血清miR⁃152、miR⁃153和miR⁃203在宫颈上皮内病变中的表达及临床意义

目的探究血清miR⁃152、miR⁃153和miR⁃203在宫颈上皮内病变中的表达及临床意义。方法选取2019年12月至2020年12月安庆市立医院收治的宫颈上皮内病变患者80例(CIN组),根据宫颈上皮内病变级别分为低度鳞状上皮内病变(LSIL)组(n=48)和高度鳞状上皮内病变(HSIL)组(n=32)。另选取宫颈筛查正常、因子宫肌瘤入院患者50例作为对照组,比较CIN组和对照组临床资料、miR⁃152、miR⁃153和miR⁃203水平,采用多因素分析miR⁃152、miR⁃153和miR⁃203与宫颈上皮内病变的关系,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR⁃152、miR⁃153和miR⁃203对宫颈上皮内病变的诊断价值。结果CIN组和对照组年龄、BMI、吸烟史、CEA、CA199、CA125比较,差异无统计学意义(P>0.05);CIN组血清miR⁃152、miR⁃153和miR⁃203水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,miR⁃152(OR=0.271)、miR⁃153(OR=0.201)和miR⁃203(OR=0.164)是宫颈上皮内病变的影响因素(P<0.05)。miR⁃152、miR⁃153和miR⁃203诊断宫颈上皮内病变的ROC曲线下面积分别为0.825、0.755和0.792,miR⁃152、miR⁃153和miR⁃203的特异性/敏感性分别为80.55%/78.65%、72.12%/71.90%和76.93%/78.13%。LSIL组患者血清miR⁃152、miR⁃153和miR⁃203水平显著高于HSIL组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清miR⁃152、miR⁃153和miR⁃203在宫颈上皮内病变患者中呈异常表达,三者或可作为诊断宫颈上皮内病变的指标。

基于miR-153/TREM1探讨健神利水方对脑出血大鼠神经细胞凋亡的作用机制

目的探究健神利水方对脑出血大鼠神经细胞凋亡的作用机制。方法通过miRNA微阵列芯片和RT-PCR分析出脑出血中miR-153的表达,观察并分析miR-153与脑出血神经细胞凋亡关系;预测miR-153的靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验观察其与靶基因的结合情况,观察过表达和抑制miR-153对靶基因的影响,随后,明确靶基因与脑出血神经细胞凋亡关系,最后观察健神利水方对miR-153、靶基因的影响,最终探究健神利水方对脑出血大鼠神经细胞凋亡的相关机制。结果微阵列芯片和RT-PCR检测表明miR-153在脑出血中是低表达的(P<0.05),miR-153与神经细胞凋亡呈负相关(R:-0.875,P=0.0002)。在线数据库TargetScan和miRDB显示miR-153与TREM1具有结合区域,双荧光素酶报告基因实验证明两者具有结合关系,当miR-153过表达时,TREM1表达量会下调,相反,当miR-153抑制时,TREM1表达量会上调,TREM1与神经细胞凋亡呈正相关(R:0.857,P<0.001)。健神利水方组的TREM1表达量、神经细胞凋亡数量、神经功能缺损评分均低于模型组(P<0.05),miR-153表达量高于模型组(P<0.05)。健神利水方+miR-153抑制组的TREM1表达量、神经细胞凋亡数量、神经功能缺损评分均高于健神利水方组(P<0.05)。结论健神利水方通过促进miR-153表达,抑制TREM1表达来达到抑制脑出血大鼠神经细胞凋亡,保护神经功能。

