miR⁃146a通过TGF⁃β1/SMAD通路调控脊柱结核进展的分子机制

目的探讨miR⁃146a/转化生长因子-β(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)/母亲抗肢瘫(small mother against decapentaplegic,SMAD)通路在脊柱结核进展中的调控机制。方法收集脊柱结核病人和正常病人髓核组织,验证miR⁃146a/TGF⁃β1/SMAD通路在结核髓核组织中的表达量;分离培养髓核细胞,敲低/过表达miR⁃146a,分别应用qPCR、Western blot、CCK⁃8、划痕实验验证miR⁃146a对TGF⁃β1/SMAD通路表达及髓核细胞增殖、迁移能力的影响。结果与正常病人比较,脊柱结核病人髓核细胞增殖及迁移能力显著减低,miR⁃146a在脊柱结核病人髓核组织中表达量显著减低,而脊柱结核病人髓核组织中SMAD同系物2(SMAD2)、SMAD同系物3(SMAD3)、SMAD同系物4(SMAD4)、TGF⁃β1基因表达增高,SMAD同系物7(SMAD7)表达减低,提示miR⁃146a与TGF⁃β1/SMAD通路活性显著负相关。过表达miR⁃146a可抑制SMAD2、SMAD3、SMAD4、TGF⁃β1和促进SMAD7表达,而敲低miR⁃146a可促进SMAD2、SMAD3、SMAD4、TGF⁃β1 mRNA和抑制SMAD7表达水平。细胞实验进一步证实过表达miR⁃146a可促进脊柱结核病人髓核细胞增殖和迁移能力,而敲低miR⁃146a可显著抑制其增殖和迁移能力。结论miR⁃146a是脊柱结核进展的关键调控因子,其可通过抑制TGF⁃β1/SMAD通路活性进而调控髓核细胞增殖及迁移活性。

虎黄烧伤搽剂对小鼠烫伤MRSA感染模型中miR⁃155、miR⁃146a及炎症因子的影响

目的:探讨虎黄烧伤搽剂对小鼠烫伤MRSA感染模型中微小RNA⁃155(miR⁃155)、miR⁃146a及炎症因子的影响。方法:建立小鼠烫伤MRSA感染模型,实验设置3组:正常对照组、模型组、虎黄烧伤搽剂组,每组各10只。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT⁃PCR)检测miR⁃155、miR⁃146a及TLR2、TLR6、NOD2、IRAK⁃1、IRAK⁃4、IRK⁃M mRNA表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清细胞因子TNF⁃α、IL⁃6、IL⁃1β、IFN⁃γ、CCL3水平。采用Pearson法分析虎黄烧伤搽剂组小鼠烫伤创面组织中miR⁃155、miR⁃146a表达量与TLR2、TLR6、NOD2、IRAK⁃1、I⁃RAK⁃4、IRK⁃M表达量的相关性。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠烫伤创面组织中miR⁃155及TLR2、TLR6、NOD2、IRAK⁃1、IRAK⁃4 mRNA表达显著升高,miR⁃146a及IRK⁃M mRNA表达显著降低,血清TNF⁃α、IL⁃6、IL⁃1β、IFN⁃γ、CCL3水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,虎黄烧伤搽剂组小鼠烫伤创面组织中miR⁃155及TLR2、TLR6、NOD2、IRAK⁃1、IRAK⁃4 mRNA表达显著降低(P<0.05),miR⁃146a及IRK⁃M mRNA表达显著升高,血清TNF⁃α、IL⁃6、IL⁃1β、IFN⁃γ、CCL3水平显著降低。miR⁃155与TLR2、TLR6、IRAK⁃1呈正相关,IRK⁃M呈负相关(P<0.05);miR⁃146a与TLR2、TLR6、IRAK⁃1呈负相关,与IRK⁃M呈正相关(P<0.05)。结论:虎黄烧伤搽剂治疗小鼠烫伤MR⁃SA感染模型后可抑制miR⁃155表达、促进miR⁃146a表达及抑制炎症因子释放,其作用机制可能与调控IRAK⁃1、I⁃RAK⁃4、IRK⁃M表达及TLRs信号通路有关。

