清肾颗粒对大鼠NRK-52E细胞转分化模型miR-23b和PINK1/Parkin通路的影响

目的 探讨TGF-β1诱导大鼠NRK-52E细胞转分化模型中miR-23b对PINK1/Parkin通路的靶向调节机制,并阐明清肾颗粒含药血清对NRK-52E细胞转分化的干预机理。方法 采用超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱法对清肾颗粒进行全指纹图谱分析。构建TGF-β1诱导大鼠NRK-52E细胞转分化模型,转染siRNA后分为模拟物空载对照组、miR-23b-5p模拟物组、抑制剂空载对照组、miR-23b-5p抑制剂组,观察miR-23b-5p对PINK1表达量的影响。再将NRK-52E细胞分组为正常组、TGF-β1组、清肾颗粒组、miR-23b-mimic-NC组、miR-23b-mimic组、miR-23b-mimic+清肾颗粒组,Western blot法检测NRK-52E细胞中Pink1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin-1、P62、α-SMA蛋白表达,RT-qPCR法检测NRK-52E细胞中miR-23b-5p、Pink1、Parkin、Beclin-1、α-SMA mRNA的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-23b-5p与PINK1的靶向关系。结果 UPLC指纹图谱法鉴定出清肾颗粒中11个活性成分。miR-23b-5p过表达后,PINK1 mRNA表达量也显著增加(P<0.05);而miR-23b-5p表达沉默后,PINK1 mRNA表达量也显著减少(P<0.05)。双荧光素酶报告显示,Rno-miR-23b-5p能显著下调Rno-PINK1-WT荧光素酶活性(P<0.05),但未能下调突变Rno-PINK1-mut荧光素酶活性(P>0.05)。清肾颗粒含药血清干预实验发现,TGF-β1组的miR-23b-5p、Pink1、Parkin、Beclin-1、LC3Ⅱ表达及LC3Ⅱ/Ⅰ比值均明显低于正常组,P62和α-SMA表达明显高于正常组(P<0.05)。清肾颗粒组和miR-23b-mimic组的miR-23b-5p、Pink1、Parkin、Beclin-1、LC3Ⅱ表达及LC3Ⅱ/Ⅰ比值均明显高于TGF-β1组,P62和α-SMA表达明显低于TGF-β1组(P<0.05)。miR-23b-mimic+清肾颗粒组的表现更优于miR-23b-mimic组(P<0.05)。结论 清肾颗粒能够上调NRK-52E细胞内miR-23b-5p表达,并通过增强PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬活性,抑制NRK-52E细胞转分化进程。

血清miR-155、miR-23b在特发性肉芽肿乳腺炎和乳腺癌中的差异性表达及意义

目的 探讨miR-155、miR-23b在特发性肉芽肿乳腺炎(IGM)和乳腺癌(BC)鉴别诊断中的作用。方法 选取2018年10月至2021年11月我院收治的32例IGM患者(ICM组)和40例BC患者(BC组),所有患者均经活检确诊。另外纳入33例健康女性作为对照组。比较患者的临床资料。采用实时荧光定量PCR检测血清miRNAs表达水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-155、miR-23b对IGM和BC的诊断价值。采用Pearson相关系数法评估相关性。结果 3组CRP、WBC、Hb、Hct、CA19-9、CA15-3、CA125水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。IGM组患者血清miR-155、miR-16-5p、miR-21-5p、miR-210-3p、miR-222-3p、miR-29c-3p表达水平较对照组升高(P<0.001),血清miR-23b表达水平低于对照组(P<0.001);BC组患者血清中以上miRNAs表达水平均高于对照组(P<0.001)。BC组患者血清miR-155表达水平低于IGM组(P<0.001),血清miR-23b表达水平高于IGM组(P<0.001)。血清miR-155和miR-23b水平鉴别诊断IGM和BC的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.722(95%CI:0.601~0.843)、0.765(95%CI:0.657~0.874),敏感度分别为81.00%、77.50%,特异度分别为65.00%、59.40%;二者联合鉴别诊断的AUC为0.869(95%CI:0.786~0.951),敏感度和特异度分别为84.10%和92.50%。IGM组血清miR-155与WBC、CRP水平均呈正相关(P<0.05),而血清miR-23b与WBC、CRP水平均呈负相关(P<0.05)。结论 血清miR-155和miR-23b有助于区分IGM和BC,可成为IGM和BC早期鉴别诊断的靶标。

