血清miR⁃134及miR⁃301水平对慢性丙型肝炎肝纤维化的诊断价值

目的探讨血清miR⁃134及miR⁃301水平对慢性丙型肝炎肝纤维化的诊断价值。方法选取我院收治的150例慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)患者为CHC组,同期从健康人群中选择150例为对照组。比较两组ALT、AST、TBIL、miR⁃134及miR⁃301水平。将CHC组根据肝纤维化分期(S0⁃S4级)分为不同亚组,比较亚组间各指标水平。采用ROC曲线分析ALT、AST、TBIL、miR⁃134及miR⁃301水平在诊断显著性肝纤维化(S2⁃S4期)中的临床价值。结果相较于对照组,CHC组ALT、AST、TBIL、miR⁃134及miR⁃301水平显著上升(P<0.05),且随肝纤维化分期增加,患者ALT、AST、TBIL、miR⁃134及miR⁃301水平有所上升(P<0.05)。ROC曲线结果显示,ALT、AST、TBIL诊断显著性肝纤维化的AUC<0.7,而miR⁃134及miR⁃301水平诊断显著性肝纤维化的AUC>0.70。结论慢性丙型肝炎患者血清miR⁃134及miR⁃301水平显著上升,并与患者肝纤维程度密切相关。miR⁃134、miR⁃301检测在诊断显著性肝纤维化中具有一定临床价值。

miR-301在结肠癌细胞增殖和凋亡中的作用

背景与目的:miR-301在多种恶性肿瘤中表达上调,然而其在结肠癌中的表达及功能尚不清楚。本研究旨在检测微小RNA miR-301在结肠癌组织中的表达,并在体内外研究miR-301反义寡核苷酸技术(ASO)对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:运用荧光定量PCR定量分析120例结肠癌患者癌组织及对应癌旁组织中miR-301的表达;通过miR-301ASO降低结肠癌SW620细胞中miR-301的表达,采用MTT、克隆形成实验、流式细胞技术及体内实验观察miR-301ASO对SW620细胞产生的生物学效应。结果:在120例结肠癌患者中,63.33%(76/120)的结肠癌组织miR-301表达明显高于对应癌旁组织(P=0.00);与对照组miR-301的表达量(0.50±0.07)相比,miR-301ASO组可以显著降低miR-301的表达(0.09±0.01,P=0.00);MTT实验结果显示,转染miR-301 ASO组24、48、96 h SW620细胞的存活数量均明显低于对照组(P<0.05);克隆形成实验结果显示,miR-301ASO组克隆形成率(5.33%±0.74%)较对照组(33.33%±8.38%)显著降低(P=0.00);体内研究进一步证实miR-301ASO可以抑制肿瘤细胞的增殖,从而导致肿瘤生长较对照组慢(P=0.01),肿瘤的体积较对照组明显减小(P=0.01);流式细胞仪检测显示,转染miR-301ASO组SW620细胞凋亡指数(15.68±1.46)较随机染转染ASO组(3.36±0.88)明显增高(P=0.02);另外,降低miR-301的表达发现Bcl-2的mRNA和Bcl-2蛋白均明显下降(P=0.00,P=0.00)。结论:miR-301在结肠癌组织中表达上调,降低miR-301的表达可有效抑制结肠癌细胞生长、促进细胞凋亡。miR-301有可能成为结肠癌基因表达调控的新靶点。

