miR⁃429靶向调控SIAH1基因对结直肠癌细胞LOVO增殖的影响

目的探讨miR⁃429靶向SIAH1基因对结直肠癌细胞系LOVO细胞增殖的影响。方法采用qRT⁃PCR检测正常结肠黏膜上皮细胞系NCM460和结直肠癌细胞系SW480、LOVO、HT⁃29中miR⁃429的表达。将miR⁃429 mimic和miR⁃429阴性对照序列(NC)转染至LOVO细胞,同时设置Control组。预测miR⁃429的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系。采用Western blot检测SIAH1蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布情况。结果qRT⁃PCR检测结果显示,相对于NCM460细胞,miR⁃429在各结直肠癌细胞系中的表达均降低(均P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验证实了SIAH1与miR⁃429的靶向关系。与NC组相比,过表达miR⁃429能抑制LOVO细胞中SIAH1蛋白的表达(P<0.001),细胞被阻滞在G0G1期,细胞增殖能力降低(P<0.001)。结论miR⁃429通过靶向SIAH1基因表达抑制LOVO细胞增殖。

肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199联合诊断胰腺癌的价值

目的探讨与分析肿瘤标志物血清miR-429、癌胚抗原(CEA)、AFF3、糖类抗原199(CA199)联合诊断胰腺癌的价值。方法选取2018年8月—2022年12月在内蒙古自治区精神卫生中心接受检验的105例胰腺癌患者作为胰腺癌组,同期选取在内蒙古自治区精神卫生中心接受检验的105例胰腺良性结节作为良性组。检测胰腺癌组与良性组的血清miR-429、CEA、AFF3、CA199水平,判断阳性率与诊断价值。结果胰腺癌组的血清CEA、AFF3、CA199含量显著高于良性组(P<0.05),血清miR-429相对表达水平与良性组相比也显著增加(P<0.05)。胰腺癌组的血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表达阳性率为74.29%、80.00%、84.76%、90.48%,显著高于良性组的4.76%、5.71%、3.81%、6.67%(P<0.05)。在胰腺癌210例患者中,Pearson相关分析显示血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表达水平与组织学分化、临床分期、淋巴结转移等存在相关性(P<0.05)。肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199判断为胰腺癌104例,肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199鉴别诊断胰腺癌的敏感性与特异性分别为98.10%(103/105)、99.05%(104/105),阳性预测值为99.04%(103/104),阴性预测值为98.11%(104/106)。受试者操作特征(ROC)曲线分析显示肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199联合诊断胰腺癌的最大曲线下面积为0.920,Kappa检验分析联合诊断的一致性为0.874。结论胰腺癌多伴随有血清miR-429、CEA、AFF3、CA199的高表达,与患者的病理特征存在相关性,肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199联合诊断胰腺癌具有很高的敏感度与特异度。

miR-429对烧伤小鼠肺组织炎性反应和氧化应激的影响

目的探讨miR-429对烧伤小鼠肺组织炎性反应和氧化应激的影响及可能的机制。方法24只C57BL/6小鼠,按随机数表法分为对照组、模型组、阴性对照组和miR-429抑制剂组,每组6只。除对照组外,其他3组小鼠通过热水烫伤法构建小鼠烧伤模型。其中,miR-429抑制剂组和阴性对照组小鼠通过尾静脉分别注射等量的miR-429抑制剂miR-429 antagomir以及阴性对照miR-NC;对照组和模型组小鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液。qRT-PCR实验检测肺组织中miR-429的表达水平;ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)水平;HE染色评估肺组织病理变化;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡情况;Western blotting检测肺组织中Nrf2和HO-1蛋白表达情况。结果与对照组小鼠比较,模型组小鼠肺泡壁变宽,并出现明显的组织水肿和炎症细胞浸润;肺组织中凋亡细胞数量明显增多,且miR-429表达、TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA含量明显升高,而SOD、CAT和GSH含量以及Nrf2蛋白、HO-1蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与阴性对照组比较,miR-429抑制剂组小鼠肺组织病理损伤情况得到明显改善;肺组织中凋亡细胞数量明显减少,miR-429表达、TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA含量明显降低,而SOD、CAT和GSH含量以及Nrf2蛋白、HO-1蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-429表达能够抑制烧伤小鼠肺组织的炎性反应,减轻氧化应激损伤,其分子机制或许与Nrf2/HO-1信号通路相关。