miR-146a、miR-23b水平与前列腺癌患者术前临床分期及预后的关系

目的 探索miR-146a、miR-23b表达水平与前列腺癌(PCa)患者术前临床分期及预后的关系。方法 选取2019年3月-2020年3月期间重庆市丰都县人民医院收治的70例PCa患者和70例良性前列腺增生症(BPH)患者,设为PCa组和BPH组,入组后分别进行前列腺组织取样,检测两组前列腺中miR-146a、miR-23b表达水平,分析miR-146a、miR-23b表达与PCa患者临床病理特征及预后的相关性。结果 PCa组miR-146a、miR-23b表达低于BPH组,差异有统计学意义(P<0.05);术前PCa患者miR-146a、miR-23b水平随Gleason评分和临床T分期升高而逐次下降(P<0.05);PCa患者术前存在淋巴结转移者miR-146a、miR-23b水平低于无转移者,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,PCa患者术前前列腺组织miR-146a、miR-23b表达水平分别与临床分期呈现负相关(r=-0.758、-0.760,均P<0.05);截止随访,预后不良的PCa患者miR-146a、miR-23b低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-146a、miR-23b联合检测预测PCa预后AUC高于单一检测指标(P<0.05)。结论 PCa患者前列腺组织中miR-146a、miR-23b表达较低,且与临床分期相关,miR-146a、miR-23b表达水平对患者不良预后有一定预测价值。

miR-23b通过靶定TAB2/3抑制糖尿病肾病纤维化

MicroRNAs(miRNAs)通过与靶基因的相互作用发挥其生物学功能.miR-23b作为抑癌基因,参与了许多肿瘤和自身免疫疾病的发生过程,但其在糖尿病肾病中的作用尚不清楚.为了探讨miR-23b与靶基因TAB2/3作用对糖尿病肾病纤维化的影响,本实验通过建立糖尿病小鼠模型和糖尿病HK-2细胞模型,利用实时定量荧光PCR方法,检测糖尿病小鼠模型肾mRNA表达,发现miR-23b在糖尿病组(Dia组)表达低于正常组(P<0.001).利用Western印迹检测相关蛋白,结果显示,与正常组相比,TAB2/3,FN和α-SMA在糖尿病组高表达,并且TAB2/3在糖尿病组中持续高表达.利用基因转染技术过表达miR-23b可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制TAB2/3,P38和ERK1/2的表达,FN表达也显著降低.以上结果显示:miR-23b可能通过作用靶基因TAB2/3及其信号通路下游,抑制糖尿病肾病纤维化.

白果内酯调控LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴缓解肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤

目的探讨白果内酯对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤的保护作用及其对lncRNA LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴的调控作用。方法用肺炎链球菌诱导肺泡上皮细胞建立细胞损伤模型(感染组);分别转染si-NC、si-LEF1-AS1后,用肺炎链球菌感染细胞(感染+si-NC组和感染+si-LEF1-AS1组);pcDNA、pcDNA-LEF1-AS1分别转染至肺泡上皮细胞后用白果内酯与肺炎链球菌共同处理细胞(感染+白果内酯+pcDNA组和感染+白果内酯+pcDNA-LEF1-AS1组)。ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测LEF1-AS1、miR-23b-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测LEF1-AS1与miR-23b-3p的靶向关系;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果白果内酯能够降低肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平和LEF1-AS1的表达量(P<0.05),并可降低凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05),还可促进miR-23b-3p和Bcl-2表达(P<0.05),且呈剂量依赖性;LEF1-AS1可靶向调控miR-23b-3p;转染si-LEF1-AS1可降低TNF-α、IL-1β、IL-6的水平以及凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05),增加Bcl-2蛋白水平(P<0.05);转染pcDNA-LEF1-AS1能够逆转白果内酯对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎性因子及凋亡的作用。结论白果内酯可通过调控LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎性反应及凋亡,进而减轻细胞损伤。

