LncRNA PURPL调节miR-342-3p/PIK3R1轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探究长链非编码RNA(PURPL)调节微小RNA-342-3p(miR-342-3p)/磷脂酰肌醇-3激酶调节亚基1(PIK3R1)轴对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:细胞实验:将si-NC、si-PURPL、si-PURPL+inhibitor NC、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor分别转染至肝癌细胞Huh-7细胞并命名为si-NC组、si-PURPL组、si-PURPL+inhibitor NC组、si-PURPL+miR-342-3p inhibitor组,未做任何处理的Huh-7细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PURPL、miR-342-3p、PIK3R1的关系;qRT-PCR检测人正常肝细胞系L02和人肝癌细胞系Huh-7中LncRNA PURPL、miR-342-3p表达;Western blot检测L02细胞、Huh-7细胞PIK3R1蛋白水平;MTT法检测Huh-7细胞增殖情况;流式细胞术检测Huh-7细胞凋亡率;Transwell检测Huh-7细胞侵袭数量;划痕试验测定Huh-7细胞迁移。体内实验:构建裸鼠异种移植模型,分组同细胞实验,检测肿瘤体积和肿瘤重量。结果:细胞实验结果显示:与si-NC组相比,si-PURPL组Huh-7细胞OD490值、划痕愈合率、侵袭细胞数量、LncRNA PURPL、PIK3R1水平显著下降(P<0.05),Huh-7细胞凋亡率、miR-342-3p相对表达量显著升高(P<0.05),而抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL抑制Huh-7细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡的效果;LncRNA PURPL负向调控miR-342-3p/PIK3R1轴。体内结果显示:si-PURPL组裸鼠肿瘤体积和质量较si-NC组下降(P<0.05);抑制miR-342-3p表达减弱了沉默LncRNA PURPL对体内肿瘤生长的抑制作用。结论:沉默LncRNA PURPL可抑制Huh-7细胞的恶性生物学行为,其机制可能与调控miR-342-3p/PIK3R1轴有关。

LINC01503通过miR-342-3p/IGF2R轴促进上皮性卵巢癌的进展

目的:探讨LINC01503在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达水平和生物学功能及其可能的作用机制。方法:收集2015年5月至2016年5月间在河北医科大学第四医院妇瘤科手术切除并经病理学确诊的85例EOC患者的肿瘤组织和输卵管组织。常规培养人EOC细胞A2780、SKOV3、OVCAR3和OV90及正常人卵巢上皮细胞IOSE80,将si-LINC01503、si-NC及miR-342-3p mimic、miR mimic NC分别转染至SKOV3和A2780细胞,分别作为si-LINC01503组、si-NC组、miR-342-3p mimic组和miR mimic NC组。q PCR法检测EOC组织和细胞中LINC01503的表达水平,Kaplan-Meier法分析LINC01503表达水平与患者生存的关系。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01503/miR-342-3p/IGF2R轴相关分子间的靶向关系。平板克隆、划痕愈合和Transwell实验分别检测敲低LINC01503及转染miR-342-3p mimic对A2780和SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。WB法检测EOC细胞中LINC01503/miR-342-3p通路对IGF2R蛋白表达的影响。构建A2780细胞裸鼠移植瘤模型,观察敲低LINC01503对移植瘤生长的影响。结果:EOC组织和细胞中LINC01503表达水平分别显著高于输卵管组织和IOSE80细胞(均P<0.01),LINC01503高表达组患者术后PFS和OS均显著短于LINC01503低表达组患者(均P<0.01)。敲低LINC01503、转染miR-342-3p mimic均可抑制EOC细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01)。敲低LINC01503可下调IGF2R的表达(P<0.01),这一现象可通过转染miR-342-3p inhibitor挽救。敲低LINC01503可抑制A2780细胞裸鼠移植瘤的生长(P<0.01)。结论:在EOC组织和细胞中呈高表达的LINC01503与患者的不良预后密切相关,LINC01503可能通过吸附miR-342-3p影响IGF2R表达进而促进EOC的进展。

