骨肉瘤血清miR-337-3p、miR-484、miR-582表达及临床意义

目的 检测骨肉瘤血清miR-337-3p、miR-484、miR-582表达及其临床意义。方法 收集我院2016年1月至2022年1月期间收治的67例骨肉瘤患者的临床病历资料,另纳入同期60例健康志愿者作为对照组。采用DEGseq方法对血清样本进行全基因组miRNA分析,采用实时荧光定量PCR(qPCR)分析血清和组织样本中miRNA水平。受试者工作特征(ROC)曲线分析miRNA诊断骨肉瘤的效能。Logistic回归模型分析影响骨肉瘤新辅助化疗疗效的因素。Cox风险比例回归模型分析影响骨肉瘤预后的因素。结果 经全基因组miRNA分析,骨肉瘤患者血清中miR-337-3p、miR-484、miR-582、miR-1912、miR-4535的表达显著下调。qPCR检测结果显示,骨肉瘤血清miR-337-3p(0.519±0.249 vs. 1.015±0.420)、miR-484(0.669±0.254 vs. 1.029±0.515)、miR-582(0.516±0.258 vs. 0.996±0.381)均低于健康对照组(P<0.001),同时骨肉瘤组织中miR-337-3p、miR-484、miR-582相对表达量也低于癌旁正常组织(P<0.001)。骨肉瘤血清样本和组织样本中miR-337-3p、miR-484、miR-582表达量分别呈正相关(P<0.001)。ROC曲线显示血清miR-337-3p、miR-484、miR-582对于骨肉瘤有良好的诊断效能,联合曲线下面积(AUC)为0.960(95%CI:0.932~0.989)。Logistic回归分析和Cox风险比例回归模型分析均显示血清miR-337-3p、miR-484、miR-582表达水平是影响骨肉瘤新辅助化疗疗效和总生存的独立影响因素(P<0.05)。结论 血清miR-337-3p、miR-484、miR-582可作为骨肉瘤诊断、预测预后的生物标志物。

异甘草素通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移的机制研究

目的 肺鳞癌(Lung squamous cell carcinoma,LUSC)是全世界范围内高频率发生的恶性肿瘤。最近的研究表明,异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)在肿瘤增殖和转移中发挥抗肿瘤活性。因此,研究旨在探讨ISL在抗LUSC转移中的作用机制。方法 利用梯度浓度ISL处理LUSC细胞,探究ISL在LUSC细胞增殖、迁移和侵袭中的抗癌特性。随后,利用生物信息学手段探寻了长链非编码RNA(Long non-coding RNAs, lncRNA)MIR22HG/miR-24-3p/Fas配体基因(Fas ligand Gene,FASLG)之间可能的互作关系。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测LUSC细胞中lncRNA MIR22HG、miR-24-3p、FASLG的表达,细胞计数盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、克隆形成、划痕愈合和Transwell实验分别检测细胞活力、增殖、迁移和侵袭。蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)检测上皮间充质转换(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)和转移相关蛋白的表达。RNA免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RIP)实验和双萤光素酶实验验证lncRNA MIR22HG与miR-24-3p、miR-24-3p与FASLG的结合关系。结果 ISL可以显著抑制LUSC细胞增殖、迁移和侵袭。生信分析及临床样本分析发现lncRNA MIR22HG在LUSC中低表达,ISL可以促进lncRNA MIR22HG的表达,抑制LUSC细胞的恶性行为。此外,lncRNA MIR22HG可以海绵吸附miR-24-3p进而调节FASLG的表达。miR-24-3p在LUSC中上调表达,FASLG在LUSC中下调表达。过表达FASLG可以逆转miR-24-3p过表达对LUSC增殖、转移以及EMT进程的促进作用。结论 这些结果表明,ISL通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移,表明ISL有潜力作为治疗LUSC的新型药物。