子宫内膜异位症患者miR-429与HIF-1α、VEGF水平和临床分期的相关性及其诊断效能

目的 研究子宫内膜异位症(EMs)患者血清微小核糖核酸-429(miR-429)与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和EMs分期的相关性,并探讨其对EMs预测价值。方法 选取2020年2月至2023年1月深圳市龙华区人民医院妇科EMs确诊患者135例为EMs组,年龄21~46岁,平均(32.67±9.03)岁,其中Ⅰ期23例、Ⅱ期35例、Ⅲ期49例及Ⅳ期28例。同期非EMs健康育龄妇女80例为对照组,年龄20~47岁,平均(30.96±8.74)岁。分别检测miR-429、HIF-1α及VEGF水平,并对结果进行统计分析。结果 EMs组miR-429、HIF-1α及VEGF水平[2.70±0.80,(20.90±6.58)pg/mL及(234.10±80.37)pg/mL]明显高于对照组[0.98±0.11,(6.06±3.35)pg/mL及(117.91±22.26)pg/mL],差异有统计学意义(t=19.118、18.768、12.635,均P<0.05);miR-429、HIF-1α及VEGF水平随EMs临床分期的加重而升高,不同临床分期之间差异有统计学意义(F=66.860、25.558、24.362,均P<0.05),但Ⅰ期与Ⅱ期之间差异无统计学意义(t=1.340、1.294、0.889,均P>0.05)。经Pearman/Spearman相关性分析,miR-429与HIF-1α、VEGF水平及临床分期呈明显正相关(r=0.525 0、0.483 2、0.751 0,均P<0.05);经ROC曲线分析,血清miR-429预测EMs的曲线下面积(AUC)为0.915(95%CI:0.877~0.953),特异度为72.98%,明显高于HIF-1α和VEGF指标(Z=2.405、2.756,均P<0.05),但明显低于三者联合检测预测价值(AUC为0.959,特异度为79.6%),而敏感度基本一致。结论 EMs患者miR-429水平明显升高,且与HIF-1α、VEGF水平及EMs分期呈明显正相关,其可能通过激活HIF-1α/VEGF通路在EMs发病中发挥作用的,且三者联合检测对EMs诊断有更高的预测价值。

LncRNA ZEB1-AS1调节miR-429/PDX-1轴对结肠癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探究长链非编码RNA E盒锌指蛋白1反转录本1(LncRNA ZEB1-AS1)调节miR-429/胰腺十二指肠同源盒基因-1(PDX-1)轴对结肠癌细胞增殖、凋亡以及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:q RT-PCR法测定细胞LncRNA ZEB1-AS1、miR-429、PDX-1 m RNA表达水平;将SW480细胞分为对照组、si-NC组、si-LncRNA ZEB1-AS1组、si-LncRNA ZEB1-AS1+inhibitor NC组、si-LncRNA ZEB1-AS1+miR-429 inhibitor组、si-LncRNA ZEB1-AS1+miR-429 inhibitor+sh NC组、si-LncRNA ZEB1-AS1+miR-429 inhibitor+sh PDX-1组,检测SW480细胞增殖、凋亡、EMT相关蛋白、紧密连接蛋白以及PDX-1表达;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA ZEB1-AS1、PDX-1与miR-429关系。结果:与人正常结肠上皮细胞相比,NCM-460、HCT116、SW620、CT26、SW480中LncRNA ZEB1-AS1、PDX-1 m RNA表达升高,miR-429表达降低,其中SW480细胞升高或降低最为显著(P<0.05);与对照组相比,si-LncRNA ZEB1-AS1组SW480细胞增殖抑制率、凋亡率及E-cad、ZO-1、Claudin-1表达升高,N-cad、Vimentin表达降低(P<0.05);miR-429 inhibitor下调可逆转LncRNA ZEB1-AS1沉默对SW480细胞的作用;si-LncRNA ZEB1-AS1与miR-429 inhibitor基础上沉默PDX-1可恢复LncRNA ZEB1-AS1沉默对SW480细胞的作用;miR-429与LncRNA ZEB1-AS1以及PDX-1均有靶向关系。结论:沉默ZEB1-AS1可能通过促进miR-429表达,抑制PDX-1表达,进而抑制SW480细胞增殖与EMT,并促进细胞凋亡。