血清IL-17A、miR-342-3p与2型糖尿病肾病严重程度及预后的关系

目的探讨血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p与2型糖尿病肾病严重程度及预后的关系。方法选取2019年1月至2021年12月东方市人民医院内分泌科收治的119例2型糖尿病患者为研究对象。根据糖尿病肾病发生情况将患者分为对照组(单纯2型糖尿病,n=49)和糖尿病肾病组(发生糖尿病肾病,n=70),并根据白蛋白尿分期和CKD分期并将糖尿病肾病组患者分为G1A2组(n=12)、G2A2组(n=14)、G3A3组(n=17)、G4A3组(n=16)和G5A3组(n=11)等5个亚组。检测比较六组血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p水平,分析血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p水平与UACR和肾小球滤过率的关系。糖尿病肾病患者均随访至2022年11月30日,统计患者随访期间肾存活情况,并将患者分为肾存活组(n=49)和肾非存活组(n=21)。分析血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p水平对2型糖尿病肾病预后的影响及其对2型糖尿病肾病预后的预测效能。结果不同糖尿病肾病病情患者血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p水平比较:G5A3组<G4A3组<G3A3组<G2A2组<G1A2组<对照组,差异有统计学意义(F=9.158,38.244,均P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,患者血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p水平与UACR均呈负相关(r=-0.879,-0.883,均P<0.001),但与其肾小球滤过率相关性不明显(r=0.338,0.286,P=0.592,0.704)。肾非存活组血清IL⁃17A、miR⁃342⁃3p水平均低于肾存活组,差异有统计学意义(t=5.997,5.194,均P<0.001)。Logistics回归模型分析结果显示,血清IL⁃17A和miR⁃342⁃3p水平均可明显影响患者预后[OR(95%CI)=(0.2300.111~0.478),0.212(0.096~0.470)]。ROC曲线分析结果显示,2型糖尿病肾病患者血清IL⁃17A和miR⁃342⁃3p水平的预后预测效能均良好,两者联合预测预后效能最佳。结论2型糖尿病肾病患者IL⁃17A和miR⁃342⁃3p表达水平均下调且均与病情严重程度和预后相关,可能作为其病情和预后早期评估参考指标。

紫花牡荆素通过上调miR-342-3p抑制宫颈癌HeLa细胞糖酵解

目的:探讨紫花牡荆素对宫颈癌HeLa细胞miR-342-3p表达和糖酵解的影响,验证紫花牡荆素是否通过上调miR-342-3p表达抑制宫颈癌HeLa细胞糖酵解。方法:使用不同浓度(0,10,30,100 nmol/L)的紫花牡荆素处理HeLa细胞,采用紫花牡荆素(30 nmol/L)联合miR-342-3p模拟物或抑制物转染HeLa细胞,随后用实时荧光定量PCR分析HeLa细胞miR-342-3p的表达水平,通过测定相对葡萄糖消耗量和相对乳酸产物,分析紫花牡荆素及紫花牡荆素联合miR-342-3p模拟物或抑制物转染对宫颈癌HeLa细胞糖酵解的影响。结果:紫花牡荆素以浓度依赖方式上调HeLa细胞miR-342-3p表达水平,同时降低HeLa细胞的葡萄糖消耗量和抑制乳酸产生。此外,miR-342-3p模拟物协同紫花牡荆素抑制HeLa细胞的葡萄糖消耗和乳酸产生;相反miR-342-3p抑制物减弱紫花牡荆素上调miR-342-3p表达水平的作用和减弱紫花牡荆素抑制HeLa细胞的葡萄糖消耗和乳酸产生作用。结论:紫花牡荆素通过上调miR-342-3p表达水平抑制HeLa细胞糖酵解。