lncRNA MIR4435-2HG靶向miR-376a-3p调控胆管癌细胞生物学行为的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MIR4435-2HG(MIR4435-2HG)对胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对微小RNA-376a-3p(miR-376a-3p)的调控作用。方法 qRT-PCR法检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic与人胆管癌细胞RBE中MIR4435-2HG、miR-376a-3p的表达。将si-NC、si-MIR4435-2HG、miR-NC、miR-376a-3p mimics、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-NC、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-376a-3p分别转染至RBE细胞,作为si-NC组、si-MIR4435-2HG组、miR-NC组、miR-376a-3p组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组;采用MTT法、Transwell小室法及流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证MIR4435-2HG与miR-376a-3p的靶向关系。Western blot检测相关蛋白表达。结果 RBE细胞中MIR4435-2HG表达量升高(P<0.05),miR-376a-3p表达量降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MIR4435-2HG组MIR4435-2HG表达、细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率升高(P<0.05)。MIR4435-2HG可靶向调控miR-376a-3p;与si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组比较,si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论 敲低MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-376a-3p进而抑制RBE细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导其凋亡。

长链非编码RNAMIR22HG和微RNA-9-3p在骨关节炎病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MIR22HG和微RNA-9-3p(miR-9-3p)在骨关节炎(OA)病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性。方法 选取2020年10月至2021年10月在南充市中医医院确诊为OA的病人120例,作为OA组,60例体检健康人群作为对照组;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平;Pearson法分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的相关性以及二者与视觉模拟(VAS)评分、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)以及西安大略和麦马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC)评分的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p对OA的诊断价值。结果 OA组的血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著高于对照组(1.48±0.25比1.01±0.22),miR-9-3p的表达水平显著低于对照组(0.72±0.13比1.05±0.12)(P<0.05);相关性分析显示,lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平呈负相关关系(P<0.05);KLⅣ级血清lncRNA MIR22HG的表达水平、VAS评分、WOMAC评分显著高于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著高于KLⅡ级(P<0.05),KLⅣ级血清miR-9-3p的表达水平、HSS评分显著低于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著低于KLⅡ级(P<0.05);OA病人lncRNA MIR22HG的表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈正相关,与HSS评分呈负相关(P<0.05);miR-9-3p表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈负相关,与HSS评分呈正相关(P<0.05);二者联合诊断的AUC高于lncRNA MIR22HG、miR-9-3p单独诊断的AUC值(Z=2.22,P=0.012;Z=1.43,P=0.025)。结论OA病人血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著升高,miR-9-3p表达水平显著降低,二者与OA病情严重程度密切相关,且对OA具有一定的诊断价值。

LncRNA CRNDE调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法将人肺泡上皮细胞A549分为CK组、LPS组、LPS+si⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE组、LPS+si⁃CRNDE+inhibitor NC组、LPS+si⁃CRNDE+miR⁃338⁃3p inhibitor组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃KLF6组;qRT⁃PCR检测各组细胞CRNDE、miR⁃338⁃3p和KLF6表达水平;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA试剂盒检测TNF⁃α、IL⁃10和IL⁃1β水平;商品化试剂盒分析MDA、GSH⁃Px、SOD水平;Western blot检测细胞中KLF6、Cleaved⁃caspase⁃3、Bax、Bcl⁃2蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃338⁃3p与RNDE和KLF6的关系。结果与CK组相比,LPS组和LPS+si⁃NC组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著升高,miR⁃338⁃3p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著降低(P<0.05);与LPS+si⁃NC组相比,LPS+si⁃CRNDE组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著降低,miR⁃150⁃5p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著升高(P<0.05);干扰miR⁃338⁃3p表达或过表达KLF6均可降低下调CRNDE表达改善LPS诱导A549细胞损伤的作用(P<0.05)。结论下调CRNDE可调控miR⁃338⁃3p/KLF6轴减轻LPS诱导的A549细胞损伤。

LncRNA FZD10-AS1通过调控miR-337-3p/GPD1分子轴抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移