miRNA-153-5p通过靶向TFRC调控巨噬细胞极化在病毒性心肌炎中的作用

目的:探讨miRNA-153-5p调控巨噬细胞极化在病毒性心肌炎(VM)中的作用。方法:建立VM小鼠模型,提取心脏,RT-qPCR检测心肌组织miRNA-153-5p的表达,HE染色观察心脏炎症程度,ELISA检测小鼠血清肌钙蛋白cTnI的水平,流式细胞术检测心脏浸润巨噬细胞表型。体外分离BMDMs诱导为M1/M2型巨噬细胞,过表达和抑制miR-153-5p,RT-qPCR检测M1/M2标志物iNOS、IL-12、TNF-α、Arg1、YM-1、FIZZ1的表达。生物信息学软件预测结合双荧光素酶实验验证miR-153-5p与转铁蛋白受体(TFRC)的靶向关系。结果:miR-153-5p在CVB3感染7 d的VM小鼠心脏组织中表达明显增加(P<0.05)。体内实验中抑制miR-153-5p表达能减轻VM小鼠心脏的病变程度,改善心脏功能(P<0.01)。抑制miR-153-5p表达能够促进小鼠心脏浸润的巨噬细胞向M2极化(P<0.01)。体外实验中,较之M2,miR-153-5p在M1巨噬细胞中表达升高(P<0.01)。过表达miR-153-5p促进巨噬细胞向M1极化,抑制miR-153-5p表达则促进巨噬细胞向M2极化(P<0.01)。TFRC是miR-153-5p的靶基因,抑制miR-153-5p表达可上调TFRC的mRNA和蛋白水平(P<0.01)。结论:miRNA-153-5p通过靶向TFRC调控VM小鼠心脏浸润巨噬细胞的极化。

miR-153-3p靶向调控CHI3L1对LPS所致人牙周膜干细胞炎症反应的影响

目的:探索miR-153-3p是否能通过靶向调控几丁质酶3样蛋白1(CHI3L1)改善脂多糖(LPS)所致人牙周膜干细胞(hPDLSCs)炎症反应。方法:分离培养hPDLSCs,采用LPS处理建立炎症细胞模型,并进行miR-NC、miR-153-3p mimics、si-NC、si-CHI3L1以及miR-153-3p mimics+pc-NC、miR-153-3p mimics+pcDNA-CHI3L1转染。转染48h后qRT-PCR法检测各组细胞中miR-153-3p、CHI3L1 mRNA表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot法检测细胞中CHI3L1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-153-3p与CHI3L1的靶向关系。结果:LPS处理后hPDLSCs中miR-153-3p表达下调(P<0.05),CHI3L1 mRNA与蛋白表达均显著上调(P<0.05);过表达miR-153-3p或抑制CHI3L1表达可降低LPS诱导的hPDLSCs中IL-6、IL-1β、TNF-α水平,下调CHI3L1 mRNA与蛋白表达,降低细胞凋亡率,差异均具有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-153-3p可靶向调控CHI3L1表达(P<0.05)。此外,过表达CHI3L1可显著逆转过表达miR-153-3p对LPS诱导的hPDLSCs凋亡与炎症反应的抑制作用(P<0.05)。结论:miR-153-3p可通过靶向调控CHI3L1表达减轻LPS所致hPDLSCs炎症反应,减少细胞凋亡。