miR-301a在结肠直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的:分析结肠直肠癌组织miR-301a的表达及其与结肠直肠癌病人临床病理特征的关系。探讨下调miR-301a表达对结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移能力以及PTEN蛋白表达的影响。方法:应用实时定量PCR方法检测48对结肠直肠癌组织和癌旁组织以及5种结肠癌细胞株中miR-301a的表达。应用瞬时转染方法将miR-301a抑制剂转入结肠癌细胞株HCT116后,用细胞增殖实验(CCK-8法)、transwell侵袭实验检测细胞的增殖和侵袭力;采用transwell迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力;并用Western印迹技术检测下调miR-301a后其靶蛋白PTEN表达的变化。结果:PCR结果显示,miR-301a在有淋巴结转移的结肠直肠癌组织中表达较其对应的癌旁组织和无淋巴结转移的癌组织为高(P<0.05);5种结肠癌细胞中均有不同程度表达;transwell侵袭、迁移实验显示,miR-301a抑制剂转染后HCT116细胞侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05);增殖实验显示,下调miR-301a对结肠癌细胞抑制作用明显(P<0.05)。划痕实验表明,miR-301a抑制剂转染组细胞迁移能力明显受到抑制。Western印迹法显示,miR-301a抑制剂转染组细胞PTEN蛋白表达增加。结论:miR-301a在有淋巴结转移的结肠直肠癌组织中表达较高;下调miR-301a的表达抑制HCT116细胞的增殖、侵袭和迁移能力,且PTEN蛋白表达增加。miR-301a对结肠癌细胞生物学功能的影响可能是通过PTEN信号通路实现的。

高糖诱导前列腺上皮细胞微小RNA的差异表达及miR-301a的促增殖作用

目的检测高糖刺激下微小RNA（miRNA）在前列腺组织及细胞中的差异表达，探讨高血糖对前列腺影响的分子机制。方法将成年雄性SD大鼠随机分为对照组和高血糖组（〉300mg／d1），应用miRNA芯片技术检测两组间miRNA表达谱的差异，并通过实时定量聚合酶链反应（qRT—PCR）方法验证；以qRT．PCR检测差异表达的miRNAs在高糖（50mmoL／L）培养的RWPE-1细胞中的表达；噻唑蓝（MTT）比色法检测转染miRNAs和／或高糖（25～50mmol／L）培养的RWPE—1的增殖。结果高血糖组大鼠前列腺组织中4个miRNA上调（miR-1862．405倍、miR-301a2．202倍、miR-3652．093倍、miR-1932．317倍），2个miRNA下调（miR-4340．298倍、miR-3610．386倍），差异均有统计学意义（P〈0．05）；高糖培养下，RWPE-1细胞中各miRNAs的表达趋势与之一致。MTT实验中25mmol／L组、50mmol／L组、miR-301a转染组的细胞吸光度（A）值分别为起始的175％、197％、188％，与对照组（122％）比较差异有统计学意义（P〈0．05）；50mmol／L高糖联合miR-301a抑制物转染组的A值为起始的143％，与50mmol／L组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论体内外高糖条件均可引起前列腺miRNA表达谱变化，高糖通过miR-301a对前列腺上皮细胞的增殖有明显促进作用。

miR-134及miR-301在CHC的表达及与肝功能、病毒载量的相关性

目的:探讨慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)患者血清miR-134及miR-301表达水平与丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和丙肝病毒载量(hepatitis C virus-RNA,HCV-RNA)的相关性。方法:选取我院收治的125例CHC患者作为CHC组和健康体检正常者60例作为对照组。CHC患者根据HCV-RNA的检测结果,分为低病毒载量组、中病毒载量组和高病毒载量组。根据ALT的检测结果,ALT正常组、ALT轻度升高组和ALT明显升高组。检测各组血清miR-134及miR-301表达水平和HCV-RNA含量,分析miR-134、miR-301表达水平与ALT、HCV-RNA的相关性。结果:CHC组血清miR-134及miR-301表达水平均明显高于对照组(t=12.874,P<0.01;t=12.305,P<0.01)。ALT明显升高组血清miR-134及miR-301表达水平明显高于轻度升高组和正常组(P<0.01)。高病毒载量组血清miR-134及miR-301表达水平明显高于中病毒载量组和低病毒载量组(P<0.01),且中病毒载量组血清miR-134及miR-301表达水平明显高于低病毒载量组(P<0.01)。相关分析显示,血清miR-134及miR-301表达水平与ALT、HCV-RNA均呈正相关(r=0.748,P<0.01;r=0.825,P<0.01;r=0.713,P<0.01;r=0.796,P<0.01)。结论:CHC患者血清miR-134及miR-301表达水平明显升高,与ALT、HCV-RNA均呈正相关,提示miR-134及miR-301可能参与CHC发生发展。