CircRHOT1调节miR-187-3p/SOX4轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:研究环状RNA ras同源物基因家族成员T1(CircRHOT1)调节miR-187-3p/性别决定区Y框蛋白4(SOX4)轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:采用实时荧光定量PCR和Western blot检测体外培养的人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、Hs-578T、MDA-MB-231中CircRHOT1、miR-187-3p与SOX4表达;将体外培养的MCF-7细胞随机分为对照组、CircRHOT1敲低(转染CircRHOT1 siRNA质粒)组、miR-187-3p mimics(转染miR-187-3p mimics)组、共转染阴性对照(转染空载质粒和miR-187-3p inhibitor阴性对照)组、CircRHOT1敲低+miR-187-3p inhibitor(转染CircRHOT1 siRNA质粒和miR-187-3p inhibitor)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测各组细胞CircRHOT1、miR-187-3p与SOX4表达;采用EdU染色和平板集落形成实验检测各组细胞增殖;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡;采用免疫荧光染色检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达比值(Bax/Bcl-2)。各组细胞与人外周血淋巴细胞共培养并分组转染后,采用流式细胞术检测各组人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例;采用MTT法检测人外周血淋巴细胞对各组MCF-7细胞的杀伤率。采用双荧光素酶报告实验检测MCF-7细胞CircRHOT1对miR-187-3p、miR-187-3p对SOX4的靶向调控。结果:与人正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,人乳腺癌MCF-7、Hs-578T、MDA-MB-231细胞CircRHOT1、SOX4蛋白与mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-187-3p表达明显降低(P<0.05)。与对照组相比,CircRHOT1敲低组、miR-187-3p mimics组细胞SOX4蛋白与mRNA表达、EdU阳性率、集落生成率降低(P<0.05),miR-187-3p表达、凋亡率、Bax/Bcl-2、人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例及其对MCF-7细胞杀伤率升高(P<0.05)。与CircRHOT1敲低组相比,CircRHOT1敲低+miR-187-3p inhibitor组细胞CircRHOT1表达差异无统计学意义(P>0.05),SOX4蛋白与mRNA表达、EdU阳性率、集落生成率升高(P<0.05),miR-187-3p表达、凋亡率、Bax/Bcl-2、人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例及其对MCF-7细胞杀伤率降低(P<0.05);共转染阴性对照组细胞各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低CircRHOT1可通过上调miR-187-3p而降低SOX4表达,从而减弱乳腺癌细胞增殖活性,并促进其凋亡,还可抑制CD8^(+)T细胞活化并增强其癌细胞杀伤力,减弱乳腺癌细胞免疫逃逸。

