联合检测miR⁃195、SOCS3 mRNA、miR⁃210对急性淋巴细胞性白血病的诊断价值分析

目的:研究联合检测微小核苷酸195(miR⁃195)、细胞因子信号转导抑制因子⁃3(SOCS3 mRNA)、微小核苷酸210(miR⁃210)在急性淋巴细胞性白血病(ALL)诊断及危险度评估中的价值。方法:选取2014年2月至2017年2月收治的120例ALL患者为研究对象,初诊患者74例、缓解组患者22例、复发患者24例,另选取健康体检的儿童120例作为对照组,分别对不同组别研究对象的miR⁃195、SOCS3 mRNA、miR⁃210表达水平,初诊组患者不同危险度与miR⁃195、SOCS3 mRNA、miR⁃210表达水平的相关性,初诊组患者危险度的危险因素以及单独检测和联合检测对ALL疾病的诊断效能进行分析。结果:对照组、缓解组、复发组、初诊组以及不同危险度患者的miR⁃195、SOCS3 mRNA、miR⁃210表达水平差异明显(P<0.05)。经两两比较,各组miR⁃195、miR⁃210表达水平从高到低依次为对照组、缓解组、初诊组、复发组以及标危组、中危组、高危组,SOCS3 mRNA表达水平从高到低依次为复发组、初诊组、缓解组、对照组以及高危组、中危组和标危组(P<0.05)。患者的危险度与miR⁃195、miR⁃210表达水平呈现负相关,与SOCS3 mRNA呈现正相关,联合检测灵敏度显著高于单独检测患者的miR⁃195、miR⁃210、SOCS3 mRNA的标危、中危以及高危临界值分别为2.43、2.01、1.34;6.32、5.44、4.09;0.66、0.98、1.22。结论:联合检测miR⁃195、SOCS3 mRNA、miR⁃210在ALL患者诊断中灵敏度较高,且miR⁃195、SOCS3 mRNA、miR⁃210表达水平与ALL患者危险度呈显著相关,建议在临床中推广。

多发性骨髓瘤组织中miR-29c、miR-195表达水平变化及其与临床病理特征及预后的关系

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)组织中miR-29c、miR-195表达水平变化及其与临床病理特征及预后的关系。方法 选取75例MM患者作为病例组,另选取同期就诊的75例骨髓象检查为正常的非血液系统疾病患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测骨髓组织中miR-29c、miR-195表达水平,根据检测平均值将miR-29c、miR-195分为高水平组和低水平组,分析miR-29c、miR-195表达水平与临床病理特征及预后的相关性。结果 病例组骨髓组织miR-29c、miR-195表达水平低于对照组(P<0.05)。miR-29c低水平组中ISS分期Ⅲ期及血清白蛋白水平<35 g/L的患者占比高于高水平组(P<0.05);miR-195低水平组中ISS分期Ⅲ期及血清白蛋白水平<35 g/L的患者占比高于高水平组(P<0.05);miR-29c低水平组的生存期低于高水平组(P<0.05),miR-195低水平组的生存期低于高水平组(P<0.05)。miR-29c、miR-195表达水平与ISS分期呈负相关(P<0.05),与血清白蛋白、生存期呈正相关(P<0.05)。结论miR-29c、miR-195均在MM患者骨髓组织中低表达,且低表达miR-29c、miR-195患者的生存期较短。miR-29c、miR-195表达水平与ISS分期呈正相关,与血清白蛋白、生存期呈负相关。