异甘草素通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移的机制研究

目的 肺鳞癌(Lung squamous cell carcinoma,LUSC)是全世界范围内高频率发生的恶性肿瘤。最近的研究表明,异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)在肿瘤增殖和转移中发挥抗肿瘤活性。因此,研究旨在探讨ISL在抗LUSC转移中的作用机制。方法 利用梯度浓度ISL处理LUSC细胞,探究ISL在LUSC细胞增殖、迁移和侵袭中的抗癌特性。随后,利用生物信息学手段探寻了长链非编码RNA(Long non-coding RNAs, lncRNA)MIR22HG/miR-24-3p/Fas配体基因(Fas ligand Gene,FASLG)之间可能的互作关系。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测LUSC细胞中lncRNA MIR22HG、miR-24-3p、FASLG的表达,细胞计数盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、克隆形成、划痕愈合和Transwell实验分别检测细胞活力、增殖、迁移和侵袭。蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)检测上皮间充质转换(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)和转移相关蛋白的表达。RNA免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RIP)实验和双萤光素酶实验验证lncRNA MIR22HG与miR-24-3p、miR-24-3p与FASLG的结合关系。结果 ISL可以显著抑制LUSC细胞增殖、迁移和侵袭。生信分析及临床样本分析发现lncRNA MIR22HG在LUSC中低表达,ISL可以促进lncRNA MIR22HG的表达,抑制LUSC细胞的恶性行为。此外,lncRNA MIR22HG可以海绵吸附miR-24-3p进而调节FASLG的表达。miR-24-3p在LUSC中上调表达,FASLG在LUSC中下调表达。过表达FASLG可以逆转miR-24-3p过表达对LUSC增殖、转移以及EMT进程的促进作用。结论 这些结果表明,ISL通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移,表明ISL有潜力作为治疗LUSC的新型药物。

lncRNA MIR4435-2HG靶向miR-376a-3p调控胆管癌细胞生物学行为的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MIR4435-2HG(MIR4435-2HG)对胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对微小RNA-376a-3p(miR-376a-3p)的调控作用。方法 qRT-PCR法检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic与人胆管癌细胞RBE中MIR4435-2HG、miR-376a-3p的表达。将si-NC、si-MIR4435-2HG、miR-NC、miR-376a-3p mimics、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-NC、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-376a-3p分别转染至RBE细胞,作为si-NC组、si-MIR4435-2HG组、miR-NC组、miR-376a-3p组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组;采用MTT法、Transwell小室法及流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证MIR4435-2HG与miR-376a-3p的靶向关系。Western blot检测相关蛋白表达。结果 RBE细胞中MIR4435-2HG表达量升高(P<0.05),miR-376a-3p表达量降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MIR4435-2HG组MIR4435-2HG表达、细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率升高(P<0.05)。MIR4435-2HG可靶向调控miR-376a-3p;与si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组比较,si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论 敲低MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-376a-3p进而抑制RBE细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导其凋亡。

长链非编码RNAMIR22HG和微RNA-9-3p在骨关节炎病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MIR22HG和微RNA-9-3p(miR-9-3p)在骨关节炎(OA)病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性。方法 选取2020年10月至2021年10月在南充市中医医院确诊为OA的病人120例,作为OA组,60例体检健康人群作为对照组;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平;Pearson法分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的相关性以及二者与视觉模拟(VAS)评分、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)以及西安大略和麦马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC)评分的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p对OA的诊断价值。结果 OA组的血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著高于对照组(1.48±0.25比1.01±0.22),miR-9-3p的表达水平显著低于对照组(0.72±0.13比1.05±0.12)(P<0.05);相关性分析显示,lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平呈负相关关系(P<0.05);KLⅣ级血清lncRNA MIR22HG的表达水平、VAS评分、WOMAC评分显著高于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著高于KLⅡ级(P<0.05),KLⅣ级血清miR-9-3p的表达水平、HSS评分显著低于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著低于KLⅡ级(P<0.05);OA病人lncRNA MIR22HG的表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈正相关,与HSS评分呈负相关(P<0.05);miR-9-3p表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈负相关,与HSS评分呈正相关(P<0.05);二者联合诊断的AUC高于lncRNA MIR22HG、miR-9-3p单独诊断的AUC值(Z=2.22,P=0.012;Z=1.43,P=0.025)。结论OA病人血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著升高,miR-9-3p表达水平显著降低,二者与OA病情严重程度密切相关,且对OA具有一定的诊断价值。

LncRNA CRNDE调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法将人肺泡上皮细胞A549分为CK组、LPS组、LPS+si⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE组、LPS+si⁃CRNDE+inhibitor NC组、LPS+si⁃CRNDE+miR⁃338⁃3p inhibitor组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃KLF6组;qRT⁃PCR检测各组细胞CRNDE、miR⁃338⁃3p和KLF6表达水平;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA试剂盒检测TNF⁃α、IL⁃10和IL⁃1β水平;商品化试剂盒分析MDA、GSH⁃Px、SOD水平;Western blot检测细胞中KLF6、Cleaved⁃caspase⁃3、Bax、Bcl⁃2蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃338⁃3p与RNDE和KLF6的关系。结果与CK组相比,LPS组和LPS+si⁃NC组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著升高,miR⁃338⁃3p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著降低(P<0.05);与LPS+si⁃NC组相比,LPS+si⁃CRNDE组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著降低,miR⁃150⁃5p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著升高(P<0.05);干扰miR⁃338⁃3p表达或过表达KLF6均可降低下调CRNDE表达改善LPS诱导A549细胞损伤的作用(P<0.05)。结论下调CRNDE可调控miR⁃338⁃3p/KLF6轴减轻LPS诱导的A549细胞损伤。