加味柴胡疏肝汤对急性癫痫小鼠海马miR-187/Wnt/β-catenin信号通路表达的影响

目的探讨加味柴胡疏肝汤对急性癫痫小鼠miR-187/Wnt/β-catenin信号通路表达的影响。方法制备匹罗卡品急性癫痫小鼠模型后,将小鼠随机分为模型组、加味柴胡疏肝汤组、卡马西平组、加味柴胡疏肝汤+miR-187过表达组、加味柴胡疏肝汤+miR-187抑制组,每组10只,除模型组之外,其余组别分别给予相应药物灌胃进行干预,2次/d,连续14 d。脑电图检测小鼠痫性波,苏木素-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)染色法进行正常组与模型组病理组织学观察,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR,RT-PCR)检测小鼠海马组β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3 mRNA表达水平,免疫蛋白印迹法(western blot,WB)检测小鼠海马组织β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3蛋白表达水平,免疫荧光检测小鼠海马组织β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3的表达水平。结果脑电图结果显示,与正常组相比,模型组小鼠脑电图观察到连续性痫性放电,表现为棘波、尖波、棘-慢综合波;与模型组比较,加味柴胡疏肝汤组与卡马西平组均能减少癫痫小鼠脑电图痫性波次数;与加味柴胡疏肝汤组比较,加味柴胡疏肝汤+miR-187过表达组小鼠脑电图中痫性放电次数明显减少,加味柴胡疏肝汤+miR-187抑制组小鼠脑电图中痫性放电次数明显增加。RT-PCR结果显示,与正常组相比,模型组β-catenin、cyclin D1、c-myc和wnt3基因表达显著升高;与模型组相比,加味柴胡疏肝汤组和加味柴胡疏肝汤+miR-187过表达组小鼠海马组织中β-catenin、cyclin D1、c-myc和wnt3基因表达均明显减低,且较单纯使用加味柴胡疏肝汤组明显减低;加味柴胡疏肝汤+miR-187抑制组cyclin D1较模型组明显降低;卡马西平组β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3基因表达水平均明显降低。WB结果显示,与正常组相比,模型组β-catenin、cyclin D1、c-myc和wnt3蛋白表达显著升高;与模型组相比,加味柴胡疏肝汤组和卡马西平组小鼠海马组织中β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3蛋白表达量均减低;加味柴胡疏肝汤+miR-187过表达组β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3蛋白表达量较模型组和加味柴胡疏肝汤组均明显减低;加味柴胡疏肝汤+miR-187抑制组c-myc、wnt3蛋白表达量较模型组比均明显降低;免疫荧光结果基本同WB。结论加味柴胡疏肝汤上调miR-187的表达,抑制β-catenin、cyclin D1、c-myc、wnt3的表达,抑制癫痫的发生和发展。

急性ST段抬高型心肌梗死患者血清miR-187-5p、DYRK2水平变化及预后价值评估

目的:探讨急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者血清微小RNA-187-5p(miR-187-5p)、人双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶2(DYRK2)的水平变化,并分析对患者预后评估的意义。方法:选取本院2019-05-2021-12入院治疗的102例急性STEMI患者(研究组),以同期在本院进行体检的40例健康者作为对照组,收集整理患者一般临床资料进行分析,采用Pearson相关性分析急性STEMI患者血清miR-187-5p、DYRK2表达的关系;随访102例患者治疗后6个月内情况,根据是否发生不良心血管事件(MACE)将其分为MACE组(45例)和非MACE组(57例),采用Logistic回归分析影响急性STEMI患者预后的因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-187-5p、DYRK2对患者预后的预测价值。结果:研究组血清miR-187-5p水平显著低于对照组,DYRK2水平显著高于对照组(P<0.01);MACE组血清miR-187-5p表达水平显著低于非MACE组,血清DYRK2水平显著高于非MACE组(P<0.01);血清miR-187-5p与DYRK2水平呈负相关(r=-0.228,P<0.05);血清DYRK2、miR-187-5p、cTnT、LVEF、TG均为STEMI患者预后的影响因素(P<0.01);ROC曲线分析显示,miR-187-5p和DYRK2联合检测对患者预后评估的ROC曲线下面积为0.872,敏感度、特异度分别为88.89%、75.44%。结论:STEMI患者血清miR-187-5p水平降低,DYRK2水平升高,二者联合检测对患者预后评估具有一定的预测价值。

LINC00341通过靶向miR-187对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的 探讨LINC00341对前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的靶向影响及机制。方法 将LINC00341过表达载体(pcDNA3.1-LINC00341)转染前列腺癌细胞DU145,检测细胞的增殖力、细胞凋亡及迁移和侵袭能力,蛋白质印记(Western blot)法检测Cyclin D1、P21、Bcl-2、Bax、MMP-2和E钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。双荧光素酶报告实验联合RT-qPCR验证LINC00341对miR-187的靶向调控关系。将miR-187模拟物(miR-187 mimics)和pcDNA3.1-LINC00341共转染DU145细胞,采用上述方法检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力变化。结果 过表达LINC00341抑制DU145细胞Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2的表达,促进P21、Bax和E-cadherin蛋白的表达水平,抑制DU145细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。miR-187是LINC00341的靶基因,LINC00341靶向负性调控miR-187表达。过表达miR-187可逆转LINC00341过表达对DU145细胞的增殖、迁移侵袭抑制作用和凋亡促进作用。结论 LINC00341通过靶向下调miR-187抑制DU145细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

