miR-152-3p表达下调降低紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇的耐药性

目的探讨miR-152-3p对紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇耐药性的影响及机制。方法①紫杉醇(1.875,3.75,7.5,17和23μmol·L^(-1))与人卵巢癌A2780和A2780T细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率,计算抑制细胞存活半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI)。Western印迹法检测A2780和A2780T细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达。②实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测A2780和A2780T细胞miR-152-3p表达水平。脂质体瞬时转染技术转染miR-152-3p抑制物降低A2780T细胞中miR-152-3p表达(miR-152-3p抑制物组),同时设转染miR-152-3p阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法、划痕实验和流式细胞术分别检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞存活、迁移和凋亡的影响;Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。③用miRDB,Targetscan,miRWalk和Starbase数据库预测miR-152-3p的靶基因,并用Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞磷酸酯酶张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达的变化及RT-qPCR检测A2780和A2780T细胞PTEN mRNA表达水平予以验证。随后,脂质体瞬时转染技术转染PTEN siRNA沉默A2780T细胞中PTEN表达,同时设转染siRNA阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测沉默PTEN表达后A2780T细胞存活率和IC50值,Western印迹法检测P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达。结果①紫杉醇处理后A2780和A2780T细胞存活率均降低(P<0.01),A2780T细胞RI为2.8。与A2780细胞相比,A2780T细胞P-gp,MRP1和ABCG2蛋白高表达(P<0.05,P<0.01)。②与A2780细胞相比,A2780T细胞miR-152-3p明显高表达(P<0.01)。与转染miR-152-3p阴性对照组比较,转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和细胞迁移能力(P<0.05)明显降低,细胞凋亡率升高(P<0.01);Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。③生物信息学数据库分析结果提示,PTEN是miR-152-3p的一个靶基因;Western印迹法验证显示,转染miR-152-3p抑制物组A2780T细胞PTEN蛋白表达低于转染miR-152-3p阴性对照组(P<0.05);RT-qPCR结果显示,A2780T细胞PTEN mRNA表达水平高于A2780细胞(P<0.01)。转染PTEN siRNA沉默PTEN表达后,与转染siRNA阴性对照组相比,A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和IC50值(P<0.01)显著降低,P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论miR-152-3p在A2780T细胞中高表达,其表达下调可抑制A2780T细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,降低A2780T细胞对紫杉醇的耐药性,该作用可能是通过降低其靶基因PTEN表达发挥的。

丹皮酚通过调控动脉粥样硬化中的miR-152-3p/ASPH轴抑制氧化低密度脂蛋白诱发的小鼠血管内皮细胞凋亡、炎症反应和氧化应激

目的揭示丹皮酚通过调控miR-152-3p/ASPH轴在ox-LDL诱导的血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)进展中的作用。方法首先,用不同浓度的氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)(0、25、50、100μg·mL^(-1))处理小鼠VECs,选取100μg·mL^(-1)ox-LDL进行实验。然后,用不同浓度的丹皮酚(30、60、120μmol·L^(-1))或辛伐他汀(30μmol·L^(-1))处理VECs。接着,使用细胞计数试剂盒-8和流式细胞术分别用于测定细胞活力和凋亡。此外,使用酶联免疫吸附法分析了IL-1β和IL-6的水平,并使用相关试剂盒检测了活性氧、乳酸脱氢酶和丙二醛的含量。此外,通过qRT-PCR或Western blot检测miR-152-3p和天冬氨酰(天冬酰胺)β-羟化酶(aspartate-β-hydroxylase,ASPH)的表达。miR-152-3p和ASPH之间的相互作用由starBase预测,然后通过双荧光素酶报告基因实验和RNA结合蛋白免疫沉淀实验证实。结果100μg·mL^(-1)ox-LDL显著抑制VECs活力,并促进细胞凋亡、炎症反应和氧化损伤。而丹皮酚的处理以剂量依赖性的方式增加细胞活力,抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡。丹皮酚以剂量依赖性的方式降低ox-LDL诱导的IL-1β和IL-6的水平,以及以剂量依赖性的方式减弱ox-LDL对ROS、MDA和LDH含量的促进作用。另外,ox-LDL对miR-152-3p表达的抑制作用和对ASPH表达的促进作用也被丹皮酚逆转,且120μmol·L^(-1)丹皮酚效果最好。120μmol·L^(-1)丹皮酚能够上调miR-152-3p或下调ASPH,进一步促进丹皮酚对VECs生长的保护作用,miR-152-3p靶向负调控ASPH表达。结论丹皮酚通过调节miR-152-3p/ASPH轴减弱ox-LDL对小鼠VECs生长的影响,为AS的治疗提供理论基础。