益赛普联合柳氮磺吡啶治疗强直性脊柱炎疗效及miR⁃29a、miR⁃146a的变化

目的探讨益赛普联合柳氮磺吡啶治疗强直性脊柱炎(AS)疗效及对外周血单个核细胞(PBMCs)中miR⁃29a、miR⁃146a表达的影响。方法选取本院AS患者123例进行前瞻性随机对照研究,以随机数字表将患者分为对照A组(n=41)、对照B组(n=41)、观察组(n=41)。对照A组给予益赛普,对照B组给予柳氮磺吡啶,观察组给予益赛普联合柳氮磺吡啶,均治疗12周。比较3组疗效与治疗前、治疗4、8、12周后症状与病情改善情况[脊柱痛、晨僵时间、AS活动指数(BASDAI)评分]、血清炎症因子指标[C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、基质金属蛋白酶⁃3(MMP⁃3)]、PBMCs中miR⁃29a、miR⁃146a水平。结果经治疗,临床疗效改善率比较结果显示,观察组最高,其次是对照A组,最低是对照B组,差异有统计学意义(P<0.05),而无效率则是对照B组最高,其次是对照A组,最低是观察组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗4、8、12周后脊柱痛、晨僵时间、BASDAI评分、血清CRP、TNF⁃α、MMP⁃3及PBMCs中miR⁃29a、miR⁃146a水平比较结果为:观察组最低,其次是对照A组,最高是对照B组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论应用益赛普联合柳氮磺吡啶治疗AS患者可减轻机体炎症反应,降低PBMCs中miR⁃29a、miR⁃146a水平,改善临床症状、病情,疗效显著。

NONHSAT248596.1内源性竞争miR-146a-5p调控骨关节炎软骨退变的机制

背景:目前已有针对lncRNA\miRNA\mRNA的共表达网络对骨关节炎发生发展调控机制的研究,课题组前期研究已通过数据库筛选出符合条件的NONHSAT248596.1和miR-146a-5p,尚缺乏体内实验来验证上述调控机制。目的:探究NONHSAT248596.1在基质细胞衍生因子1/4型趋化因子受体轴介导体内骨关节炎软骨退变进程中对miR-146a-5p发挥的竞争性内源性RNA调控作用。方法:取36只新西兰兔,通过向右侧后肢膝关节注射基质细胞衍生因子1溶液建立骨关节炎模型,采用随机数字表法分4组,lncRNA组、miRNA组、ceRNA组、对照组分别向造模膝关节内注射NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体、miR-146a-5p过表达的慢病毒载体、miR-146a-5p+NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体及空慢病毒载体。造模第4,8,12周,取膝关节软骨组织和软骨下骨组织进行相关检测。结果与结论:①苏木精-伊红与番红O固绿染色显示,4组软骨组织都有不同程度的退变表现,造模第4周时,lncRNA组软骨组织中的软骨细胞肿胀、细胞极性消失,细胞外基质破坏,出现表层糜烂、裂缝形成和软骨组织局部或全层缺失,并随时间延长软骨损伤程度逐渐加重,4组中miRNA组关节软骨炎症进展最缓慢;②qRT-PCR检测显示,相同时间点下,lncRNA组软骨组织中NONHSAT248596.1、4型趋化因子受体、基质金属蛋白酶3,9及13的mRNA表达量高于其他3组(P<0.05),miR-146a-5p、聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的mRNA表达量低于其他3组(P<0.05);造模后第8,12周,miRNA组软骨组织中的NONHSAT248596.1、4型趋化因子受体、基质金属蛋白酶3,9及13的mRNA表达量低于ceRNA组、对照组(P<0.05),miR-146a-5p、聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的mRNA表达量高于ceRNA组、对照组(P<0.05);③Western Blot检测显示,相同时间点下,lncRNA组软骨组织中的聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达量始终低于其他3组(P<0.05);miRNA组造模后第8,12周软骨组织中的聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原蛋白表达量高于ceRNA组、对照组(P<0.05);④结果表明,miR-146a-5p作为NONHSAT248596.1的作用靶点会受到其竞争性内源性RNA的作用造成活性被抑制,NONHSAT248596.1作用于miR-146a-5p后调控基质细胞衍生因子1/4型趋化因子受体轴,影响骨关节炎软骨组织中基质金属蛋白、Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖的表达,造成细胞外基质的降解及蛋白多糖的丢失。

miR-146a调控TLRs信号通路对类风湿关节炎患者外周血单个核细胞的影响

目的:观察miR-146a调控TLRs信号通路对活动期类风湿关节炎患者外周血单个核细胞的影响。方法:选取20例活动期类风湿关节炎患者,对患者外周血单个核细胞分离培养,分为LPS组和LPS+miR-146a组;同时选取10例健康体检者为健康对照组。采用MTT法测定吸光度,比较外周血单个核细胞变化,检测外周血单个核细胞的凋亡情况。RT-PCR法检测外周血单个核细胞miR-146a、Toll样受体2(TLR2)、髓样分化因子88(MyD88)mRNA表达。Western blot法检测外周血单个核细胞miR-146a、TLR2、MyD88蛋白表达。结果:LPS组较健康对照组和LPS+miR-146a组外周血单个核细胞TLR2表达明显升高(P<0.05);LPS组较健康对照组和LPS+miR-146a组外周血单个核细胞中miR-146a、TLR2、MyD88 mRNA表达明显升高(P<0.05);LPS组较健康对照组和LPS+miR-146a组外周血单个核细胞miR-146a、TLR2、MyD88蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:高表达miR-146a可能通过依赖TLR2/MyD88信号通路,抑制活动期类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中TLR2、MyD88表达,减轻炎症反应。