miR-187影响结肠癌LOVO细胞恶性生物学行为的研究

目的:探讨miR-187对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡、侵袭转移等恶性生物学行为的影响。方法:应用miR-187 mimics转染结肠癌LOVO细胞,利用MTT实验、流式细胞术和Transwell实验观察miR-187对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡、侵袭转移的影响。结果:与对照细胞相比,MTT显示转染miR-187的LOVO细胞增殖速度变快,流式细胞术表明miR-187mimics转染可以减少LOVO细胞的凋亡,Transwell实验证实转染miR-187mimics可以促进LOVO细胞迁移,增强LOVO细胞的侵袭转移能力。结论:miR-187促进结肠癌LOVO细胞的恶性增殖、抑制凋亡、促进侵袭和转移,提示miR-187在结肠癌的恶性生物学进程中可能发挥重要作用。

miR-187在肺癌组织中的表达及其效应

目的:探讨微小RNA(micro RNA,miR)-187在肺癌组织中的表达及其效应。方法:以U6为内参,采用茎环实时荧光定量PCR(RT-q PCR)方法检测32例肺癌及其癌旁正常组织标本miR-187的表达量,并分析其表达与肺癌临床病理特征间的关系。采用miR-187模拟物(mimics)上调A549肺癌细胞内miR-187表达水平,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,通过流式细胞术检测细胞周期。结果:与癌旁正常组织比较,miR-187在肺癌组织中表达显著下调(t=5.236,P<0.001)。临床病理特征相关性分析结果显示,肿瘤组织miR-187的表达与肺癌病理分级及临床分期相关(P<0.05),与年龄、性别、吸烟史、肿块大小、病理类型及淋巴结转移情况未见明显相关性(P>0.05)。采用miR-187 mimics上调A549肺癌细胞内miR-187表达后,细胞增殖明显受到抑制,G0/G1期细胞比例增高,G2/M期细胞比例明显降低。结论:miR-187在肺癌组织中的下调表达可能参与了肺癌的发生发展过程。

补肾安胎冲剂对复发性流产小鼠胎盘滋养细胞miR-187、VEGF、VEGF-R2表达的影响

目的观察补肾安胎冲剂对复发性流产(RSA)小鼠胎盘滋养细胞miR-187、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGF-R2表达的影响,探讨其相关作用机制。方法将雌性CBA/J小鼠与雄性DBA/2小鼠合笼饲养建立RSA小鼠模型,雌性CBA/J小鼠与雄性BALB/c小鼠合笼饲养作为正常妊娠小鼠,分离并培养胎盘滋养细胞,将细胞分为正常对照组(正常妊娠小鼠胎盘滋养细胞+空白血清)、模型组(RSA小鼠胎盘滋养细胞+空白血清)、补肾安胎冲剂组(RSA小鼠胎盘滋养细胞+20%含药血清)、miR-187 inhibitor NC组(RSA小鼠胎盘滋养细胞转染空白miR-187 inhibitor+空白血清)、miR-187 inhibitor组(RSA小鼠胎盘滋养细胞转染miR-187 inhibitor+空白血清)、联合组(RSA小鼠胎盘滋养细胞转染miR-187 inhibitor+20%含药血清)。RT-qPCR检测miR-187、VEGF、VEGF-R2 mRNA表达,Western blot检测VEGF、VEGF-R2蛋白表达,双荧光素酶实验检测miR-187和VEGF靶向关系,采用Spearman法分析miR-187与VEGF、VEGF-R2 mRNA表达量的相关性。结果与正常对照组比较,模型组细胞miR-187表达显著升高,VEGF、VEGF-R2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,补肾安胎冲剂组细胞miR-187表达显著降低,VEGF、VEGF-R2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05);与miR-187 inhibitor NC组比较,miR-187 inhibitor组细胞miR-187表达显著降低,VEGF、VEGF-R2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05);与补肾安胎冲剂组及miR-187 inhibitor组比较,联合组细胞miR-187表达显著降低,VEGF、VEGF-R2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,miR-187能够与VEGF靶向结合。Spearman相关性分析显示,miR-187与VEGF、VEGF-R2 mRNA表达呈负相关。结论补肾安胎冲剂可通过下调miR-187活性,靶向上调VEGF、VEGF-R2表达,介导血管新生,促进母胎界面血管重构,从而对RSA发挥治疗作用。