子宫内膜癌患者血清和癌组织中LncRNA CRNDE、miR-153-5p表达及临床诊断价值

目的 探讨miR-153-5p、LncRNA CRNDE在子宫内膜癌(EC)患者血清和癌组织中的表达及对EC的诊断价值。方法 选取2019年12月至2021年12月手术治疗的115例EC患者为观察组,收集手术患者的癌组织及癌旁组织,同时选取100例体检健康者为对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清和癌组织中miR-153-5p、LncRNA CRNDE表达水平,分析血清中miR-153-5p、LncRNA CRNDE表达水平与患者临床病理参数的关系;受试者工作特征(ROC)曲线评价血清LncRNA CRNDE、miR-153-5p表达水平对EC发生的诊断价值。结果 与癌旁组织相比,LncRNA CRNDE在癌组织中的表达水平升高,miR-153-5p表达水平降低,且二者呈负相关(r=-0.268,P<0.05);与对照组比较,LncRNA CRNDE在观察组患者血清中的表达水平升高,miR-153-5p表达水平降低,且二者呈负相关(r=-0.315,P<0.05)。EC患者血清中LncRNA CRNDE、miR-153-5p表达水平均与年龄、肿瘤直径、组织类型无关(P>0.05),均与肌层浸润深度、分化程度、淋巴结转移、FIGO分期有关(P<0.05);ROC曲线结果显示,血清miR-153-5p、LncRNA CRNDE表达水平诊断EC发生的曲线下面积分别为0.901(95%CI:0.855~0.936)、0.944(95%CI:0.906~0.970),对应的敏感度分别为90.43%、87.83%,特异度分别为76.52%、92.17%,LncRNA CRNDE、miR-153-5p联合诊断的曲线下面积为0.971(95%CI:0.940~0.988),敏感度为89.57%,特异度为98.26%。结论 EC患者癌组织及血清中miR-153-5p呈低表达,LncRNA CRNDE呈高表达,二者联合检测对EC的诊断效能较高,可以为临床早期诊断提供参考依据。

miR-153-5p靶向SNAI1介导结直肠癌细胞的放疗抵抗

目的 探讨miR-153-5p在结直肠癌放疗抵抗中的作用,并进一步研究其潜在分子机制。方法 首先对放疗敏感细胞系SW480及放疗抵抗结直肠癌细胞系SW480R中miR-153-5p表达水平进行RT-qPCR检测;然后利用转染技术构建过表达miR-153-5p的SW480R细胞株,检测过表达miR-153后SW480R在接受放射后其细胞活力、侵袭能力、集落形成能力、凋亡水平的改变;免疫组织化学染色观察放疗敏感及放疗抵抗结直肠癌组织中SNAI1的表达差异;TargetScan分析miR-153-5p潜在靶点并利用荧光素酶实验验证;检测过表达miR-153-5p及SNAI1后SW480R细胞侵袭能力、集落形成能力及凋亡水平。结果 与SW480组相比,SW480R组细胞中miR-153-5p表达降低;过表达miR-153-5p的SW480R细胞细胞活力、侵袭能力、集落形成能力均明显减弱,而凋亡水平显著增加;与放疗敏感结直肠癌组织相比,放疗抵抗结直肠癌组织中SNAI1显著增加;SNAI1可能为miR-153-5p的作用靶点;过表达miR-153-5p及SNAI1后SW480R细胞侵袭能力、集落形成能力显著增加,凋亡水平显著下降。结论 miR-153-5p通过靶向SNAI1参与调控结直肠癌细胞放疗抵抗。

lncRNA KTN1-AS1调节miR-153-3p/NFAT5轴对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA Kinectin 1反义RNA 1(lncRNA KTN1-AS1)调控miR-153-3p/活化T细胞核因子5(NFAT5)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测NSCLC组织、癌旁组织、人正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞系A549、HCC827、H1299中KTN1-AS1、miR-153-3p表达及NFAT5蛋白表达;将A549细胞分为Ct组、si-NC组、si-KTN1-AS1组、mimic NC组、miR-153-3p mimic组、miR-153-3p mimic+pcDNA组、miR-153-3p mimic+pcDNA-NFAT5组,qRT-PCR检测细胞中KTN1-AS1、miR-153-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;Western blot检测NFAT5、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶验证KTN1-AS1与miR-153-3p、miR-153-3p与NFAT5的关系。结果在NSCLC组织和细胞中,KTN1-AS1、NFAT5蛋白高表达,miR-153-3p低表达,且在A549细胞中KTN1-AS1、NFAT5蛋白表达最高,miR-153-3p表达最低(P<0.05),因此,选择A549细胞为研究对象;与si-NC组比较,si-KTN1-AS1组KTN1-AS1、NFAT5蛋白表达降低,miR-153-3p表达升高(P<0.05);与mimic NC组比较,miR-153-3p mimic组KTN1-AS1表达量变化差异不显著(P>0.05),NFAT5蛋白表达降低,miR-153-3p表达升高(P<0.05);与miR-153-3p mimic组、miR-153-3p mimic+pcDNA组比较,miR-153-3p mimic+pcDNA-NFAT5组KTN1-AS1、miR-153-3p表达量变化差异不显著(P>0.05),NFAT5蛋白表达升高(P<0.05);下调KTN1-AS1或上调miR-153-3p均可抑制A549细胞增殖、迁移、侵袭及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达;过表达NFAT5减弱了上调miR-153-3p对A549细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用;KTN1-AS1靶向调控miR-153-3p/NFAT5轴。结论沉默KTN1-AS1可能通过上调miR-153-3p来抑制NFAT5表达,进而抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-153-3p靶向KLF7基因调控IL-6/STAT3通路抑制食管癌细胞的增殖和转移的机制研究

