床意义。方法 选取2021年10月-2022年7月,因EMs在石河子大学第一附属医院妇科行腹腔镜手术或开腹手术的患者30例为EMs组,同期选取非EMs患者因子宫肌瘤行诊断性刮宫或子宫全切术的子宫内膜组织30例为对照组,术后病理证实均为增生期子宫内膜。通过qRT-PCR检测子宫内膜组织中miR-141-3p以及PD-L1的表达;通过免疫组化检测子宫内膜组织中M1型巨噬细胞表面标志物CD86,M2型巨噬细胞表面标志物CD206的表达,并应用Image J软件对免疫组化结果进行平均光密度(Average Optical Density,AOD)的检测。通过Person或Spearman相关检验分析miR-141-3p、PD-L1、CD86及CD206之间相关性。结果 (1) miR-141-3p在EMs组在位内膜、异位内膜中的表达低于对照组子宫内膜(P=0.000 5;P<0.000 1),且在异位内膜中表达最低。(2) PD-L1在EMs组在位内膜、异位内膜中的表达高于对照组子宫内膜(P=0.013 7;P=0.000 3),且在异位内膜中表达最高。(3)在EMs异位内膜中miR-141-3p与PD-L1的表达呈负相关(r=-0.648 9,P=0.000 1)。(4) CD86在EMs组在位内膜、异位内膜中的表达低于对照组子宫内膜(P=0.047 2;P=0.001 0)。(5) CD206在EMs组在位内膜、异位内膜中的表达高于对照组子宫内膜(P=0.043 4;P<0.000 1),且在异位内膜中表达最高。(6) PD-L1与M1型巨噬细胞标志物CD86在EMs异位内膜中的表达呈负相关(r=-0.440 8,P=0.014 8)。(7) PD-L1与M2型巨噬细胞标志物CD206在EMs异位内膜中的表达呈正相关(r=0.598 1,P=0.000 5)。结论 EMs患者中miR-141-3p表达降低,PD-L1表达升高,巨噬细胞从M1型向M2型极化,且随病情进展而改变。

miR-141-3p通过靶向生长分化因子-6对RANKL诱导RAW264.7破骨分化的影响

目的研究miR-141-3p通过靶向生长分化因子-6(growth differentiation factor 6,GDF-6)对RANKL诱导的RAW264.7细胞在破骨分化中的调控作用。方法RAW264.7细胞使用RANKL处理,诱导分化为破骨细胞,通过qRT-PCR和Western blot法检测GDF-6及抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)的表达水平,同时qRT-PCR检测miR-141-3p的表达。实验分为未诱导组、RANKL诱导并转染载体对照组(RANKL+OE-NC)和RANKL诱导并转染GDF-6过表达载体组(RANKL+OE-GDF-6),对各组细胞进行TRAP染色,qRT-PCR和Western blot法检测破骨相关指标TRAP、CTSK、金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)及GDF-6的表达水平,同时qRT-PCR检测miR-141-3p的表达水平。实验分为过表达对照组(mimics NC)、过表达miR-141-3p组(mimics)、敲低对照组(inhibitor NC)、敲低miR-141-3p组(inhibitor)及过表达miR-141-3p转染过表达GDF-6载体组(miR-141-3p mimics+OE-GDF-6),检测方法同上,对各组细胞进行TRAP染色,qRT-PCR和Western blot法检测破骨相关指标TRAP、CTSK、MMP-9、MMP-2及GDF-6的表达水平,同时qRT-PCR检测miR-141-3p的表达水平。通过双荧光酶实验检测miR-141-3p和GDF-6的靶向关系。结果与未诱导组相比,RAW264.7诱导分化5 d后细胞内TRAP、CTSK、miR-141-3p表达水平升高(P<0.01),同时GDF-6表达水平降低(P<0.01)。转染OE-GDF-6载体后,RAW264.7向破骨细胞的分化受到抑制,TRAP、CTSK、MMP-9、MMP-2表达降低(P<0.01),TRAP染色阳性的破骨细胞数目减少。转染miR-141-3p mimics后,RAW264.7向破骨细胞分化受到促进,TRAP染色阳性的破骨细胞数量增多,破骨相关标志物TRAP、CTSK、MMP-9、MMP-2表达升高(P<0.01),GDF-6表达降低(P<0.01)。转染miR-141-3p抑制剂后,上述实验结果与模拟物组相反,RAW264.7向破骨细胞分化受到抑制。与miR-141-3p模拟物组相比,OE-GDF-6转染细胞后,可以在一定程度上拮抗miR-141-3p模拟物对破骨细胞分化的促进作用。双荧光素酶实验结果表明miR-141-3p可以与GDF-6-3′UTR-WT结合,抑制荧光素酶活性。结论miR-141-3p促进RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化,其可能是通过靶向抑制GDF-6完成对破骨细胞分化的调控。

miR-141-3p通过调节Keap1-NRF2/ARE信号通路对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺纤维化的影响