卵巢癌患者血浆miR-205、miR-212及miR-429的水平分析及意义

目的探讨卵巢癌患者血浆miR-205、miR-212及miR-429水平,分析3者与卵巢癌临床病理学特征的关系。方法收集本院收治的71例上皮性卵巢癌患者未经治疗前的血浆标本(上皮性卵巢癌组),采用实时定量RT-PCR(qRTPCR)法检测以上标本的miR-205、miR-212及miR-429水平,收集卵巢癌患者的临床病理学参数(年龄、临床分期、分化程度、组织类型及淋巴结转移情况),比较不同miR-205、miR-212及miR-429水平的临床病理参数分布差异,采用受试者工作特征曲线(ROC)评价血浆miR-205、miR-212及miR-429水平在卵巢癌诊断中的临床价值。同时选取同期的68例女性健康体检者(健康对照组)及66例良性卵巢肿瘤患者(良性卵巢肿瘤组)的血浆标本作对照。结果上皮性卵巢癌组的血浆miR-205水平高于良性卵巢肿瘤组和健康对照组,但miR-212和miR-429水平低于良性卵巢肿瘤组和健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);上皮性卵巢癌组中的miR-205水平与年龄、临床分期、分化程度及淋巴结转移有关,miR-212水平与临床分期、分化程度有关,miR-429水平与临床分期、淋巴结转移有关,以上差异均有统计学意义(P<0.05);卵巢癌患者血浆miR-205水平与miR-212及miR-429均呈负相关(r=-0.572、-0.325),miR-212与miR-429呈正相关(r=0.473),差异均有统计学意义(P<0.05);血浆miR-205、miR-212及miR-429诊断卵巢癌的AUC、灵敏度和特异度分别为0.915、92.1%和86.2%,0.944,87.3%和91.0%,0.905、88.5%和83.6%。结论卵巢癌患者血浆中miR-205呈高表达,miR-212和miR-429呈低表达,与临床病理学参数有关,且在卵巢癌诊断中有一定的价值,可用于卵巢癌的辅助诊断和病情评估。

MiR-429调节肝细胞癌炎性微环境、分化及增殖

目的观察miR-429对人肝细胞癌(HCC)炎性浸润、分化以及增殖的影响。方法利用免疫磁珠法分选人肝癌细胞系HCCLM3细胞,得到Ep CAM(CD326)阳性以及阴性的细胞。对两种细胞分别进行miR-429的干扰(AntagomiR-429)与过表达(miR-429mimic),通过流式细胞技术、real-time PCR法检测其干预效果。利用CCK-8法检测miR-429过表达及干扰肝癌细胞系的增殖活性并绘制生长曲线。分别利用干扰miR-429的Ep CAM阳性HCCLM3细胞及其对照、过表达miR-429的Ep CAM阴性HCCLM3细胞及其对照进行NOD-SCID小鼠皮下荷瘤实验,通过免疫组织化学法检测成瘤后癌组织内炎性细胞浸润情况及增殖分化相关蛋白的表达情况。结果干扰miR-429的表达能降低Ep CAM阳性肝癌细胞的比例,反之,过表达miR-429能促使Ep CAM阴性肝癌细胞转化为Ep CAM阳性细胞。过表达miR-429可增强Ep CAM阴性肝癌细胞在小鼠体内的成瘤能力,而干扰miR-429表达可降低Ep CAM阳性细胞成瘤率;与对照相比,过表达miR-429的瘤体组织中出现大量的巨噬细胞,提示miR-429可招募炎性细胞浸润从而促进肿瘤发展;AFP染色提示miR-429与肿瘤的低分化有关;Ki67染色结果证实miR-429在体内能够促进肿瘤组织生长。与对照相比,miR-429在体外也可以促进肝癌细胞的增殖,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-429能够在体外、体内水平影响Ep CAM阳性细胞的比例,显著影响肝肿瘤微环境、促进肿瘤细胞的增殖活性并降低其分化潜能。