miR-23b-3p调控脂蛋白(a)抑制同型半胱氨酸诱导的冠状动脉血管内皮细胞损伤

目的 探讨miR-23b-3p作为一种高效降低载脂蛋白（a）[apolipoprotein（a）,Apo（a）]的内源性miR,对高同型半胱氨酸引起的冠状动脉内皮细胞损伤抑制效果及作用机制。方法 通过生物信息学、miR芯片及基础实验筛选ETS1为靶基因,设计miR-23b-3p mimic/inhibitor。构建pmir GLOETS1 3＇-UTR质粒分6组转染人冠状动脉内皮细胞（human coronary artery endothelial cells,HCAECs）,分别为A组（pmirGLO-ETS1 3＇-UTR转染）、B组（miR-23b-3p inhibitor＋pmir GLO-ETS1 3＇-UTR转染）、C组（miR-23b-3p minics＋pmirGLO-ETS13＇-UTR转染）、D组（pmirGLO-ETS13＇-UTR mut转染）、E组（miR-23b-3p minics＋pmirGLO-ETS13＇-UTR mut转染）和F组（miR-23b-3p inhibitor＋pmirGLO-ETS13＇-UTR mut转染）,经双荧光素酶报告基因实验验证。HCAECs分为：对照组（无干预）、阴性对照组（miR-23b-3p inhibitor转染）和实验组（miR-23b-3p mimic转染）。3组细胞均置于含1. 0 mmol/L同型半胱氨酸（homocysteine,hcy）培养基中培养7 d。检测各组HCAECs存活率、miR-23b-3p和Apo（a） mRNA表达、akt、p-akt和eNOS蛋白表达。结果 双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p能够和ETS13＇-UTR直接结合,可得ETS1是miR-23b-3p直接靶基因。实验组HCAECs存活率（66. 22±5. 17）%、阴性对照组（42. 12±2. 35）%和对照组（38. 36±2. 21）%均显著低于正常HCAECs（P 〈0. 01）,实验组HCAECs存活率显著高于阴性对照组和对照组（P 〈0. 01）。转染后,实验组miR-23b-3p mRNA表达显著高于阴性对照组和对照组（P 〈0. 01）,实验组Apo（a） mRNA表达显著低于阴性对照组和对照组（P 〈0. 01）。转染后,实验组p-akt表达和eNOS蛋白相对表达显著高于阴性对照组和对照组（P 〈0. 01）。结论 miR-23b-3p能够以ETS1为靶基因,可能通过akt/eNOS信号通路下调hcy诱导损伤的内皮细胞中Apo（a）表达,从而保护冠状动脉血管内皮细胞。

胆酸通过上调miR-23b-3p抑制载脂蛋白A表达

目的分析胆酸降载脂蛋白A(Apo A)效应与miR-23b-3p的关系,研究胆酸降Apo A作用新机制。方法首先用生物信息学在线工具对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子肝细胞核因子4γ(HNF4γ)进行靶基因分析,使用荧光素酶报告系统对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子HNF4γ进行靶基因验证实验,Western blot检测Apo A表达水平、p38MAPK(MAPK:丝裂原活化蛋白激酶)及p-p38MAPK,实时定量PCR检测miR-23b-3p表达水平。结果生物信息学分析表明HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因,荧光素酶报告系统转染miR-23b-3p处理组细胞裂解后荧光强度显著低于对照组,验证了HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因。胆酸呈剂量和时间依赖性抑制Hep G2细胞Apo A的表达,以32 mg/L和24 h的作用最显著。胆酸抑制Apo A表达与活化MAPK和上调miR-23b-3p有关。结论胆酸呈剂量和时间依赖性地下调Hep G2细胞Apo A表达水平;胆酸降Apo A与上调miR-23b-3p有关。