MIR-187影响胃癌细胞恶性生物学行为的研究

探讨mir-187对胃癌细胞恶性生物学行为的影响;采用q PCR检测miR-187在胃癌SGC7901细胞、MKN45细胞和人永生化胃黏膜上皮细胞GES细胞中的表达,应用miR-187 mimics转染SGC7901细胞和MKN45细胞,通过MTT实验、流式细胞术和裸鼠成瘤实验检测miR-187对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。结果 SGC7901、MKN45细胞中miR-187的表达明显高于GES细胞;与对照细胞相比,MTT实验显示转染miR-187 mimics后胃癌SGC7901细胞的增殖增快(P<0.05),流式细胞检测表明miR-187mimics转染可以减少SGC7901细胞的凋亡(P<0.05),裸鼠成瘤实验提示转染miR-187mimics可以促进SGC7901细胞成瘤(P<0.05)。说明miR-187可以促进胃癌细胞生长、抑制凋亡和促进增殖,提示miR-187在胃癌恶性生物学行为中发挥重要作用,有可能成为诊断胃癌的新标志和治疗胃癌的新靶点。

癫痫鼠电击下颞叶相关miRNA(miR-187)表达谱的下调表达

目地:目地:本研究目的证实微小NRA(miNRA)在癫痫动物模型中的异常表达,探索导致癫痫发作潜在的基因片段。方法:从NCBI GEO数据库中下载癫痫大鼠齿状回扁桃体电击下颞叶7天,14天,30天和90天miRNA表达基因片段GSE49850的20个样本及相应的20个对照样本,比较找到电刺激样本miRNA的表达显著不同基因序列。整合两个miRNA数据库miRDB和microRNA.org中的预测靶基因,从中挑选目标miRNA的靶基因。用DAVID软件对筛选得到的靶基因进行功能富集分析,并对miRNA和目标基因的互补序列分析。结果:与对照组比较,rno-miRNA-187证实电刺激后下调表达且与所对应的预测靶基因功能与神经系统密切相关。序列CUGUGC是rno-miR-187与部分交集靶基因结合的共有序列。结论:rno-miR-187电击刺激后四个不同阶段表达持续下调,与神经系统功能密切关联,其表达特异性可能成为癫痫大鼠后颞叶组织中miRNA变化的分子靶标,所调控的靶基因可能为颞叶组织与癫痫疾病关联的基因。

miR-187通过抑制胃癌细胞凋亡影响胃癌多药耐药

目的:探讨miR-187对胃癌多药耐药的影响。方法:应用q PCR检测miR-187在胃癌SGC7901细胞和SGC7901ADR细胞中的表达。miR-187 mimics转染上述细胞,MTT检测转染后细胞对多种化疗药物的敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:SGC7901ADR细胞中miR-187的表达明显高于SGC7901细胞。MTT实验显示转染miR-187 mimics后胃癌细胞对化疗药物的敏感性均明显降低(P<0.05)。流式细胞检测表明miR-187 mimics转染可以减少SGC7901细胞的凋亡(P<0.05)。结论:miR-187通过抑制胃癌细胞凋亡参与胃癌多药耐药,可能成为逆转胃癌多药耐药的新靶点。