长链非编码RNA AFAP1-AS1靶向miR-195-5p对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)AFAP1-AS1及微小核糖核酸-195-5p(miR-195-5p)对肝细胞癌(HCC)细胞生物学行为的影响。方法常规培养人HCC细胞系(HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Bel7402、SK-hep1细胞)和正常人肝细胞(HL-7702细胞),用实时荧光定量PCR法检测AFAP1-AS1、miR-195-5p并筛选实验细胞。将对数生长期实验细胞随机分为si-AFAP1-AS1组、si-NC组,miR-195-5pmimics组、mimics-NC组,miR-195-5pinhibitor+si-NC组、miR-195-5p inhibitor+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-AFAP1-AS1组、inhibitor-NC+si-NC组,用Lipofectamine 2000试剂将相应质粒按照分组转染入细胞。用CCK-8实验、菌落形成实验检测细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,用Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,用双荧光素酶报告基因实验验证AFAP1-AS1与miR-195-5p的靶向关系。结果HCC细胞中AFAP1-AS1表达高于正常人肝细胞(P均<0.05),HCC细胞中miR-195-5p表达低于正常人肝细胞(P均<0.05)。由于SK-hep1细胞中AFAP1-AS1表达最高、miR-195-5p表达最低,因此,后续研究均采用SK-hep1细胞进行实验。与si-NC组比较,si-AFAP1-AS1组中AFAP1-AS1表达低、细胞增殖能力低、迁移和侵袭细胞少、G0/G1期细胞比例高、细胞凋亡率高(P均<0.05)。通过Starbase v3.0在线数据库预测发现,AFAP1-AS1与miR-195-5p有互补的结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-NC组、miR-195-5p组共转染WT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P<0.05),共转染MUT-AFAP1-AS1后相对荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与inhibitor-NC+si-NC组比较,si-NC+miR-195-5p inhibitor组细胞增殖能力高、迁移和侵袭细胞多、G_(0)/G_(1)期细胞比例低、细胞凋亡率低(P均<0.05),而si-AFAP1-AS1+miR-195-5p inhibitor组上述细胞生物学行为则相反。结论lncRNA AFAP1-AS1可能通过竞争性结合miR-195-5p参与调控HCC细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为。

长链非编码RNA FGD5-AS1调节miR-195-5p/PIM1轴对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA FGD5反义RNA1(lncRNA FGD5-AS1)调节miR-195-5p/PIM1轴对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响。方法将大鼠心肌细胞H9c2及人心肌细胞随机分为对照组、模型组、lncRNA FGD5-AS1过表达组、miR-195-5p inhibitor组、阴性对照组、lncRNA FGD5-AS1过表达+miR-195-5p mimics组,分组处理后检测其lncRNA FGD5-AS1、miR-195-5p和PIM1表达、增殖、凋亡、促炎性细胞因子水平。结果与对照组相比,模型组细胞lncRNA FGD5-AS1、PIM1 mRNA及蛋白表达、存活率,增殖率降低(P<0.05);miR-195-5p表达,凋亡率,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平升高(P<0.05);过表达lncRNA FGD5-AS1可逆转模型组细胞上述变化,上调miR-195-5p可减弱过表达lncRNA FGD5-AS1的逆转作用。结论过表达lncRNA FGD5-AS1可通过下调miR-195-5p增强PIM1表达,从而抑制高糖诱导的心肌细胞炎症反应,促进细胞存活,减轻细胞凋亡。

吉非替尼联合调强放疗治疗老年中晚期非小细胞肺癌效果及对血清miR-224、miR-195表达作用

目的 探讨吉非替尼联合调强放疗治疗老年中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的效果及对血清miR-224、miR-195表达作用。方法 选取了河南省肿瘤医院(郑州大学附属肿瘤医院)在2018年2月至2020年2月期间收治的老年中晚期NSCLC患者92例随机分为研究组组和对照组,每组各46例。对照组予以调强放疗,研究组予以吉非替尼联合调强放疗,比较研究组与对照组疗效、不良反应、治疗后1年、2年、3年生存率与治疗前后血清肿瘤标志物指标[细胞角质蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、鳞状细胞癌抗原(SCC)、癌胚抗原(CEA)]、免疫功能指标(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))、miR-224、miR-195水平。结果 研究组治疗后DCR较对照组高,差异有统计学意义(χ^(2)=5.392,P<0.05);研究组与对照组治疗后血清CYFRA21-1、SCC、CEA水平较治疗前降低,且研究组低于对照组,差异有统计学意义(t=9.364、9.391、9.822,P<0.05);研究组治疗后血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较治疗前提高,且高于对照组,差异有统计学意义(t=4.667、4.913、2.923,P<0.05);研究组与对照组治疗后血清miR-224水平较治疗前降低,且研究组低于对照组(t=4.378,P<0.05),两组miR-195水平较治疗前提高,且研究组高于对照组,差异有统计学意义(t=2.787,P<0.05);研究组治疗后2年、3年生存率高于对照组(χ^(2)=4.142、4.022,P<0.05)。结论 吉非替尼联合调强放疗应用于老年中晚期NSCLC可提高治疗效果,调节miR-224、miR-195表达,延长患者生存期。