敲降miR-23b通过靶向PTEN增强肺癌A549细胞的放疗敏感性

目的:探讨miR-23b/PTEN分子轴对肺癌A549细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法:选用人肺癌细胞系NCI-H1650、NCI-H175、Calu-1、LTEP-A-2、MSTO-211H、A549及正常肺上皮细胞株BEAS-2B,用qPCR检测肺癌细胞系中miR-23b的表达水平。用双荧光素酶报告基因检测miR-23b和PTEN的靶向关系。用脂质体转染技术将miR-23b mimics、miR-23b inhibitor、pcDNA3.1-PTEN等不同质粒转染进A549细胞,用WB检测细胞中PTEN的表达水平,用CCK-8、Transwell和Annexin VFITC/PI染色流式细胞术分别检测miR-23b/PTEN分子轴对60Coγ-射线处理的A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果:miR-23b在肺癌细胞系中高表达(P<0.05或P<0.01),尤其在A549细胞中表达水平最高(P<0.01)。敲降miR-23b可逆转3 Gy60Coγ-射线对A549细胞增殖和侵袭的抑制作用,并诱导细胞凋亡(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告基因结果显示,miR-23b可靶向负调控PTEN(P<0.05)。敲降miR-23b能上调PTEN的表达水平,进而上调3 Gy 60Coγ-射线对A549细胞凋亡的促进作用及抑制A549细胞增殖和侵袭(P<0.05或P<0.01)。结论:敲降miR-23b可以增强肺癌A549细胞的放疗敏感性,其机制是60Coγ-射线通过下调miR-23b对PTEN表达的抑制,进而降低A549细胞增殖、侵袭能力并诱导细胞凋亡。

LncRNA-SNHG17通过调控miR-23b-3p促进非小细胞肺癌进展

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)在非小细胞肺癌中的作用及其分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime PCR,qRT-PCR)技术检测SNHG17在肺癌细胞系和正常气管上皮细胞中的表达;通过转染pLCDH-SNHG17质粒或SNHG17-siRNA,过表达或沉默SNHG17,检测不同肺癌细胞株增殖、细胞周期和迁移能力;采用生物信息学方法预测并鉴定SNHG17相互作用的微小RNA (miRNA)。结果 SNHG17在NSCLC细胞系中表达上调,SNHG17的沉默能抑制非小细胞肺癌细胞增殖和迁移;SNHG17的上调促进非小细胞肺癌细胞增殖和迁移;沉默SNHG17导致非小细胞肺癌细胞系中miR-23b-3p水平升高,过表达miR-23b-3p在非小细胞肺癌细胞系中抑制SNHG17的表达。结论 LncRNA-SNHG17在非小细胞肺癌细胞系中高表达,可能通过竞争性结合miR-23b-3p参与非小细胞肺癌的发生。

miR-23b-3p对延边黄牛垂体细胞中生长激素分泌影响的研究

为了分析血液外胞体miRNA对延边黄牛垂体细胞中生长激素(GH)分泌的影响,试验选择在延边黄牛和韩延牛血液外胞体中存在显著差异表达的miR-23b-3p,分析其对延边黄牛垂体细胞中GH分泌的影响机制。首先进行延边黄牛垂体细胞的原代培养,然后将miR-23b-3p的mimics(miR-23b-3p-mi组)、mimics对照品(NC组)、inhibitor(miR-23b-3p-in组)、inhibitor对照品(iNC组)转染至已建立的垂体原代细胞中,48 h后收集细胞,提取总mRNA和总蛋白,利用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western-blot技术分别检测GH mRNA转录和蛋白的表达情况;利用targetscan和RNAhybrid分析软件对miR-23b-3p的靶基因进行预测,再利用双荧光素酶报告基因系统对miR-23b-3p的靶关系进行了验证;最后利用实时荧光定量PCR和Western-blot技术分别检测miR-23b-3p靶基因的mRNA转录和蛋白表达情况。结果表明:miR-23b-3p-mi组的延边黄牛垂体细胞中GH mRNA转录和蛋白表达水平极显著低于NC组(P<0.01),而miR-23b-3p-in组的延边黄牛垂体细胞中GH mRNA转录和蛋白表达水平显著高于iNC组(P<0.05);miR-23b-3p靶向了垂体特异性转录因子(POU1F1)的3′UTR;miR-23b-3p-mi组的POU1F1 mRNA转录和蛋白表达水平极显著低于NC组(P<0.01),而miR-23b-3p-in组的POU1F1 mRNA转录和蛋白表达水平极显著高于iNC组(P<0.01)。说明miR-23b-3p可通过调节POU1F1基因的表达来调控延边黄牛垂体细胞GH的分泌,进而调控延边黄牛的生长发育。