MiR-152-3p调控DNA甲基转移酶1对结肠癌增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的:探究miR-152-3p、DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferases,DNMT1)在结肠癌细胞中的调控机制。方法:qRT-PCR检测miR-152-3p和DNMT1的表达;细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕愈合实验以及Transwell实验检测各处理组癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;双荧光素酶实验检测miR-152-3p与DNMT1的靶向关系;Western blot实验检测DNMT1蛋白表达;流式细胞术实验检测细胞凋亡率。结果:结肠癌细胞中miR-152-3p显著低表达,DNMT1显著高表达;过表达miR-152-3p会抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭;miR-152-3p能靶向抑制DNMT1的表达,从而抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭;过表达miR-152-3p可以靶向DNMT1并促进细胞凋亡。结论:miR-152-3p通过靶向下调DNMT1的表达,从而抑制结肠癌细胞的发生发展。

miR-152-3p通过AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路促进脑出血大鼠神经元铁死亡

目的:探讨miR-152-3p通过AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路促进脑出血(ICH)大鼠神经元铁死亡的机制。方法:使用大鼠神经元细胞为研究对象,采用氧合血红蛋白(oxyHb)刺激神经元细胞构建ICH体外细胞模型,分别将miR-152-3p inhibitor和(或)PIK3CA抑制剂分别处理细胞,采用流式细胞术观察细胞凋亡情况,RT-qPCR、Western blot检测相关基因和蛋白表达情况;并用细胞免疫荧光观察Nrf2蛋白的入核率;用双荧光素酶靶标实验验证miR-152-3p与PIK3CA的关系。结果:将miR-152-3p inhibitor转染的细胞构建ICH细胞模型后,细胞凋亡率明显降低(P<0.01);SLC7A11、GPx4、PIK3CA、Nrf2蛋白表达水平以及p-AKT/AKT比率显著升高而GSK-3β蛋白表达水平显著降低(P<0.01);同时,Nrf2蛋白入核量也显著升高(P<0.01);而此作用在使用PIK3CA抑制剂干预后,miR-152-3p inhibitor的改善效果消失;荧光素酶靶标实验证实,miR-152-3p可靶向调控PIK3CA。结论:miR-152-3p通过AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路促进ICH大鼠神经元铁死亡。

miR-7-5p和miR-152-3p联合调控Wnt/β-catenin通路对乳腺癌细胞上皮-间质转化及化疗耐药的影响

目的探讨miR-7-5p和miR-152-3p协同抑制乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进程及紫杉醇耐药的分子机制。方法采用生物信息学软件预测miR-7-5p和miR-152-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测两者与TCF4的靶向关系;Western blot法检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键调控因子β-catenin及TCF4蛋白的表达;在转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics基础上给予Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl处理后,Western blot法检测MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和EMT相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达,Transwell小室实验检测MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力;MTT实验检测激活Wnt/β-catenin信号通路对MCF-7/TAX细胞紫杉醇耐药性的影响。结果TCF43′UTR区域存在能够与miR-7-5p及miR-152-3p互补的结合位点;转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后可使TCF4野生型(TCF4-WT)报告基因载体的荧光素酶活性较NC组明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与NC组相比,转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后各组紫杉醇耐药MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),且两者共同转染后MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平较miR-7-5p组或miR-152-3p组进一步降低(P<0.05)。Western blot结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和vimentin蛋白表达水平明显升高,而E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。Transwell小室结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力明显增强(P<0.05)。MTT结果显示,不同浓度紫杉醇作用下,miR-7-5p+LiCl组细胞增殖活力较miR-7-5p组明显升高;同时miR-152-3p+LiCl组和miR-7-5p/152-3p+LiCl组细胞的增殖活力较NC组均明显升高(P<0.05)。结论TCF4是miR-7-5p和miR-152-3p的共同靶标。miR-7-5p和miR-152-3p可共同抑制MCF-7/TAX细胞中Wnt/β-catenin信号通路的活化。