目的探讨长链非编码RNA(long⁃chain non⁃coding RNA,lncRNA)FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p上调甘油-3-磷酸脱氢酶1(glycerol⁃3⁃phosphate dehydrogenase 1,GPD1)基因的表达抑制骨肉瘤增殖和迁移的分子机制。方法收集青岛大学附属青岛妇女儿童医院儿童骨科2016年9月至2018年12月47例行骨肉瘤根治术切除的癌组织及相应癌旁组织,qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织及癌旁组织、骨肉瘤细胞株和正常成骨细胞中的表达量。选择FZD10⁃AS1表达量最低的细胞株为研究对象,Lipofectamine 2000转染试剂分别转染表达FZD10⁃AS1的质粒(观察组)和阴性对照质粒(对照组)至骨肉瘤细胞,CCK⁃8法和细胞划痕实验检测分别FZD10⁃AS1过表达对细胞增殖和迁移能力的影响。生物信息学预测FZD10⁃AS1的作用机制。qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1过表达对下游基因表达的影响,Western Blot检测有关蛋白的表达量。结果骨肉瘤组织中FZD10⁃AS1的表达明显少于癌旁组织(P<0.01)。骨肉瘤细胞株中FZD10⁃AS1的表达明显少于正常成骨细胞(P<0.01),在U⁃2OS细胞中表达量最少(P<0.01)。过表达FZD10⁃AS1明显抑制U⁃2OS细胞的增殖能力和迁移能力(P<0.05)。生物信息学显示,FZD10⁃AS1可互补结合miR⁃337⁃3p,miR⁃337⁃3p可进一步互补结合GPD1 mRNA。过表达FZD10⁃AS1后U⁃2OS细胞中miR⁃337⁃3p表达量明显下降(P<0.01),GPD1 mRNA和蛋白的表达量增加(P<0.01)。结论FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织和细胞株中表达明显降低,FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p促进GPD1基因的表达,从而抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移能力,FZD10⁃AS1可能成为骨肉瘤治疗及诊断的靶点。

重度子痫前期患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p及杀伤细胞抑制性受体的表达意义

目的探究重度子痫前期(PE)患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p及杀伤细胞抑制性受体(KIR)表达水平及临床意义。方法回顾性分析2019年3月—2022年8月于合肥市第一人民医院南区就诊143例PE患者临床资料。根据PE严重程度将患者分为重度PE组(n=85)和轻度PE组(n=58),另选取同期正常妊娠孕妇65例为对照组。比较3组及PE患者中不同妊娠结局患者的外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR表达水平;受试者工作特征曲线(ROC)评估miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR对重度PE的诊断效能;Logistic回归分析miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR与PE患者妊娠结局的关系。结果与对照组比较,轻度PE组、重度PE组外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR表达水平升高,且重度PE组高于轻度PE组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR诊断重度PE的AUC值分别为0.836、0.835和0.879(P<0.05),最佳阈值分别为1.43、1.70和52.13μg/L。各组不良妊娠结局发生率比较差异有统计学意义(P<0.05),且重度PE组最高,轻度PE组高于对照组(P<0.05)。轻度及重度PE患者中,结局不良患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR水平均高于结局良好者(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,重度PE、miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR与PE患者不良妊娠结局呈正相关(P<0.05)。结论PE患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR表达水平偏高,并与病情严重程度相关,可能会增加PE患者不良妊娠结局风险。检测外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR水平或可为临床重度PE的诊断提供参考。

LncRNA MIR22HG调节miR-132-3p/TLR2轴对急性心肌梗死小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响