miR-146a-5p miR-155-5p在寻常型银屑病不同体液外泌体中的表达

目的 探讨外泌体miR-146a-5p、miR-155-5p在寻常型银屑病患者血浆、唾液、尿液中的表达及意义。方法 采用超速离心法提取40例寻常型银屑病患者血浆、唾液和尿液中外泌体,利用投射电镜观察外泌体形态,并提取RNA,利用核酸测定仪检测RNA浓度,RT-qPCR检测miR-146a-5p、miR-155-5p的表达水平。结果 外泌体外形呈现圆形或椭圆形,直径均在60~200 nm;外泌体RNA在银屑病患者血浆、唾液、尿液中的浓度分别为3.9 ng/μl、61.6 ng/μl、0.57 ng/μl;外泌体miR-146a-5p、miR-155-5p在寻常型银屑病患者血浆、唾液、尿液中的表达分别为血浆(0.01±0.002)、(0.06±0.002),尿液(1.03±0.02)、(0.95±0.08),唾液(0.02±0.00)、(0.18±0.01)。结论 外泌体miR-146a-5p、miR-155-5p在寻常型银屑病患者不同体液中存在表达性差异,从微观角度研究银屑病,有利于为今后的诊断、治疗及发病机制的研究提供科研依据。

miR-146a-3p抑制胰岛素样生长因子1表达调控星形胶质细胞增殖、迁移和凋亡

背景:mi R-146a-3p水平改变是大多数神经系统疾病发病机制中的常见事件,mi R-146a-3p调节星形胶质细胞的具体机制尚未被研究。目的:验证mi R-146a-3p通过胰岛素样生长因子1调控星形胶质细胞的增殖、迁移和凋亡。方法:将12只SD大鼠随机分为假手术组和脊髓损伤组,每组6只。术后2周对大鼠脊髓组织进行了RNA-Seq测序分析,筛选出差异基因(log2FC>2),同时挑选出Genecards数据库中脊髓损伤相关基因(Score>20),再通过Targetscan预测mi R-146a-3p的靶基因,取这3个基因集交集,筛选出胰岛素样生长因子1为其中一个重要的目的基因。q PCR、Western blot和免疫组化分析脊髓组织中胰岛素样生长因子1的表达水平。将原代星形胶质细胞分为NC组、NC-mimics组和mi R-146a-3p mimics组,用Annexin-V/PI染色法检测细胞凋亡情况、CCK-8法检测细胞增殖情况、Transwell法检测细胞的迁移能力。结果与结论:脊髓损伤组大鼠脊髓组织中mi R-146a-3p的表达较假手术组下降(P<0.05),胰岛素样生长因子1的表达较假手术组上升(P<0.05)。与NC组和NC-mimics组比较,mi R-146a-3p mimics组星形胶质细胞凋亡率增加(P<0.01),增殖能力下降(P<0.01),迁移数量减少(P<0.01)。结果表明,脊髓损伤后脊髓组织中mi R-146a-3p表达量下降,胰岛素样生长因子1表达量上升;在星形胶质细胞中mi R-146a-3p靶向调节胰岛素样生长因子1抑制星形胶质细胞的增殖和迁移,促进其凋亡。

急性脑梗死患者血清miR-27b和miR-146a表达及其与颈动脉狭窄的相关性分析

目的 探讨急性脑梗死(ACI)患者血清miR-27b和miR-146a表达并分析其与颈动脉狭窄的相关性。方法 选取120例ACI患者作为观察组,再选取同期65名健康体检者作为对照组。根据颈动脉狭窄程度将ACI患者分为轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组、完全闭塞组。检测被试者血清miR-27b和miR-146a表达,分析ACI患者血清miR-27b和miR-146a的表达,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-27b和miR-146a表达对ACI的诊断价值,再以Pearson相关性分析法分析血清miR-27b和miR-146a表达与颈动脉狭窄的相关性,行多因素Logistic回归分析探讨影响ACI发生的危险因素。结果 观察组患者血清miR-27b表达高于对照组,血清miR-146a表达低于对照组(P<0.01)。血清miR-27b和miR-146a表达对ACI诊断价值的ROC曲线显示,单独检测时血清miR-27b的敏感度最高,miR-146a的特异度最高,两者联合检测时曲线下面积可达0.986。不同颈动脉狭窄程度ACI患者血清miR-27b和miR-146a表达水平不同,其中轻度狭窄组miR-27b表达最低,miR-146a表达最高,而完全闭塞组miR-27b表达最高,miR-146a表达最低,各组间比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清miR-27b表达与颈动脉狭窄程度呈正相关(r=0.775,P<0.01),血清miR-146a表达与颈动脉狭窄程度呈负相关(r=-0.622,P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-27b、miR-146a表达为ACI患者发生中、重度颈动脉狭窄的影响因素(P<0.01)。结论 ACI患者血清miR-27b表达升高,miR-146a表达降低,可作为临床诊断ACI的潜在指标,且两者联合检测的价值高于单独检测。