miR-23b过表达对高糖诱导近端肾小管上皮细胞EMT及PI3K-AKT通路的影响

目的研究过表达miR-23b对高糖诱导近端肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)及PI3K-AKT通路的影响。方法将人近端肾小管上皮细胞HK-2分为4组:正常葡萄糖(NG)组、高糖(HG)组、miR-23b阴性对照(NC)组和miR-23b过表达(mimic)组,转染48 h后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-23bmRNA的表达,光学显微镜观察细胞形态,qRT-PCR检测波形蛋白(VIM)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-CD) mRNA的表达,蛋白免疫印迹(WB)检测VIM、α-SMA、E-CD、PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达。结果与NG组比较,HG组中miR-23b表达显著下调,差异有统计学意义(P <0. 05);转染miR-23b mimic后,HK-2细胞中miR-23b表达显著上调(P <0. 05)。与NG组比较,HG组、NC组和mimic组HK-2细胞出现大量纺锤形细胞,细胞中VIM、α-SMA mRNA和蛋白表达显著上调(P <0. 05),E-CDmRNA和蛋白表达显著下调(P <0. 05),PTEN蛋白表达上调(P <0. 05),PI3K、p-Akt蛋白表达下调(P <0. 05);与HG组、NC组比较,mimic组HK-2细胞纺锤形细胞数量明显减少,细胞中VIM、α-SMA mRNA和蛋白表达下调(P <0. 05),E-CD、PI3K mRNA和蛋白表达上调(P <0. 05),PTEN蛋白表达下调(P <0. 05),PI3K、p-Akt蛋白表达上调(P <0. 05)。结论过表达miR-23b抑制高糖诱导近端肾小管上皮细胞间充质转化作用,其机制可能与抑制PI3K-AKT通路激活有关。

系统性红斑狼疮患者血清中miR⁃23b表达水平与疾病活动性的关系及作用机制

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)中miR⁃23b表达与疾病活动性的关系及作用机制。方法选取2016年3月至2018年4月于恩施土家族苗族自治州中心医院及湖北民族学院附属民大医院收治的SLE患者92例作为研究对象,根据疾病活动评分标准将其分为活动期组(≥10分)和缓解期组(0~9分),分别为54例和38例;并选取同期50例健康体检者作为对照组。采用实时荧光免疫PCR检测三组血清miR⁃23b表达水平;采用毛细管光度计成像法、免疫比浊法和化学发光法分别检测SLE患者血液红细胞沉降率(ESR)、补体C3、C4及抗dsDNA抗体,并分析miR⁃23b与血液ESR、补体C3、C4及抗dsDNA抗体的相关性;采用酶联免疫吸附法检测SLE患者血液TGF⁃β1和Smad3蛋白表达水平,并分析miR⁃23b与其相关性。结果对照组、缓解期组及活动期组血清miR⁃23b表达水平差异有统计学意义(F=10.67,P<0.001),活动期组<缓解期组<对照组。活动期组ESR和抗dsDNA抗体均明显高于缓解期组,补体C3、C4、TGF⁃β1和Smad3蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson法分析得知,miR⁃23b与ESR、补体C3、C4及抗dsDNA相关分析的r值分别为-0.803、0.847、0.471和-0.929,miR⁃23b与TGF⁃β1和Smad3蛋白相关分析的r值分别为0.911和0.927,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR⁃23b在系统性红斑狼疮中低表达,可能通过介导TGF⁃β1/Smad3通路参与其发生发展,与疾病活动性呈明显负相关。