目的:探讨长链非编码RNA miR-22宿主基因(lncRNA MIR22HG)调节miR-132-3p/Toll样受体2(TLR2)轴对急性心肌梗死(AMI)小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响。方法:取C57BL/6J小鼠随机分为sham组、AMI组、AMI+sh-NC组、AMI+shMIR22HG组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组,每组10只,除去sham组外,其它组都进行冠状动脉左前降支结扎,sham组只开胸不结扎冠状动脉,其中AMI+sh-NC组、AMI+sh-MIR22HG组、AMI+shMIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组小鼠分别相对应的对尾静脉注射sh-NC、sh-MIR22HG、sh-MIR22HG+antagomir-NC、sh-MIR22HG+antagomir-132-3p。超声心动图评估小鼠心室重构和心脏功能;HE染色和Masson染色观察心肌组织病理学变化及纤维化;RT-qPCR检测心肌组织MIR22HG、miR-132-3p表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;Western blotting检测心肌组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleved caspase-3)/半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、collagenⅢ和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证MIR22HG和miR-132-3p、miR-132-3p和TLR2的关系。结果:与sham组比较,AMI组小鼠心功能显著降低,心肌组织损伤、心肌纤维化加重,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著升高,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与AMI+sh-NC组比较,AMI+sh-MIR22HG组小鼠心功能改善,心肌组织损伤、心肌纤维化减轻,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著降低,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达上升(P<0.05);下调miR-132-3p减弱了敲减MIR22HG对心肌组织的保护作用;双荧光素酶报告基因实验结果显示,MIR22HG靶向调控miR-132-3p表达,miR-132-3p靶向负调控TLR2表达。结论:抑制MIR22HG表达可通过调节miR-132-3p/TLR2轴抑制AMI小鼠心肌细胞凋亡,改善小鼠心室重构。

lncRNA XIST通过调控miR-337-3p/HOXC8轴促进胃癌的发展进程

目的:探讨lncRNA XIST(XIST)通过调控miR-337-3p/HOXC8分子轴介导胃癌发展进程的分子机制。方法:选取2013年3月至2018年1月河北省唐山市开滦总医院普通外科手术切除的58例胃癌组织和对应的癌旁组织标本,以及人胃癌细胞系AGS、MGC803、HGC27和人胃黏膜细胞GES-1,用qPCR检测胃癌组织和细胞系中XIST和miR-337-3p的表达水平。将XIST敲降载体、miR-337-3p mimics/inhibitor和HOXC8过表达载体转染进AGS细胞,用CCK-8、Transwell实验检测AGS细胞的增殖及侵袭能力,用WB检测HOXC8及上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达水平。用双荧光素酶报告基因验证XIST、miR-337-3p和HOXC8的靶向关系。结果:XIST在胃癌组织和细胞系中高表达(均P<0.01)。敲降XIST显著抑制AGS细胞的增殖、侵袭和EMT(P<0.05或P<0.01)。XIST靶向作用miR-337-3p并下调其表达,HOXC8是miR-337-3p的靶基因。敲降XIST通过靶向上调miR-337-3p对HOXC8表达的抑制作用,从而抑制AGS细胞增殖、侵袭和EMT(P<0.05或P<0.01)。结论:敲降XIST可抑制AGS细胞增殖、侵袭和EMT,其作用机制是通过靶向miR-337-3p并下调HOXC8的表达。

CircSMC3调节miR-582-5p/MCL1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:探讨环状非编码RNA(CircRNA)SMC3通过调节微小RNA(miR)-582-5p/髓细胞白血病基因1(MCL1)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:qRT-PCR检测4种GC细胞系及正常胃上皮细胞系GES-1中SMC3、miR-582-5p、MCL1mRNA的表达水平。将SGC-7901细胞分为对照组、si-NC组、si-SMC3组、mimics NC组、miR-582-5p组、si-SMC3+inhibitor NC组、si-SMC3+miR-582-5p inhibitor组、miR-582-5p+pcDNA3.1组、miR-582-5p+MCL1组。检测各细胞凋亡、增殖、迁移及相关蛋白表达的情况;验证miR-582-5p与SMC3、MCL1的靶向关系。结果:4种GC细胞系中SMC3、MCL1 mRNA表达均增加,miR-582-5p表达下降(P<0.05)。干扰SMC3、过表达miR-582-5p可以抑制SGC-7901细胞增殖、迁移及相关蛋白、表达(P<0.05);抑制miR-582-5p表达可逆转干扰SMC3对细胞的作用(P<0.05);上调MCL1可逆转过表达miR-582-5p细胞的作用(P<0.05)。结论:干扰SMC3可能通过调节miR-582-5p/MCL1轴,抑制SGC-7901细胞增殖、迁移,促进凋亡。

