LncRNA MINCR靶向miR⁃223抑制LPS诱导的人肺泡上皮细胞系A549损伤和炎性反应

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MINCR靶向调节微小RNA(miR)-223对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系损伤和炎性反应的影响。方法将人肺泡上皮细胞系A549随机分为对照组、LPS组、LPS+转染组(Si NC组、Si MINCR组、miR-223 NC组、miR-223 mimic组、Si NC+miR-223 NC组、Si NC+miR-223 antagomir组、Si MINCR+miR-223 NC组、Si MINCR+miR-223 antagomir组)。RT-qPCR检测MINCR、miR-223表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证MINCR与miR-223的靶向关系;Western blot检测细胞中活化的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果MINCR和miR-223存在靶向关系。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率、TNF-α、IL-6水平、MINCR、cleaved caspase-3蛋白表达均显著增加(P<0.05),miR-223、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。与Si NC组相比,Si MINCR组细胞凋亡率、TNF-α和IL-6水平、MINCR和cleaved caspase-3蛋白表达均显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05);与miR-223 NC相比,miR-223 mimic组细胞凋亡率、TNF-α和IL-6水平、cleaved caspase-3蛋白表达均显著降低(P<0.05),miR-223、Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05)。miR-223 antagomir可逆转Si MINCR发挥的作用(P<0.05)。结论沉默lncRNA MINCR的表达可能通过靶向激活miR-223表达,抑制A549细胞凋亡以及炎性反应,减少LPS诱导的A549细胞损伤。

黄芩苷通过调节miR⁃223⁃3p/NLRP3通路对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用

目的研究黄芩苷调节miR⁃223⁃3p/NOD样受体蛋白3(NLRP3)通路对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠的保护作用。方法构建脓毒症ALI大鼠模型,实验分为假手术组、模型组、地塞米松组、低剂量黄芩苷组、中剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组。酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠血清TNF⁃α(肿瘤坏死因子⁃α)、IL⁃1β(白细胞介素1β)、IL⁃10水平;苏木素⁃伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化;测定大鼠肺组织含水量及肺泡液体清除率(AFC);实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)测定各组大鼠肺组织miR⁃223⁃3p水平;蛋白印迹法测定各组大鼠肺组织NLRP3水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清IL⁃1β、TNF⁃α水平和WW/DW比值、肺组织NLRP3水平升高(P<0.05),血清IL⁃10水平和AFC值、肺组织miR⁃223⁃3p水平降低(P<0.05);同时模型组大鼠肺泡完整性破坏,肺泡萎陷,肺间质明显水肿,大量炎症细胞浸润,肺组织病理得分升高(P<0.05)。经黄芩苷治疗后,随着给药剂量增高,血清IL⁃1β、TNF⁃α水平和WW/DW比值、肺组织NLRP3水平降低(P<0.05),血清IL⁃10水平和AFC值、肺组织miR⁃223⁃3p水平升高(P<0.05),呈剂量依赖性;同时大鼠肺泡结构恢复,肺间质水肿缓解,炎症细胞浸润减少,肺组织病理评分降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论黄芩苷可通过下调促炎因子IL⁃1β、TNF⁃α水平,上调抑炎因子IL⁃10水平以缓解脓毒症ALI大鼠肺损伤,可能与miR⁃223⁃3p/NLRP3通路有关。

miR⁃223和miR⁃192在重症肺炎患儿血清中的表达意义

目的探讨微小RNA⁃223(miR⁃223)与微小RNA⁃192(miR⁃192)在重症肺炎患儿中的表达及其临床意义。方法选取120例肺炎患儿为研究组,根据儿童肺炎诊断标准将研究组分为轻度感染组、中度感染组与重度感染组,同时选取同期健康体检儿童120例为对照组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT⁃PCR)检测血清miR⁃223、miR⁃192的表达水平;采用免疫比浊法检测血清载脂蛋白E(ApoE)与C⁃反应蛋白(CRP)水平;化学发光法检测血清降钙素原(PCT)水平;Pearson法分析重症肺炎患儿血清miR⁃223、miR⁃192相关性及其两者表达与ApoE、CRP、PCT水平的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR⁃223、miR⁃192对重症肺炎的诊断价值。结果与对照组相比,研究组血清miR⁃223的表达水平显著升高,血清miR⁃192的表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与轻度感染组相比,中度感染组与重度感染组血清miR⁃223的表达水平显著升高,血清miR⁃192的表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,研究组血清ApoE、CRP、PCT水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,重症肺炎患儿血清中miR⁃223和miR⁃192表达呈负相关(r=-0.226,P<0.001)。重症肺炎患儿血清中miR⁃223表达与ApoE、CRP、PCT呈正相关(P<0.001),miR⁃192表达与ApoE、CRP、PCT呈负相关(P<0.001)。血清中miR⁃223诊断重症肺炎时的敏感度为84.00%,特异度为74.00%,AUC面积为0.862;miR⁃192诊断重症肺炎时的敏感度为88.00%,特异度为72.00%,AUC面积为0.868。结论重症肺炎患儿血清miR⁃223表达水平升高,miR⁃192的表达水平降低,且与肺炎严重程度有关,并可能作为早期诊断重症肺炎的分子标志物。