目的 探讨miR-141-3p对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺纤维化的影响及作用机制。方法 将大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、agomir-NC组、miR-141-3p agomir组,每组10只;除对照组外,其余大鼠采用脂多糖(LPS)滴注法构建ARDS模型;将大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN细胞分为NC组、LPS组、miR-NC组、miR-141-3p mimics组、miR-141-3p mimics+pcDNA组、miR-141-3p mimics+NRF2与Kelch样环相关蛋白1(Keap1)组,除NC组外,其余各组建立LPS细胞模型;qPCR检测肺组织和细胞中miR-141-3p、Keap1 mRNA表达;Western blot检测肺组织和细胞上皮型钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙黏附素(N-cadherin)、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、自噬相关基因Beclin-1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Keap1、核因子E2相关因子2(NRF2)、血红素氧合酶1(HO-1)表达;HE和Masson染色观察肺组织病理变化并进行肺损伤评分和肺纤维化面积评分;试剂盒检测肺组织羟脯氨酸(Hyp);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎性因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;双萤光素酶报告实验验证miR-141-3p与Keap1靶向关系。结果ARDS大鼠肺组织和细胞中miR-141-3p表达下调,Keap1表达上调(P<0.05);过表达miR-141-3p可降低大鼠肺组织病理损伤和纤维化程度、Hyp含量,上调肺组织和细胞中SOD、E-cadherin、LC3B、Beclin-1、NRF2、HO-1表达,下调IL-1β、TNF-α、MDA、N-cadherin、α-SMA、Col-Ⅰ、Keap1表达(P<0.05);过表达Keap1可逆转过表达miR-141-3p对ARDS大鼠肺泡上皮细胞损伤的改善作用(P<0.05);双萤光素酶报告基因实验证实miR-141-3p与Keap1可能存在靶向调控关系。结论 过表达miR-141-3p可能激活Keap1-NRF2/ARE信号通路,激活自噬,抑制炎症反应、氧化应激和上皮-间充质转化进展,改善ARDS大鼠肺纤维化。

miR-141基因干扰靶向PTEN影响小鼠BMSCs成骨分化的实验研究

目的 探讨微小核糖核酸-141(micro-RNA-141,miR-141)基因干扰靶向蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)对小鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)成骨分化的影响。方法 取小鼠BMSCs并鉴定;构建miR-141 mimics、miR-141 inhibitor、miR-141 mimics-NC、miR-141 inhibitor-NC质粒,分别转染小鼠BMSCs,并记为过表达组、沉默组、过表达对照组、沉默对照组,另取小鼠BMSCs常规培养记为空白对照组。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色、茜素红染色检测各组成骨分化能力;检测各组miR-141、PTEN通路相关基因及蛋白表达;验证miR-141是否可靶向调控PTEN。结果 与空白对照组、过表达对照组相比,过表达组ALP定量,AKT、GSK3β mRNA及蛋白表达,Runx2、Osterix蛋白表达,p-AKT、p-GSK3β均下降(P<0.05),钙化结节大小、数量、密度均显著减少,miR-141 mRNA表达及PTEN mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);与空白对照组、沉默对照组相比,沉默组ALP定量,AKT、GSK3β mRNA及蛋白表达,Runx2、Osterix蛋白表达,p-AKT、p-GSK3β均升高(P<0.05),钙化结节也显著增多,miR-141 mRNA表达及PTEN mRNA和蛋白表达低于其余4组(P<0.05);荧光素酶活性实验验证miR-141可靶向调控PTEN。结论 miR-141过表达可激活PTEN信号通路抑制小鼠BMSCs成骨分化,而miR-141基因沉默可下调PTEN,上调AKT、GSK3β表达,增加p-AKT、p-GSK3β水平,并促进成骨标志蛋白表达,促进小鼠BMSCs成骨分化。

miR-141-3p靶向CDC25B调节VEGF通路对三阴性乳腺癌血管生成的机制研究

目的:血管生成是肿瘤生长和转移的关键介质,CDC25B在包括三阴性乳腺癌(Triple-Negative Breast Cancer,TNBC)等恶性肿瘤作为肿瘤癌基因,但其对血管生成的生物学作用知之甚少,本研究旨在探讨CDC25B在TNBC血管生成中的确切功能和作用机制。方法:生信数据库分析CDC25B及其上游调控分子miR-141-3p在TNBC肿瘤组织中的表达,采用qRT-PCR分析CDC25B和miR-141-3p在TNBC细胞系中的表达。利用CCK-8和血管形成实验分析HUVEC细胞的增殖和血管形成能力,并通过Western blot检测VEGFA、VEGFR-2和VEGFR-3蛋白的表达。双荧光素酶报告实验被用于探索CDC25B和miR-141-3p之间的特异性相互作用。结果:本研究发现CDC25B在TNBC中表达上调,其高表达可以激活VEGF信号通路,沉默CDC25B后显著抑制了HUVEC细胞的增殖和血管生成,并降低了VEGFA、VEGFR-2和VEGFR-3蛋白的表达。此外,miR-141-3p在TNBC中表达下调,可以靶向抑制CDC25B的表达。过表达CDC25B可以逆转miR-141-3p过表达对HUVEC细胞增殖和血管生成的抑制作用。结论:miR-141-3p靶向CDC25B抑制VEGF通路抑制TNBC血管生成,为miR-141-3p/CDC25B/VEGF通路可能作为TNBC抗血管生成治疗的新选择提供理论依据。