Circ_0000739调控miR-337-3p/JAK2轴对肝癌细胞增殖和转移的影响

目的探究circ_0000739通过调控miR-337-3p/Janus kinase 2(JAK2)轴介导肝癌(hepatocellular carcinoma cells,HCC)细胞增殖和转移的影响。方法采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测50例HCC癌组织和细胞系中circ_0000739的表达水平。分析circ_0000739表达水平和HCC患者临床病理指标的关系。采用CCK-8、划痕愈合实验和Transwell实验检测circ_0000739过表达质粒和miR-337-3p mimics对细胞增殖,运动和转移的影响。采用Western blot检测circ_0000739和miR-337-3p对JAK2表达的影响。通过双荧光素酶报告基因分析circ_0000739和miR-337-3p之间的靶向调控关系。结果HCC组织或细胞中的circ_0000739表达显著上调,其高表达水平与HCC患者组织的T分期级别增加和分化程度低显著相关。circ_0000739显著促进HCC细胞的增殖、运动和转移,且这种促进作用可被miR-337-3p模拟物部分减弱。机制上,circ_0000739通过吸附miR-337-3p并间接上调JAK2的表达从而促进HCC进展。结论circ_0000739/miR-337-3p/JAK2轴参与促进HCC细胞增殖,迁移和侵袭,可能为临床早期诊断和评估疗效提供潜在的生物标记物。

血清外泌体MIR210HG、miR-337-3p在子宫内膜癌中的表达及意义

目的探究血清外泌体MIR210HG、miR-337-3p在子宫内膜癌(EC)中的表达水平及临床意义。方法选取收治的95例EC患者为研究对象,即为EC组,正常健康体检者85例为对照组,采用qRT-PCR法检测MIR210HG、miR-337-3p的表达水平;用Pearson相关性分析血清外泌体MIR210HG、miR-337-3p表达水平相关性;ROC曲线分析血清外泌体MIR210HG、miR-337-3p对EC的诊断价值;多因素logistic回归分析影响EC发生的危险因素。结果EC组血清外泌体MIR210HG的表达水平高于对照组,miR-337-3p表达水平低于对照组,二者具有负相关关系(r=-0.336,P<0.05);MIR210HG和miR-337-3p表达水平与组织学分级、淋巴结是否转移、肌层浸润、肿瘤分化有关(P<0.05)。MIR210HG、miR-337-3p联合诊断EC的ROC曲线下面积(AUC)高于二者单独诊断的AUC(P<0.05);Logistic回归分析显示,组织学分级、淋巴结转移、肿瘤分化、MIR210HG、miR-337-3p表达为EC发生的影响因素(P<0.05)。结论EC患者血清外泌体中MIR210HG表达水平显著增加,而miR-337-3p表达水平显著降低,二者表达呈负相关,且与EC的发生密切相关。

长链非编码RNA TTY15通过海绵miR337-3p上调JAK2促进舌鳞状细胞癌的生长和转移

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)TTTY 15在舌鳞状细胞癌生长和转移中的作用。方法采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TTTY15、miR-337-3p、JAK2在舌鳞状细胞癌组织和细胞系中的表达,采用CCK-8法检测舌鳞状细胞癌细胞的增殖,采用Transwel法检测舌鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭,采用荧光素酶报告基因法进行验证TTTY15与miR-337-3p的相互作用。Western blot分析TTTY15和miR-337-3p对JAK2表达的影响。结果TTTY15在舌鳞状细胞癌样本中表达明显上调,而miR-337-3p则下调。TTTY15敲低可显著降低舌鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,而miR-337-3p转染则有相反的效应。此外,TTTY15可通过海绵miR-337-3p并下调其表达,而且在舌鳞状细胞癌样本中TTTY15和miR-337-3p有负向调节的关系,而miR-337-3p可直接靶向调节JAK2从而调节舌鳞状细胞癌细胞生长。结论TTTY15通过靶向调节miR-337-3p/JAK2的表达在舌鳞状细胞癌中发挥促癌效应。