miR-223-3p通过靶向TGFBR3促进LncRNA ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞的增殖和迁移作用

目的:探讨miR-223-3p通过靶向转化生长因子-βⅢ型受体(TGFBR3)促进长链非编码RNA(LncRNA)ADAMTS9-AS2表达上调抑制肺癌细胞增殖和迁移的作用及可能机制。方法:采用RT-PCR检测肺癌H1299细胞中miR-223-3p和TGFBR3 mRNA表达水平,Western blotting检测TGFBR3的蛋白表达水平,RT-qPCR检测LncRNA ADAMTS9-AS2的表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。采用脂质体转染miR-223-3p模拟物(过表达组)、抑制剂(抑制组)、对照质粒(对照组)于H1299细胞中,比较各组转染前后miR-223-3p、TGFBR3、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平、细胞增殖能力、细胞迁移能力。结果:与转染前比较,过表达组转染后的H1299细胞中miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均升高(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均降低(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力下降(P<0.05);抑制组转染后的细胞中miR-223-3p和LncRNA ADAMTS9-AS2表达水平均降低(P<0.05),TGFBR3蛋白和mRNA表达水平均升高(P<0.01和P<0.05),细胞增殖和迁移能力均增加(P<0.05)。转染72 h后,TGFBR3蛋白表达水平及mRNA的表达水平细胞增殖与迁移能力:抑制组>观察组>过表达组(P<0.01)。3组miR-223-3p、LncRNA ADAMTS9-AS2 mRNA表达水平逐渐降低,抑制组<对照组<过表达组(P<0.01)。结论:miR-223-3p抑制肺癌H1299细胞的增殖和迁移,靶向下调TGFBR3和上调LncRNA ADAMTS9-AS2表达可能为其作用机制。

miR-223-3p与ECT2表达在食管鳞状细胞癌组织中的相关性及与其预后的关系

目的探讨miR-223-3p与ECT2表达在食管鳞状细胞癌中的相关性及与其预后的关系。方法纳入85例食管鳞状细胞癌的石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织、相应的正常食管黏膜组织。实时荧光定量PCR检测miR-223-3p与ECT2 mRNA水平,Pearson相关系数分析miR-223-3p与ECT2 mRNA表达水平的相关性。Kaplan-Meier生存分析和Cox比例风险模型分析miR-223-3p、ECT2表达对食管鳞状细胞癌预后的影响。结果ECT2高表达食管鳞状细胞癌患者46例,ECT2低表达食管鳞状细胞癌患者39例。ECT2 mRNA表达水平食管鳞状细胞癌组织高于正常食管黏膜组织,miR-223-3p表达水平食管鳞状细胞癌组织低于正常食管黏膜组织。ECT2表达水平与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、血管侵犯相关。miR-223-3p表达水平与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、血管侵犯相关。此外,食管鳞状细胞癌中miR-223-3p与ECT2 mRNA表达存在相关性(ρ=-0.5223,P<0.0001),miR-223-3p与ECT2蛋白表达存在相关性(χ^(2)=21.56,P<0.0001)。Kaplan-Meier生存分析显示:TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平对食管鳞状细胞癌患者的总生存期有影响。Cox比例风险模型发现TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平对总生存期有影响。结论miR-223-3p与ECT2的表达水平在食管鳞状细胞癌中存在相关性。TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平可作为ESCC的独立预后因素。