miR-187通过靶向胰岛素生长因子-1受体基因对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究miR-187通过靶向胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常乳腺上皮细胞HBL-100和不同乳腺癌细胞中miR-187的表达水平。在MDA-MB-231细胞中分别转染miR-187 mimics(miR-187组)或阴性对照mimics-NC(miR-NC组),以未转染的MDA-MB-231细胞为空白对照(空白对照组)。采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹(Western blotting)法分别检测转染后细胞中miR-187和IGF-1R蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况。Western blot检测与增殖和凋亡相关蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-187与IGF-1R靶向调控关系。结果与人正常乳腺上皮细胞HBL-100(1.00±0.10)相比,乳腺癌细胞中miR-187表达水平明显降低(P<0.05),在MDA-MB-231细胞中表达水平最低(0.11±0.01)。与miR-NC组和空白对照组相比,miR-187组的miR-187表达水平明显上调[(0.98±0.09)、(1.00±0.11)比(3.18±0.33),P<0.05],IGF-1R蛋白表达水平明显下调[(0.28±0.03)、(0.27±0.03)比(0.09±0.01),P<0.05],细胞增殖活力OD值[(0.79±0.08)、(0.82±0.08)比(0.43±0.04)]和PCNA表达水平[(0.39±0.04)、(0.40±0.04)比(0.20±0.02)]均显著降低(P<0.05),凋亡率[(5.02±1.13)%、(4.61±1.01)%比(20.38±3.44)%]和Cleaved Caspase-3表达水平[(0.09±0.02)、(0.08±0.02)比(0.58±0.07)]显著升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-187与IGF-1R基因3’非编码区(UTR)存在靶向关系。结论miR-187对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其作用机制与靶向抑制IGF-1R基因表达有关。

MicroRNA-187在胶质瘤中的表达及对预后判断的价值

目的探讨microRNA-187(miR-187)在不同级别胶质瘤的表达及其与临床病理参数和预后的关系。方法收集郑州大学第一附属医院53例不同病理级别的胶质瘤及10例正常脑组织标本,通过qRT-PCR检测miR-187的表达水平;分析miR-187表达量与胶质瘤患者临床病理参数的相关性;通过Kaplan-Meier分析及log-rank检验评价不同表达水平与生存期的关系。结果与正常脑组织相比,miR-187低表达于胶质瘤组织(P<0.05),miR-187在胶质瘤组织中的表达水平与肿瘤大小、WHO分级、KPS评分和增殖分数Ki-67相关(P<0.05),与患者的年龄,性别及肿瘤部位无关(P>0.05),在生存分析中,低表达miR-187的胶质瘤患者预后较差。结论 miR-187在胶质瘤细胞中的表达水平显著降低,与肿瘤大小、WHO分级、增殖分数Ki-67和KPS评分及预后密切相关。miR-187在胶质瘤的诊断与治疗中有重要意义,可能作为新型胶质瘤预后相关的分子靶标。

微小RNA-187调控肿瘤细胞的分子机制

微小RNA(miRNA)是一种高度保守的单链小分子RNA,具有调控组织细胞的生长发育、分化、凋亡的作用,在肿瘤细胞中通过不同的分子机制调控细胞增殖、凋亡、转移及耐药等生物学过程。近年来越来越多的研究发现mir-187在众多肿瘤中的表达失调,而人为改变肿瘤细胞mir-187的表达可以通过不同的机制抑制肿瘤细胞的增殖和转移,促进其凋亡。本文就最新发现的mir-187在肿瘤细胞的作用机制做一综述。

超声微泡介导miR-187-3p调节S100A4对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响

目的 探究超声微泡(UM)介导miR-187-3p对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法qRT-PCR检测不同乳腺细胞中miR-187-3p表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-187-3p与S100钙结合蛋白A4(S100A4)的靶向关系。使用miR-187-3p mimic、miR-NC或UM介导的miR-187-3p mimic、miR-NC处理MDA-MB-231细胞,并过表达S100A4进行回复实验,采用qRT-PCR、Westernblot检测细胞中miR-187-3p、S100A4mRNA和蛋白表达水平,CCK-8、EdU染色检测细胞增殖能力,划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果 miR-187-3p在人乳腺癌细胞中低表达,其中MDA-MB-231细胞中miR-187-3p表达水平变化最为明显。过表达miR-187-3p可抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭;UM介导的miR-187-3p进一步增强了miR-187-3p对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用;经验证,MDA-MB-231细胞中miR-187-3p与S100A4存在靶向调控关系,且过表达S100A4可部分减弱UM介导的miR-187-3p对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 UM介导的miR-187-3p可能通过负靶向调节S100A4抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-187在胃癌组织中的表达及意义