miR⁃27b⁃3p通过靶向SSRP1调控骨肉瘤细胞的生长

目的:探究miR⁃27b⁃3p对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞生长的影响及其潜在的分子机制。方法:①采用实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)分析miR⁃27b⁃3p在骨肉瘤细胞系中的表达;②CCK⁃8实验、集落形成实验及流式细胞术检测miR⁃27b⁃3p以及SSRP1对骨肉瘤细胞生长的影响;③使用在线数据库预测miR⁃27b⁃3p的靶基因并进行筛选,使用双荧光素报告酶实验测定miR⁃27b⁃3p与结构特异性识别蛋白1(structure⁃specific recognition protein⁃1,SSRP1)的关系;④干扰效率以及过表达效率使用Western blot实验验证。结果:①miR⁃27b⁃3p在骨肉瘤细胞和临床样本中低表达,过表达miR⁃27b⁃3p会抑制骨肉瘤细胞的生长;②生物信息学分析和双荧光素报告酶实验证实SSRP1为miR⁃27b⁃3p的靶基因,SSRP1表达受miR⁃27b⁃3p的直接调控;③干扰SSRP1的表达会抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进凋亡;④过表达SSRP1会部分逆转miR⁃27b⁃3p对骨肉瘤细胞生长的抑制效应。结论:miR⁃27b⁃3p在骨肉瘤细胞中低表达,通过靶向SSRP1从而影响骨肉瘤细胞的生长。miR⁃27b⁃3p可能是骨肉瘤的一个潜在的分子靶点,靶向miR⁃27b⁃3p/SSRP1轴可能成为骨肉瘤治疗的新策略。

血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a与非小细胞肺癌射频消融治疗患者预后生存的关系

目的探究血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a与非小细胞肺癌(NSCLC)射频消融治疗患者预后生存的关系。方法选取2019年1月至2021年1月于河南省新乡市新乡和平医院行射频消融治疗的92例NSCLC患者,根据随访生存情况将患者分为生存组65例和死亡组27例,比较不同临床分期、不同临床疗效以及不同生存情况患者血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a水平差异,分析miR⁃28⁃3p、miR⁃23a与肺癌分期以及射频消融疗效的相关性,采用ROC曲线分析miR⁃28⁃3p、miR⁃23a预测患者生存的最佳截断值,采用COX比例风险模型以及Kaplan⁃Meier生存分析miR⁃28⁃3p、miR⁃23a与肺癌患者预后生存关系。结果不同分期患者血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a表达水平:Ⅰ期>Ⅱ期>Ⅲa期,差异有统计学意义(P<0.05);不同临床疗效患者血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a表达水平:局部进展>不完全消融>完全消融,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman分析结果显示,血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a与肺癌分期呈正相关,与射频消融疗效呈负相关(P<0.05);截至2023年2月,生存组和死亡组患者性别、年龄、组织病理类型、肿瘤位置、基础疾病比较差异无统计学意义(P>0.05),肿瘤分期及血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a比较差异有统计学意义(P<0.05),且死亡组血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a水平高于生存组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC分析结果显示,血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a预测NSCLC患者生存的最佳截断值分别为10.18和1.03;COX分析结果显示,血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a高表达与NSCLC射频消融治疗患者预后不良相关(P<0.05);Kaplan⁃Meier生存分析显示,NSCLC射频消融治疗患者miR⁃28⁃3p、miR⁃23高、低表达患者间总生存期比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清miR⁃28⁃3p、miR⁃23a与NSCLC频消融治疗患者肿瘤分期以及临床疗效相关,两指标可用于评估患者预后生存情况,值得推广应用。