LncRNA RUNX1-IT1对恶性多形性腺瘤miR-195/CyclinD1的调控作用探讨

目的 :探讨恶性多形性腺瘤(malignant pleomorphic adenoma, MPA)细胞中长链非编码RNA(long non-coding RNA, LncRNA)RUNX1-IT1对微小RNA-195(microRNA-195, miR-195)/细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的调控作用。方法:收集手术切除的MPA组织及癌旁组织,检测LncRNA RUNX1-IT1、miR-195、CyclinD1 mRNA的表达水平,分析三者与MPA临床病理的关系。培养MPA细胞系SM-AP1,转染阴性对照(NC)siRNA、LncRNA RUNX1-IT1 siRNA、miRNC、miR-195抑制物,检测细胞增殖水平A490及miR-195、CyclinD1的表达水平,分析LncRNA RUNX1-IT1靶向miR-195、miR-195靶向CyclinD1的关系。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果 :MPA中LncRNA RUNX1-IT1、CyclinD1的表达水平显著高于癌旁组织,miR-195的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。LncRNA RUNX1-IT1与miR-195呈负相关、与CyclinD1呈正相关,miR-195与CyclinD1呈负相关。肿瘤直径≥3 cm、复发、远处转移的MPA癌组织中,LncRNA RUNX1-IT1、CyclinD1表达更高(P<0.05),miR-195表达更低(P<0.05)。敲低LncRNA RUNX1-IT1后,SM-AP1细胞的A490水平、CyclinD1表达水平降低,miR-195表达水平增加(P<0.05)。LncRNA RUNX1-IT1通过直接靶向作用于SM-AP1细胞中的miR-195,miR-195通过直接靶向作用于SM-AP1细胞中的CyclinD1。抑制miR-195后,敲低LncRNA RUNX1-IT1降低A490水平及CyclinD1表达水平的作用减弱(P<0.05)。结论:LncRNA RUNX1-IT1可能通过调控miR-195/CyclinD1表达,参与MPA的发生、发展。

LncRNA SNHG16通过调控miR-195-5p/MYB促进胃癌细胞增殖及迁移

目的探讨lncRNA SNHG16(SNHG16)对胃癌细胞增殖、迁移的影响及其分子调控机制。方法基于在线数据库检索SNHG16在胃癌组织中的表达情况并筛选SNHG16的下游靶基因。通过生物信息学方法分析、双荧光素酶报告基因实验验证SNHG16与miR-195-5p间相互作用关系。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SNHG16、miR-195-5p和MYB在胃癌细胞(HGC-27、MKN-28)中的表达情况;敲低SNHG16检测miR-195-5p或MYB表达;过表达miR-195-5p检测MYB表达;蛋白质印迹分析(Western blot)检测各组中MYB的蛋白表达水平。敲低SNHG16或过表达miR-195-5p,通过细胞增殖及划痕实验分别检测胃癌细胞(HGC-27、MKN-28)增殖及迁移能力。结果LncRNA SNHG16在胃癌组织及胃癌细胞(HGC-27、MKN-28、MKN-45、NCI-N87)中表达升高。双荧光素酶报告基因实验结果显示,将psiCHECK2-SNHG16-WT和miR-195-5p mimic同时转染进HGC-27中,显著抑制了HGC-27细胞的荧光素酶活性。qRT-PCR及WB实验结果显示:敲低HGC-27、MKN-28细胞中SNHG16可上调miR-195-5p并抑制MYB在转录及翻译水平的表达;过表达HGC-27、MKN-28细胞中miR-195-5p可抑制MYB表达。CCK8增殖实验及细胞划痕实验结果表明:敲低SNHG16或过表达miR-195-5p均可抑制HGC-27、MKN-28细胞的增殖和迁移。结论LncRNA SNHG16可通过miR-195-5p调节MYB在胃癌细胞中的表达,SNHG16高表达可促进胃癌细胞增殖和迁移。

miR-195靶向FOXK1介导Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌细胞侵袭转移的分子机制

目的探究微小RNA(miR)-195靶向叉头盒蛋白K1(FOXK1)介导Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌细胞侵袭转移的分子机制。方法选择140例胃癌组织和癌旁正常组织,其中男性77例,女性63例;年龄46~73岁,平均年龄55.34岁(标准差3.68岁)。检测其中miR-195、FOXK1和β-catenin的表达水平。通过Pearson检验分析相关性。通过双荧光素酶报告验证miR-195与FOXK1的相关性。将人胃癌细胞分为4组:对照组、miR-195组、FOXK1组和miR-195+FOXK1组。通过转染miR-195类似物和/或FOXK1质粒来提高miR-195和/或FOXK1的水平。检测各组细胞增殖、侵袭能力,以及β-catenin转录和蛋白表达水平。结果胃癌组织中miR-195水平显著低于正常组织,而FOXK1和β-catenin表达水平显著高于正常组织(P<0.05)。FOXK1与β-catenin正相关,miR-195分别与FOXK1和β-catenin负相关(P<0.05)。验证结果显示miR-195与FOXK1的靶向结合(P<0.05)。miR-195组FOXK1蛋白、增殖、侵袭、β-catenin mRNA和蛋白水平显著低于对照组(P<0.05)。FOXK1组FOXK1蛋白、增殖、侵袭、β-catenin mRNA和蛋白水平显著高于对照组(P<0.05)。miR-195+FOXK1组FOXK1蛋白、增殖、侵袭、β-catenin mRNA和蛋白水平高于miR-195组并低于FOXK1组(P<0.05)。结论miR-195可通过靶向FOXK1抑制Wnt/β-catenin通路,抑制胃癌细胞的侵袭和转移。