miR-23b对口腔癌转移影响

口腔癌转移是威胁全世界生命健康的问题,有效的靶向治疗对口腔癌患者尤为重要.近年来,microRNA(miRNA)作为一种微小的非编码RNA在肿瘤转移中发挥着重要的作用,因此,开展了体外探究miR-23b在口腔癌转移中的作用.利用实时荧光定量核酸扩增检测系统(qRT-PCR)检测了miR-23b在口腔正常细胞和口腔癌细胞中的表达差异,结果显示miR-23b在口腔癌细胞中的表达明显高于口腔正常细胞中的表达,且随着口腔癌转移程度的增加而增高( P <0.05).在此基础上,通过给细胞转染miR-23b mimics的方法过表达miR-23b,以探究该miRNA对口腔癌转移的作用.实验结果发现,增加口腔原位癌细胞Um-2中miR-23b的表达后,该细胞的转移能力显著增强,表明miR-23b在口腔癌转移中发挥着重要作用,可能成为临床口腔癌的治疗靶点和口腔癌检测标志物.

苦瓜蛋白通过下调miR-23b-3p促进三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达

目的前期工作发现苦瓜蛋白（MD28）可上调THP-1源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的表达而减少胞内的脂质蓄积,但其机制不清楚。文章拟从转录后水平分析其作用机制。方法首先用miRNA芯片技术分析经MD28干预后,50 mg/L ox-LDL处理48 h的THP-1源性泡沫细胞miRNA谱中下调1.5倍的micro RNA（miRNA）,并与Genecards调控ABCA1基因表达的miRNA比较,找到二者共同miRNA,然后以荧光素酶报告基因系统验证其靶基因关系。qRT-PCR检测ABCA1 m RNA和miR-23b-3p的表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,油红O染色测定胞内脂质蓄积。结果 miR-23b-3p是miRNA芯片和Genecards的交集,靶基因验证实验证实ABCA1是miR-23b-3p的靶基因。MD28剂量（0 g/L、0.4 g/L、1.2 g/L、3.6 g/L、5 g/L）和时间（0 h、6 h、12h、24 h、48 h）依赖性地上调ABCA1 m RNA及蛋白的表达水平,以1.2 g/L作用12 h最为显著。ox-LDL上调miR-23b-3p表达且被MD28抑制,MD28能减少胞内脂质蓄积,miR-23b-3p的抑制剂可拮抗MD28对ABCA1表达和胞内脂质蓄积的作用。结论 MD28通过下调miR-23b-3p介导其促进THP-1源性泡沫细胞ABCA1表达、减少胞内脂质蓄积作用。

miR-23b-3p在结直肠癌中的表达及其靶向KLF3抑制结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的机制研究

目的:研究miR-23b-3p在结直肠癌中的表达情况及对结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的影响机制。方法:收集2018年01月至2020年12月我院胃肠外科手术切除的58例结直肠癌组织及癌旁组织标本,以及结直肠癌细胞株SW480、SW620、HCT116、HT-29、Lovo和人正常结直肠黏膜细胞FHC,采用qPCR法检测miR-23b-3p和KLF3相对表达水平。采用脂质体转染技术将miR-23b-3p mimics、mimics-NC转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变。利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p和KLF3的结合位点。将KLF3过表达质粒(pcDNA3.1-KLF3)或空载质粒(Vector)单独或联合miR-23b-3p mimics转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用qPCR和Western Blot实验检测SW620细胞中KLF3 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05),并与患者TNM分期和远处转移有关(均P<0.05);miR-23b-3p在结肠癌细胞系中的表达水平均显著低于FHC细胞,上调miR-23b-3p表达能显著抑制SW620细胞的侵袭和迁移能力。KLF3在结直肠癌组织和细胞中高表达,与miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关(r=-0.326,P=0.013),双荧光素酶报告基因实验证实miR-23b-3p直接靶向调节KLF3的表达,KLF3过表达能促进SW620细胞的侵袭和迁移,同时转染miR-23b-3p mimics可下调KLF3蛋白和mRNA表达,逆转KLF3过表达对SW620细胞侵袭和迁移能力的促进作用。结论:miR-23b-3p在结直肠癌中低表达并与肿瘤患者TNM分期及远处转移相关,miR-23b-3p靶向调控KLF3表达抑制结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移能力。