miR-146a及MUC5AC在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织中的表达及临床意义

目的:探讨微小RNA-146a(miR-146a)及黏蛋白5AC(MUC5AC)在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组织中的表达及其临床意义。方法:选取2022年1月—2023年1月新疆医科大学第二附属医院耳鼻喉科所收治的慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者40例(观察组)及同期因鼻外伤、鼻中隔偏曲、单纯鼻窦囊肿接受手术治疗患者40例(对照组)。检测对照组鼻黏膜组织和观察组鼻息肉组织的miR-146a水平及MUC5AC水平,并分析两组的VAS评分、鼻内镜评分,以及鼻息肉组织的miR-146a、MUC5AC表达水平与VAS评分、鼻内镜评分、炎症细胞百分比的相关性。结果:观察组miR-146a水平低于对照组,MUC5AC水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);鼻息肉组织中的miR-146a水平与VAS评分及鼻内镜评分均呈负相关(r=-0.637、-0.339,P<0.05),而MUC5AC水平与VAS评分及鼻内镜评分均呈正相关(r=0.525、0.471,P<0.05);miR-146a的表达水平与嗜酸性粒细胞的百分比呈负相关(r=-0.701,P<0.05),MUC5AC的表达水平与嗜酸性粒细胞百分比呈正相关(r=0.587,P<0.05),miR-146a、MUC5AC的表达水平与中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比均无相关性(P>0.05)。结论:在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉疾病诊断中,鼻息肉组织的miR-146a水平低表达及MUC5AC水平高表达均提示病情加重,均与组织炎性程度有关。

miR-146a调控TLR4/NF-κB通路对脑出血模型大鼠的保护作用及机制研究

目的:探索miR-146a调控TLR4/NF-κB通路对脑出血模型大鼠炎症损伤及神经保护的作用及可能作用机制。方法:选取40只大鼠,随机分为假手术组、模型组、过表达miR-146a腺病毒注射组及阴性病毒注射组,每组10只。Garcia评分评定神经功能;HE染色观察脑组织改变;ELISA检测炎症因子水平;Western blot及RT-PCR检测脑组织TLR4、NF-κB蛋白、基因表达。结果:与模型组相比,过表达miR-146a腺病毒注射组大鼠神经功能评分升高(P<0.05)。模型组大鼠脑组织细胞形态异常,伴有水肿及炎症;过表达miR-146a腺病毒注射组大鼠脑组织细胞形态改善,水肿及炎症减轻。模型组大鼠炎症因子水平较假手术组升高(P<0.05);过表达miR-146a腺病毒注射组大鼠炎症因子水平较模型组下降(P<0.05)。模型组大鼠TLR4、NF-κB蛋白及mRNA表达较假手术组增加(P<0.05);过表达miR-146a腺病毒注射组大鼠TLR4、NF-κB蛋白及mRNA表达较模型组下降(P<0.05)。结论:miR-146a可改善脑出血模型大鼠神经功能,减轻炎症损伤,可能通过抑制脑组织TLR4/NF-κB信号通路激活降低炎症因子水平实现。