血清miR-195在宫颈鳞状细胞癌诊断中的临床意义

目的探讨miR-195表达水平作为宫颈鳞状细胞癌肿瘤标志物的临床价值。方法收集2016年9—11月中国医科大学附属盛京医院中的21例确诊且初诊为早期(Ⅰ_(a1)~Ⅱ_(a2)期)宫颈鳞状细胞癌患者的血清标本为观察组,同期健康志愿者22名为对照组,运用荧光定量PCR方法检测miR-195在宫颈鳞状细胞癌患者和健康志愿者血清中的表达程度,探讨其作为宫颈鳞状细胞癌肿瘤标志物的临床价值。结果观察组血清miR-195表达水平高于对照组,差异有统计学意义(t=4.342,P<0.001)。血清miR-195诊断宫颈鳞状细胞癌的ROC曲线下面积为0.675(95%CI:0.569~0.781,P=0.001),截断值为29.86时的敏感性和特异性分别为71.43%、60.71%。结论血清miR-195有可能作为宫颈鳞状细胞癌的一项肿瘤标志物,对宫颈鳞状细胞癌的发病情况具有提示作用。

MicroRNA-195/497对香烟烟雾提取物诱导的人支气管上皮细胞中TGF-β表达的影响

目的探讨microRNA-195/497(miR-195/497)在香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人支气管上皮细胞中影响转化生长因子-β(TGF-β)表达的作用机制。方法用3%CSE诱导BEAS-2B细胞模拟慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发病机制,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-195、miR-497、SMAD7及TGF-β基因表达。双荧光素酶报告实验验证miR-195、miR-497与SMAD7的靶向关系,将miR-195mimic和miR-497 mimic转染至3%CSE处理的细胞中,qRT-PCR检测SMAD7的表达。将miR-195 mimic、miR-497 mimic和si-SMAD7转染至3%CSE处理的细胞中,qRT-PCR检测miR-195、miR-497、SMAD7、TGF-β的基因表达,Western blotting检测SMAD7、TGF-β的蛋白表达。结果3%CSE组miR-195、miR-497 mRNA相对表达量低于正常细胞组(P<0.05),SMAD7、TGF-βmRNA相对表达量高于正常细胞组(P<0.05)。miR-195 mimic组Wt-SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-195 mimic组与mimic NC组Wt-SMAD7 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-497 mimic组WtSMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-497 mimic组与mimic NC组Mut-SMAD7mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-195 mimic组SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-497 mimic组SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。3%CSE组细胞miR-195和miR-497相对表达量较Control组下降(P<0.05),SMAD7及TGF-β蛋白相对表达量升高(P<0.05);miR-195 mimic+3%CSE组细胞miR-195相对表达量较3%CSE组升高(P<0.05),SMAD7、TGF-β下降(P<0.05),而miR-497相对表达量无明显差异(P>0.05);miR-497 mimic+3%CSE组细胞miR-497相对表达量较3%CSE组升高(P<0.05),SMAD7、TGF-β下降(P<0.05),而miR-195相对表达量无明显差异(P>0.05);si-SMAD7+3%CSE组SMAD7、TGF-β蛋白相对表达量较3%CSE组下降(P<0.05),而miR-195、miR-497无明显差异(P>0.05)。3%CSE组SMAD7、TGF-β蛋白相对表达量较Control组升高(P<0.05),miR-195 mimic+3%CSE组、miR-497 mimic+3%CSE组、si-SMAD7+3%CSE组较3%CSE组下降(P<0.05)。结论miR-195/497可通过调控SMAD7的表达影响CSE诱导的人支气管上皮细胞中TGF-β表达。