miR-429与肿瘤

miR-429是miR-200家族成员之一。研究表明,miR-429异常表达与肿瘤的发生、发展、转移、凋亡和耐药等密切相关。但miR-429在肿瘤中所起的作用一直有争议,可作为肿瘤抑制剂或促进剂,具肿瘤细胞/组织特异性。其在骨肉瘤、肾癌、卵巢癌、乳腺癌、宫颈癌、胶质瘤、口腔鳞状细胞癌、胃癌、食管癌、胰腺癌中起抑癌作用,而在肺癌、前列腺癌和子宫内膜癌中起促癌作用,但在结肠癌、肝癌、膀胱癌中的作用尚不明确。本文综述了近年来miR-429在肿瘤发生、发展中的作用及潜在的调控机制,为其作为肿瘤诊断、治疗及预后的潜在生物标记分子提供新的启示和参考。

胰腺癌患者血循环miR-429的表达及其临床意义

目的:检测胰腺癌患者血浆miR-429表达水平,分析其表达与胰腺癌临床病理学特征的关系。方法:定量PCR检测BXPC-3、PANC-1细胞株以及3例胰腺癌组织中miR-429的表达水平。收集未经治疗的37例胰腺癌患者的血浆标本,采用实时定量PCR法检测miR-429表达水平,收集胰腺癌患者的临床病理学参数(年龄、临床分期、分化程度、组织类型及淋巴结转移情况),比较不同miR-429水平的临床病理参数分布差异。结果:相较于正常胰腺细胞、胰腺组织,miR-429在胰腺癌细胞株和癌组织中均处于低表达水平(P<0.05)。miR-429表达与肿瘤大小、TNM临床分期、神经浸润以及生存期密切相关,均有统计学差异(P<0.05)。结论:循环血miR-429的表达可能成为胰腺癌早期诊断、预后判断的指标。

MiR-429对人U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制

目的研究miR-429对人U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法培养人U87胶质瘤细胞,应用Lipofectamine LTX试剂将pre-mi R-429质粒以及anti-miR-429质粒(sh RNA质粒载体)稳定转染人U87胶质瘤细胞,real-time PCR验证转染效率后,应用CCK-8检测增殖能力的变化;使用Transwell小室法检测人U87胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的变化;应用real-time PCR和Western blot检测E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)m RNA和蛋白表达含量变化;将ZEB1分别转染至U87胶质瘤细胞或miR-429过表达的U87胶质瘤细胞,应用Transwell小室检测mi RNA-429和ZEB1分别过表达或二者双过表达对人U87胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果与对照组比较,miR-429过表达显著抑制了人U87胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力;显著降低了ZEB1在人U87胶质瘤细胞的m RNA和蛋白表达水平;ZEB1过表达显著增强了人U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力;并且ZEB1过表达有效阻断了mi R-429抑制U87胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用。结论 mi R-429能够通过抑制ZEB1降低人U87胶质瘤细胞的增殖,迁移和侵袭能力。