miR-152-3p靶向IGF1基因对高糖诱导的ARPE-19细胞活性和凋亡的影响

目的:探究microRNA-152-3p(miR-152-3p)靶向胰岛素样生长因子1(IGF1)基因对高糖诱导的视网膜色素上皮ARPE-19细胞活性和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:高糖诱导ARPE-19细胞并转染miR-152-3p mimics,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞中miR-152-3p水平,蛋白印迹(Western blot)法检测细胞中IGF1和VEGF表达水平,双荧光素酶报告基因检测IGF1和miR-152-3p靶向结合关系。结果:高糖能够降低ARPE-19细胞活性,提高细胞凋亡率,抑制细胞中miR-152-3p的表达,提高IGF1和VEGF的表达;而过表达miR-152-3p能够回调高糖诱导的细胞活性抑制及凋亡增加,抑制IGF1和VEGF的表达。双荧光素酶报告基因实验验证了IGF1是miR-152-3p的靶基因。结论:miR-152-3p可通过靶向IGF1基因调节VEGF的表达抑制高糖诱导的ARPE-19细胞活性抑制和凋亡增加。

miR-152-3p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感性的作用及分子机制研究

目的:探究miR-152-3p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感性的作用及其分子机制。方法:采用顺铂处理体外培养的A549细胞,检测细胞内miR-152-3p、SOS1表达水平的变化;采用荧光素酶活性检测法分析miR-152-3p与SOS1的调控关系。A549细胞转染miR-152-3p慢病毒过表达载体、SOS1慢病毒过表达载体或慢病毒空载体,采用顺铂处理转染的细胞,比较miR-152-3p过表达或SOS1过表达对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡及迁移的影响。结果:与正常培养的A549细胞相比,顺铂处理的A549细胞内miR-152-3p表达水平显著降低,而SOS1表达水平显著升高(P<0.05);生物信息学分析显示SOS1是miR-152-3p的一个潜在靶基因,而荧光素酶活性检测法分析显示miR-152-3p具有负调控SOS1的作用。与转染空载体的A549细胞相比,miR-152-3p过表达显著抑制A549细胞增殖及迁移、阻滞细胞周期、促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-152-3p过表达的A549细胞内SOS1表达水平显著低于转染空载体的细胞(P<0.05);与单独转染miR-152-3p过表达载体的细胞相比,同时转染miR-152-3p过表达载体和SOS1慢病毒过表达载体的A549细胞增殖、迁移增强,且细胞凋亡受到显著抑制(P<0.05)。结论:miR-152-3p通过抑制SOS1表达增强A549细胞对顺铂的敏感性,继而抑制A549细胞增殖、迁移,阻滞细胞周期以及促进A549细胞凋亡。

LncRNA KIF9-AS1靶向miR-152-3p调控肺癌细胞的顺铂敏感性

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)驱动蛋白家族成员9反义RNA1(KIF9-AS1)对肺癌细胞的顺铂(DDP)敏感性的影响和作用机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印记(western blot)检测检测A549、A549/DDP中KIF9-AS1、miR-152-3p和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达水平。将KIF9-AS1小干扰RNA、miR-152-3p模拟物分别转染A549/DDP细胞,流式细胞术、Western blot分别检测下调KIF9-AS1或上调miR-152-3p对A549/DDP细胞凋亡和MRP1、细胞周期素D1(CyclinD1)和裂解的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)蛋白表达的影响。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力和A549/DDP细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50)值。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR确定KIF9-AS1对miR-152-3p的靶向调控作用。结果与A549细胞比较,A549/DDP细胞中KIF9-AS1、MRP1蛋白表达显著升高,miR-152-3p表达显著降低(P<0.05)。下调KIF9-AS1表达或上调miR-152-3p表达后,A549/DDP细胞活力、CyclinD1蛋白表达显著降低,凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,MRP1蛋白表达和IC50显著降低(P<0.05)。KIF9-AS1靶向负调控miR-152-3p表达。下调miR-152-3p表达可逆转下调KIF9-AS1对A549/DDP细胞活力、凋亡率、CyclinD1、Cleaved-caspase-3和MRP1蛋白表达以及IC50的影响(P<0.05)。结论下调KIF9-AS1表达可显著抑制A549/DDP细胞的增殖,促进细胞凋亡,增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制与靶向调控miR-152-3p表达有关。