miR-223对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的影响

以中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞(dairy cow mammary epithelial cell,DCMECs)为研究模型,探讨mi R-223对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的DCMECs炎症反应与乳脂合成的影响。应用Western blot检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)与脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)的表达情况,通过脂质体转染技术将mi R-223转染至DCMECs,qRT-PCR检测mi R-223的相对表达量,采用原位荧光技术分别检测DCMECs的凋亡与乳脂合成能力。结果表明LPS诱导DCMECs炎症反应的最佳浓度为1μg/m L;添加LPS可促进DCMECs mi R-223的表达;DCMECs转染mi R-223后,mi R-223的表达显著上调;mi R-223可下调LPS诱导的DCMECs炎症蛋白因子TNF-α,上调乳脂合成相关蛋白FASN,抑制LPS诱导的细胞凋亡,促进LPS诱导的乳脂合成。

miR-223调控NLRP3抑制心力衰竭大鼠心肌纤维化机制

目的研究miR-223调控Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein3,NLRP3)抑制心力衰竭(heart failure,HF)大鼠心肌纤维化的机制。方法选取54只成年Wistar大鼠,采用腹主动脉缩窄法建立大鼠充血性HF动物模型,按照随机数字表法将其分为对照组、HF组、HF+miR-223过表达组,每组各18只。HF+miR-223过表达组尾静脉注射miR-223mimics,72h转染成功后,应用动物心脏彩超检测各组大鼠心功能相关指标,即舒张末期室间隔厚度(interventricular septal thickness at end-diastole,IVSd)、舒张末期左心室后壁厚度(left ventricular posterior wall thickness at end-diastolic,LVPWd)、左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter,LVEDd)、左心室收缩末期内径(left ventricular end systolic diameter,LVED)和射血分数(leftventricularejectfraction,LVEF)。计算测定心/体比、肺/体比;检测各组大鼠心肌组织中miR-223、NLRP3、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Collagen-3、Collagen-1、Bax和Bcl-2的表达情况。结果HF组心功能较对照组更差,NLRP3、IL-1β、TNF-α、Collagen-1、Collagen-3和Bax表达高于对照组,miR-223、Bcl-2表达低于对照组(P<0.05),心肌间质纤维化程度明显加重。HF+miR-223过表达组心功能较HF组好转,NLRP3、IL-1β、TNF-α、Collagen-1、Collagen-3、Bax表达低于HF组,miR-223、Bcl-2表达高于HF组,心肌间质纤维化程度明显减轻。结论miR-223可通过作用于其靶标NLRP3抑制Collagen-1、Collagen-3的表达,在HE心肌纤维化的发生、发展过程中起到重要作用。

miR-223-3p调节TLR4/MyD88/NF-κB通路影响脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应

目的:探讨miR-223-3p对脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应的影响。方法:实验分成2部分,每个部分分为2组,共4组:miRNA阴性对照(mimic NC)+LPS组,miR-223-3p模拟物(miR-223-3p mimic)+LPS组;miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组,miR-223-3p mimic+等量溶剂(vehicle)+LPS组。随后利用Western blot实验检测每组TLR4/MyD88/NF-κB表达水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测促炎细胞因子水平,CCK-8法检测细胞活力。结果:与mimic NC+LPS组相比,miR-223-3p mimic+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。与miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组相比,miR-223-3p mimic+vehicle+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。结论:miR-223-3p可以通过抑制TLR4/My D88/NF-κB促进A549细胞增殖、抑制促炎细胞因子的分泌,从而抑制肺癌中炎症的发生,本研究为今后临床上肺癌的治疗及药物开发提供了新策略。

酸枣仁皂苷A通过miR-223-3p/SGK1/NLRP3轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中的保护作用

目的 探讨酸枣仁皂苷A通过miR-223-3p/血清和糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中的保护作用及潜在机制。方法 通过盲肠结扎和穿刺(CLP)诱导脓毒症动物模型。通过酸枣仁皂苷A治疗实验动物,苏木精和伊红染色分析组织病理学变化。相应试剂盒分析肾损伤指标(血清BUN、SCr和NGAL水平)和血清炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的水平。生信分析miR-223-3p在脓毒症患者中的表达及其与炎症反应因子的相关性,预测miR-223-3p与SGK1的结合位点。双荧光素酶实验验证miR-223-3p与SGK1的结合关系。构建脂多糖(LPS)诱导的HK2细胞的体外模型。荧光实时定量PCR(qPCR)检测miR-223-3p在患者血清或LPS处理的HK-2细胞中的表达。脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹检测中BCL2相关的X(BAX)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和裂解的半胱氨酸蛋白酶(cleaved caspase-3)的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清或细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的水平。qPCR和蛋白质免疫印迹法检测不同处理组HK-2细胞中SGK1的表达,蛋白质免疫印迹检测不同处理组HK-2细胞中NLRP3的表达。结果 酸枣仁皂苷A治疗可以降低脓毒症小鼠急性肾小管坏死评分,减轻肾损伤。血清血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平降低,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平亦下降。酸枣仁皂苷A治疗可以降低脓毒症小鼠肾脏组织中miR-223-3p的表达水平。生信分析和临床样本分析显示,miR-223-3p在脓毒症患者中高表达。细胞实验结果显示,miR-223-3p在LPS处理的HK-2细胞中呈高表达。miR-223-3p促进LPS诱导的HK-2细胞凋亡和炎症反应,这种促进作用是由miR-223-3p通过负调控SGK1/NLRP3介导的。结论 酸枣仁皂苷A可能通过miR-223-3p/SGK1/NLRP3轴在脓毒症小鼠肺上皮细胞损伤中发挥保护作用,可能为脓毒症治疗提供新的治疗靶点。