血清miR-195-5p和DRD1在妊娠期糖尿病合并高血压孕妇中的表达水平及意义

目的探讨血清miR-195-5p和DRD1在妊娠期糖尿病合并高血压孕妇中的表达水平及意义。方法前瞻性选取2022年2月至2023年1月在本院定期产前检查并分娩的GDM患者269例,根据患者是否并发HDP,将患者分为GDM组(n=171)和GDM-HDP组(n=98),另选取正常健康的孕妇100例作为对照组。采用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖,qRT-PCR检测血清中miR-195-5p和DRD1相对表达水平,观察对照组、GDM组及GDM-HDP组的miR-195-5p、DRD1及空腹血糖水平;观察不同疾病严重程度血清miR-195-5p、DRD1及空腹血糖水平;Logistic回归模型分析GDM合并HDP的影响因素;Spearman秩相关分析血清miR-195-5p、DRD1和空腹血糖的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-195-5p、DRD1在GDM合并HDP中的诊断价值。结果与对照组相比,GDM组和GDM-HDP组中miR-195-5p的水平明显降低(P<0.001),DRD1及空腹血糖水平明显升高(P<0.001);与GDM组相比,GDM-HDP组中miR-195-5p的水平显著降低(P<0.001),DRD1及空腹血糖水平显著升高(P<0.001);GDM-HDP组患者血清中miR-195-5p水平明显高于轻度子痫前期、重度子痫前期患者,轻度子痫前期患者血清miR-195-5p水平显著高于重度子痫前期患者(P<0.001);GDM-HDP组患者血清中DRD1及空腹血糖水平明显低于轻度子痫前期、重度子痫前期患者,轻度子痫前期患者血清DRD1及空腹血糖水平显著低于重度子痫前期患者(P<0.001);miR-195-5p是GDM合并HDP发生的保护因素(P<0.001),而DRD1和空腹血糖是GDM合并HDP发生的危险因素(P<0.001);miR-195-5p与空腹血糖呈负相关(r=-0.276,P<0.001),DRD1与空腹血糖呈正相关(r=0.309,P<0.001);血清miR-195-5p诊断GDM合并HDP的AUC值为0.826,95%CI为0.769~0.883,血清DRD1诊断GDM合并HDP的AUC值为0.884,95%CI为0.837~0.929,miR-195-5p和DRD1联合诊断AUC值为0.952,95%CI为0.924~0.981,miR-195-5p和DRD1联合检测的AUC值、灵敏度、准确性明显高于miR-195-5p和DRD1单独检测,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论GDM合并HDP患者血清中miR-195-5p明显降低,DRD1显著升高,与GDM合并HDP发生密切相关,且miR-195-5p和DRD1联合检测诊断GDM合并HDP时具有较高的临床价值。

补中益气汤加减辅助治疗脑梗死恢复期患者的临床疗效、预后与同型半胱氨酸、胰岛素样生长因子-1、miR-195水平的相关性研究

目的探讨同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)、胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)、miR-195与脑梗死恢复期患者应用补中益气汤加减辅助治疗疗效及预后的关系。方法选取2018年1月—2021年1月期间驻马店市中医收治的脑梗死恢复期患者118例作为研究对象,均给予补中益气汤加减辅助治疗14 d,根据临床疗效分为治愈组24例、显效组39例、有效组46例、无效组9例;另对患者进行1年随访,通过改良Rankin评分量表(ModifiedRankin Scale,mRS)评估患者预后情况,mRS评分≤2分为预后良好组96例,mRS评分>2分为预后不良组22例。比较各组不同疗效Hcy、IGF-1、miR-195水平,采用Spearman法分析脑梗死恢复期患者血清Hcy、IGF-1及miR-195水平与疗效的相关性,多因素Logistic回归分析脑梗死恢复期补中益气汤加减辅助治疗预后的影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析Hcy、IGF-1及miR-195预测脑梗死恢复期补中益气汤加减辅助治疗预后不良的价值。结果118例患者经治疗后治愈的有24例,显效有39例,有效有46例,无效有9例,临床总有效率为92.37%(P<0.05)。与无效组比较,治愈组、显效组、有效组患者的Hcy、miR-195均更低、IGF-1均更高,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,Hcy、miR-195与疗效呈负相关,IGF-1与疗效呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,Hcy、miR-195是脑梗死恢复期补中益气汤加减辅助治疗预后不良的独立危险因素,而IGF-1是保护因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,Hcy、IGF-1及miR-195及三者联合检测的曲线下面积(AUC)分别为0.865、0.802、0.782、0.903。结论Hcy、IGF-1及miR-195水平与脑梗死恢复期补中益气汤加减辅助治疗疗效密切相关,且对预后具有一定的预测价值,可作为疗效及预后不良的预测因子。