急性冠状动脉综合征患者PCI治疗前后血清miR-34a、miR-146a水平变化及近期预后预测价值

目的探讨急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者血清微小RNA-34a(miR-34a)、微小RNA-146a(miR-146a)水平变化及近期预后预测价值。方法选取2018年2月~2020年6月收治的拟行经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)术的ACS患者86例,所有研究对象均采用Judkins法进行冠脉造影,并根据造影图像结果中冠脉血管狭窄程度分为单支病变组(23例),双支病变组(36例),三支病变组(27例);同时对冠脉造影结果进行Gensini评分,<50分为轻度病变组(46例),50~90分为中度病变组(30例),>90分为重度病变组(10例)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测ACS患者PCI术前、术后1个月的miR-34a、miR-146a的表达水平。并随访ACS患者术后1年内主要不良心血管事件(MACE)的发生情况,并根据是否发生MACE事件分为MACE组与非MACE组,比较两组血清miR-34a、miR-146a的表达水平。结果ACS患者PCI术前血清miR-34a、miR-146a水平明显高于PCI术后(P<0.001);ACS患者冠脉中度病变组血清miR-34a、miR-146a表达水平高于轻度病变组(P<0.001),而重度病变组中血清miR-34a、miR-146a表达水平明显高于中度病变组与轻度病变组(P<0.001);ACS患者冠脉双支病变组血清miR-34a、miR-146a表达水平高于单支病变组(P<0.05);而三支病变组中血清miR-34a、miR-146a表达水平明显高于双支病变组与单支病变组(P<0.05);MACE组患者血清miR-34a、miR-146a表达水平显著高于非MACE组(P<0.001)。结论PCI可明显降低ACS患者体内血清miR-34a、miR-146a的表达水平。而血清miR-34a、miR-146a的表达水平随着冠脉病变程度的加重而增高,故可通过血清miR-34a、miR-146a来预测冠脉的病变程度。同时监测ACS患者PCI术后的血清miR-34a、miR-146a的表达水平也具有重要意义,能预防MACE事件的发生。

宫颈病变患者病灶组织miR-21、miR-146a、miR-224表达与HR-HPV感染、宫颈病变程度的关系

目的分析宫颈病变患者病灶组织miR-21、miR-146a、miR-224表达与高危型人乳头状瘤病毒(HR-HPV)感染、宫颈病变程度的关系。方法选取宫颈病变患者252例,根据宫颈病变程度分为宫颈癌组、低级别鳞状上皮内病变(LSIL)组、高级别鳞状上皮内病变(HSIL)组;根据是否感染HR-HPV分为感染组和非感染组。另选宫颈正常的子宫肌瘤患者84例为对照组。PCR检测各组miR-21、miR-146a和miR-224表达水平,并分析宫颈癌患者临床病理特征与miR-21、miR-146a和miR-224表达的关系。结果感染组、非感染组miR-224水平高于对照组,感染组miR-224水平高于非感染组,宫颈癌组高于对照组、LSIL组、HSIL组(P<0.05)。低分化、FIGO分期Ⅱb~Ⅲa期、淋巴结转移、HR-HPV感染的宫颈癌患者病灶组织中miR-224高于中高分化、FIGO分期Ⅰb~Ⅱa期、无淋巴结转移及非HR-HPV感染者(P<0.05)。分化程度、HR-HPV感染、FIGO分期、淋巴结转移是影响宫颈病变患者病灶组织miR-224水平的影响因素。结论宫颈癌组织miR-224表达明显上调,且HR-HPV感染者miR-224表达水平更高;HR-HPV感染、分化程度、FIGO分期、淋巴结转移与宫颈癌组织miR-224表达密切相关。

颈动脉超声联合ABCD3-Ⅰ评分及血清miR-146a预测短暂性脑缺血发作后继发脑梗死的临床价值

目的探讨颈动脉超声联合ABCD3-Ⅰ评分及血清miR-146a预测短暂性脑缺血发作(TIA)后继发脑梗死的临床应用价值。方法选取我院收治的90例TIA患者,根据TIA后30 d内是否继发脑梗死分为脑梗死组42例和非脑梗死组48例,比较两组临床资料、颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分及血清miR-146a的差异。采用Logistic回归分析筛选TIA后继发脑梗死的独立危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分、血清miR-146a单独及联合应用预测TIA后继发脑梗死的诊断效能。结果脑梗死组与非脑梗死组颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分和血清miR-146a比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Logistic回归分析显示,颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分和血清miR-146a均为TIA后继发脑梗死的独立危险因素(OR=2.807、2.680、2.762,均P<0.05)。ROC曲线分析显示,颈动脉狭窄程度、ABCD3-Ⅰ评分和血清miR-146a预测TIA后继发脑梗死的曲线下面积分别为0.892、0.854和0.889,其联合应用的曲线下面积为0.925。结论颈动脉超声联合ABCD3-Ⅰ评分及血清miR-146a在预测TIA后继发脑梗死中具有较好的临床应用价值。