急性淋巴细胞白血病患者miR-429表达水平及其预后价值

目的:分析急性淋巴细胞白血病(ALL)患者miR-429表达水平及其临床预后价值。方法:选择2016年4月-2018年2月在本院血液科诊治的ALL患者126例,并选择同期100例体检健康者作为对照,收集研究对象的骨髓单个核细胞,采用RT-PCR检测单个核细胞的miR-429水平,同时分析miR-429表达水平与患者临床特征及疗效的相关性,采用Kaplan-Meier法及多因素Cox回归模型分析miR-429水平与ALL患者预后的相关性。结果:ALL患者中,miR-429相对水平为2.47±0.07,显著高于对照组(P<0.05)。miR-429水平与ALL患者的白细胞水平(r=0.994)、LDH(r=0.992)、骨髓原始细胞比例(r=0.995)、危险分级(r=0.991)有明显相关性。miR-429水平与ALL患者的年龄、性别、Hb水平、Plt、免疫分型无相关性(P>0.05)。CR患者miR-429水平与对照组差异无统计学意义(P>0.05);PR患者miR-429水平均显著高于对照组及CR患者(P<0.05)。NR患者miR-429水平均显著高于其余各组(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析发现,miR-429低表达的ALL患者总生存率明显高于高表达组(P<0.05)。单因素Cox回归分析发现,ALL患者的白细胞水平、骨髓原始细胞比例、Hb水平、LDH浓度、危险分级、miR-429是总生存率的影响因素(P<0.05)。多因素Cox回归分析发现,白细胞水平、骨髓原始细胞比例、危险分级、以及miR-429是ALL患者总生存率的影响因素(P<0.05)。结论:ALL患者中miR-429表达水平较高,与患者的疗效及预后密切相关,可作为评估ALL患者临床预后的参考指标。

胃癌组织/细胞中miR-429和ZEB1/2表达的相关性及临床意义

目的:探讨胃癌组织及胃癌细胞中miR-429和E盒结合锌指蛋白(ZEB)1/2表达的相关性,及其与临床病理参数的关系。方法:收集胃癌手术标本,分别采用Western blot法和定量RT-PCR法检测胃癌组织及胃癌细胞中ZEB1/2及miR-429的表达,分析两者表达相关性及其与临床病理参数的关系。将miR-429表达及as-miR-429质粒转染胃癌细胞,再将ZEB1/2-3'UTR荧光素酶报告质粒转染细胞,测定荧光素酶在细胞中的表达。结果:胃癌组织中ZEB1和ZEB2表达明显高于癌旁组织,而miR-429表达低于癌旁组织(P<0.05)。miR-429与ZEB1/2表达均呈显著负相关(r=-0.65、-0.58,P<0.0001)。miR-429与ZEB1/2mRNA的3'-UTR结合,抑制ZEB蛋白翻译表达。胃癌组织中miR-429和ZEB1/2的表达水平均与脉管瘤栓相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、淋巴结转移、TNM分期无关(P>0.05)。结论:miR-429在胃癌发生、进展过程中发挥重要作用,可通过其与下游关键调节因子,如ZEB1/2的协同作用而实现。