葛根素对缺氧复氧损伤H9C2心肌细胞的保护作用及其与miR-195表达、Parthanatos死亡的相关性

目的:研究葛根素对于心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及其与miR-195表达及与PARP-1依赖性细胞死亡(Parthanatos)的相关性。方法:培养H9C2心肌细胞,分4组,分别为:正常对照组(Control)、缺氧复氧组(Hypoxia Reoxygenation,HR)、转染组(Transfection Group,TG)、葛根素组(Puerarin Group,PG),其中HR组、TG组、GP组均构建心肌细胞缺氧复氧模型,转染组预先转染沉默miR-195表达,葛根素组预先给药,浓度为50μmol/L,检测心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)的释放,细胞活力检测,通过qPCR法检测Parthanatos主要基因凋亡诱导因子(AIF)与多聚ADP核糖聚合酶-1(PARP-1)的表达。结果:相较于HR组,TG组与PG组细胞活力均提高,LDH含量均下降(均P<0.05);相较于正常组,HR组miR-195、AIF、PARP-1的表达显著上升(均P<0.05),TG组、PG组相较于HR组,miR-195、AIF、PARP-1的表达均显著降低(均P<0.05)。结论:H9C2心肌细胞H/R损伤过程中主要发生Parthanatos死亡,葛根素可能通过抑制miR-195的表达降低Parthanatos死亡。

miR-195对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的探讨miR-195对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法以人胃癌细胞系SGC-7901细胞株及BGC-823细胞株为研究对象,分别转染miR-195模拟物及抑制物。应用实时荧光定量PCR技术,检测转染后miR-195 mRNA的表达水平。通过CCK8方法检测miR-195对胃癌细胞增殖的影响。通过Transwell实验检测miR-195对胃癌细胞迁移和侵袭的影响。结果 (1)CCK8实验研究显示,与阴性对照(无关序列)相比,转染miR-195模拟物后,SGC-7901细胞的增殖能力减弱;转染miR-195抑制物后,BGC-823细胞的增殖能力明显增强。(2)Transwell小室实验研究显示,与阴性对照相比,转染miR-195模拟物后,SGC-7901细胞的迁移及侵袭能力明显下降;转染miR-195抑制物后,BGC-823细胞的迁移及侵袭能力明显增强。结论 miR-195在胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭中发挥重要的作用,miR-195可能成为治疗胃癌的靶基因。

miR-195在子宫内膜癌患者血浆和组织中的表达及临床意义

目的探讨miR 195在子宫内膜癌患者血浆样本和组织样本中的表达情况,以及与患者病理参数和预后的关系。方法选择120例子宫内膜癌患者的癌组织标本和相配对的癌旁组织标本,并采集患者术前血液样本。另选取60例子宫内膜正常的子宫肌瘤患者和60例健康体检正常者的血液样本。实时荧光定量PCR法检测所有标本中miR 195的表达量,统计分析与患者病理特征(包括年龄、肿瘤分化程度、FIGO分期、发病类型、浸润深度、淋巴结转移、病灶形态)和预后的关系。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,并计算血浆miR 195诊断子宫内膜癌的曲线下面积(AUC)。另绘制Kaplan Meier生存曲线。结果miR 195在子宫内膜癌组织中的表达量低于癌旁组织(t=8.996,P<0.05),并且与肿瘤分化程度、FIGO分期、发病类型、浸润深度有关(P<0.05);同样miR 195在子宫内膜癌患者血浆中的表达量低于子宫肌瘤组患者和健康者(F=8.996,P<0.05),且与肿瘤FIGO分期、发病类型、浸润深度有关(P<0.05)。经ROC曲线分析,血浆miR 195对子宫内膜癌诊断的AUC为0.732(95%CI:0.611~0.853),敏感度和特异度分别为71.5%和69.0%。绘制Kaplan Meier生存曲线,组织和血浆miR 195高表达亚组总生存期高于miR 195低表达亚组者(组织:Log rank χ^2=6.964,P=0.008;血浆:Log rank χ^2=3.195,P=0.047)。另组织和血浆miR 195(组织:HR=0.558,95%CI:0.501~0.726;血浆:HR=0.917,95%CI:0.874~0.982)均是子宫内膜癌患者术后生存的独立影响因素(P<0.05)。结论miR 195在子宫内膜癌组织和血浆中的表达均下调,有望成为子宫内膜癌诊断和预后判断的辅助指标。