miR-152-3p对血管平滑肌细胞的作用及其机制研究

目的:研究miR-152-3p对血管平滑肌细胞(VSMCs)的作用及机制。方法:使用ox-LDL刺激血管平滑肌细胞,用ApoE基因敲除小鼠建立动脉粥样硬化动物模型。使用qRT-PCR检测miR-152-3p和转化生长因子-B2(TGFB2 Mrna)表达水平。分别使用CCK-8实验、transwell实验和TUNEL实验检测VSMCs增殖、迁移和凋亡。通过生物信息分析预测miR-152-3p的下游靶点。MiR-152-3p和TGFB2之间的相互作用通过双荧光素酶实验、qRT-PCR和Western blot进行验证。结果:在动脉粥样硬化小鼠主动脉平滑肌细胞和受到ox-LDL处理的VSMCs中miR-152-3p表达水平显著下调,并表现出浓度和时间依赖特性。过表达miR-152-3p显著抑制了VSMCs的增殖和迁移,诱导了细胞凋亡。从机制上来看,miR-152-3p通过靶向作用于TGFB2发挥作用。结论:miR-152-3p通过靶向抑制TGFB2抑制VSMCs的异常增殖和迁移。

MiR-152-3p靶向调控KLF4促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨微小RNA-152-3p(miR-152-3p)在结肠癌(CC)中的表达情况及靶向Krüppel样因子4(KLF4)对CC细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过starBase及TCGA数据库分析预测miR-152-3p与KLF4之间的靶向关系,以及各自在正常组织和CC组织中的表达情况差异;双荧光素酶和RIP实验验证miR-152-3p与KLF4之间的靶向关系;RT-q PCR检测miR-152-3p与KLF4在CC细胞系中的mRNA表达量;Western blot实验检测KLF4在CC细胞系中的蛋白表达水平;MTT实验检测细胞的增殖能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell实验检测细胞的侵袭能力;细胞周期实验和凋亡实验检测细胞的周期分布情况和凋亡百分率。结果:miR-152-3p在CC组织和细胞系中高表达(P<0.001),而KLF4低表达(P<0.01),且miR-152-3p能够靶向下调KLF4的表达(P<0.01)。miR-152-3p过表达能增高CC细胞系的增殖、迁移和侵袭能力,降低细胞周期在G0/G1期的分布,并抑制其凋亡(P<0.05);KLF4过表达可以抑制miR-152-3p对CC细胞增殖、迁移和侵袭能力的促进作用(P<0.05),使G0/G1期细胞比例增加(P<0.05),并促进细胞凋亡(P<0.05)。结论:miR-152-3p通过靶向下调KLF4的表达促进CC细胞的增殖、迁移和侵袭。

血浆miR-152-3p作为肺癌诊治指标的临床价值

目的探讨血浆中miR-152-3p浓度相对水平在肺癌早期诊断中的应用价值。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测我院和广州医科大学呼吸疾病研究所收集的2014年5~10月55例Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者和53例健康人群血浆中miR-152-3p浓度相对水平,并对检测结果进行统计学分析,比较两组结果之间是否存在差异性,同时运用ROC曲线分析评价miR-152-3p对肺癌早期诊断的价值。结果肺癌患者血浆中miR-152-3p浓度相对水平为(4.71±2.18),健康组为(7.34±4.15),肺癌患者明显低于健康组,差异有统计学意义(t=4.223,P<0.05);血浆miR-152-3p浓度ROC曲线下面积(AUC)为0.689;当血浆中miR-152-3p浓度相对水平在最佳临界值5.6时,血浆miR-152-3p对肺癌诊断的特异性为67.3%,敏感性为62.3%;不同年龄、性别、吸烟和不吸烟、I期和II期肺癌患者血浆中miR-152-3p浓度相对水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论肺癌患者血浆中miR-152-3p浓度相对水平明显低于健康人群,但对肺癌早期诊断的准确性较低,需结合其他生物标记物联合检测。