目的本研究旨在探讨microRNA(miR)-187在胃癌组织中的表达情况,并分析miR-187表达的改变与胃癌分化程度和TNM分期之间的关系。方法 32例胃癌及相应癌旁正常胃黏膜组织标本提取RNA后,采用茎环逆转录实时荧光定量PCR(real time-PCR)方法,分别检测miR-187在胃癌及癌临近正常胃黏膜组织中的表达量,并进一步观察miR-187表达的变化同胃癌分化程度以及TNM分期之间存在的联系。结果胃癌及癌旁正常胃黏膜组织中均可以检测到miR-187,且与癌临近的正常胃黏膜组织相比,miR-187的表达量发生显著的改变,其在胃癌组织中表达出现显著性的下降(P<0.05)。胃癌组织中的miR-187表达量与胃癌的分化程度(P<0.05)及TNM分期(P<0.05)均显著相关。结论在胃癌组织及癌临近胃黏膜组织中,miR-187的表达呈明显减少的趋势,差异具有统计学意义;且胃癌组织中miR-187表达的减少与胃癌的分化程度以及TNM分期均呈显著的相关性。以上研究结果表明,miR-187表达的减少与胃癌的发生、发展密切相关。

miR-187-5p通过RANKL/NFκB信号通路抑制骨质疏松症中的破骨细胞活性

目的探讨miR-187-5p通过RANKL/NFκB信号通路对骨质疏松症中破骨细胞活性的影响及机制分析。方法使用小鼠巨噬细胞264.7细胞株(RAW246.7),设置正常组(con)、核因子κB配体的受体激活子(receptor activator of nuclear factor-κBligand,RANKL)诱导的骨质疏松症组(RANKL-induced OP)、阴性对照(mimic negative control,mimic NC)、OP+miR-187-5p模拟物(OP+miR-187-5p mimic),通过细胞计数试剂盒(the cell counting kit 8,CCK8)检测破骨细胞的增殖水平,RT-qPCR检测TRAPmRNA、miR-187-5p表达水平,免疫印迹检测p65和TNFα蛋白表达。最后,通过双荧光素酶报告基因(dual luciferase reporter assays)检测miR-187-5p和p65间的相互作用。结果RAW264.7细胞转染miR-187-5p后,OP组的细胞增殖水平和TRAP mRNA水平显著高于con组(P=0.008、0.017),OP+miR-187-5p mimic组细胞增殖水平和TRAP mRNA水平显著低于OP+miR-187-5p NC组(P=0.023、0.037)。而miR-187-5p在OP组显著低于con组(P=0.031),转染miR-187-5p mimic后升高其表达水平(P=0.041)。此外,OP组的p65和TNFα蛋白水平明显高于con组(P=0.034;P=0.024),OP+miR-187-5p mimic组的p65和TNFα蛋白水平显著低于OP+miR-187-5p NC组(P=0.028;P=0.036)。同时OP组的p65显著高于con组(P=0.039),OP+miR-187-5p mimic组的p65基因水平明显高于OP+miR-187-5p NC(P=0.025)。双荧光素酶报告分析,miR-187-5p与p65间存在靶向关系。结论miR-187-5p通过抑制NFκB信号通路抑制破骨细胞的活性。