白芍总苷通过miR-23b-3p/FoxA1对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的探讨白芍总苷及对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响分子机制。方法肺泡上皮细胞A549随机分为对照(Con)组、模型(Model)组(1×10^(8)CFU/mL的肺炎链球菌感染)、Model+白芍总苷低、中、高剂量组(17.5 mg/mL、35 mg/mL、70 mg/mL的白芍总苷+1×10^(8)CFU/mL的肺炎链球菌感染)、Model+白芍总苷+anti-miR-23b-3p组(转染miR-23b-3p抑制剂+70 mg/mL白芍总苷+1×10^(8)CFU/mL肺炎链球菌感染);细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-6、IL-10水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-23b-3p表达水平;蛋白质印迹法检测FoxA1蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测miR-23b-3p和FoxA1的靶向关系。结果低、中、高剂量白芍总苷处理后,肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞的活性升高,细胞凋亡率降低,IL-6含量降低,IL-10含量升高,miR-23b-3p表达水平升高,FoxA1蛋白表达水平降低,呈剂量依赖性(P<0.05)。过表达miR-23b-3p后,FoxA1蛋白表达水平降低,细胞活性升高,细胞凋亡率降低,IL-6含量降低,IL-10含量升高(P<0.05)。抑制miR-23b-3p可逆转白芍总苷对肺炎链球菌诱导A549细胞凋亡、活性和IL-6和IL-10含量的影响。miR-23b-3p靶向调控FoxA1。结论白芍总苷通过调控miR-23b-3p/FoxA1轴抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症。

苦瓜蛋白通过FXR/miR-23b-3p/HNF4α途径抑制载脂蛋白(a)表达

目的 研究苦瓜蛋白（MD28）对HepG2细胞载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达的影响,探索其作用机制。 方法 离心、超滤、透析、阳离子交换色谱、反相高效液相色谱等方法提取苦瓜蛋白；MTT法检测苦瓜蛋白处理HepG2细胞后细胞存活率；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot分别检测Apo（a）、法尼酯X受体（FXR）、肝细胞核因子4α（HNF4α）的mRNA和蛋白表达水平；qRT-PCR检测hsa-miR-23b-3p的表达水平,采用小干扰RNA转染沉默FXR。 结果 与对照组相比,0.1、0.2、0.4、0.8及1.6 g/L苦瓜蛋白处理HepG2细胞24 h,细胞存活率无统计学差异；与对照组相比,苦瓜蛋白呈剂量和时间依赖性抑制Apo（a）表达,以1.6 g/L苦瓜蛋白作用48 h的效果最为显著；苦瓜蛋白上调FXR和hsa-miR-23b-3p表达水平,下调HNF4α表达水平,沉默FXR则逆转苦瓜蛋白的上述作用,沉默hsa-miR-23b-3p能逆转苦瓜蛋白对HNF4α的下调作用,但对FXR的表达无影响。 结论 苦瓜蛋白通过FXR/miR-23b-3p/HNF4α途径抑制HepG2细胞Apo（a）的表达,有望成为临床降低脂蛋白（a）的候选药物。

circZNF292靶向miR-23b-3p/SIRT1轴调节人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的机制分析