目的探讨miR-153-3p对食管癌细胞增殖和转移的影响及其作用机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-153-3p和Kruppel样因子7(KLF7)mRNA表达水平;蛋白质印迹(Western Blot)法检测KLF7、磷酸化信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)的表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;ELISA检测白细胞介素(IL-6)的表达;双荧光素酶报告基因检测KLF7和miR-153-3p的靶向。结果与正常食管上皮细胞HEEC相比,食管癌细胞EC9706、Eca-109、EC-1、TE-1中KLF7表达水平升高,miR-153-3p表达水平下降。过表达miR-153-3p和沉默KLF7可降低细胞活性和迁移、侵袭数量,降低p-STAT3表达水平,抑制IL-6的分泌。miR-153-3p靶向KLF7,上调KLF7能部分恢复miR-153-3p对EC9706细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论上调miR-153-3p可以靶向KLF7参与调节IL-6/STAT3通路抑制食管癌细胞增殖和转移。

miR-153-3p靶向结合BCL2基因调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的实验研究

目的探讨miR-153-3p调控鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的作用。方法利用生物信息学软件对miR-153-3p的候选靶基因进行预测。实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测miR-153-3p对细胞内mRNA和蛋白表达的影响。用密理博MUSETM细胞检测仪对细胞周期和细胞凋亡情况进行检测。用CCK8法和克隆技术形成实验检测细胞增殖能力。结果生物信息学预测结果显示,miR-153-3p与BCL2分子之间存在一个高可信度的结合区。miR-153-3p mimic能上调miR-153-3p的表达,降低BCL2蛋白的表达。与对照组相比,过表达miR-153-3p的6-10B细胞的凋亡明显增加,增殖能力受到显著抑制。结论miR-153-3p通过下调BCL2的表达,能够促进鼻咽癌细胞凋亡,抑制其增殖。

miR-153-3p对于腰退行性病变调节机制的初步探讨

目的 初步探讨H_(2)O_(2)对于腰椎髓核细胞的影响及miR-153-3p对于腰退行性病变的调节机制。腰椎间盘退变(Lumbar disc degeneration,LDD)是导致下腰痛的主要因素。髓核(nucleus pulposus,NP)细胞异常增殖或过度凋亡是LDD中最明显的细胞和生化变化之一。方法 分别采用CCK8检测对照组及H_(2)O_(2)组细胞活力,流式检测两组细胞活性氧及线粒体膜电位,另采用qPCR检测上述两组的基质金属蛋白酶3(MMP3)、Nrf2、miR-153-3p、Ⅱ型胶原(COL-Ⅱ)表达含量。结果 经H_(2)O_(2)处理的腰椎髓核细胞活力下降、线粒体膜电位下降比例较对照组减少;qPCR检测对照组、H_(2)O_(2)组的miR-153-3p、COL-Ⅱ、MMP3、Nrf2表达含量,结果提示对照组、H_(2)O_(2)组Nrf2表达量差异无统计学意义(P> 0.05),H_(2)O_(2)组的miR-153-3p、MMP3表达量较对照组减少,而其COL-Ⅱ表达量较对照组降低且差异有统计学意义(P <0.05)。Westernblot检测对照组、inhibitor-NC组及nhibitor组的Nrf2表达含量,inhibitor组胞质及胞核中的Nrf2表达量升高,分别与对照组、inhibitor-NC组相比,有统计学差异(P <0.05);inhibitor-NC组胞质及胞核中的Nrf2表达量与对照组相比,差异无统计学意义。结论 抑制miR-153-3p表达,可上调腰椎髓核细胞Nrf2表达水平,提示miR-153-3p参与存进LDD进程的过程可能与其调控Nrf2表达、调节线粒体自噬过程有关。