miR-2116-3p和miR-342-3p对肝细胞癌诊断及预后价值的研究

目的:探讨miR-342-3p和miR-2116-3p在肝细胞癌中的临床价值。方法:该研究纳入进行根治性手术切除的HCC患者的肿瘤组织和瘤旁肝组织样本共57例,采用qRT-PCR法进行了miR-2116-3p、miR-342-3p的表达量测定并分析。结果:miR-2116-3p和miR-342-3p在肝癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(P=0.034,P<0.001)。ROC曲线分析二者具有诊断效能(P<0.05)。miR-2116-3p表达量可以作为预测HCC患者不良预后的独立危险因素。结论:在本研究57例样本中,miR-2116-3p以及miR-342-3p在肝炎相关的HCC组织中显著降低,具有HCC诊断价值,为潜在新的标志物;miR-2116-3p为HCC不良预后独立预测因素。

乳腺癌手术前后血清VCAM-1、miR-342-3p水平变化及其临床价值

目的 探究血清VCAM-1、miR-342-3p在乳腺癌手术前后的表达水平及其临床意义。方法 选取乳腺癌患者100例,收集患者临床资料。ELISA法检测患者手术前后血清VCAM-1水平以及RT-PCR检测miR-342-3p水平。结果 不同肿瘤大小、TNM分期、病理类型和淋巴结转移情况的乳腺癌患者术前血清VCAM-1、miR-342-3p表达水平差异均有统计学意义(P<0.05);不同年龄患者的术前血清VCAM-1、miR-342-3p表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。乳腺癌患者术后1周、1个月和6个月血清VCAM-1、miR-342-3p表达水平与术前相比均明显降低(P<0.05)。术前VCAM-1高表达组16个月累积生存率为70.4%,低于低表达组的90.2%(P<0.05);术前miR-342-3p高表达组16个月累积生存率为73.5%,低于低表达组的88.3%(P<0.05)。结论 乳腺癌患者血清VCAM-1、miR-342-3p表达水平在乳腺癌手术后明显下降。术前患者血清VCAM-1、miR-342-3p水平与病理特征及预后显著相关,可作为判断手术治疗效果的重要指标。

穿心莲内酯通过下调miR-342-3p抑制结核分枝杆菌感染的巨噬细胞焦亡

【目的】探讨穿心莲内酯(Andro)是否通过下调miR-342-3p抑制结核分枝杆菌(Mtb)感染的巨噬细胞焦亡。【方法】构建Mtb H37Ra感染的小鼠RAW264.7巨噬细胞模型。实验分5组:Control组(对照组)为未作处理的巨噬细胞;Mtb组为经Mtb感染的巨噬细胞;Mtb+Andro组为巨噬细胞经Mtb感染后,给予Andro处理;Mtb+Andro+miR-NC组或Andro+Mtb+miR-342-3p组为巨噬细胞经Mtb和Andro联合处理后,分别转染miR-NC或miR-342-3p mimic。各组处理后,利用细胞流式术分析细胞凋亡,乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测LDH活性,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞焦亡相关的炎性因子白细胞介素(IL)-6和IL-18含量,荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定miR-342-3p表达,Western Blot法检测GSDMD、Caspase-1、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧化酶1(HO-1)蛋白表达。【结果】与Control组比较,Mtb组和Mtb+Andro组的细胞凋亡率,LDH活力,IL-6、IL-18含量,miR-342-3p表达,GSDMD、Caspase-1、Nrf2及HO-1的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与Mtb组比较,Mtb+Andro组的细胞凋亡率,LDH活力,IL-6、IL-18含量,miR-342-3p表达,GSDMD、Caspase-1、Nrf2及HO-1的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。另外,与Mtb+Andro+miR-NC组比较,Mtb+Andro+miR-342-3p组上述指标均升高(P<0.05)。【结论】Andro通过下调miR-342-3p表达,减少Mtb感染的巨噬细胞炎症和细胞焦亡,其分子机制与Nrf2/HO-1通路有关。