MiR-152-3p靶向PIK3CA基因对乳腺癌细胞生物学特性的调控及其机制

目的探讨miR-152-3p靶向PIK3CA基因对乳腺癌细胞生物学特性的调控及机制。方法选取2016年1月至2017年7月宣城市中心医院保存的乳腺癌组织和相应的正常乳腺组织(距肿瘤边缘>5 cm)标本各50例,培养乳腺癌MCF-7细胞和正常乳腺上皮细胞MCF-10A,采用反转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织、正常乳腺组织、MCF-7细胞及MCF-10A细胞中miR-152-3p及PIK3CA mRNA表达。培养MCF-7细胞,待细胞融合度达30%~50%时将细胞分为空白组、阴性对照组、miR-152-3p mimic组、miR-152-3p inhibitor组、si-PIK3CA组和miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组,空白组细胞不转染任何序列,阴性对照组细胞转染miR-152-3p阴性对照质粒,miR-152-3p mimic组细胞转染miR-152-3p mimic质粒,miR-152-3p inhibitor组细胞转染miR-152-3p inhibitor质粒,si-PIK3CA组细胞转染si-PIK3CA质粒,miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组细胞共转染miR-152-3p inhibitor质粒和si-PIK3CA,转然后继续培养24~48 h;采用Western blot法检测各组MCF-7细胞中PIK3CA、细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38和E-cadherin蛋白表达,四甲基偶氮唑盐法检测各组MCF-7细胞增殖活性,划痕实验检测各组MCF-7细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测各组MCF-7细胞侵袭能力。结果乳腺癌组织中miR-152-3p相对表达量显著低于正常乳腺组织,PIK3CA mRNA相对表达量显著高于正常乳腺组织(P<0.05)。MCF-7细胞中miR-152-3p相对表达量显著低于MCF-10A细胞,PIK3CA mRNA相对表达量显著高于MCF-10A细胞(P<0.05)。与空白组和阴性对照组比较,miR-152-3p mimic组和si-PIK3CA组MCF-7细胞中PIK3CA、p38、ERK、JNK和E-cadherin蛋白相对表达量显著降低,miR-152-3p inhibitor组MCF-7细胞中PIK3CA、p38、ERK、JNK和E-cadherin蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组与空白组和阴性对照组MCF-7细胞中PIK3CA、p38、ERK、JNK和E-cadherin蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。细胞增殖能力实验结果显示,48、72、96 h时,miR-152-3p mimic组和si-PIK3CA组MCF-7细胞增殖能力显著低于空白组和阴性对照组,miR-152-3p inhibitor组MCF-7细胞增殖能力显著高于空白组和阴性对照组(P<0.05);48、72、96 h时,miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组与空白组和阴性对照组MCF-7细胞增殖能力比较差异均无统计学意义(P>0.05)。划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,空白组与阴性对照组MCF-7细胞迁移和侵袭能力比较差异无统计学意义(P>0.05);与空白组和阴性对照组比较,miR-152-3p mimic组和si-PIK3CA组MCF-7细胞迁移和侵袭能力显著降低,miR-152-3p inhibitor组MCF-7细胞迁移和侵袭能力显著增强(P<0.05);miR-152-3p inhibitor+si-PIK3CA组与空白组和阴性对照组MCF-7细胞迁移和侵袭能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-152-3p在乳腺癌组织中低表达,miR-152-3p可能参与了乳腺癌的发生与发展,miR-152-3p可能通过抑制PIK3CA表达而抑制MAPK信号通路的激活,进而抑制乳腺癌细胞的生长、增殖及侵袭转移。

miRNA152-3p在前列腺癌的变化及其意义

目的:观察miRNA152-3p在前列腺癌患者血清中的水平变化,并探讨其意义。方法:选择前列腺癌患者30例(PCa组)、前列腺增生患者30例(BPH组)。采取各组血清,采用实时荧光定量免疫技术检测血清水平,分析水平与前列腺癌临床病理特征的关系。结果:miRna-152-3p在血清中高表达与患者年龄无统计学意义(P> 0. 05),与临床分级、Gleason评分、有无骨转移、血清t PSA水平(P <0. 01)具有统计学意义。结论:miRna-152-3p与前列腺癌组织的浸润、转移及预后有关,可作为疾病诊断、预后因子及相关靶向药物抑制转移因子。