miR-153-3p靶向下调Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)基因抑制乳腺癌细胞增殖及迁移

目的探究miR-153-3p调节乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭的分子机制。方法利用生物信息学软件检索预测miR-153-3p的候选靶基因;采用双荧光素酶报告实验分析miR-153-3p与候选基因的靶向关系;应用实时荧光定量PCR和Western blot法检测miR-153-3p对MDA-MB-231细胞mRNA和蛋白质表达水平的影响;通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,并以TranswellTM检测细胞的迁移和侵袭能力。结果软件预测显示miR-153-3p与Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)有连续的结合区域;共转染miR-153-3p模拟物(miR-153-3p mimics)与ROCK1野生型报告载体的细胞相对荧光素酶活性降低;转染hsa-miR-153-3p-mimics后,MDA-MB-231细胞的miR-153-3p表达水平显著增高,且ROCK1蛋白的表达量明显降低。与对照组相比,转染组MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力均减弱。结论miR-153-3p通过靶向下调ROCK1的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-153干预对骨肉瘤细胞MG-63侵袭能力的影响

目的:探讨不同miR-153干预对骨肉瘤细胞系MG-63侵袭能力的影响。方法:培养骨肉瘤细胞MG-63并随机分为miR-153过表达组、miR-153沉默表达组及阴性对照组,依次分别转染miR-153 mimic、miR-153 inhibitor及空白对照质粒;Real-time PCR检测转染后细胞中miR-153表达以确定细胞模型构建成功;Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中侵袭相关蛋白ROCK1和ROCK2的表达;Transwell侵袭实验检测转染后细胞侵袭能力的变化;理论预测miR-153与ROCK1/ROCK2的靶向结合作用。结果:相比于阴性对照组,miR-153过表达组、miR-153沉默表达组MG-63细胞内miR-153表达水平分别上调和下调,细胞模型构建成功;Real-time PCR和Western blot结果显示,相比于阴性对照组,miR-153过表达组、miR-153沉默表达组MG-63细胞内侵袭相关蛋白ROCK1和ROCK2的mRNA表达变化不明显而蛋白表达水平分别降低和增高;Transwell侵袭实验结果显示上调及沉默miR-153后,MG-63细胞侵袭能力分别下降和增强;Targetscan生物学软件理论预测miR-153与ROCK1/ROCK2同时存在结合位点。结论:不同miR-153干预可明显影响骨肉瘤细胞MG-63的侵袭能力,而这种影响可能通过miR-153-ROCK1/ROCK2途径实现。