复发性阿弗他口腔溃疡患者唾液外泌体miR⁃142⁃5p、FOXO3表达的相关性研究

目的分析复发性阿弗他口腔溃疡(RAU)患者唾液外泌体miR⁃142⁃5p、叉头转录蛋白O亚族3(FOXO3)表达与免疫功能的相关性。方法收集2019年12月—2021年12月三亚中心医院/海南省第三人民医院口腔科收治RAU患者134例作为观察组,另选取同期健康志愿者134例作为健康对照组。收集受试者唾液后提取唾液外泌体,qRT⁃PCR分析样本中miR⁃142⁃5p、FOXO3 mRNA表达水平,流式细胞仪测定外周血CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)细胞比例,并计算CD4^(+)/CD8^(+)比值;比较miR⁃142⁃5p、FOXO3高、低表达亚组间RAU患者的疼痛指数、溃疡面积;Pearson法分析患者唾液外泌体miR⁃142⁃5p、FOXO3 mRNA水平之间及二者与CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)的相关性;绘制受试者工作特征曲线(ROC)评估miR⁃142⁃5p、FOXO3 mRNA表达水平预测RAU的诊断价值。结果与健康对照组比较,观察组患者唾液外泌体miR⁃142⁃5p表达水平、外周血CD3^(+)CD8^(+)细胞比例升高[t(χ^(2))/P=34.580/<0.001、6.889/<0.001],FOXO3 mRNA及蛋白表达水平、外周血CD3^(+)CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)细胞比值降低[t(χ^(2)/P=43.121/<0.001、37.692/<0.001、10.219/0.001、26.091/<0.001)]。与miR⁃142⁃5p低表达亚组比较,miR⁃142⁃5p高表达亚组患者疼痛指数升高、溃疡面积增大(t/P=3.880/<0.001、5.027/<0.001);与FOXO3高表达亚组比较,FOXO3低表达亚组患者疼痛指数升高、溃疡面积增大(t/P=4.711/<0.001、5.382/<0.001)。观察组患者唾液外泌体miR⁃142⁃5p与CD3^(+)CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)细胞比值呈负相关(P均<0.001),FOXO3 mRNA与CD3^(+)CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)细胞比值呈正相关(P均<0.001),miR⁃142⁃5p、FOXO3与CD3^(+)CD8^(+)细胞比值均无相关性(P>0.05)。绘制ROC曲线结果提示,miR⁃142⁃5p、FOXO3 mRNA及二者联合预测RAU复发的曲线下面积(AUC)分别为0.810、0.809、0.947,二者联合检测优于各自单独预测效能(Z=6.528、8.573,P均<0.001)。结论RAU患者唾液外泌体miR⁃142⁃5p处于高表达状态,FOXO3处于低表达状态,二者共同参与复发性口腔溃疡的免疫调控。

血清miR-193a-3p,miR-337-5p和miR-483-5p在食管鳞状细胞癌诊断和预后中的应用

目的探讨miR-193a-3P,miR-337-5p和miR-483-5p在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者血清中的表达水平,评估其临床应用价值。方法收集2011年6月~2014年5月南京军区南京总医院及徐州市肿瘤医院住院的63例ESCC患者术前、术后血清及随访信息,同时收集63例年龄、性别相匹配的健康体检者血清作为正常对照。利用TaqMan低密度芯片方法筛选出ESCC患者中异常表达的miRNA;实时荧光定量PCR法验证芯片检测到的ESCC中明显上调的miR-193a-3p,miR-337-5P以及文献报道在口腔鳞状细胞癌(OSCC)表达上调的miR-483-5P;最后评价它们的诊断和预后价值。结果与健康对照相比,ESCC患者血清miR-193a-3p(0.459±0.339 vs 0.195±0.084),miR-337-5p(5.686±5.211 vs 2.476±0.808)和miR-483-5p(32.545±22.479 vs 19.509±10.601)的相对含量均显著升高(U值分别为591,605和1037,P值均<0.0001),且在患者术后明显降低(P值均<0.05);三种miRNA的ROC AUC分别为0.851,0.848和0.739,三种miRNA组合在一起的AUC为0.873,均明显大于癌胚抗原;术后高表达miR-483-5p的患者较之低表这的生存期短(P=0.022)。结论血清miR-193a-3p,miR-337-5p和miR-483-5p可作为ESCC患者诊断或预后评估的潜在分子标志物。