miR-429靶向肌细胞增强因子2D调控Hippo/YAP信号通路对舌鳞癌细胞的影响

目的肌细胞增强因子2D(MEF2D)对舌鳞癌发生发展的影响及miR-429能否靶向MEF2D影响舌鳞癌的发生发展尚未阐明。文中旨在探究miR-429和MEF2D对舌鳞癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响及miR-429能否靶向MEF2D发挥作用。方法收集2017年4月至2019年10月赣南医学院第一附属医院口腔科33份舌鳞癌患者的组织及癌旁组织标本。RT-qPCR法检测组织中miR-429和MEF2DmRNA的表达,Pearson相关性分析舌鳞癌组织中miR-429和MEF2D mRNA表达的相关性。体外培养舌鳞癌细胞,分别转染miR-NC(miR-NC组)、miR-429 mimics(miR-429组)、si-NC(si-NC组)、si-MEF2D(si-MEF2D组)、pcDNA(pcDNA组)、pcDNA-MEF2D(pcDNA-MEF2D组)、共转染miR-429 mimics与pcDNA-MEF2D(miR-429+pcDNA-MEF2D组)、对照组(不进行任何转染),采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,蛋白质印迹法检测细胞中MEF2D及Hippo/YAP信号通路相关蛋白p-YAP的表达。构建MEF2D野生型荧光素酶报告基因载体(wt-MEF2D)和突变型荧光素酶报告基因载体(mut-MEF2D),分别共转染miR-429 mimics与wt-MEF2D(miR-429+wt-MEF2D组)、miR-NC与wt-MEF2D(miR-NC+wt-MEF2D组)、miR-429 mimics与mut-MEF2D(miR-429+mut-MEF2D组)、miR-NC与mut-MEF2D(miR-NC+mut-MEF2D组)至舌鳞癌细胞。双荧光素酶报告基因实验验证miR-429和MEF2D调控关系。结果舌鳞癌组织中miR-429的表达低于癌旁组织(P<0.05),而MEF2D mRNA的表达高于癌旁组织(P<0.05),且舌鳞癌组织中miR-429和MEF2DmRNA的表达呈负相关(r=-0.992,P<0.05)。miR-429组舌鳞癌细胞中miR-429的表达高于对照组、miR-NC组(P<0.05)。与对照组、miR-NC组比较,miR-429组舌鳞癌细胞A值、集落形成数和迁移距离、MEF2D蛋白表达显著降低(P<0.05),而凋亡率和p-YAP蛋白表达显著升高(P<0.05)。miR-429+wt-MEF2D组舌鳞癌细胞荧光素酶活性(0.22±0.01)较miR-NC+wt-MEF2D组(1.03±0.09)明显降低(P<0.05)。si-MEF2D组舌鳞癌细胞中MEF2D蛋白表达低于对照组、si-NC组(P<0.05),pcDNA-MEF2D组明显高于对照组、pcDNA组(P<0.05)。结论miR-429在舌鳞癌组织中通过靶向抑制MEF2D,进而激活Hippo/YAP信号通路来抑制舌鳞癌细胞增殖和迁移,并促进细胞凋亡。

转化生长因子β调控miR-200b-200a-429启动子活性

目的探讨转化生长因子β(TGF-β)对miR-200b-200a-429簇表达的影响,对其调控机制作初步研究。方法使用RT-PCR方法检测TGF-β对人肾小管上皮细胞HK-2miR-200a、miR-200b和miR-429表达的影响。PCR方法扩增出miR-200b-200a-429簇启动子序列,构建miR-200b-200a-429启动子荧光素酶报告基因表达载体,转染至HK-2细胞,检测其荧光素酶活性。观察TGF-β对miR-200b-200a-429转录的表达调控。结果实时定量PCR检测结果显示TGF-β作用细胞24h后下调了miR-200a、miR-200b和miR-429的表达。成功构建miR-200b-200a-429启动子荧光素酶表达载体,测序正确,然后利用双荧光素酶报告基因系统证实构建的报告基因载体启动子具有活性,发现TGF-β可以抑制miR-200b-200a-429启动子活性(P<0.05)。结论 TGF-β可以调控miR-200b-200a-429启动子的活性。

SLC7A11-AS1调控miR-429对口腔鳞癌细胞CAL-27细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的探讨SLC7A11-AS1对口腔鳞癌细胞CAL-27细胞增殖、凋亡及迁移的影响及分子机制.方法收集29例口腔鳞癌患者癌组织及癌旁组织;CAL-27细胞分为si-NC组、si-SLC7A11-AS1组、水SLC7A11-AS1+anti-miR-NC组、si-SLC7A11-AS1+anti-miR429组。实时荧光定暈PCR(RT-qPCR)检测SLC7A11-AS1和miR-429表达水平;平板克隆实验检测克隆形成细胞数;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell检测细胞迁移数;蛋内质印迹(Western hlot)法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证SLC7A11-AS1和miR-429的靶向关系.结果与癌旁组织相比,口腔鳞癌组织中SLC7A11-AS1表达水平升高,miR-429表达水平降低(P<0.05)。抑制SLC7A11-AS1表达后,CAL-27细胞克隆形成数减少,细胞凋亡率升高,迁移细胞数减少,Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低(P<0.05)。同时抑制SLC7A11-AS1和miR-429表达后,CAL-27细胞克隆形成数增加,细胞凋亡率降低,迁移细胞数增加,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高(P<0.05).结论抑制SLC7A11-AS1表达可通过上调miR-429抑制口腔鳞癌细胞CAL-27增殖及迁移,且促进CAL-27细胞凋亡.