异甘草素通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移的机制研究

目的 肺鳞癌(Lung squamous cell carcinoma,LUSC)是全世界范围内高频率发生的恶性肿瘤。最近的研究表明,异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)在肿瘤增殖和转移中发挥抗肿瘤活性。因此,研究旨在探讨ISL在抗LUSC转移中的作用机制。方法 利用梯度浓度ISL处理LUSC细胞,探究ISL在LUSC细胞增殖、迁移和侵袭中的抗癌特性。随后,利用生物信息学手段探寻了长链非编码RNA(Long non-coding RNAs, lncRNA)MIR22HG/miR-24-3p/Fas配体基因(Fas ligand Gene,FASLG)之间可能的互作关系。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测LUSC细胞中lncRNA MIR22HG、miR-24-3p、FASLG的表达,细胞计数盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、克隆形成、划痕愈合和Transwell实验分别检测细胞活力、增殖、迁移和侵袭。蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)检测上皮间充质转换(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)和转移相关蛋白的表达。RNA免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RIP)实验和双萤光素酶实验验证lncRNA MIR22HG与miR-24-3p、miR-24-3p与FASLG的结合关系。结果 ISL可以显著抑制LUSC细胞增殖、迁移和侵袭。生信分析及临床样本分析发现lncRNA MIR22HG在LUSC中低表达,ISL可以促进lncRNA MIR22HG的表达,抑制LUSC细胞的恶性行为。此外,lncRNA MIR22HG可以海绵吸附miR-24-3p进而调节FASLG的表达。miR-24-3p在LUSC中上调表达,FASLG在LUSC中下调表达。过表达FASLG可以逆转miR-24-3p过表达对LUSC增殖、转移以及EMT进程的促进作用。结论 这些结果表明,ISL通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移,表明ISL有潜力作为治疗LUSC的新型药物。

lncRNA MIR4435-2HG靶向miR-376a-3p调控胆管癌细胞生物学行为的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MIR4435-2HG(MIR4435-2HG)对胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对微小RNA-376a-3p(miR-376a-3p)的调控作用。方法 qRT-PCR法检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic与人胆管癌细胞RBE中MIR4435-2HG、miR-376a-3p的表达。将si-NC、si-MIR4435-2HG、miR-NC、miR-376a-3p mimics、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-NC、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-376a-3p分别转染至RBE细胞,作为si-NC组、si-MIR4435-2HG组、miR-NC组、miR-376a-3p组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组;采用MTT法、Transwell小室法及流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证MIR4435-2HG与miR-376a-3p的靶向关系。Western blot检测相关蛋白表达。结果 RBE细胞中MIR4435-2HG表达量升高(P<0.05),miR-376a-3p表达量降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MIR4435-2HG组MIR4435-2HG表达、细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率升高(P<0.05)。MIR4435-2HG可靶向调控miR-376a-3p;与si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组比较,si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论 敲低MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-376a-3p进而抑制RBE细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导其凋亡。

长链非编码RNAMIR22HG和微RNA-9-3p在骨关节炎病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MIR22HG和微RNA-9-3p(miR-9-3p)在骨关节炎(OA)病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性。方法 选取2020年10月至2021年10月在南充市中医医院确诊为OA的病人120例,作为OA组,60例体检健康人群作为对照组;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平;Pearson法分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的相关性以及二者与视觉模拟(VAS)评分、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)以及西安大略和麦马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC)评分的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p对OA的诊断价值。结果 OA组的血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著高于对照组(1.48±0.25比1.01±0.22),miR-9-3p的表达水平显著低于对照组(0.72±0.13比1.05±0.12)(P<0.05);相关性分析显示,lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平呈负相关关系(P<0.05);KLⅣ级血清lncRNA MIR22HG的表达水平、VAS评分、WOMAC评分显著高于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著高于KLⅡ级(P<0.05),KLⅣ级血清miR-9-3p的表达水平、HSS评分显著低于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著低于KLⅡ级(P<0.05);OA病人lncRNA MIR22HG的表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈正相关,与HSS评分呈负相关(P<0.05);miR-9-3p表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈负相关,与HSS评分呈正相关(P<0.05);二者联合诊断的AUC高于lncRNA MIR22HG、miR-9-3p单独诊断的AUC值(Z=2.22,P=0.012;Z=1.43,P=0.025)。结论OA病人血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著升高,miR-9-3p表达水平显著降低,二者与OA病情严重程度密切相关,且对OA具有一定的诊断价值。