TLR4/miR-223/NLRP3信号通路的表达与脑卒中后抑郁大鼠海马炎症反应的关系

目的探究Toll样受体4(TLR4)/miR-223/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路的表达与脑卒中后抑郁(PSD)大鼠海马炎症反应的关系。方法30只3月龄SPF级健康雄性Sprague-Dawley大鼠分为假手术组,PSD模型组和TLR4抑制剂组,各10只。PSD模型组和TLR4抑制剂组建立PSD模型,TLR4抑制剂组给予0.3 mg/kg的TAK-242溶液腹腔注射,其余各组均腹腔注射等体积的生理盐水溶液,5次/周,连续4周。评定各组大鼠的神经行为学,ELISA法检测血清白介素-1β(IL-1β)和IL-10的表达水平,RT-PCR测定海马组织中TLR4/miR-223/NLRP3信号通路相关基因的表达,Western blot测定TLR4/miR-223/NLRP3信号轴蛋白的相对表达。结果与假手术组相比,PSD模型组和TLR4抑制剂组大鼠Longa评分以及血清IL-1β和IL-10的表达升高,糖水偏嗜比(SP)、移动情况(LA)显著降低(P<0.05);与PSD模型组相比,TLR4抑制剂组大鼠Longa评分以及血清IL-1β和IL-10的表达表达下降、LA和SP升高(P<0.05)。与假手术组相比,PSD模型组大鼠海马组织中TLR4 mRNA、miR-223和NLRP3 mRNA以及TLR4、NLRP3、IL-1β和IL-10蛋白的相对表达均显著升高(P<0.05);与PSD模型组相比,TLR4抑制剂组的TLR4 mRNA和NLRP3 mRNA以及TLR4、NLRP3、IL-1β和IL-10蛋白的相对表达显著降低,miR-223的表达显著升高(P<0.05)。结论TLR4/miR-223/NLRP3信号转导通路与PSD海马炎症反应密切相关,通过调控TLR4/miR-223/NLRP3信号转导通路可能成为临床防治PSD的新靶位和新思路。

COPD患者肺泡灌洗液来源外泌体通过miR-223-3p/FOXO3通路抑制成骨细胞成骨分化的作用

目的探索慢性阻塞性肺病患者肺泡灌洗液来源的外泌体(COPD-bronchoalveolar lavage fluid-exosome,COPD-Exo)调控成骨细胞分化的作用及机制。方法选取2023年6月于陆军军医大学第一附属医院就诊的6例COPD患者和6例非COPD患者(对照),在临床肺泡灌洗过程中收集肺泡灌洗液,提取COPD-Exo、非COPD患者肺泡灌洗液来源的外泌体(ctrl-bronchoalveolar lavage fluid-exosome,Ctrl-Exo),使用电镜和Western blot进行鉴定。使用茜素红染色、qRT-PCR检测COPD-Exo干预成骨细胞后成骨分化水平的改变。对GEO数据库数据集(GSE218571)中COPD-Exo的微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱进行生物信息学分析,获得COPD-Exo中差异表达的miRNA,使用Antagomir阻碍MircoRNA功能,明确具有成骨分化调控功能的miRNA,使用Targetscan软件预测miRNA的下游靶基因并进行验证。结果COPD患者和非COPD患者的肺泡灌洗液内均可提取出外泌体。茜素红染色及PCR结果表明,COPD-Exo可以抑制人hFOB 1.19成骨细胞的成骨分化(P<0.05)。生物信息学分析显示,COPD-Exo中miR-223-3p表达水平显著上调。使用Antagomir阻碍miR-223-3p可减轻COPD-Exo对于人hFOB 1.19成骨细胞的成骨分化抑制(P<0.05)。Targetscan预测和Western blot结果显示miR-223-3p可能靶向抑制成骨分化相关因子FOXO3的表达(P<0.05)。结论COPD-Exo可能通过miR-223-3p抑制人hFOB 1.19成骨细胞的成骨分化,该过程与miR-223-3p抑制FOXO3表达有关。