lncRNA-MSTRG.7889.1竞争性结合bta-miR-146a靶向Smad4调控牦牛颗粒细胞的凋亡

【背景】卵泡颗粒细胞(Granulosa cells,GCs)凋亡是导致卵泡闭锁的重要原因,竞争性内源RNA(competing endogenous RNAs,ce RNA)机制已被证明参与调控GCs的凋亡过程。前期牦牛卵巢转录组测序发现lnc RNA-MSTRG.7889.1与bta-mi R-146a具有结合位点,而bta-mi R-146a和Smad4存在靶向关系。【目的】通过探究影响牦牛卵泡GCs凋亡的ce RNA分子调控机制,为揭示牦牛生殖调控的奥秘奠定基础。【方法】采集和分离成年母牦牛的健康和闭锁卵泡,利用RT-q PCR法检测lnc RNA-MSTRG.7889.1、bta-mi R-146a和Smad4在卵泡中的表达。制作牦牛健康和闭锁卵泡组织切片,TUNEL检测健康卵泡和闭锁卵泡中GCs的凋亡情况;荧光原位杂交分析lnc RNA-MSTRG.7889.1、bta-mi R-146a和Smad4在卵泡中的定位。体外分离和培养牦牛GCs,分别转染Smad4过表达载体和bta-mi R-146a mimics,流式细胞术检测GCs细胞凋亡率,Western blot检测促凋亡蛋白CASPASE3和BAX,抑凋亡蛋白BCL-2的表达;GCs共转染Smad4过表达载体和bta-mi R-146a mimics后,探究bta-mi R-146a是否靶向Smad4影响牦牛GCs的凋亡。将lnc RNA-MSTRG.7889.1过表达慢病毒载体感染GCs,流式细胞术和Western blot检测lnc RNA-MSTRG.7889.1对GCs凋亡的影响;lnc RNA-MSTRG.7889.1载体和bta-mi R-146a mimics共转染GCs,进一步分析lnc RNA-MSTRG.7889.1是否竞争性结合bta-mi R-146a靶向Smad4影响牦牛GCs的凋亡。【结果】lnc RNA-MSTRG.7889.1和Smad4 m RNA在牦牛健康卵泡中的表达极显著高于闭锁卵泡(P<0.01),而bta-mi R-146a的表达则相反(P<0.01)。TUNEL检测结果显示,在闭锁卵泡中GCs的荧光强度极显著高于健康卵泡(P<0.01),说明闭锁卵泡中GCs凋亡显著高于健康卵泡。荧光原位杂交结果显示Smad4、bta-mi R-146a和lnc RNA-MSTRG.7889.1在牦牛卵泡中共表达,其在健康和闭锁卵泡中的表达与RT-q PCR结果基本一致,提示可能存在ce RNA机制参与牦牛健康卵泡发育和卵泡闭锁过程。在牦牛GCs过表达Smad4使细胞凋亡率显著降低(P<0.01),CASPASE3和BAX蛋白的表达显著降低(P<0.01),BCL-2蛋白的表达显著升高(P<0.01);过表达bta-mi R-146a使GCs凋亡率显著升高(P<0.01),CASPASE3和BAX蛋白的表达显著升高(P<0.01),BCL-2蛋白的表达显著降低(P<0.01);bta-mi R-146a靶向抑制Smad4的表达(P<0.01);Smad4和bta-mi R-146a共转染GCs,结果显示bta-mi R-146a靶向抑制Smad4降低前者对GCs凋亡的促进作用(P<0.01)。过表达lnc RNA-MSTRG.7889.1使牦牛GCs凋亡率显著降低(P<0.01),CASPASE3和BAX蛋白的表达显著降低(P<0.01),BCL-2蛋白的表达显著升高(P<0.01);lnc RNA-MSTRG.7889.1显著抑制bta-mi R-146a的表达(P<0.01)。将lnc RNA-MSTRG.7889.1和bta-mi R-146a共转染GCs,结果表明lnc RNA-MSTRG.7889.1靶向bta-mi R-146a降低后者对GCs凋亡的促进作用(P<0.01);而且RT-q PCR法和Western blot检测结果表明lnc RNA-MSTRG7889.1竞争性结合bta-mi R-146a促进Smad4 m RNA和蛋白水平的表达(P<0.01)。【结论】lnc RNA-MSTRG.7889.1竞争性结合bta-mi R-146a促进Smad4的表达抑制牦牛GCs的凋亡。

乌梅丸通过调控miR-146a对溃疡性结肠炎大鼠结肠细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探讨乌梅丸通过调控miR-146a对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠细胞凋亡的影响及机制。方法:选取50只SD大鼠,每组10只,分为正常对照组、模型组、乌梅丸低、中、高剂量组,转染anti-miR-NC、anti-miR-146a、miR-NC、miR-146a,作为anti-miR-NC组、anti-miR-146a组、乌梅丸+miR-NC组、乌梅丸+miR-146a组。CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测细胞miR-146a表达;ELISA检测细胞IL-1β、IL-13含量;Western blot检测细胞B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bax蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低,细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-1β、IL-13含量、miR-146a表达升高(P<0.05);与模型组比较,乌梅丸显著升高细胞存活率、Bcl-2蛋白表达,降低细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-1β、IL-13含量、miR-146a表达(P<0.05)。抑制miR-146a可提高细胞存活率、Bcl-2蛋白表达,降低细胞凋亡率、IL-1β、IL-13含量、Bax蛋白表达(P<0.05)。过表达miR-146a表达逆转乌梅丸对UC大鼠结肠细胞增殖和凋亡的影响。结论:乌梅丸通过上调miR-146a表达降低UC大鼠结肠细胞凋亡。