miR-152-3p调控硫氧还蛋白结合蛋白表达对过氧化氢诱导的内皮祖细胞凋亡的影响

[目的]探讨miR-152-3p靶向硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的内皮祖细胞(EPC)凋亡的影响。[方法]从健康人外周血分离与鉴定EPC,建立H_(2)O_(2)诱导的EPC损伤模型(500μmol/L H_(2)O_(2)处理8 h),RT-qPCR检测EPC中miR-152-3p表达;EPC中过表达miR-152-3p或抑制TXNIP表达或同时过表达miR-152-3p和TXNIP,再使用500μmol/L H_(2)O_(2)处理8 h,分别检测miR-152-3p表达水平、细胞凋亡率及TXNIP、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-152-3p与TXNIP的关系。[结果]从健康人外周血成功分离EPC,miR-152-3p在H_(2)O_(2)诱导的EPC中表达减少65.0%(P<0.001);与对照组相比,模型组EPC凋亡率及Bax、Caspase-3蛋白表达水平增加895.1%、352.0%、290.3%,Bcl-2蛋白表达水平降低79.4%(均P<0.001);与miR-NC组相比,miR-152-3p mimic组EPC凋亡率及Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低55.7%、60.9%、56.8%(P<0.001),Bcl-2蛋白表达水平增加389.5%(均P<0.001);与si-NC组相比,si-TXNIP组EPC凋亡率及TXNIP、Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低40.2%、57.5%、59.8%、55.4%(均P<0.001),Bcl-2蛋白表达水平增加313.0%(P<0.001);与miR-152-3p mimic+pcDNA组相比,miR-152-3p mimic+TXNIP组EPC凋亡率及TXNIP、Bax、Caspase-3蛋白表达水平增加86.8%、184.8%、137.7%、109.2%(P<0.001),Bcl-2蛋白表达水平降低69.1%(P<0.001);双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-152-3p可靶向负调控TXNIP表达。[结论]miR-152-3p在H_(2)O_(2)诱导的EPC中低表达,过表达miR-152-3p可通过靶向抑制TXNIP表达抑制H_(2)O_(2)诱导的EPC凋亡。

不同肝病患者外周血血管内皮生长因子、乏氧诱导因子α、脂蛋白α及miR-152-3p表达及临床意义

目的:探讨不同肝病患者血清血管内皮生长因子(VEGF)、乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、脂蛋白α(Lp-α)及血浆miR-152-3p表达及临床意义。方法:对2015年2月~2017年10月来深圳龙岗区慢性病防治院和中医院就诊并确诊慢性乙型肝炎(CHB)216例、肝硬化(LCI)59例、肝癌(LCA)25例患者及健康人群(HCO)120例,采用免疫增强比浊法测定血清Lp-α浓度、酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清HIF-lα和VEGF水平及实时荧光定量PCR检测血浆miR-152-3p表达。结果:LCA组患者血清中VEGF、HIF-1α和Lp-α浓度明显高于CHB、LCI和HCO组,差异均有统计学意义(t=7.015~17.032,P<0.01或0.05);miR-152-3p浓度相对水平明显低于其他组,差异亦有统计学意义(t=4.825~6.106,P<0.05)。CHB、LCI和HCO组患者VEGF和HIF-1α及miR-152-3p水平在3组之间比较差异无统计学意义(t=0.417~0.925,P>0.05)。LCI组患者Lp-α浓度明显低于CHB和HCO组,差异均有统计学意义(t=5.205~7.163,P<0.05);且child分级C级患者明显低于A级和B级,差异均有统计学意义(t=3.945~5.607,P<0.05)。Ⅲ期LCA患者VEGF,HIF-1α和Lp-α浓度明显高于Ⅰ期和Ⅱ期患者,差异有统计学意义(t=5.895~7.826,P<0.05),而Ⅲ期LCA患者miR-152-3p浓度明显低于Ⅰ期和Ⅱ期患者,差异有统计学意义(t=3.214~4.517,P<0.05)。结论:LCA患者血清VEGF,HIF-1α和Lp-α浓度明显增高,且随LCA分期增加而增加,而miR-152-3p水平明显降低,且随分期增加而降低,可用于LCA患者临床诊断和分期诊断;LCI患者血清中Lp-α浓度明显降低,可用于LCI诊断及与LCA鉴别诊断。