重度子痫前期患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p及杀伤细胞抑制性受体的表达意义

目的探究重度子痫前期(PE)患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p及杀伤细胞抑制性受体(KIR)表达水平及临床意义。方法回顾性分析2019年3月—2022年8月于合肥市第一人民医院南区就诊143例PE患者临床资料。根据PE严重程度将患者分为重度PE组(n=85)和轻度PE组(n=58),另选取同期正常妊娠孕妇65例为对照组。比较3组及PE患者中不同妊娠结局患者的外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR表达水平;受试者工作特征曲线(ROC)评估miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR对重度PE的诊断效能;Logistic回归分析miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR与PE患者妊娠结局的关系。结果与对照组比较,轻度PE组、重度PE组外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR表达水平升高,且重度PE组高于轻度PE组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR诊断重度PE的AUC值分别为0.836、0.835和0.879(P<0.05),最佳阈值分别为1.43、1.70和52.13μg/L。各组不良妊娠结局发生率比较差异有统计学意义(P<0.05),且重度PE组最高,轻度PE组高于对照组(P<0.05)。轻度及重度PE患者中,结局不良患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR水平均高于结局良好者(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,重度PE、miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR与PE患者不良妊娠结局呈正相关(P<0.05)。结论PE患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR表达水平偏高,并与病情严重程度相关,可能会增加PE患者不良妊娠结局风险。检测外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR水平或可为临床重度PE的诊断提供参考。

LncRNA MIR22HG调节miR-132-3p/TLR2轴对急性心肌梗死小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响

目的:探讨长链非编码RNA miR-22宿主基因(lncRNA MIR22HG)调节miR-132-3p/Toll样受体2(TLR2)轴对急性心肌梗死(AMI)小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响。方法:取C57BL/6J小鼠随机分为sham组、AMI组、AMI+sh-NC组、AMI+shMIR22HG组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组,每组10只,除去sham组外,其它组都进行冠状动脉左前降支结扎,sham组只开胸不结扎冠状动脉,其中AMI+sh-NC组、AMI+sh-MIR22HG组、AMI+shMIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组小鼠分别相对应的对尾静脉注射sh-NC、sh-MIR22HG、sh-MIR22HG+antagomir-NC、sh-MIR22HG+antagomir-132-3p。超声心动图评估小鼠心室重构和心脏功能;HE染色和Masson染色观察心肌组织病理学变化及纤维化;RT-qPCR检测心肌组织MIR22HG、miR-132-3p表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;Western blotting检测心肌组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleved caspase-3)/半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、collagenⅢ和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证MIR22HG和miR-132-3p、miR-132-3p和TLR2的关系。结果:与sham组比较,AMI组小鼠心功能显著降低,心肌组织损伤、心肌纤维化加重,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著升高,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与AMI+sh-NC组比较,AMI+sh-MIR22HG组小鼠心功能改善,心肌组织损伤、心肌纤维化减轻,心肌细胞凋亡率、MIR22HG、TLR2、cleved caspase-3/caspase-3、collagenⅠ、collagenⅢ和α-SMA蛋白表达水平显著降低,miR-132-3p和Bcl-2蛋白表达上升(P<0.05);下调miR-132-3p减弱了敲减MIR22HG对心肌组织的保护作用;双荧光素酶报告基因实验结果显示,MIR22HG靶向调控miR-132-3p表达,miR-132-3p靶向负调控TLR2表达。结论:抑制MIR22HG表达可通过调节miR-132-3p/TLR2轴抑制AMI小鼠心肌细胞凋亡,改善小鼠心室重构。