血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2水平在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨血清miR-141-3p、可溶性上皮钙黏蛋白(s E-cadherin)、环氧合酶-2(COX-2)水平在乳腺癌中的表达及与临床病理、细胞免疫的关系。方法选择2020年4月至2021年12月南阳市第二人民医院收治的乳腺癌患者50例进行研究,设为病例组;并选取同期入院的乳腺良性疾病患者50例设为对照组。采用酶联免疫分析两组患者miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2表达及与临床病理、细胞免疫之间的关系。结果病例组血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(t=24.400,8.229,26.195,P<0.01);病例组CD4+、CD4+/CD8+水平显著低于对照组,CD8+显著高于对照组,差异均有统计学意义(t=19.419,170.271,203.192,P<0.01);所有患者不同年龄、病理组织学类型与血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤最大径>4 cm、病理分级Ⅲ级~Ⅳ级、分化程度高分化程度、淋巴结转移血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2水平均明显高于肿瘤最大径≤4 cm、病理分级Ⅰ~Ⅱ级级、中低分化程度、淋巴结未转移患者,差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示,血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2与乳腺癌患者肿瘤最大径、病理分级、分化程度、淋巴结转移及CD8+之间均呈正相关,血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2与乳腺癌患者CD4+、CD4+/CD8+之间均呈负相关(P<0.05)。结论乳腺癌患者中血清miR-141-3p、sE-cadherin、COX-2水平表达明显升高,与临床病理、细胞免疫之间关系密切,可能协同参与了乳腺癌的发生、发展,对乳腺癌患者预后的评估具有重要意义。

miR-337-3p对胃癌细胞SGC7901中HPSE表达的调控及其对细胞增殖的影响

目的:探讨miR-337-3p对胃癌细胞SGC7901中HPSE表达的调控作用及其对细胞增殖的影响。方法:miR-337-3p mimics转染SGC7901细胞后,应用RT-PCR、Western blot检测其对miR-337-3p表达水平的影响及其对HPSE表达的影响;荧光素酶实验检测转染细胞中HPSE 3’-UTR荧光素酶活性;CCK-8测定细胞增殖的影响。结果:上调miR-337-3p可以抑制HPSE的表达、降低HPSE 3’-UTR启动子荧光素酶活性,并可抑制胃癌细胞增殖。结论:miR-337-3p可以通过下调HPSE的表达抑制胃癌细胞SGC7901增殖。

miR⁃30b⁃5p通过下调MKRN3表达抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR⁃30b⁃5p在食管癌细胞中的表达及对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响机制。方法收集2016年1月至2020年12月就诊于安徽省第二人民医院手术治疗的70例食管癌患者的肿瘤和癌旁组织,检测miR⁃30b⁃5p的表达水平。qRT⁃PCR检测食管癌细胞株中miR⁃30b⁃5p的表达水平。将miR⁃30b⁃5p mimics转染至TE⁃13和ECA109细胞中,检测转染后各组细胞中miR⁃30b⁃5p及MKRN3表达水平。根据细胞增殖实验,Transwell及裸鼠成瘤实验检测食管癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。双荧光素酶实验验证miR⁃30b⁃5p的靶基因。蛋白印迹实验探索miR⁃30b⁃5p对食管癌影响的分子机制。结果miR⁃30b⁃5p在食管癌细胞和食管癌组织中相较于正常上皮细胞和癌旁组织表达显著下降(P<0.05)。细胞增殖实验显示,miR⁃30b⁃5p mimics组增殖率显著低于NC组(P<0.05);Transwell实验结果显示,miR⁃30b⁃5p mimics组迁移率及侵袭率显著低于NC组(P<0.05);双荧光素酶实验显示MKRN3是miR⁃30b⁃5p的直接靶基因。Western blot检测JAK/STAT信号通路蛋白发现,miR⁃30b⁃5p mimics组蛋白低于NC组(P<0.05)。结论miR⁃30b⁃5p在食管癌中呈现低表达,miR⁃30b⁃5p通过下调MKRN3表达抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。