未足月胎膜早破孕妇血清中miR-223-3p的表达水平及临床意义

目的 探讨miRNA-223-3p(miR-223-3p)在未足月胎膜早破(PPROM)孕妇血清中的表达水平及临床意义。方法 选取2023年4~9月徐州医科大学附属徐州妇幼保健院行剖宫产术分娩的孕妇91例,其中PPROM孕妇60例及同期足月正常孕妇31例(正常组)作为观察对象。根据胎膜病理结果将观察组分为:未足月胎膜早破(PPROM)未合并HCA组(PPROM组,n=37);PPROM合并HCA组(PPROM+HCA组,n=23)。收集入院治疗前孕妇血清样本,实时荧光定量(qRT)-PCR法检测血清中miR-223-3p的表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等炎症因子水平。结果 PPROM+HCA组血清中miR-223-3p的表达水平较PPROM组、正常组显著增加(P <0.05)。PPROM+HCA组血清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平较PPROM组、正常组显著增加(P <0.05)。PPROM+HCA组孕妇血清中miR-223-3p的表达水平与IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达水平呈正相关(r=0.553、0.505、0438、0.656,P <0.05)。结论 miR-223-3p在PPROM+HCA孕妇血清中表达上调,与PPROM的炎症严重程度有关。

2型糖尿病患者外周血miR-223与2型糖尿病周围神经病变相关性分析

目的 分析miR-223与糖尿病周围神经病变的相关性。方法 收集2020年12月至2022年5月138例2型糖尿病患者的临床资料,根据是否发生周围神经病变,将患者分为2组,2型糖尿病组77例;2型糖尿病伴周围神经病变组61例。通过实时定量PCR方法检测所有患者血清miR-223的表达水平,ELISA法测定所有患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。比较两组miR-223及TNF-α的差异。结果 与2型糖尿病组比较,miR-223及TNF-α在2型糖尿病伴周围神经病变组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析,miR-223预测糖尿病周围神经病变的敏感度67.2%,特异度76.6%(95%CI:0.634~0.809,P<0.05),miR-223联合糖尿病病程预测糖尿病周围神经病变的敏感度73.8%,特异度为77.9%(95%CI:0.750~0.889,P<0.05)。结论 2型糖尿病患者外周血miR-223可作为预测糖尿病周围神经病变的分子标志物,联合糖尿病病程诊断价值更高。

丹皮酚上调miR⁃223⁃3p减轻高糖诱导的小鼠心肌微血管内皮细胞损伤的研究

目的探讨丹皮酚(Pae)对高糖诱导的小鼠心肌微血管内皮细胞(MCMECs)的影响及其作用机制。方法建立HG诱导MCMECs体外模型,分为正常对照组(Con)组、高糖(HG)组、HG+Pae30μmol/L组(HG+Pae30)、HG+Pae60μmol/L组(HG+Pae60)、HG+Pae120μmol/L组(HG+Pae120)。将miR⁃NC、miR⁃223⁃3p mimics、anti⁃miR⁃NC、anti⁃miR⁃223⁃3p转染细胞,分为HG+miR⁃NC、HG+miR⁃223⁃3p组及HG+Pae60+anti(-)、HG+Pae60+anti(+)组。MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT⁃PCR检测miR⁃223⁃3p、NLRP3 mRNA表达。Western blot法检测Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、B淋巴细胞瘤⁃2(Bcl⁃2)、Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶⁃3(Caspase⁃3)蛋白表达。结果60μmol/L Pae改善高糖诱导细胞损伤,用于后续实验。与Con组比较,HG组NLRP3 mRNA、NLRP3、Bax、Caspase⁃3蛋白升高(P<0.05),miR⁃223⁃3p、Bcl⁃2蛋白表达降低(P<0.05)。与HG组比较,HG+Pae60组miR⁃223⁃3p、Bcl⁃2蛋白表达升高(P<0.05),NLRP3 mRNA、NLRP3、Bax、Caspase⁃3蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+miR⁃NC组比较,HG+miR⁃223⁃3p组细胞活力、Bcl⁃2蛋白表达升高(P<0.05),细胞凋亡率、NLRP3、Bax、Caspase⁃3蛋白表达降低(P<0.05);与HG+Pae60+anti(-)组比较,HG+Pae60+anti(+)组细胞凋亡率、NLRP3、Bax、Caspase⁃3蛋白表达升高(P<0.05),细胞活力、Bcl⁃2蛋白表达降低。结论Pae可能通过上调miR⁃223⁃3p减轻高糖诱导内皮细胞损伤,并抑制其凋亡。