目的探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞(LECs)氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法收集单纯年龄相关性白内障(ARC)患眼的晶状体前囊膜组织(ARC组)和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织(对照组)各3例,进行RNA提取及转录组学测序。应用qRT-PCR检测两组样本中circZNF292、miR-23b-3p和SIRT1 mRNA表达水平。利用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性来验证circZNF292、miR-23b-3p、SIRT1之间的靶向关系。体外培养人永生化LECs细胞系HLE-B3,分为空白对照组、NC siRNA组、circZNF292 siRNA组、NC inhibitor组、miR-23b inhibitor组、NC mimics组、miR-23b mimics组、circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组。使用Lipo2000试剂转染,48 h后收获细胞。分别用MTT法、流式细胞术和荧光探针示踪法检测细胞活力、凋亡率及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)含量。结果ARC组和对照组晶状体前囊膜组织样本之间鉴定得到469个下调circRNA和1231个上调circRNA,对前10位变化最明显的circRNA进行qRT-PCR验证,最终确定circZNF292在ARC组样本中下调最明显;且circZNF292与miR-23b-3p表达、miR-23b-3p与SIRT1 mRNA表达均呈负相关(r=-0.935,-0.951,均为P<0.05)。NC siRNA组和空白对照组细胞活力、细胞凋亡率及ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。应用H_(2)O_(2)刺激后,与NC siRNA组相比,NC siRNA组+H_(2)O_(2) HLE-B3细胞凋亡率及ROS、MDA含量均明显升高(均为P<0.05),细胞活力及SOD、GSH-Px含量均明显降低(均为P<0.05);而circZNF292 siRNA组+H_(2)O_(2)细胞凋亡率及ROS、MDA含量则较NC siRNA组+H_(2)O_(2)均进一步升高(均为P<0.05),细胞活力及SOD、GSH-Px含量均进一步降低(均为P<0.05)。此外,circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组上述指标较circZNF292 siRNA组则被逆转(均为P<0.05)。结论circZNF292可通过miR-23b-3p/SIRT1轴调节人LECs氧化应激损伤,从而有望为ARC提供新的治疗靶标。

miR-23b在NSCLC患者血清中的表达及其预后评估价值分析

目的观察miR-23b在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血清中的表达水平及其对预后的评估价值。方法选取我院2012年1月—2014年12月收治的86例NSCLC作为观察组,另选取同期于我院体检身体健康者60例作为对照组,分析两组血清miR-23b表达情况及观察组患者随访3年后的生存情况,并分析影响NSCLC患者预后的相关因素。结果 (1)观察组患者血清miR-23b水平显著高于对照组,且观察组患者血清miR-23b高表达率为74.42%显著高于对照组的20.00%,差异均有统计学意义(P<0.01);(2)miR-23b高表达患者生存率明显低于miR-23b低表达患者,差异有统计学意义(χ~2=7.184,P=0.007);(3)病理分期过高、肿瘤存在远处转移、肿瘤存在淋巴结转移、肿瘤组织分化程度较低和miR-23b高表达为NSCLC患者预后的独立危险因素。结论 miR-23b在NSCLC患者血清中表达升高,且病理分期过高、肿瘤存在远处转移、肿瘤存在淋巴结转移、肿瘤组织分化程度较低和miR-23b高表达为NSCLC患者预后的独立危险因素,血清miR-23b可作为临床评估NSCLC患者预后的有效指标。

miR-23b-3p对肝核因子4的靶基因及效用分析

目的探索miR-23b-3p是否以肝核因子4作为靶基因并下调apo(a)表达,为降高脂蛋白(a)血症提供新的思路。方法用Targetscan在线工具对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子肝核因子4(HNF4)进行靶基因分析;在JM109细胞中使用荧光素酶报告系统对miR-23b-3p与调控筛选调控LPA基因的转录因子HNF4进行靶基因进行验证实验;用RT-PCR检测Hep G2细胞apo(a)mRNA表达水平。结果 Targetscan生物信息学分析工具表明HNF4G可作为miR-23b-3p的靶基因,荧光素酶报告系统转染miR-23b-3p处理组细胞裂解后荧光强度显著低于对照组,miR-23b-3p的抑制剂可抑制其作用,验证了HNF4G可作为miR-23b-3p的靶基因。转染miR-23b-3p可抑制Hep G2细胞apo(a)mRNA的表达。结论 miR-23b-3p以HNF4为其靶基因,并下调Hep G2细胞apo(a)的表达。