miR-195-5p靶向FGF2抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞恶性生物学行为

目的:探讨miR-195-5p通过靶向FGF2抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的分子机制。方法:HEC-1B细胞培养与转染完成后分为4组:HEC-1B组、miR-195-5p mimic组、p LV-FGF2组和miR-195-5p+FGF2组。q RT-PCR检测细胞miR-195-5p和FGF2 m RNA水平,荧光素酶实验验证miR-195-5p与FGF2的靶向关系,Western blotting检测FGF2表达水平,CCK-8法检测HEC-1B细胞增殖水平,流式细胞术检测HEC-1B细胞凋亡率,Transwell实验检测HEC-1B细胞侵袭能力,划痕实验检测HEC-1B细胞迁移能力。结果:与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic组miR-195-5p表达升高、FGF2 m RNA水平下降(均P<0.01);miR-195-5p可直接靶向FGF2。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic组FGF2的蛋白表达水平下降,p LV-FGF2组FGF2的蛋白水平明显上升,且miR-195-5p+FGF2组FGF2的蛋白表达水平低于p LV-FGF2组(均P<0.01)。miR-195-5p mimic组细胞增殖水平低于HEC-1B组,p LV-FGF2组细胞增殖水平高于HEC-1B组(均P<0.01)。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic组细胞凋亡率增加,p LV-FGF2组细胞凋亡率降低,且miR-195-5p+FGF2组细胞凋亡率高于p LV-FGF2组(均P<0.01)。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率下降,p LV-FGF2组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率上升,且miR-195-5p+FGF2组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率低于p LV-FGF2组(均P<0.01)。结论:miR-195-5p通过靶向FGF2抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖、侵袭和迁移并促进细胞凋亡,其作为子宫内膜癌的治疗靶点。

缺氧预处理通过激活MALAT1靶向抑制miR-195促进骨髓间充质干细胞的生存和血管形成

背景:研究表明,缺氧预处理能够促进骨髓间充质干细胞生存和血管形成,但具体机制未完全明确。长链非编码RNA-MALAT1(MALAT1)和microRNA-195(miR-195)均被证实与骨髓间充质干细胞生存和血管形成密切相关,MALAT1促进骨髓间充质干细胞生存和血管形成,而miR-195是骨髓间充质干细胞生存和血管形成的负向调节因子。目的:体外探讨缺氧预处理是否通过激活MALAT1靶向抑制miR-195进而提高骨髓间充质干细胞生存和促血管形成能力。方法:将体外培养的骨髓间充质干细胞分为以下6组:常氧组(体积分数为20%O2)、缺氧组(体积分数为1%O2)、缺氧+si-MALAT1组、缺氧+si-MALAT1对照组、缺氧+miR-195组和缺氧+miR-195对照组,其中缺氧+si-MALAT1组和缺氧+si-MALAT1对照组细胞分别转染MALAT1 siRNA以及scramble阴性对照,再进行缺氧处理,缺氧+miR-195组和缺氧+miR-195对照组细胞分别转染miR-195模拟物及阴性对照,再进行缺氧处理。各组培养24 h后检测细胞增殖、凋亡以及血管腔样结构形成情况,qRT-PCR检测MALAT1和miR-195的表达。在上述基础上,通过生物信息学网站RegRNA 2.0预测MALAT1与miR-195的潜在结合位点,将MALAT1野生型和突变型质粒分别与miR-195模拟物以及阴性对照在293T细胞中共转染,通过检测各组萤光素酶活性对MALAT1与miR-195的靶向关系进行验证。结果与结论:①与常氧组相比,缺氧组细胞生存力显著增强,凋亡率明显减少,血管腔样结构数量增多(P<0.01),MALAT1表达升高,miR-195表达降低(P<0.01);②与缺氧组和缺氧+si-MALAT1对照组比较,缺氧+si-MALAT1组细胞生存力显著降低,凋亡率明显增加,血管腔样结构数量减少(P<0.01),MALAT1表达下降,miR-195表达升高(P<0.01);与缺氧组和缺氧+miR-195对照组比较,缺氧+miR-195组细胞生存力显著降低,凋亡率明显增加,血管腔样结构数量减少(P<0.01),MALAT1表达明显下降,miR-195表达升高(P<0.01);③双萤光素酶检测结果显示:与miR-195对照组和空白对照组相比,miR-195组MALAT1野生型报告基因的萤光素酶活性显著降低,下降约63%(P<0.01),而miR-195组、miR-195对照组以及空白对照组的萤光素酶活性在MALAT1突变型中均无明显差异性(P>0.05);④结果表明,缺氧预处理能够通过激活MALAT1靶向抑制miR-195提高骨髓间充质干细胞的生存和促血管形成能力。