LncRNA CRNDE调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法将人肺泡上皮细胞A549分为CK组、LPS组、LPS+si⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE组、LPS+si⁃CRNDE+inhibitor NC组、LPS+si⁃CRNDE+miR⁃338⁃3p inhibitor组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃KLF6组;qRT⁃PCR检测各组细胞CRNDE、miR⁃338⁃3p和KLF6表达水平;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA试剂盒检测TNF⁃α、IL⁃10和IL⁃1β水平;商品化试剂盒分析MDA、GSH⁃Px、SOD水平;Western blot检测细胞中KLF6、Cleaved⁃caspase⁃3、Bax、Bcl⁃2蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃338⁃3p与RNDE和KLF6的关系。结果与CK组相比,LPS组和LPS+si⁃NC组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著升高,miR⁃338⁃3p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著降低(P<0.05);与LPS+si⁃NC组相比,LPS+si⁃CRNDE组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著降低,miR⁃150⁃5p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著升高(P<0.05);干扰miR⁃338⁃3p表达或过表达KLF6均可降低下调CRNDE表达改善LPS诱导A549细胞损伤的作用(P<0.05)。结论下调CRNDE可调控miR⁃338⁃3p/KLF6轴减轻LPS诱导的A549细胞损伤。

miR-152-3p靶蛋白差异表达及调控机制在肝癌复发中的作用

目的比较肝癌复发与预后良好患者癌组织的蛋白表达,分析miR-152-3p相关的靶蛋白差异及调控机制,探讨miR-152-3p在肝癌复发中的作用。方法应用TMT标记全蛋白质组学测序方法和RT-PCR分别检测肝癌切除术后2年复发(n=6)与5年预后良好(n=6)患者肝癌组织的蛋白质表达和miR-152-3p的表达水平;联合六大数据库检索分析miR-152-3p靶基因,并运用Gene Ontology、DAVID和REACTOME数据库进行靶基因筛选、富集注释和信号转导通路富集分析;将筛选的miR-152-3p靶基因进行基因突变频率和生存曲线分析,验证miR-152-3p靶基因在肝癌复发中的作用。计量资料2组间比较采用独立样本t检验。肝脏组织有关基因生存率分析采用Kaplan-Meier分析。结果肝癌切除术后预后良好患者癌组织的miR-152-3p转录表达水平显著高于复发患者癌组织的水平(P<0.05)。蛋白测序结果显示,预后良好患者与复发患者的癌组织存在365个差异表达蛋白,联合肝癌复发数据库分析显示,其中有17个蛋白受miR-152-3p调控。进一步的信号通路分析发现,17个受miR-152-3p调控的靶基因其功能集中于线粒体核糖体翻译调控;多重富集发现靶基因与线粒体呼吸链复合体密切关系的蛋白6个,分别为AKAP1、FOXRED1、MRPL28、MRPL50、SHC1、STAU1。基因突变频率及生存曲线分析发现,线粒体呼吸链相关靶蛋白的功能缺失或减弱会严重影响患者的生存率。结论miR-152-3p在HCC切除术后预后良好和复发患者的癌组织表达差异显著,miR-152-3p在肝癌复发中作用机制可能是通过调控靶基因AKAP1、FOXRED1、MRPL28、MRPL50、SHC1、STAU1作用于线粒体呼吸链,影响细胞氧化呼吸功能导致肝癌复发。