miR-146a通过调节IPr1基因对结核分枝杆菌感染的AEC Ⅱ型细胞活性作用机制

目的 探讨miR-146a通过调节IPr1基因观察对结核分枝杆菌(Mtb)感染的肺泡II型上皮细胞(AEC II)活性的作用机制。方法 采用Mtb感染AECⅡ细胞。将AECⅡ细胞分为结核组(感染Mtb)、 NC组(模型+转染miR-146a NC)、转染组(模型+转染miR-146a mimics)。RT-PCR检测AECⅡ细胞miR-146a、Ipr1基因表达;CCK8检测AECⅡ细胞增殖;流式细胞仪检测AECⅡ细胞凋亡;双荧光素酶报告测定Ipr1与miR-146a靶向关系。结果 DIO荧光染色的Mtb在感染人AECⅡ细胞12 h内会进入细胞质基质中,并围绕细胞核分布,表明建立的结核分枝杆菌感染模型成功;结核组与NC组AECⅡ细胞中miR-146a、Ipr1基因表达比较无差异(P>0.05),与NC组相比,转染组AECⅡ细胞中miR-146a、Ipr1基因表达水平升高(P<0.05);结核组与NC组AECⅡ细胞在不同时间点的OD值比较均无差异(P>0.05),与NC组相比,转染组AECⅡ细胞在不同时间点的OD值均升高(P<0.05);结核组AECⅡ细胞凋亡率与NC组相比无差异(P>0.05),与NC组相比,转染组AECⅡ细胞凋亡率显著降低(P<0.001)。双荧光素酶报告结果显示,转染miR-146a后野生型Mtb感染的AECⅡ细胞中Ipr1活性升高(P<0.05),突变型Mtb感染的AECⅡ细胞中Ipr1活性无明显变化(P>0.05),表明Ipr1是miR-146a的靶基因。结论 过表达的miR-146a可增加Mtb感染的AECⅡ细胞活性,降低凋亡,研究机制认为可能与通过激活Ipr1水平相关。Ipr1是miR-146a靶基因,可通过激活表达而发挥减少Mtb对AECⅡ细胞活性的损伤。

miR-146a、miR-23b水平与前列腺癌患者术前临床分期及预后的关系

目的 探索miR-146a、miR-23b表达水平与前列腺癌(PCa)患者术前临床分期及预后的关系。方法 选取2019年3月-2020年3月期间重庆市丰都县人民医院收治的70例PCa患者和70例良性前列腺增生症(BPH)患者,设为PCa组和BPH组,入组后分别进行前列腺组织取样,检测两组前列腺中miR-146a、miR-23b表达水平,分析miR-146a、miR-23b表达与PCa患者临床病理特征及预后的相关性。结果 PCa组miR-146a、miR-23b表达低于BPH组,差异有统计学意义(P<0.05);术前PCa患者miR-146a、miR-23b水平随Gleason评分和临床T分期升高而逐次下降(P<0.05);PCa患者术前存在淋巴结转移者miR-146a、miR-23b水平低于无转移者,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,PCa患者术前前列腺组织miR-146a、miR-23b表达水平分别与临床分期呈现负相关(r=-0.758、-0.760,均P<0.05);截止随访,预后不良的PCa患者miR-146a、miR-23b低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-146a、miR-23b联合检测预测PCa预后AUC高于单一检测指标(P<0.05)。结论 PCa患者前列腺组织中miR-146a、miR-23b表达较低,且与临床分期相关,miR-146a、miR-23b表达水平对患者不良预后有一定预测价值。

狼疮性肾炎患者尿液miR-26a、miR-146a表达及对病情活动的预测价值分析

目的 分析狼疮性肾炎(LN)患者尿液miR-26a、miR-146a表达及对病情活动的预测价值。方法 选取2021年1月至2022年12月在本院住院的158例LN患者,按照系统性红斑狼疮活动指数(SLEDAI)将其分为LN稳定期组(88例)和LN活动期组(70例);选取同期本院60例体检健康者作为对照组。比较三组的一般资料及常规实验室指标;用多因素Logistic回归分析影响LN病情活动的因素;分析LN患者尿液miR-26a、miR-146a预测病情活动的效能。结果 LN活动期组和LN稳定期组的补体C3、补体C4、血红蛋白、白蛋白水平及尿液miR-26a、miR-146a表达量均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。LN活动期组的补体C4、血红蛋白、白蛋白水平及尿液miR-26a、miR-146a表达量均低于LN稳定期组,尿酸水平高于LN稳定期组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,尿液miR-26a、miR-146a均是影响LN患者病情活动的因素(P<0.05)。尿液miR-26a、miR-146a及二者联合预测LN患者病情活动的曲线下面积(AUC)分别为0.773、0.686、0.876;二者联合预测价值优于尿液miR-26a及miR-146a单独预测(P=0.037、0.000)。结论 miR-26a及miR-146a在LN患者尿液中表达降低,二者联合用于预测LN病情活动的价值更高。