下调miR-153促进高糖诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化

目的:探讨miR-153调控高糖诱导肾小管上皮细胞(HK2)-间充质转化(EMT)的机制,为研究糖尿病肾病(DN)间质纤维化机制提供新思路。方法:采用生物信息学方法预测调控Snail的候选miRNAs;在db/db小鼠肾组织中验证所有候选miRNAs的表达并分别与Snail做pearson相关性分析,筛选出与Snail负相关最显著的miRNA;以高糖诱导的HK2细胞为载体,转染该miRNA mimics 72 h后,采用real-time PCR、western blot方法,观察该miRNAs、Snail以及E-cadherin的表达改变。结果:调控Snail的候选miRNAs共7个,分别是:miR-153、miR-30e、miR-30d、miR-30b、miR-384-5p、miR-30a、miR-30c;与db/m相比,miR-153、miR-30d及miR-30e在db/db小鼠肾皮质中表达显著下调(P<0.05),其中miR-153与Snail表达水平负相关最显著(r=-0.501 56);高糖诱导HK2细胞下调miR-153,肾小管上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达减少;过表达miR-153抑制HK2细胞表达Snail,而E-cadherin水平增加。结论:MiR-153可能通过靶基因Snail参与调控高糖诱导的HK2细胞EMT。

miR-153-3p通过靶向FZD3调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭与迁移

目的:探讨miR-153-3p对胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其机制。方法:收集2018年5月至2020年6月宁夏医科大学总医院收治的60例胃癌患者的癌和配对癌旁组织标本,以及人胃癌细胞系NCI-N87、AGS、SNU-5、SGC7901和胃上皮细胞GES-1,qPCR法检测miR-153-3p在胃癌组织与细胞中的表达水平。将miR-153-3p mimic及mimic对照序列转染至SGC7901细胞,用CCK-8、克隆形成、流式细胞术、TUNEL、Transwell和划痕愈合实验分别检测上调miR-153-3p对SGC7901细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。构建裸鼠SGC7901细胞移植瘤模型,观察miR-153-3p对肿瘤生长的影响。通过生物信息学数据库和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-153-3p与FZD3靶向关系,WB法检测miR-153-3p对FZD3蛋白及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达的影响。结果:miR-153-3p在胃癌组织和细胞中表达水平分别显著低于癌旁组织和GES-1细胞(均P<0.01),以SGC7901细胞中表达水平最低。上调miR-153-3p显著抑制SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并提高细胞凋亡率(均P<0.01),同时上调细胞中E-cadherin表达而下调N-cadherin、MMP2和MMP9表达(均P<0.01)。在体内实验表明,静脉注射miR-153-3p mimic显著降低移植瘤体积和瘤组织中Ki-67表达而上调P57表达(均P<0.01)。机制分析表明,miR-153-3p靶向结合FZD3基因的3′UTR区域,上调miR-153-3p会抑制FZD3表达并上调β-catenin、TCF-4和cyclin D1水平(均P<0.01)。结论:miR-153-3p靶向FZD3并通过Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌SGC7901细胞的增殖、侵袭和迁移。

miR-153下调FOXR2、CDK8和CDK13的表达抑制胶质母细胞瘤细胞增殖

目的探讨miR-153对胶质母细胞瘤细胞增殖的影响。方法体外培养胶质母细胞瘤细胞系U87、U251、SHG-44和T98G细胞,分别转染miR-153质粒(miR-153组)、空载质粒(载体组)和miR-153突变质粒(miR-153突变组),另设置空白对照组(不转染任何质粒)。RT-PCR检测miR-153、FOXR2、CDK8和CDK13的表达,MTT法检测细胞增殖能力。结果miR-153组U87、U251、SHG-44和T98G细胞miR-153表达水平较载体组和空白对照组显著上升(P<0.05),细胞增殖水平较载体组和空白对照组均显著降低(P<0.05)。miR-153组U87、U251、SHG-44和T98G细胞FXOR2、CDK8和CDK13的mRNA水平较miR-153突变组、载体组和空白对照组均显著下降(P<0.05),而后三组之间均无统计学差异(P>0.05)。结论miR-153抑制胶质母细胞瘤细胞增殖,其机制可能与抑制FXOR2、CDK8和CDK13表达有关。