解毒复正汤通过干扰miR-223-3p并靶向调控TGFBR3影响肺癌侵袭转移的实验研究

目的探讨解毒复正汤(JieduFuzhengdecoction,JDFZ)通过影响微小核糖核酸-223-3p(Mircro ribonucleic acid-223-3p,miR-223-3p)靶向调控转化生长因子β受体3(Transforming growth factorβReceptor3,TGFBR3)的表达及其对肺癌细胞迁移的影响。方法利用RT-qPCR技术检测肺腺癌患者癌组织及癌旁组织、肺腺癌患者及健康人外周血清中miR-223-3p表达水平的差异;并检测不同种类的NSCLC细胞系肺癌细胞(95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460)以及人肺上皮细胞BEAS-2B中miR-223-3p的本底表达量,从组织、血浆及细胞3个维度验证miR-223-3p的差异性。利用生物信息学网站重叠分析,初步预测到miR-223-3p与TGFBR33’UTR具有潜在的结合位点序列。接着运用双荧光素酶报告基因实验验证miR-223-3p与TGFBR3的靶向关系。体外培养肺癌A549细胞,采用脂质体法分别将miR-223-3p-过表达序列(miR-223-3p-mimics)及携带TGFBR3全基因的重组载体(Over-expression-TGFBR3,OE-TGFBR3)分别转染至肺癌细胞,以转入无关序列的模拟剂(Negative control-mimics,NC)作为对照组,收集各组稳转细胞,Transwell小室检测转染处理后及JDFZ作用后的细胞迁移能力;收集各组细胞蛋白,蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测细胞中EMT相关蛋白的表达。结果肺癌组织中miR-223-3p的表达量显著低于癌旁组织;肺癌患者血浆miR-223-3p表达水平明显低于健康正常人。不同种类的NSCLC细胞系肺癌细胞(95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460)中的miR-223-3p表达量亦低于正常人肺上皮细胞BEAS-2B。利用生物信息学网站及荧光素酶报告基因实验证实了miR-223-3p与TGFBR3的靶向调控关系。与miR-223-3p NC组对比,miR-223-3p mimics组和miR-223-3p mimics+OE-TGFBR3组的细胞迁移能力均下降(P<0.05),上调TGFBR3和加入解毒复正汤均能有效增强miR-223-3p对A549细胞迁移的负向调节作用;Westenblot结果发现,与miR-223-3p NC组对比,miR-223-3p mimics组和miR-223-3p mimics+OE-TGFBR3组E-Cadherin的表达水平上调,NCadherin及Vimentin的表达水平下升(P<0.05),两组均在不同程度上抑制EMT的发生;上调TGFBR3和加入解毒复正汤作用能有效增加miR-223-3p对细胞迁移相关蛋白的负向调节作用(P<0.05)。结论解毒复正汤对肺癌A549细胞的侵袭迁移有抑制作用,其机制可能是通过调节miR-223-3p并靶向调控TGFBR3及其下游EMT相关指标的表达来实现的。