miR-429通过靶向作用Sox2抑制骨肉瘤干细胞特性

目的探讨miR-429在骨肉瘤干细胞中的作用。方法利用不同方法筛选出骨肉瘤干细胞,检测miR-429的含量。利用分子探针技术将骨肉瘤细胞分为miR-429高表达组和低表达组,检测各组骨肉瘤细胞干细胞样特性。利用转染技术检测miR-429对骨肉瘤干细胞样特性的影响。利用荧光素酶报告基因系统,验证miR-429下游靶基因。结果骨肉瘤干细胞中miR-429的表达量明显减少。miR-429高表达细胞的干细胞特性明显低于miR-429低表达细胞,且转染实验验证了上述结果。荧光素酶报告实验显示,miR-429在转录后水平上负性调节Sox2基因。结论 miR-429可以通过下调Sox2负性调节骨肉瘤干细胞特性。

miR-429和Bmi-1mRNA在肺癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究miR-429和Bmi-1 mRNA在肺癌(LC)组织中的表达及其与患者临床特征、预后之间的关系,并探讨其表达水平对LC患者预后的预测意义。方法:选取2013年1─12月在河北医科大学第四医院就诊的60例LC患者癌组织及癌旁组织,实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测组织中miR-429及Bmi-1 mRNA的表达水平,并分析二者之间表达水平的关系及其与患者临床病理指标及预后之间的关系。结果:与癌旁组织比较,LC组织中miR-429表达水平明显降低,而Bmi-1 mRNA的表达水平明显升高(P<0.01)。LC组织中miR-429低表达而Bmi-1 mRNA高表达的患者往往瘤组织较大、临床分期较晚、更易发生淋巴结转移,同时患者生存期较短。结论:LC组织中低表达miR-429及高表达Bmi-1 mRNA可能是患者临床进展及预后较差的预测指标。

miR-429-5p调控Bcl2的表达参与脊髓损伤过程中神经元细胞凋亡的机制

目的观察mi R-429-5p在脊髓损伤后的表达变化及其对脊柱神经元细胞的凋亡的影响,并探讨mi R-429-5p在脊髓损伤中的作用机制。方法(1)培养大鼠背根神经节细胞,通过qPCR检测mi R-429-5p在大鼠背根神经节细胞受损后的表达变化,并通过流式细胞仪检测mi R-429-5p对受损背根神经节细胞的凋亡的影响,同时通过Western blot检测Caspase3的蛋白表达;(2)通过TargetScan基因库预测mi R-429-5p的靶基因为Bcl2,通过双荧光素酶实验验证其靶向关系,并通过Western blot检测mi R-429-5p对Bcl2表达的调控;(3)利用SD大鼠建立脊髓损伤模型,正常组10只,脊髓损伤模型组20只,mi R-429-5p Inhibitor组20只。进行BBB评分检测各组后肢运动的恢复情况,通过qPCR检测mi R-429-5p以及Bcl2的表达变化,通过Western blot检测凋亡相关基因Caspase3的变化,通过嗜银染色和HE染色观察神经纤维的再生。结果(1)miR-429-5p参与脊髓损伤后的再生过程,mi R-429-5p的表达下调(P<0.05);(2)miR-429-5p参与调控受损背根神经节细胞的凋亡,mi R-429-5p的表达下调(P<0.05)。结论 mi R-429-5p通过靶向Bcl2参与调控脊髓损伤过程中神经元细胞的凋亡,从而影响脊髓神经细胞功能的再生,为继发性脊髓损伤的治疗提供了新的靶点。