疏肝益肾抗癌方对子宫内膜癌化疗后癌因性疲乏的疗效及对血清miR-222、miR-146a的影响

目的:探讨疏肝益肾抗癌方对子宫内膜癌化疗后癌因性疲乏(Cancer-Related Fatigue,CRF)的疗效及对血清miR-222、miR-146a的影响。方法:选取2019年5月~2021年12月在我院住院治疗的晚期子宫内膜癌化疗后CRF患者98例为研究对象,随机分为观察组和对照组,每组各49例。对照组口服地塞米松片,观察组在对照组基础上服用疏肝益肾抗癌方,疗程4周。比较两组疗效、Piper量表积分、中医证候积分、免疫功能、miR-222、miR-146a等指标。采用Pearson相关分析miR-222、miR-146a与免疫指标的关系,多因素Logistic回归和ROC曲线分析miR-222、miR-146a对CRF复发的影响。结果:观察组总有效率为95.92%,对照组为75.51%,观察组疗效优于对照组(χ^(2)=8.257,P=0.041)。观察组治疗后的Piper量表行为、情感、躯体、认知、总分均低于对照组(P均<0.001)。观察组治疗后的神疲乏力、胁肋胀满、腰膝酸软、胸闷气短证候积分均高于对照组(P均<0.001)。观察组治疗后的CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均高于对照组,CD8^(+)水平低于对照组(P均<0.001)。观察组治疗后miR-222水平低于对照组,miR-146a水平高于对照组(P均<0.001)。血清miR-222水平与CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平呈负相关,与CD8^(+)水平呈正相关(P均<0.001),血清miR-146a水平与CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平呈正相关,与CD8^(+)水平呈负相关(P均<0.001)。miR-222为CRF复发的独立危险因素(OR=2.185,P<0.001),miR-146a、CD4^(+)为CRF复发的独立保护因素(OR=0.276、0.335;P均<0.001)。miR-222、miR-146a及二者联合预测的AUC分别为0.851、0.741、0.942,二者联合预测优于各自单独预测效能(Z=6.357、9.415,P均<0.001)。结论:疏肝益肾抗癌方能明显提高CRF疗效,改善CRF症状,提高免疫功能,减少miR-222水平,增加miR-146a水平,miR-222和miR-146a均是CRF复发的独立影响因素,二者联合对CRF复发有很好的预测价值。

子痫前期蜕膜巨噬细胞源性外泌体来源miR-146a-5p通过靶向HIF1α抑制滋养细胞的活力和侵袭能力

目的:探究蜕膜巨噬细胞源性外泌体miR-146a-5p对子痫前期滋养细胞的作用及其分子机制。方法:收集子痫前期(preeclampsia,PE)患者和正常妊娠女性蜕膜组织,使用密度梯度法与流式细胞术分选获得巨噬细胞,提取蜕膜巨噬细胞源性外泌体;为了鉴定外泌体,采用透射电镜观察结构,western blot验证外泌体CD63蛋白表达;采用CCK-8检测外泌体对滋养细胞活力的影响;Transwell实验检测滋养细胞迁移变化;qPCR检测外泌体中miR-146a-5p的表达;western blot检测滋养细胞中HIF1α蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测miR-146a-5p与HIF1α是否存在结合位点。结果:巨噬细胞外泌体呈现直径约30~130 nm的中间凹陷“饼状”结构形态,CD63高表达,符合外泌体特征。与正常组相比,PE组蜕膜巨噬细胞源性外泌体显著降低滋养细胞增殖与迁移(P<0.001)。PE组蜕膜巨噬细胞源性外泌体中miR-146a-5p表达量显著下降,蜕膜巨噬细胞源性外泌体处理滋养细胞后滋养细胞中HIF1α蛋白表达显著升高,miR-146a-5p和HIF1α之间存在靶向结合位点。结论:PE组蜕膜巨噬细胞源性外泌体可以降低滋养细胞增殖与迁移,这可能与外泌体miR-146a-5p表达下降,从而促进滋养细胞HIF1α蛋白表达有关。