重楼皂苷Ⅰ通过调控LncRNA CEBPA-AS1/miR-195-5p通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及促进细胞凋亡的初步研究

目的:探讨重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)是否通过调控长链非编码RNA CEBPA-AS1(LncRNA CEBPA-AS1)/微小RNA-195-5p(miR-195-5p)通路影响瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡。方法:原代培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,使用不同浓度的PPⅠ处理细胞,si-CEBPA-AS1、pcDNA-CEBPA-AS1分别转染至细胞;采用MTT检测细胞增殖;应用流式细胞仪检测细胞周期;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用qRT-PCR法检测LncRNA CEBPA-AS1、miR-195-5p的表达量;双荧光素酶报告实验检测LncRNA CEBPA-AS1与miR-195-5p的靶向关系。结果:与Control组比较,PPⅠ可明显降低细胞存活率、S期细胞比例、Bcl-2蛋白水平、LncRNA CEBPA-AS1的表达水平,提高G0/G1期细胞比例、凋亡率、miR-195-5p的表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-CEBPA-AS1组细胞存活率、S期细胞比例降低,G0/G1期细胞比例、凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实LncRNA CEBPA-AS1可靶向调控miR-195-5p;转染pcDNA-CEBPA-AS1可明显逆转PPⅠ对细胞增殖、细胞周期及凋亡的作用。结论:重楼皂苷Ⅰ可能通过下调LncRNA CEBPA-AS1的表达及上调miR-195-5p的表达从而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及促进细胞凋亡。

miR-195-5p靶向调控ELMO2抑制IL-17诱导的胃癌细胞AGS侵袭和迁移

目的:研究miR-195-5p调控吞噬细胞运动蛋白2(ELMO2)对白介素17(IL-17)诱导的胃癌细胞AGS侵袭和迁移的影响和机制。方法:以胃癌细胞AGS作为实验对象,转染miR-195-5p mimics,给予IL-17处理,qRT-PCR方法测定细胞中miR-195-5p表达;Transwell小室测定细胞侵袭和迁移能力;Western blot测定细胞中E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。生物信息学软件预测miR-195-5p的靶基因可能为ELMO2,双荧光素酶系统鉴定靶向关系。在胃癌细胞AGS中共转染miR-195-5p mimics、pcDNA3.1-ELMO2,检测细胞侵袭和迁移能力变化。结果:IL-17处理后的胃癌细胞AGS中miR-195-5p表达水平下调,细胞侵袭和迁移能力升高,细胞中E-cadherin蛋白表达水平下降,Vimentin蛋白表达水平升高。转染miR-195-5p mimics后的细胞经过IL-17处理以后,细胞中miR-195-5p表达水平升高,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高,Vimentin蛋白表达水平降低。miR-195-5p靶向负调控ELMO2表达。pcDNA3.1-ELMO2能够提高转染miR-195-5p mimics后的细胞侵袭和迁移能力。结论:miR-195-5p靶向负调控ELMO2抑制IL-17诱导的胃癌细胞AGS侵袭和迁移。

miR-195对胃癌MKN45细胞生物学行为的影响

目的研究过表达及抑制miR-195对胃癌MKN45细胞生物学行为的影响。方法将miR-195、miR-control、miR-195 inhibitor、inhibitor control分别转染至MKN45细胞,实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)检测胃癌MKN45细胞miR-195的表达水平。CCK-8实验、克隆形成实验检测miR-195及miR-195抑制剂对MKN45细胞活性的影响。流式细胞仪检测miR-195及其抑制剂对MKN45细胞周期的影响,Transwell小室检测miR-195及其抑制剂对MKN45细胞迁移能力的影响。结果RT-PCR结果显示,与转染miR-control相比,转染miR-195的MKN45细胞中miR-195表达水平显著提高,差异有统计学意义(P=0.040)。与转染inhibitor-control相比,转染inhibitor的MKN45细胞miR-195表达下降,差异有统计学意义(P=0.000)。CCK-8实验表明,miR-195能抑制MKN45细胞活性,miR-195抑制剂可提高MKN45细胞活性。克隆形成实验表明,miR-195能抑制MKN45细胞克隆形成能力,miR-195抑制剂可提高MKN45细胞克隆形成能力。细胞周期实验证明,miR-195转染MKN45细胞后,S期细胞减少(P<0.05)。Transwell小室实验提示miR-195能抑制MKN45细胞迁移,而miR-195抑制剂可促进MKN45细胞的迁移。结论miR-195可抑制胃癌MKN45细胞增殖,抑制细胞迁移。