miR-429对食管鳞癌细胞EC9706的影响及其分子机制探讨

目的:探讨miR-429对食管鳞癌细胞的影响及其靶向潜在的分子机制。方法:将miR-429 mimics、miR-429 mimics NC、miR-429 inhibitor和miR-429 inhibitor NC分别转染至食管鳞癌细胞EC9706,分别设为miR-429 mimics组、miR-429 mimics NC组、miR-429 inhibitor组和miR-429 inhibitor NC组。利用实时荧光定量检测各组miR-429的表达情况,MTT法检测细胞增殖率,通过Targer Scans Human7.1预测miR-429靶基因并利用荧光素酶活性检测对其进行验证,蛋白免疫印迹检测各组细胞中E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)蛋白的表达情况。结果:空白对照组、miR-429 mimics NC组、miR-429 inhibitor NC组之间miR-429相对表达量差异不明显(P>0.05)。与miR-429 mimics NC组相比,miR-429 mimics组食管鳞癌EC9706细胞中miR-429表达量显著上调(P<0.05);与miR-429 inhibitor NC组相比,miR-429 inhibitor组食管鳞癌EC9706细胞中miR-429表达量显著下调(P<0.05)。与miR-429 mimics NC组相比,miR-429mimics组中EC9706细胞增殖率显著下降(P<0.05),miR-429 inhibitor NC组中EC9706细胞增殖率无显著差异(P>0.05),miR-429 inhibitor组中EC9706细胞增殖率显著增加(P<0.05)。预测miR-429靶基因为ZEB1,荧光素酶活性检测证实ZEB1为miR-429靶基因。与miR-429 mimics NC组相比,miR-429 mimics组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量显著下调(P<0.05),miR-429 inhibitor NC组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量无显著差异(P> 0. 05),miR-429 inhibitor组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量显著上调(P <0. 05)。结论:miR-429可通过靶向ZEB1抑制食管鳞癌细胞增殖。

miR-429在糖尿病视网膜病变中的表达和对AKT信号通路的影响

目的检测miR-429在糖尿病视网膜病变(DR)中的表达及对AKT信号通路的影响。方法收集DR患者(DR组)、糖尿病无视网膜病变者(NDR组)和健康人(HC组)的外周血标本,分别检测miR-429和VEGF mRNA水平,并分析miR-429与VEGF mRNA之间的相关性。培养人视网膜微血管内皮细胞,并加入33 mmol·L-1葡萄糖刺激,然后转染miR-429 scramble、miR-429 mimic或miR-429 inhibitor,RT-PCR和ELISA检测VEGF mRNA和蛋白表达水平;转染VEGF over-expression或siRNA后检测Bad的表达和AKT通路相关蛋白的表达。结果检测三组研究对象的外周血标本结果显示,DR组的miR-429和VEGF mRNA水平均显著高于NDR组和HC组,且miR-429和VEGF mRNA水平之间存在显著正相关(相关系数为0.804,P<0.001)。细胞实验结果显示,与转染miR-429 scramble相比,转染miR-429 mimic后VEGF mRNA相对表达量(1.778±0.223)和蛋白水平[(91.383±9.534)μg·L-1]均显著增高(均为P<0.01),转染miR-429 inhibitor后VEGF mRNA相对表达量(1.131±0.087)和蛋白水平[(66.841±5.988)μg·L-1]均显著降低(均为P<0.05)。转染VEGF over-expression后Bad的表达增加、AKT和NOS的磷酸化水平显著升高,转染VEGF siRNA后Bad的表达降低、AKT和NOS的磷酸化水平显著降低。结论DR中miR-429水平增加,并可促进VEGF上调和激活AKT信号通路。