卵巢癌患者组织中miR-29b、miR-187表达与预后关系

目的分析miR-29b和miR-187在卵巢癌患者组织中表达情况,探讨两者表达与卵巢癌患者病理特征和预后关系。方法选择2013年1月-2016年5月金华市中心医院收治的卵巢癌患者76例作为研究对象,另选择76例正常卵巢组织作为对照。采用实时荧光定量(qRT-PCR)法检测组织中miR-29b与miR-187表达水平,分析两者表达与卵巢癌患者病理特征和预后关系。结果卵巢癌组织中miR-29b表达水平显著低于正常卵巢组织(P<0.05),miR-187表达水平显著高于正常卵巢组织(P<0.05)。miR-29b和miR-187异常表达与卵巢癌患者年龄、病理分型等无关(均P>0.05),miR-29b低表达组低分化、FIGOⅢ期、有腹水以及淋巴结转移患者比例显著高于miR-29b高表达组(均P<0.05),miR-187高表达组低分化、FIGOⅢ期、有腹水以及淋巴结转移患者比例显著高于miR-187低表达组(均P<0.05)。卵巢癌组织中miR-29b和miR-187表达水平呈负相关(r=0.672,P<0.05)。miR-29b低表达组、miR-187高表达组患者3年总生存率分别显著低于miR-29b高表达组以及miR-187低表达组(P<0.05)。低分化、高FIGO分期、淋巴结转移、miR-29b低表达以及miR-187高表达是影响卵巢癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论miR-29b在卵巢癌组织中低表达,miR-187高表达,两者与卵巢癌分化程度、淋巴结转移等临床病理特征及预后有关,可能共同影响卵巢癌不良预后发生。

miR-187靶向S100A4抑制胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、迁移并诱导细胞凋亡

目的探讨miR-187对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的U251细胞分为Con组(未处理)、NC组(转染miR-NC)、miR-187组(转染miR-187 mimics)。采用实时定量PCR检测miR-187的表达,MTT法、Transwell小室实验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡,实时定量PCR和Western blot检测S100A4 mRNA和蛋白的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-187和S100A4的靶向关系。结果与Con组相比,miR-187组细胞中miR-187表达水平和细胞凋亡率均明显升高,而细胞增殖活性、侵袭细胞数、迁移细胞数和S100A4 mRNA、S100A4蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);而miR-NC组与Con组相比无显著性差异(P>0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实S100A4是miR-187的靶基因。结论 miR-187通过靶向S100A4抑制U251细胞增殖、迁移、侵袭并诱导细胞凋亡。

miR-187在宫颈癌中的表达与临床病理关系的研究

目的探讨miR-187在宫颈癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法收集78例宫颈癌组织标本,同时收取同期手术的60例正常宫颈组织标本,采用实时荧光定量PCR检测方法检测两种组织中miR-187的表达量并进行比较,同时分析癌组织中miR-187的表达水平与临床病理特征的关系。结果宫颈癌组织中miR-187的表达量低于正常宫颈组织标本,统计学意义显著(P<0.001);宫颈癌组织中miR-187的表达水平与宫颈癌组织的分化程度、患者的临床分期及有无淋巴结转移情况有关(P<0.05),而与患者的年龄、肿块类型、肿瘤大小及组织学类型无关(P>0.05)。结论 miR-187在宫颈癌组织中低表达,可能作为其诊断与治疗的重要靶点。

阿霉素对H9C2心肌细胞活力和miRNA表达水平影响

目的阿霉素(doxorubicin,DOX)是一种抗肿瘤广谱抗生素,可抑制RNA和DNA合成,对心肌细胞有剂量依赖性毒性,miRNAs与心血管疾病有着重要联系。本研究分析DOX对H9C2心肌细胞活力和miRNA表达水平影响。方法用3μmol/L、5μmol/L浓度的DOX处理H9C2心肌细胞48h,先用PBS配置DOX储备液,再将储备液滴入含有血清的正常培养基中,使DOX终浓度调到所需浓度,建立心肌细胞损伤模型,并设置正常对照组,CellTiter 96○R AQueous增殖试剂盒测定细胞活力;再用对细胞活力有显著影响的DOX处理细胞48h,然后用实时荧光定量方法检测DOX处理的H9C2心肌细胞中miR-187-3p表达情况。结果 3μmol/L和5μmol/L DOX处理细胞后,与对照组相比细胞活力均下降,产生明显细胞毒性,F=135.627,P<0.001;实时荧光定量结果显示,5μmol/L组与对照组相比,miR-187-3p表达量出现上调,t=-21.68,P<0.001。结论 DOX能降低心肌细胞活性,对H9C2心肌细胞造成损伤,影响miRNA表达量。