miR-342-3p对三阴性乳腺癌化疗敏感性的影响

目的:研究miR-342-3p对三阴性乳腺癌化疗敏感性的影响。方法:收集江苏省肿瘤医院乳腺外科2011年1月至2013年8月行术前化疗的三阴性乳腺癌病人32例,其中完全缓解(CR)5例,部分缓解(PR)27例,检测肿瘤组织中miR-342-3p的表达情况;应用脂质体转染方法,三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231转染has-miR-342-3p模拟物(mimic)和miR-342-3p抑制物(inhibitor),设立阴性对照(mim-NC)组和(inhi-NC)组。mimic组,mim-NC组,inhibitor组和inhi-NC组细胞株,分别加入浓度为2μmol/L的紫杉醇,顺铂及4μmol/L的阿霉素进行培养;应用CCK8法和流式细胞仪检测48 h后肿瘤细胞增殖率和凋亡的变化。结果:miRNA-342-3p在术前化疗后达到CR的三阴性乳腺癌组织中的表达明显高于PR的三阴性乳腺癌组织(P<0.05)。Mimic组细胞株与紫杉醇,顺铂作用48 h后肿瘤细胞增殖率低于mim-NC组,凋亡率高于mim-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。Inhibitor组细胞株与紫杉醇,顺铂作用48 h后,肿瘤细胞增殖率高于inhiNC组,凋亡率低于inhi-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。但与阿霉素作用后细胞增殖率和凋亡率在mimic组与mimNC组,inhibitor组与inhi-NC组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-342-3p高表达的三阴性乳腺癌对化疗药物反应更敏感,miR-342-3p能调控乳腺癌细胞株MDA-MB-231对紫杉醇和顺铂的化疗敏感性,但miR-342-3p不影响MDAMB-231细胞株对阿霉素的化疗敏感性。

miR-342-3p在不同乳腺癌分子亚型及乳腺癌细胞株中的表达

目的：乳腺癌的个体化治疗越来越受到人们的重视，不同乳腺癌分子亚型具有不同的预后和治疗方案，研究发现miR-342-3p与乳腺癌激素受体和内分泌治疗耐药相关，与肿瘤细胞凋亡相关，课题进一步研究miR-342-3p在不同乳腺癌分子亚型和不同乳腺癌细胞株中的表达，揭示miR-342-3p在乳腺癌个体化治疗中的重要作用。方法收集乳腺癌手术患者组织标本共90例及培养乳腺癌细胞株MCF-7、SKBr3和MDA-MB-231，使用实时荧光定量PCR检测miR-342-3p在乳腺癌组织中的表达情况。结果 miR-342-3p在不同分子亚型乳腺癌组织中的表达以Lumina B型最高（1．594±0．465），其次为Lumina A 型（1．386±0．443），再次是Her-2高表达型（1．165±0．337），三阴性乳腺癌组织中表达最低（0．837±0．351），差异有统计学意义（P＜0．05）；miR-342-3p的表达在不同年龄组、有无淋巴结转移及与肿瘤大小、组织分级和病理分期方面，差异无统计学意义（P＞0．05）；miR-342-3p在乳腺癌细胞株中的表达，以SKBr3为参照，MCF-7的相对倍数为126（118～134），MDA-MB-231的相对倍数为0．017（0．014～0．018）。结论 miR-342-3p在不同乳腺癌分子亚型和乳腺癌细胞株中表达存在差异，与乳腺癌不同分子亚型相关，可能成为乳腺癌分型的参考指标和好的预后相关。

miR-342-3p在鼻咽癌中的表达及意义

目的:探讨miR-342-3p在鼻咽癌(NPC)中的表达及其意义。方法:miRNA芯片检测人永生化鼻咽上皮细胞系NP69和低分化NPC细胞CNE2中miRNA的差异表达;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测NPC组织中miR-342-3p的表达;GO and Pathway分析miR-342-3p在NPC发生发展中可能涉及的功能及其参与的信号通路。结果:miRNA芯片结果表明,miR-342-3p在NPC细胞CNE2中低表达,qPCR结果进一步证实miR-342-3p在NPC组织中低表达;GO分析表明,具有显著差异的10个功能中,与NPC发生发展关系较为密切的是miR-342-3p。Pathway分析显示,miR-342-3p与丝裂原应激活化蛋白(MAPK)信号通路相关性较大。结论:miR-342-3p的低表达可能与NPC的发生和发展相关。