miR-153靶向调控GALNT7对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-153(microRNA-153)靶向调控GALNT7对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法通过双荧光素酶试验证明GALNT7为miR-153的下游靶基因,在宫颈癌细胞系(Hela、C-33A)中转染miR-NC和miR-153,并设立空白对照组,采用实时荧光定量PCR法检测GALNT7 mRNA的表达量、Western blotting实验检测GALNT7蛋白的表达量。然后通过CCK8、划痕和Transwell小室法检测宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果 miR-153靶向调控GALNT7的3'-UTR,降低了荧光素酶的表达活性。miR-153组GALNT7 mRNA和蛋白表达水平明显低于miR NC组(P<0.05),且与miR NC组相比,miR-153组细胞的增殖、迁移、侵袭能力均降低(P<0.05)。结论 miR-153可能通过靶向抑制GALNT7的表达而抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

miR-153靶向ZEB2抑制胶质母细胞瘤侵袭与转移

目的:探究miR-153对人胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)侵袭转移的影响及相关作用机制。方法:利用qRT-PCR检测miR-153在GBM中的表达;将miR-153转染至胶质瘤U251细胞后,应用qRT-PCR验证转染效率;应用Western blot、Transwell及划痕实验检测U251细胞的上皮间质转化、细胞侵袭及转移能力的变化;应用qRT-PCR及Western blot检测ZEB2的mRNA和蛋白表达;利用质粒转染技术过表达miR-153后,同时过表达ZEB2,再应用Transwell及划痕实验检测U251细胞的侵袭及转移能力的变化。结果:与对照相比,miR-153在GBM中低表达;过表达miR-153显著抑制胶质瘤U251细胞的上皮间质转化、细胞侵袭及转移,并能够抑制U251细胞中ZEB2的蛋白表达;ZEB2过表达有效阻断了miR-153抑制U251细胞侵袭及转移的作用。结论:miR-153能够靶向下调ZEB2,进而抑制胶质瘤U251细胞上皮间质转化及细胞侵袭转移。

MiRNA-153调控SNAI1在特发性肺间质纤维化中的抗纤维化作用

目的探究miR-153与SNAI1在特发性肺纤维化中的靶向关系及作用。方法选取在我院治疗的22名特发性肺纤维化患者,并根据患者信息(性别、年龄)招募22名健康志愿者,采用qRT-PCR检测血清中miR-153以及SNAI1表达水平。向MCR细胞中转染miR-153 mimics,inhibitors,pc-DNA3.1-SNAI1,miR-153 mimics+pc-DNA-3.1-SNAI1以及相应阴性对照序列,分别作为mimics组、inhibitors组、pc-DNA3.1-SNAI1组、mimics+pc-DNA-3.1-SNAI1组以及NC组。采用qRT-PCR和蛋白免疫印记法检测细胞中α-SMA,Vimentin,CollagenⅠ以及Fibronectin和SNAI1 mRNA和蛋白表达水平。结果相对于健康志愿者,miR-153在患者体内显著低表达(t=4.891,P<0.01),而SNAI1显著高表达(t=5.791,P<0.01)。相对于NC组,mimics组中α-SMA,Vimentin,CollagenⅠ以及Fibronectin和SNAI等蛋白显著低表达(F=32.06,P<0.01),而在inhibitors组中,上述四种蛋白高表达(F=24.11,P<0.01)。转染pc-DNA3.1-SNAI1后,四种标志蛋白高表达,但被共转染miR-153 mimics所抑制。结论 miR-153靶向抑制SNAI1表达,并具有抗纤维化作用。

真核基因组编码大量长链非编码RNA癌易感性候选基因15在肺癌细胞中表达上调且通过miR-153-3p激活Wnt/β-catenin通路调控A549细胞增殖、侵袭及化疗敏感性实验研究