STAT1诱导的LINC00987调节miR-223-3p/FZD4促进人胶质母细胞瘤相关巨噬细胞向M2型极化

目的本研究旨在探讨STAT1激活的LINC00987对人胶质母细胞瘤(GBM)相关巨噬细胞向M2型极化的影响。方法通过GEO数据库分析筛选出GBM中表达失调的lncRNAs。RT-qPCR检测LINC00987、miR-223-3p、卷曲蛋白4基因(FZD4)的表达。将人单核细胞白血病细胞系THP-1分别诱导成M0、M1、M2型巨噬细胞,并将GBM细胞与THP-1细胞共培养,流式细胞测量术检测CD14^(+)/CD206^(+)巨噬细胞的占比,ELISA检测M2型巨噬细胞相关因子(VEGF、TGF-β1)的表达。结果相对于癌旁组织和人正常神经胶质细胞系HEB,GBM组织和细胞中的LINC00987、FZD4表达上调而miR-223-3p表达下调(P<0.05)。在GBM细胞中,STAT1能够激活LINC00987并影响miR-223-3p/FZD4轴。过表达LINC00987能够促进GBM相关巨噬细胞向M2型极化(P<0.05)。敲减LINC00987则能够抑制GBM相关巨噬细胞向M2型极化,但该作用能被miR-223-3p抑制剂部分挽救(P<0.05)。敲减FZD4能够抑制GBM相关巨噬细胞向M2型极化,但该作用能被过表达LINC00987部分挽救(P<0.05)。结论STAT1激活的LINC00987调节miR-223-3p/FZD4轴诱导GBM相关巨噬细胞向M2型极化。

转甲状腺素蛋白介导STAT4/miR-223-3p/FBXW7通路对高糖诱导的人视网膜内皮细胞新生血管生成的影响

目的分析转甲状腺素蛋白(TTR)介导信号转导和转录激活因子4(STAT4)/miR-223-3p/F-box WD重复蛋白7(FBXW7)通路对高糖(HG)诱导的人视网膜内皮细胞(hRECs)新生血管生成的影响。方法将hRECs分为对照组、HG组、HG+TTR组、HG+NC mimic组、HG+miR-223-3p mimic组和HG+TTR+miR-223-3p mimic组。生物信息学分析STAT4与miR-223-3p的靶向关系,并采用双荧光素酶报告实验进行验证。ELISA检测细胞中TTR水平,RT-PCR检测miR-223-3p水平,CCK-8法检测细胞增殖,血管生成实验分析血管生成率,Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)、TTR、STAT4和FBXW7蛋白表达。结果与对照组相比,HG组hRECs中TTR水平升高(P<0.05)。培养24 h时,与HG组相比,HG+TTR组细胞活力明显下降(P<0.05)。与HG组血管生成率(38.12±4.91)%相比,HG+TTR组hRECs血管生成率[(19.46±2.12)%]明显较小(P<0.05)。与HG+NC mimic组相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p表达上调,细胞活力增加(均为P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p表达下调,细胞活力下降(均为P<0.05)。与HG+NC mimic组血管生成率(40.11±4.10)%相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs血管生成率[(61.52±6.25)%]增多(P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs血管生成率[(42.24±4.33)%]减少(P<0.05),且与HG+NC mimic组比较差异无统计学意义(P>0.05)。生物信息学分析结果显示,STAT4与miR-223-3p启动子区域相互作用。与HG组相比,HG+TTR组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均降低,FBXW7和VEGF蛋白表达均升高(均为P<0.05);与HG+TTR组相比,HG+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均升高,FBXW7和VEGF蛋白表达均降低(均为P<0.05);与HG+miR-223-3p mimic组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、STAT4蛋白表达均降低,FBXW7和VEGF蛋白表达均升高(均为P<0.05);与HG+TTR组相比,HG+TTR+miR-223-3p mimic组hRECs中miR-223-3p、VEGF、STAT4和FBXW7蛋白表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论TTR可能通过调节STAT4/miR-223-3p/FBXW7通路抑制HG诱导的hRECs的血管生成。

Circ-CDYL通过miR-223-3p/PHF19轴调节多发性骨髓瘤对硼替佐米的敏感性

目的 探讨环状RNA Circ-CDYL调节多发性骨髓瘤(MM)对硼替佐米(BTZ)的敏感性,以及对miR-223-3p/PHD锌指蛋白19(PHF19)轴的影响。方法 收集盐城市第三人民医院118例MM患者血清标本,其中60例患者未接受任何化疗(BTZ敏感组),58例患者接受BTZ治疗并产生化疗耐药性(BTZ耐药组),比较两组Circ-CDYL及miR-223-3p、PHF19的表达情况。将MM1.R细胞根据细胞转染情况分为C组、sh-Circ-C组、sh-Circ-CDYL组、sh-Circ-CDYL+anti-miR-223-3p组和sh-Circ-CDYL+pcDNA-PHF19组,对5组细胞进行相应转染。采用荧光定量PCR(RT-qPCR)测定Circ-CDYL、miR-223-3p和PHF19 mRNA水平,CCK-8法测定MM1.R细胞活性。采用克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,采用免疫印迹法(Western blotting)检测凋亡蛋白[增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67、剪切化半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3(C-caspase 3)]及PHF19蛋白的表达水平,采用双荧光素酶报告基因实验检测Circ-CDYL与miR-223-3p/PHF19的靶向关系。结果 Circ-CDYL和PHF19在BTZ耐药组患者血清标本和MM1.R细胞中均呈高表达(P<0.05),miR-223-3p呈低表达(P<0.05)。下调Circ-CDYL表达下调Circ-CDYL表达可明显降低MM1.R细胞对BTZ的半数抑制浓度(IC_(50)),抑制增殖活力,使凋亡蛋白PCNA、Ki67表达水平均下调,细胞凋亡率、C-caspase 3蛋白表达水平上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-223-3p或过表达PHF19可部分逆转敲低Circ-CDYL后的MM1.R细胞对BTZ敏感性(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-223-3p可抑制Circ-CDYL、PHF19的表达,Circ-CDYL、PHF19是miR-223-3p的靶基因。结论 敲低Circ-CDYL可通过miR-223-3p/PHF19轴而提高MM1.R细胞对BTZ的敏感性。