CircSMC3调节miR-582-5p/MCL1轴对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:探讨环状非编码RNA(CircRNA)SMC3通过调节微小RNA(miR)-582-5p/髓细胞白血病基因1(MCL1)轴对胃癌(GC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:qRT-PCR检测4种GC细胞系及正常胃上皮细胞系GES-1中SMC3、miR-582-5p、MCL1mRNA的表达水平。将SGC-7901细胞分为对照组、si-NC组、si-SMC3组、mimics NC组、miR-582-5p组、si-SMC3+inhibitor NC组、si-SMC3+miR-582-5p inhibitor组、miR-582-5p+pcDNA3.1组、miR-582-5p+MCL1组。检测各细胞凋亡、增殖、迁移及相关蛋白表达的情况;验证miR-582-5p与SMC3、MCL1的靶向关系。结果:4种GC细胞系中SMC3、MCL1 mRNA表达均增加,miR-582-5p表达下降(P<0.05)。干扰SMC3、过表达miR-582-5p可以抑制SGC-7901细胞增殖、迁移及相关蛋白、表达(P<0.05);抑制miR-582-5p表达可逆转干扰SMC3对细胞的作用(P<0.05);上调MCL1可逆转过表达miR-582-5p细胞的作用(P<0.05)。结论:干扰SMC3可能通过调节miR-582-5p/MCL1轴,抑制SGC-7901细胞增殖、迁移,促进凋亡。

积雪草苷调控miR-342-5p/AQP3轴保护IL-1β诱导的软骨细胞损伤

目的探讨积雪草苷(Ass)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤的影响及作用机制。方法不同浓度的Ass作用IL-1β诱导软骨细胞24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-342-5p和水通道蛋白3(AQP3)mRNA表达水平,Western Blot法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)和AQP3蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-342-5p与AQP3靶向关系。转染miR-342-5p抑制剂或AQP3过表达载体至软骨细胞,上述相同方法检测抑制miR-342-5p表达或AQP3过表达对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及IL-6和TNF-α表达的影响。结果Ass可抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡率、Bax蛋白、IL-6和TNF-α表达及miR-342-5p表达(P<0.05),促进Bcl-2蛋白、AQP3 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。miR-342-5p在软骨细胞中负调控AQP3表达。抑制miR-342-5p或AQP3过表达后,IL-1β诱导的软骨细胞凋亡率、Bax蛋白、IL-6和TNF-α表达降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。抑制AQP3表达逆转了抑制miR-342-5p对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡、Bax和Bcl-2蛋白及IL-6和TNF-α表达的影响。结论Ass可抑制IL-1β诱导软骨细胞凋亡和炎症反应,其可能通过调控miR-342-5p/AQP3保护软骨细胞损伤。

miR-342-3p在乳腺癌组织中的表达及意义

目的:研究miR-342-3p在乳腺癌中的表达及与临床病理联系。方法:收集2008年1月～2012年8月乳腺癌手术患者组织标本共85例,使用实时荧光定量PCR检测miR-342-3p在乳腺癌组织中的表达情况,应用免疫组化的方法检测乳腺癌组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、Her-2及P53的表达。结果:miRNA-342-3p在Lumina型乳腺癌组织中高表达,在Her-2高表达型乳腺癌次之,在三阴性乳腺癌组织中表达最低,差异有统计学意义(P<0.05);miRNA-342-3p的表达与不同ER、Her-2及P53的表达相关,差异有统计学意义(P<0.05),在不同PR状态、不同年龄组、有无淋巴结转移及与肿瘤大小、组织分级和病理分期间,差异无统计学意义(P>0.05),癌与癌旁组织间无显著性差异(P>0.05)。结论:miR-342-3p在不同乳腺癌分子亚型中表达存在差异,可能成为乳腺癌尤其是三阴性乳腺癌治疗的新靶点。

miR-342-3p与女性相关疾病的研究进展

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性的,长度为19~25 nt的单链非编码RNA,通过完全和(或)部分互补的原则结合到靶基因3’UTRs或者直接剪切靶基因mRNA,以降解或抑制mRNA翻译的方式调控靶基因的表达。miR-342-3p位于人染色体14q32处,是最近研究较多的miRNA,其主要作为抑癌基因发挥抑制肿瘤生长、转移的作用。现有的研究表明,miR-342-3p在肺癌、前列腺癌、骨肉瘤等多种肿瘤中发挥作用,且在乳腺癌、子痫前期、卵巢早衰等多种女性相关疾病中发挥着重要功能。本文综述了miR-342-3p在女性相关疾病中的生物学功能及作用靶点,为miR-342-3p的临床应用提供理论依据。