目的:探讨真核基因组编码大量长链非编码RNA癌易感性候选基因15(lncRNA CASC15)调控肺癌A549细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的作用机制。方法:实时荧光定量PCR实验分析lncRNA CASC15、miR-153-3p在65例肺癌组织、50例癌旁组织、肺癌A549细胞和正常肺上皮BEAS-2B细胞中的差异表达。选取A549细胞进行培养,并将siRNA CASC15转染A549细胞,分析下调CASC15对A549细胞增殖和侵袭的影响,用不同浓度顺铂(0、2、4、8、16μg/ml)处理A549细胞后,检测细胞活力和凋亡率。miRcode预测lncRNA CASC15的潜在结合靶点,双荧光素酶报告基因实验进一步分析与miR-153-3p之间的相关性。下调miR-153-3p或同时上调lncRNA CASC15和miR-153-3p表达,分析A549细胞增殖、侵袭和化疗敏感性情况。过表达或下调miR-153-3p,检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达。XAV939作用细胞后进一步检测miR-153-3p对A549细胞的增殖、侵袭和化疗敏感性的影响。结果:与癌旁正常组织或BEAS-2B细胞相比,肺癌组织或A549细胞中lncRNA CASC15表达上调(均P<0.01),miR-153-3p表达下调(均P<0.01)。与siRNA NC组相比,CASC15 siRNA组A549细胞活力和侵袭能力明显降低,增强了细胞对顺铂的化疗敏感性;lncRNA CASC15靶向miR-153-3p;miR-153-3p inhibitor转染A549细胞对癌细胞增殖和侵袭能力具有显著促进作用,下调了细胞对顺铂的化疗敏感性;上调lncRNA CASC15与miR-153-3p表达,显著上调了A549细胞的活力和侵袭能力。下调miR-153-3p激活了A549细胞内Wnt/β-catenin通路,XAV939作用细胞后影响了A549细胞增殖、侵袭及其化疗敏感性。结论:lncRNA CASC15在肺癌A549细胞中表达上调且通过miR-153-3p激活Wnt/β-catenin通路调控A549细胞增殖、侵袭及化疗敏感性。

miR-153靶向抑制活化蛋白C(APC)加重脂多糖诱导的脓毒症大鼠肺损伤及机制

目的探讨miR-153靶向活化蛋白C(APC)调控脂多糖(LPS)诱导的大鼠脓毒症肺损伤的机制。方法雌性SD大鼠分为对照组、LPS组、LPS联合miR-153抑制物(miR-153 inhibitor)组、LPS联合miR-153抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、LPS和miR-153 inhibitor联合APC小干扰RNA(si-APC)组、LPS和miR-153 inhibitor联合APC小干扰RNA阴性对照(si-NC)组。除对照组外,其余各组通过给予相应处理后,再给予LPS诱导建立大鼠脓毒症损伤模型。通过实时定量PCR检测miR-153的表达,Western blot法检测APC、B淋巴细胞瘤因子2(Bcl2)和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白表达;分离并培养大鼠肺泡上皮细胞,CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。ELISA检测大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平;双荧光素报告实验检测miR-153和APC的关系。结果与对照组相比,脓毒症肺损伤大鼠模型中,miR-153表达明显增加,APC明显降低。LPS组的细胞活力、Bcl2蛋白表达和SOD活性明显降低,细胞凋亡率、c-caspase-3蛋白表达、MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α含量显著增加;与LPS联合inhibitor NC组相比,LPS联合miR-153 inhibitor组的细胞活力、Bcl2蛋白表达和SOD活性明显增加,细胞凋亡率、c-caspase-3蛋白表达、MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α表达显著降低。miR-153可以靶向调控APC的表达,与LPS和miR-153 inhibitor联合si-NC组相比,LPS和miR-153 inhibitor联合si-APC组的细胞活力、Bcl2蛋白表达和SOD活性明显降低,细胞凋亡率、c-caspase-3蛋白表达、MDA、IL-6、IL-1β、TNF-α表达显著增加。结论LPS诱导肺组织miR-153表达增强,靶向抑制APC,促进脓毒症大鼠肺组织的细胞凋亡、氧化应激和炎症反应,加重损伤。