STAT3通路调控miR-223抑制NLRP3表达对脓毒症炎症反应的影响及作用机制

目的:探讨STAT3通路调控miR-223抑制NLRP3表达对脓毒症炎症反应的影响及作用机制。方法:50只SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-NC组、miR-223组和miR-223抑制剂组,每组10只。观察各组大鼠肝、肺组织病理形态;检测各组大鼠肝、肺组织miR-223表达、血清炎症细胞因子表达、肝、肺组织STAT3、NLRP3蛋白表达。结果:与对照组相比,其余各组大鼠肝、肺组织结构均被破坏,miR-223组较优于模型组。模型组大鼠肝、肺组织miR-223表达降低(P<0.05)。与对照组相比,其余各组TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,IL-10水平降低。与模型组相比,miR-223组、miR-NC组TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,IL-10水平升高(P<0.05)。与对照组相比,其余各组大鼠肝、肺组织STAT3蛋白表达降低,NLRP3蛋白表达升高(P<0.05),与模型组相比,miR-NC组、miR-223组、miR-233抑制剂组STAT3表达升高,NLRP3蛋白表达降低(P<0.05);与miR-233组相比,miR-233抑制剂组STAT3蛋白表达升高,NLRP3蛋白表达降低(P<0.05)。结论:STAT3通路调控miR-223抑制NLRP3信号通路抑制脓毒症大鼠炎症反应。

外泌体转运miR-223改善创伤性脑损伤的作用和机制

目的探究外泌体(Exo)转运miR-223对创伤性脑损伤(TBI)大鼠脑组织损伤与小胶质细胞活化的影响及机制。方法通过脂质体法分别将miR-NC质粒、miR-223 mimic质粒转染至HEK293细胞,实时荧光定量PCR测定细胞中miR-223表达水平;提取转染后HEK293细胞Exo,通过透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析及Western blot对Exo进行鉴定,并采用实时荧光定量PCR测定Exo中miR-223表达水平;将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、NC-Exo组、miR-223-Exo组,每组10只。除假手术组外的3组大鼠均通过改良Feeney自由落体法制备TBI模型,NC-Exo组与miR-223-Exo组大鼠分别经尾静脉注射转染miR-NC质粒细胞来源的Exo、转染miR-223 mimic质粒细胞来源的Exo;2周后,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠脑组织病理学变化,尼氏(Nissl)染色检测各组大鼠尼氏体改变与分布情况,酶联免疫吸附实验(ELISA)测定各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平,免疫荧光双染法观察各组大鼠脑组织内Nod样受体蛋白3(NLRP3)与离子钙接头蛋白(Iba-1)表达,Western blot测定各组大鼠脑组织内NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白表达水平。结果细胞转染后,与对照组和miR-NC组比较,miR-223组细胞中miR-223相对表达量显著增加(P<0.05);分离的颗粒物具有典型的Exo形态,粒径峰值大约处于120 nm,Exo标志蛋白CD9、CD63及CD81均明显高表达,且miR-223相对表达量显著增加(P<0.05)。与模型组比较,miR-223-Exo组大鼠脑组织损伤现象得到改善,尼氏体形态恢复且数目增加,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平均降低(P<0.05),脑组织内NLRP3与Iba-1荧光染色强度减少(P<0.05),同时,脑组织内NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白相对表达量均下调(P<0.05)。结论Exo转运miR-223能够明显改善TBI大鼠脑组织损伤,抑制小胶质细胞激活,该作用可能与抑制NLRP3炎性小体活化相关。